Jil.

37, PEMANFAATAN UREA DENGAN RUMINANSIA 153

nan secara signifikan. Pada yang lebih dikonversi ke NH3 dalam 1 jam. ini Fakta
rendah konsentrasi penghambatan dengan telah dikonfirmasi oleh Wegner, Booth,
borat asam adalah lebih besar Bohstedt & Hart [1941], yang menemukan
dibandingkan dengan boraks. peningkatan ditandai yang dalam NPN dan
NH3 dalam rumen setelah urea makan
RINGKASAN
tetapi tidak dapat mendeteksi urea
1. Dalam pemanfaatan urea oleh perah sendiri.
sapi pertama tahap mungkin adalah 2. urease dari rumen, menyerupai di
konversi urea untuk NH3 dalam rumen. ac tivity, bahwa dari kedelai dan jack
Selain itu, urease aktivitas dari kacang. Perubahan aktivitas dengan
rumen ingesta yang begitu besar setiap perubahan suhu dan pH, dan perilakunya
saat hari, apapun waktu makan, dan di hadapan inhibitor seperti kuinon
sisa-sisa begitu sedikit terpengaruh oleh dan NaF, khas enzim dari jenis
relatif besar apaounts dari urea, bahwa urease. awal Upaya untuk mendapatkan en
semua yang urea pernah mungkin untuk zyme persiapan bebas dari bakteri
diberi makan, bahkan ke tinggi memiliki, bagaimana pernah, terbukti
menghasilkan sapi dalam penuh, menyusui tidak berhasil.
akan mudah

REFERENSI
Sumner, J. B., Gralen, N. &
Mystkowski, E. M. [1928]. Akta Biol. exp., Eriksson-Quensel, I. [1938]. J. biol.
Var8ovie, 2, 212-24. Kimia 125, 37.
Pearson, R. M. & Smith, J. A. B. [1943]. Wegner, M. I., Booth, A. N., Bohstedt, G. &
Biokimia. J. 37, 142. Hart, E. B. [1941]. J. Susu Ilmu. 24,
Quastel, J. H. [1933]. Biokimia. J. 27, 1116.

51. Pemanfaatan Urea di Bovine Rumen. 3. Sintesis

dan Perincian Protein dalam Rumen ingesta
BY R. M. Pearson DAN J. AB SMITH ,, Dari Hannah Susu Re8earch Institute,

Kirkhill, Ayr (Diterima 14) Oktober 1942

urease Kegiatan dari sapi rumen ingesta harus diambil untuk langsung mikrobiologi
telah dipelajari secara rinci oleh pemeriksaan oleh Bapak Frank Baker
Pearson & Smith [1943b] yang [Baker, 1942 a, b; 1943] dan untuk piring
menunjukkan bahwa urease aktivitas dari jumlah oleh Dr C. Higginbottom untuk
rumen cukup untuk mengkonversi r'apidly mengetahui apakah sintesis protein, jika
untuk NH3 semua urea pernah mungkin hal itu terjadi, disertai dengan
untuk dimasukkan dalam diet sebagai peningkatan jumlah mikro-organisme
parsial pengganti untuk protein. piesent.
Pemanfaatan urea oleh ruminansia Pertama, itu harus dibentuk dengan
mungkin berlangsung dalam dua tahap, kimia cara apakah protein, sintesis
pertama konversi urea untuk NH3 dan dapat dideteksi, dan jika demikian, sampai
kedua yang konversi NH3 untuk protein. sejauh mana hal itu dipengaruhi oleh
adanya biasa makanan konstituen seperti
ini Bagian pekerjaan dilakukan untuk
menyelidiki 2 tahapini. Incubations
rumen isi itu harus dilakukan secara
in vitro di bawah berbagai yang berbeda
con ditions dengan dan tanpa urea, untuk
mendapatkan sebanyak bukti mungkin
dengan kimia analisis baik untuk atau
melawan teori protein sintesis dalam
rumen dari non-protein N . Sampel itu
 Metode memperoleh sampel minuman
rumen keras dan inkubasi dan
analitis proceJures telah
dijelaskan [Pearson & Smith, 1943
a, b].
Masa inkubasi lama8. Tampaknya
mungkin bahwa jika ada terukur
perubahan Ndalam partisi
berlangsung inkubasi rumen
pada
isi in vitro, perubahan akan
lebih mudah terdeteksi di cukup
panjang
bationsincu. Oleh karena itu
pendahuluan incubations dengan
rumen isi dilakukan,
masing-masing berlangsung beberapa
hari (Gambar. 1). 900 ml. rumen
minuman keras diinkubasi dengan
2-5 g. ureum, 12 gram. K2HPO4, 10
gram. glukosa dan 0-1 g. FeSO4
selama 8 hari. Perhatikan bahwa
xyhile total N
tetap konstan sepanjang, NPN
bervariasi. Untuk pertama 3-4 hari
itu berubah sangat sedikit, tapi
antara 3 dan 7 hari itu sangat
menurun. Dengan asumsi bahwa
selisih antara total N dan NPN
adalah proteim, N asumsi yang
karbohidrat, protein dan asam amino, dibahas nanti, Gambar. 1 menunjukkan
serta oleh zat yang mungkin bf bahwa jumlah protein dalam medium
bersifat toksik. ini Tulisan hanya pada berubah pada
sedikit awalnya, tetapi
terbatas deskripsi khusus aspek dari selama bahwa terakhir 5 hari meningkat
pekerjaan.
METODE

