Mkenaisme imunitas pada Toxoplasma

 IL-12 menginduksi produksi IFN-γ, mediator kunci imunitas pada manusia dan tikus,
yang memulai imunitas pelindung tipe 1
 IFN-γ akan mengaktifkan sel T
 IFN-γ meningkatkan degradasi triptofan pada daging manusia, menghambat replikasi
parasit
 Sebuah mekanisme paralel IFN-γdependen resistensi pada manusia dan tikus terdiri
dari protein pengikat guanylate (GBPs), yang direkrut ke membran vakuola
parasitofor dan menyebabkan gangguan membran vakuolar dan pembersihan parasit
 GBP1 manusia membatasi replikasi tipe II T. gondii dalam sel epitel tanpa
menargetkan vakuola parasitofor (Johnston et al., 2016), menunjukkan bahwa GBP
dapat berpartisipasi dalam pertahanan inang tanpa menyebabkan gangguan membran
vakuolar klasik.
 Dalam sel manusia, ubiquitination di vakuola parasit juga telah muncul sebagai
mekanisme kunci pengendalian parasit, yang menyebabkan autophagy non-kanonik
dan pertumbuhan parasit terhambat dalam sel HeLa atau fusi endolysosomal dan
pembersihan parasit di vena pusar sel endotel.
 Sebagai parasit obligat intraseluler, T. gondii telah mengembangkan strategi agar
berhasil memanipulasi sistem kekebalan tubuh inang untuk membentuk infeksi yang
produktif dan mempertahankan relung replikatif yang optimal.

 Modulasi jalur sinyal host

 Manipulasi dari jalur sinyal mengarah pada produksi sitokin yang merupakan strategi
efektif mengatasi imunitas terhadap parasit
 Meskipun T. gondii bertempat pada sel vakuola yang diinfeksi, protein efektor
dihasilkan oleh parasite’s specialized secretory organelles, rhoptries atau butiran
padat, berperan penting dalam memanipulasi pensinyalan sel inang dan respons
transkripsi (Gambar 1).
 Tiga jenis T. gondii (tipe I, II, III) sangat berbeda dalam pengaruhnya terhadap sel
inang.
 Tipe I dan III, mengaktifkan strains activate the signal transducer and activator of transcription 3 dan 6
(STAT3 dan STAT6), dengan demikian menurunkan IL-12 (Saeij et al., 2007).
 Demikian pula, pada makrofag tikus, aktivasi konstitutif STAT3 oleh strain tipe I
mencegah produksi IL-12p40 yang diinduksi LPS (Butchermet al., 2005). Rhoptry
kinase ROP16 bertanggung jawab atas efek ini, dengan memfosforilasi dan
mengaktifkan STAT3 dan STAT6 pada manusia dan tikus.
 Infeksi T. gondii menginduksi kekebalan yang didorong oleh IFN-respon yang
penting untuk mengatasi infeksi dan pengendalian akut infeksi kronis.
 infeksi T. gondii memblokir regulasi semua 127 gen yang diinduksi oleh IFN-γ dalam
penelitian ini
 Penelitian selanjutnya menentukan bahwa strain tipe I, II dan III menghambat
aktivitas transkripsi STAT1 melalui mekanisme yang tidak bergantung pada ROP16
atau GRA15, protein butiran padat yang mengaktifkan pensinyalan NF-κB yang
berkelanjutan
 Stimulasi IFN-γ memulai pensinyalan JAK / STAT, dimana homodimer STAT1
berpindah tempat ke nukleus dan mengikat gamma-activated sequences (GAS) dalam
DNA untuk mengaktifkan transkripsi (Sadzak et al., 2008). Khususnya, T. gondii
 menghambat ekspresi gen responsif IFN-γ dengan mencegah disosiasi STAT1 dari
DNA, menghambat daur ulang dan siklus lebih lanjut transkripsi yang dimediasi
STAT1 (Rosowski et al., 2014).
 T. gondii yang diperlukan untuk memblokir transkripsi gen yang distimulasi IFN
dalam HFF: T. gondii inhibitor of STAT1-dependent transcription (TgIST) adalah
protein butiran padat yang mengikat ke dimer STAT1 yang diaktifkan di inti sel yang
dirawat IFN-γ dan juga kompleks Mi2 / NuRD pemodifikasi kromatin, menghasilkan
perubahan kromatin dan blokade transkripsi yang bergantung pada IFN-γ.
 Ekspresi ektopik TgIST dalam sel manusia menunjukkan bahwa itu cukup untuk
menekan aktivitas promotor yang bergantung pada STAT1 (Gay et al., 2016). Selain
itu, dalam makrofag tikus yang diberi IFN-γ, TgIST memblokir dimediasi IRG dari T.
gondii tipe II (Gay et al., 2016).
 Kaskade pensinyalan utama lainnya yang tidak diatur oleh T. gondii adalah jalur NF-
κB, yang mengarah pada produksi sitokin proinflamasi yang terlibat dalam imunitas
inang.
 Pada HFF yang terinfeksi, tipe I T. gondii membatasi aktivasi NF-κB dengan
mengurangi fosforilasi p65 / RelA dan translokasi ke nukleus.
 Tipe I T. gondii juga menghambat produksi IL-1ß yang diinduksi LPS pada neutrofil
manusia primer, dan efek ini terkait dengan penghambatan pensinyalan NF-κB.
 Dalam neutrofil yang terinfeksi T. gondii, degradasi IκBa dan fosforilasi p65 / RelA
berkurang, seperti transkrip untuk IL-1ß dan sensor inflammasome NLRP3.
 T. gondii juga menghambat pembelahan dan aktivasi caspase-1 pada neutrofil yang
terinfeksi, tetapi tidak pada monosit manusia yang terinfeksi, mewakili mekanisme
regulasi IL-1ß yang berbeda pada tipe sel manusia.
 Baru-baru ini, GRA18 diidentifikasi sebagai protein granul padat yang memprogram
ulang respons peradangan.
 GRA18 membentuk kompleks dengan elemen pengaturan kompleks penghancuran
ßcatenin, yang meliputi ß-catenin, GSK3a / ß, dan holoenzim PP2A-B56,
mempromosikan stabilisasi dan translokasi inti ß-catenin, dan menginduksi ekspresi
gen yang bergantung ß-catenin (He dkk., 2018).
 ß-catenin adalah faktor utama dari jalur Wnt, berfungsi sebagai koaktivator faktor
transkripsi faktor sel T / faktor penambah limfoid (TCF / LEF) (Cadigan dan
Waterman, 2012). Dalam makrofag murine,
 GRA18 menginduksi gen yang bergantung ß-catenin yang terkait dengan respons
antiinflamasi, termasuk CCL17 dan CCL22 (Heet al., 2018), yang dapat mengimbangi
respons peradangan tipe I.
Pencegahan apopotosis
Meskipun kematian sel yang disebabkan oleh infeksi dapat merugikan inang, apoptosis
juga merupakan sarana penting untuk menghilangkan patogen intraseluler (Williams,
1994). Mungkin tidak mengherankan, virus, bakteri, dan parasit telah mengembangkan
strategi untuk menghambat kematian sel terprogram ini (Friedrich et al., 2017). Memang,
T. gondii dapat menahan jalur apoptosis baik intrinsik sel (mitokondria) maupun
ekstrinsik (dimediasi oleh reseptor kematian) (Gambar 2) di dalam sel yang telah
diserang. Ini dapat membantu parasit mempertahankan ceruk intraselulernya, mereplikasi,
dan menghindari pembersihan oleh imunitas humoral.
Secara kolektif, data ini menunjukkan bahwa T. gondii tipe I dan II menghambat jalur
apoptosis ekstrinsik dan intrinsik melalui mekanisme yang sama. Studi pertama pada sel
manusia menunjukkan bahwa makrofag yang berasal dari HL-60 yang terinfeksi T. gondii
dilindungi dari apoptosis yang diinduksi oleh aktinomisin D (Goebel et al., 1999). Efek
pada jalur apoptosis mitokondria ini dikaitkan dengan penghambatan pelepasan sitokrom
c, yang pada gilirannya mengurangi pembelahan apoptosis caspase-9 dan caspase-3.
Selain itu, Mcl-1, faktor antiapoptosis dari keluarga Bcl-2 diatur oleh infeksi T. gondii
(Goebel et al., 2001). Penghambatan T. gondii dari apoptosis yang diinduksi UV dari sel
HeLa yang terinfeksi juga dikaitkan dengan penurunan pelepasan sitokrom c dan aktivitas
kaspase apoptosis (Carmen et al., 2006). Jalur ini diketahui bergantung pada pensinyalan
c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) (Tournier et al., 2000), dan memang, aktivitas JNK
ditekan dalam sel yang terinfeksi T. gondii. Studi selanjutnya tentang sel HeLa yang
diobati dengan staurosporin dan sel Jurkat T manusia memberikan bukti tentang
bagaimana T.gondii merusak pelepasan sitokrom c. Oligomerisasi protein pro-apoptosis
Bcl-2 Bax dan Bak meresap ke dalam membran mitokondria, memungkinkan pelepasan
protein apoptogenik, termasuk sitokrom c (Jürgensmeier et al., 1998; Annis et al., 2005).
Meskipun infeksi T. gondii tidak mempengaruhi ekspresi Bax atau Bak, infeksi ini
menghambat perubahan konformasi pada protein ini, translokasi Bax dari sitosol ke
mitokondria, dan oligomerisasi Bax, yang berkontribusi pada penurunan pelepasan
sitokrom c (Hippe et al., 2009 ).
Demikian pula, dalam makrofag THP-1 yang dirawat dengan arsenik trioksida, T. gondii
meningkatkan ekspresi Bcl-2 dan anti-apoptosis pendamping heat-shock protein 70
(HSP70), yang pada gilirannya mengurangi pelepasan sitokrom c dan aktivasi caspase-3
(Hwang dkk., 2010). Dalam sel yang diobati dengan staurosporin, mekanisme tersebut
dikaitkan dengan induksi serine protease inhibitor B3 dan B4 (SERPIN B3 / B4) melalui
aktivasi STAT6 (Song et al., 2012). Dalam sel Jurkat, T. gondii menghambat apoptosis
yang dimediasi oleh granzyme B, protease serin yang memicu kematian, dengan
menghambat aktivitas granzim B (Yamada et al., 2011).