R. M. PEARSON DAN J. A. B. SMITH'

1943
154
feses, 100 gram. tanah dan akhirnya 50 g.
secara substansial. Penjelasannya
dedak dicampur dengan 50 g. oat
mungkin bahwa banyak mikro-organisme masing-masing tersuspensi dalam 1 1. air
dalam rumen ingesta lagi kalikan pada yang mengandung urea, fosfat, glukosa dan
penghapusan dari rumen dan incuba FeSO4 dalam jumlah sama dengan yangyang
tion, tapi setelah 3-4 hari alunan ditambahkan ke rumen isi (Gbr. 1). Dengan
yang selamat dan untuk yang stagnan faeces jelas peningkatan dalam protein
rumen con tenda suatu yang cocok jauh lebih besar dibandingkan dengan isi
media berlalu dari sta, dari
mereka membentuk yang cukup bagian dari rumen, dan kenaikan itu cepat
diet yang mengarahkan digunakan. 100 gram

9 -~~~~~~~~~~~~~~9
0 pH -~~~~ pH pH H
-,pH 80 .......-*"''.. p

Total
H_ .... ..7..... 7 p
 nitrogen

bO - ~~~~~~~ sampai ~ NPN-

40 ~ awal Protein nitrogen

Feses Dedak dan oat

Total
nitrogen

200 ~~~~~~pH .-
pH 200
Total nitrogen
-96 ,~ 6 - HF,,_,,+... 1 -.. k'''

,,, P *.' k pH-............. pH..... _ . H

160
X......K.; <120 Iniia proteid protein Dirlenn

Gambar. 1. Hasil yang diperoleh dari berkepanjangan incubations rumen isi dan juga ftom
incubations berkepanjangan suspensi tinja, makan-barang dan tanah. Jumlah protein
sintesis dengan rumen isi dan feses dapat ditemukan membandingkan dengan awal protein
nitrogen dengan protein nitrogen diamati pada yang berbeda waktu sepanjang masa
inkubasi. (Dalam rangka untuk membuat diagram sesederhana mungkin NH3-N tidak
ditampilkan untuk rumen, isi makan-barang dan tinja. Dalam ketiga kasus setelah urea
diubah menjadi amonia, Nha-N mengikuti saja paralel dengan yang ada pada NPN)
lag awal 2-3 hari. The explana-' tion
tionary fase ke fase aktif pertumbuhan ada
mungkin bahwa bakteri hadir dalam tinja
di mana cepat perkalian oc & urred.
dalam seperti besar jumlah terdiri dari jenis
Beberapa percobaan ini jenis dilakukan yang stagnan feses suspensi adalah yang
dengan dan tanpa urea, dan meskipun ideal media dan bahwa tinja mengandung
hasilnya bervariasi dalam detail, umum sedikit, jika ada, dari jenis-jenis hadir
kecenderungan dari kurva yang diperoleh dalam rumen yang mati
begitu
mudah ketika
selalu sama. dihapus situ dan yang sangat sulit untuk
Untuk memastikan apakah ini perubahan di tumbuh pada biasa jenis media. itu Oleh
NPN yang asosiasi diasosiasikan dengan karena tidak mengherankan bahwa dalam ini
kehadiran mikro-organisme dalam rumen isi berkepanjangan incubations ada' adalah awal
atau yang kebetulan perubahan melekat dalam lag periode dengan rumen minuman keras tapi
mental yang prosedurexperi, Mr Frank Baker tidak dengan tinja.
menyarankan bahwa paralel tanah Suspensi itu tidak berarti steril,
percobaan dilakukan dengan sapi, kotoran karena mereka membawa konversi ditandai
dengan tanah sus pensiun dan juga dengan
suspensi dedak dan gandum di mana bakteri
urea untuk NH3 dan NH, untuk nitrat (Gbr.
kandungan akan banyak diff6rent itu minuman 1). Tidak ada perubahan dalam NRN bisa,
rumen. keras Dedak dan gandum dipilih karena bagaimanapun,
awal sedangkan inkubasi, dengan rumen isi