Efek anti-apoptosis dari T. gondii dalam berbagai jenis sel tampaknya berkumpul pada
penghambatan kaspase sitokrom c dan apoptosis. Menariknya, dalam sistem bebas sel
dengan ekstrak sel Jurkat, parasit dapat secara langsung memengaruhi aktivasi caspase
cytochrome cinduced, terlepas dari pelepasan sitokrom c dari mitokondria sel inang atau
peningkatan regulasi molekul antiapoptosis (Keller et al., 2006). Khususnya, lisat parasit
memediasi efek ini, menunjukkan bahwa molekul parasit yang larut secara spesifik
mengganggu aktivasi caspase yang diinduksi sitokrom c (Keller et al., 2006). Pengikatan
sitokrom c dan dATP atau ATP ke faktor pengaktif protease 1 (Apaf-1) memungkinkan
pembentukan kompleks heptamerik seperti roda, apoptosom, yang pada gilirannya
mengaktifkan caspase-9 (Reubold et al., 2009). Menariknya, T. gondii menghambat
pengikatan caspase-9 ke Apaf-1, yang mencegah aktivitas caspase-9 dan aktivasi caspase-
7 dan caspase-3 selanjutnya (Graumann et al., 2015).

Selain menghalangi jalur intrinsik, T. gondii juga menghambat jalur ekstrinsik apoptosis.
T. gondii mencegah apoptosis pada sel monositik U937 yang terinfeksi yang diobati
dengan TNFa dan sikloheksimida (Goebel et al., 2001). Apoptosis yang diinduksi Fas /
CD95 diblokir di sel B manusia SKW6.4 oleh gangguan T. gondii dengan inisiator
caspase-8, dengan tidak adanya loop penguat mitokondria (Vutova et al., 2007).
Penurunan tingkat pro-caspase-8 menurunkan hubungannya dengan kompleks
pensinyalan yang menginduksi kematian (DISC) dan mengganggu aktivasi eflektor
caspases (Vutova et al., 2007). Dalam sel HeLa, di mana Fas / CD95-ligasi diperkuat
melalui loop penguat mitokondria, T. gondii menghambat pembelahan Bid protein BH3
proapoptosis saja, pelepasan sitokrom c, dan aktivitas inisiator caspase-8 dan caspase -9
dan e ector caspase-3 dan caspase-7 (Hippe et al., 2008).

Semua penelitian pada manusia yang dicatat sebelumnya mencirikan efek anti-apoptosis
dari T. gondii dalam garis sel manusia; namun, baru-baru ini, efek ini telah dibuktikan
dalam sel utama manusia. Infeksi T. gondii pada sel mononuklear darah perifer manusia
(PBMCs) yang berasal dari makrofag memblokir apoptosis yang diinduksi staurosporin
melalui peningkatan ekspresi cluster gen miR-17-92 (Cai et al., 2014). Promotor kluster
ini berisi dua lokasi pengikatan STAT3 yang diduga, dan T. gondii TgCtwh3 dengan
genotipe atipikal China 1, mengaktifkan STAT3, mirip dengan tipe I T. gondii. Aktivasi
STAT3 menyebabkan peningkatan ekspresi miR-17-92 dan penurunan ekspresi Bim,
anggota hanya BH3 dari keluarga Bcl-2 yang berkontribusi pada pembentukan pori di
membran mitokondria dan pelepasan sitokrom c (O'Connor et al., 1998 ; Cai et al., 2014).
MiRNA miR-20a adalah anggota cluster gen miR-17-92 dan ekspresinya diatur ke atas
pada makrofag manusia yang terinfeksi tipe I T. gondii. Penghambatan miRNA ini
membalikkan efek, mengakibatkan apoptosis makrofag manusia (Rezaei et al., 2018).
Glycosylphosphatidylinositols (GPIs) adalah glikolipid yang menghubungkan protein
dengan membran sel eukariotik. Jangkar GPI banyak diekspresikan pada banyak
permukaan parasit protozoa, termasuk T. gondii (Lekutis et al., 2001). Sejak mengekspos
makrofag ke Trypanosoma cruzi GPIs meningkatkan ekspresi gen anti-apoptosis A1 dan
Bcl-2-like (Ropert et al., 2002), mekanisme serupa untuk T. gondii GPIs diselidiki;
namun, GPI T. gondii yang sangat murni tidak memengaruhi apoptosis sel HL-60, Jurkat,
atau SKW6.4 (Debierre-Grockiego et al., 2007). Meskipun banyak penelitian yang
menjelaskan efek anti-apoptosis dari T. gondii dalam sel manusia, faktor parasit yang
memicu respons ini masih belum diketahui.

Menghindari Kematian Intraseluler

Dalam fagosit, seperti neutrofil dan makrofag, produksi ROS merupakan respons
antimikroba yang penting untuk eliminasi patogen. Menariknya, bagaimanapun, ROS
tidak diinduksi pada makrofag manusia yang terinfeksi T. gondii (Wilson et al., 1980),
berpotensi karena mekanisme penghindaran kekebalan, seperti yang dicatat di bawah ini.
Sel non-fagositik juga menghasilkan tingkat ROS yang rendah (Bedard dan Krause,
2007), dan dalam sel ARPE-19, T. gondii menargetkan oksidase NADPH utama dengan
mengurangi Nox4 pada tingkat transkrip dan protein, yang mengakibatkan penurunan
ROS intraseluler. Efek pada ekspresi Nox4 dikaitkan dengan aktivasi pensinyalan PI3K /
AKT pada sel yang terinfeksi (Zhou et al., 2013). Proliferasi tipe I T. gondii pada
makrofag inflamasi murine juga dikaitkan dengan penurunan produksi ROS (Shrestha et
al., 2006). Studi terbaru pada makrofag tikus menunjukkan bahwa pembersihan tipe III,
tetapi bukan tipe I, T. gondii bergantung pada aktivitas NADPH, peningkatan produksi
ROS, dan induksi GBP5, menunjukkan bahwa strain virulen dapat memblokir produksi
ROS, memungkinkan kelangsungan hidup parasit (Matta et al. ., 2018).