PEMANFAATAN UREA DENGAN RUMINANSIA

Vol. 37 155
bahwa kimia perubahan yang menunjukkan di
dideteksi. Alasannya adalah mungkin bahwa
jumlah bakteri yang ditemukan di tanah menyerupai erat orang-orang dari
suspensi ini semacam sangat kecil rumen, sintesis protein tampaknya
dibandingkan dengan angka hadir dalam terjadi sejauh sekitar
tinja dan rumen isi yang mereka bisa
multiply sangat sangat dan memanfaatkan NI.PN
menyebabkan tanpa yang dapat diukur
Jumlah nitrogen
penurunan dalam NPN dari medium. Ketiga
jenis percobaan menunjukkan Oleh karena itu pH
lipatan protein incu tertahan mikro-organisme Dengan dedak dan
ketika feses dan mungkin berhubungan mereka masing-masing gandum hasilnya
rumen ingesta yang dengan berisi. lebih kompleks.
Fermentasi set pada beberapa strain bahkan setelah 1
awal dan didampingi bakteri lewat dari Initial protein nitrogen
hari inkubasi hebat
oleh banyak buih dan diam fase ke fase
75
yang sangat baubusuk. lebih
Selama pertama 6 hari pertumbuhanaktif.
fermentasi jangka pendek
mengakibatkan yang
Inkubasi. Sampel o
cukup besar penurunan 0- 50 25
dalam protein dari panjang
kandungan (Gambar. 1). periode incubations
Setelah itu, dijelaskan di atas
bagaimanapun, diperiksa
protein meningkat lagi
mikrobiologis oleh
pH *
l
tetapi tidak pernah w~~~~~~.w....,,,,.,,.
mencapai nilai asli.
Baker [1942 a, b; ..........

ini Peningkatan pada 1943] yang N p

7-5 7-0
kemudian tahap adalah menyatakan bahwa ? prOtet1 nitroge ~ n
mungkin karena
terjadi dalam
mikroflora dan fauna,
sehingga 'gambar
mikrobiologi' di
u 200 min.
400

perubahan telah
akhir 1 hari tidak mirip dengan yang
di awal. sampel percobaan Oleh karena
itu dilakukan untuk menentukan berapa
sampel panjang rumen con tenda bisa
diinkubasi tanpa mikro biologis
perubahanterdeteksi. Sampel dari rumen
ingesta dari ini percobaan diperiksa
oleh Mr Baker yang
Gambar. 2. Hasil yang diperoleh dalam
yang singkat masa inkubasi khas rumen.
minuman keras
9 mg. T/lOlg. rumeni minuman keras. (5)
Ada de lipatan di NPN disertai dengan
paralel penurunan dalam amonia N, yang
menunjukkan bahwa disintesis

Tabel 1. Perbandingan antara natrium tungstate dan trikloroasetat asam

metode memperkirakan NPN mg. N/100 gram. rumen Isi
119-8 6-4 Asam 8-5 8-8 8- 9
Trichloro Selisih Tungstate 119-8 4-2 3-0
8-6
Incuba 116-4 8-6 3-3 4-3
111- 3
tion 8-6 6-8 4-6
107-8 120-3
tidak ada. Sintesis
120-1 acetic 111-7 115-2
1 Asam 106-6
2 112-0 trikloro
115-0 128-7 8-6 Final NPN
3 asetat
4 113-4 119-4 7-4
trikloro tungstat
Tungstate Awal NPN 124-6 9-6 Perbedaan
asetat Asam
menemukan tidak signifikan perubahan tungstat Metode trikloroasetat Asam
selama thefirst 2-4 jam. inkubasi. Dalam
Waktu NPN NPN
semua berikutnya pekerjaan karena min. (awal) Sintesis (awal) Sintesis (mg.
inkubasi periode 2-4 jam. diadopsi, N/100 g. rumen cairan)
karena itu penting, jika pekerjaan itu
Awal 94-9 107-8
untuk memiliki
20 93-7 1-2 105-9 1-9 80 88-8 6-1 103-5
praktis, bantalan bahwa setiap protein 4 -3 90 88-1 6-8 100-6 6-2
sintesis de dideteksi harus terjadi dalam 100 87-6 7-3 99-7 8-1 180 87-4 7-5 98-0
kondisi semirip mungkin dengan yang ada 9-8 290 86-9 8-0 99- 6 8-2
di utuh rumen (Gbr. 2).
Kurang lebih 1500ml . rumen minuman
keras yang incu tertahan dengan 0-65 g.
urea, 4-5 gram. K2HPO4, 0-1 g. FeSO4 dan
7-5g. pati. PH dikontrol bila perlu
dengan penambahan beberapa tetes
Na2CO3 larutanpekat. Dari Gambar 2
sebagai berikut fakta muncul. (1) Total N
tetap tidak berubah. (2) Urea dengan
cepat dikonversi menjadi NH3. (3) Relatif
sedikit NPN hadir kecuali urea atau NH3. (4)
Selama pertama. 3 jam ketika
mikrobiologi kondisi di media muncul
protein dihasilkan dari amonia N dan
bukan dari NPN hadir dalam lain. bentuk