Enzim mikrobisidal juga berkontribusi untuk menghancurkan patogen intraseluler dan

ekstraseluler. Enzim butiran neutrofil disekresikan ke dalam fagolisosom dan dilepaskan
selama NETosis. PI serine keluarga Kazal, T. gondii protease inhibitor 1 (TgPI-1),
disekresikan oleh butiran padat dan menghambat aktivitas elastase neutrofil (Morris et al.,
2002). Diketahui bahwa tachyzoites dan bradyzoites resisten terhadap konsentrasi
fisiologis tripsin (Sharma dan Dubey, 1981), yang ditemui parasit di usus. TgPI-1 juga
menghambat tripsin dan kimotripsin, dua enzim proteolitik dari usus kecil (Pszenny et al.,
2000; Morris et al., 2002). Bersama-sama, data ini menunjukkan peran TgPI1 dalam
menghindari neutrofil dan melindungi parasit di usus.

Pembentukan Niche Replikatif

T. gondii juga memengaruhi siklus sel dalam sel manusia yang terinfeksi. Dalam HFFs,
parasit menginduksi perkembangan dari G0 / G1 ke fase S dan penangkapan menuju G2 /
M (Molestina et al., 2008). Respon ini terkait dengan aktivasi berkelanjutan dari
pensinyalan ekstraseluler yang diatur sinyal kinase (ERK), yang dapat bertindak sebagai
umpan balik positif untuk mempertahankan HFF dalam fase S (Molestina et al., 2008).
Penangkapan G2 serupa diamati pada garis sel trofoblas BeWo manusia dan pada
fibroblas manusia dermal primer normal (NHDF). Infeksi T. gondii menginduksi ekspresi
E3 ubiquitin-protein ligase UHRF1 dan menurunkan siklin B1, yang dapat menyebabkan
penghentian siklus sel (Brunet et al., 2008). GRA16 adalah protein granul padat yang
diekspor dari PV ke dalam sitoplasma dan terakumulasi dalam inti sel inang. Protein ini
mengikat dua enzim inang, HAUSP deubiquitinase dan PP2A fosfatase, yang mengatur
p53 dan siklus sel, menunjukkan bahwa GRA16 mengontrol penangkapan sel inang
dalam fase G2 / M (Bougdour et al., 2013). Modulasi siklus sel inang dapat memengaruhi
bagaimana T. gondii mengontrol replikasinya sendiri dan menyarankan preferensi untuk
proliferasi pada fase G2 / M.
Mikroarray pertama yang dilakukan pada sel yang terinfeksi T. gondii mengungkapkan
regulasi gen inang yang terlibat dalam pemulungan nutrisi dan metabolisme, yang
dibutuhkan parasit untuk replikasi (Blader et al., 2001). Menariknya, faktor transkripsi
hypoxiainducible factor-1 alpha (HIF-1a), yang diperlukan untuk replikasi parasit,
distabilkan dan diaktifkan pada HFF yang terinfeksi T. gondii (Spear et al., 2006).
Stabilisasi HIF-1 terjadi karena PHD2, sebuah prolyl hidroksilase yang menargetkan HIF-
1 untuk degradasi proteasomal, diatur ke bawah selama infeksi melalui pensinyalan
kinase reseptor seperti aktivin (Wiley et al., 2010). Protein pengikat poli-adenosin
(PABP) adalah protein pengikat RNA yang mengikat RNA poladenilasi dan terlibat
dalam jalur metabolisme mRNA, dan distribusi sub-selulernya berubah sebagai respons
terhadap stres seluler (Gray et al., 2015). Granulasi inti PABPs diinduksi dalam HFF yang
terinfeksi T. gondii (Fischer et al., 2018), yang memungkinkan parasit memengaruhi
transkriptom sel inang. Analisis proteomik kuantitatif HFF juga menunjukkan bahwa T.
gondii secara global memprogram ulang jalur metabolisme utama dalam sel inang,
termasuk metabolisme glikolisis, lipid, dan sterol, mitosis, apoptosis, dan ekspresi protein
struktural (Nelson et al., 2008). Bersama-sama, proses ini dapat memfasilitasi
pembentukan ceruk replikatif T. gondii.