Tabel 2. protein sintesis

diperkirakan oleh tungstate dan
trikloroasetat asam metode Jumlah N
= 143-5 mg./100 g. rumen cairan

R. M. PEARSON DAN J. A. B. SMITH

156 I943
337g .
Ini jumlah protein sintesis muncul pada
pertama pandangan menjadi sangat kecil. jika protein dalam 1 hari. 54 g. N akan
Namun, isi rumen diperkirakan secara setara dengan sekitar 25% dari total
konservatif di 75 kg., ini Nilai dari 9 protein kebutuhan dari sapi menghasilkan
mg. N/100 gram. rumen isi dalam 3 jam. 2-3 galon susu per hari.
setara dengan konversi 54 g. N sampai Kontrol percobaan dilakukan dengan
dedak dan gandum, kotoran dan tanah tapi salah satu yang terkandung 0-01%, lain
tidak ada perubahan dalam NPN pernah 0-1% dan yang ketiga -1%. Untuk semua 4
ditemukan selama pertama. 3 jam bagian, 100 rhl. larutan yang mengandung 1
inkubasi. gram. urea dan 3 gram. pati ditambahkan. ini
rumen minuman keras dengan tertentu beracun Campuran kemudian diinkubasi selama 4 jam.
zat seperti NaF. Dalam khas percobaan 2-4 dengan lambat aliran CO2 melewati
1. rumen minuman keras dibagi menjadi 4 mereka. Sampel diambil untuk analisis
yang bagiansama. Salah satu bagian awalnya dan pada akhir setiap jam
digunakan sebagai kontrol sementara ke (Gambar. 3, A). Dalam dua lainnya serupa
lain 3 bagian NaF begitu menambahkan bahwa

ke B 5

t.
0!::.-
I.01
8 z
t. 5-
0

0 t.
1 8 .? IC $kz

10 1
IPU-
I

0-8 1-0
Waktu inkubasi di jam>
untuk 00 Konsentrasi NaF (%)
-, 5U 0'2 0-4 0-6
Gambar. 3. A, jumlah sintesis atau hidrolisis diamati dengan yang berbeda konsentrasi dari
NaF dibandingkan dengan kontrol diinkubasi dengan tidak adanya NaF NaF
(percobaanpertama). B, jumlah sintesis atau hidrolisis diamati setelah inkubasi selama 4
jam. dengan yang berbeda konsentrasi dari NaF NaF (percobaankedua).

jelas sintesis diamati dengan rumen con

tenda tampaknya Oleh karena itu t1o menjadi
aneh' ke rumen. ingesta
Sintesis beberapa protein selalu ob
disajikan dalam incubations normal ini,
jenis baik dengan tungstate dan tersebut.
CC13 COOH Prosedur diuraikan dalam
sebelumnya makalah [Pearson & Smith,
1943a]. Dari Tabel 1 dan 2 itu akan
diamati itu. CC13 COOH memberikan nilai
untuk NPN yang 6-13 mg. lebih tinggi dari
yang diperoleh oleh asam, natrium
tungstat namun demikian jumlah protein
sintesis diperkirakan oleh dua metode
adalah dari yang urutansama.
Ketika terjadinya penurunan NPN di
tersebut incubations telah berulang kali
dikonfirmasi, pertanyaan muncul apakah
ini karena protein

percobaan konsentrasi NaF adalah 0-003,

0-D06, 0-05, 0-3, 0-5 dan 0,7 %. Data pada
Gambar. 3 menunjukkan bahwa sintesis
 protein sangat dihambat oleh sesedikit 5% NaCl, yang lain 0,5%
satu berisi 0-
0-01% NaF, dan bahwa dengan concen NaF,penelitian menunjukkan
hasil
trasi 0-1%, protein sintesis digantikan bahwa 0-5% NaCI tidak berpengaruh pada
oleh hyarolysis. Dengan 1-0% hidrolisis sintesis terjadi di 3 hr., sedangkan
hampir di hibited dalam pertama contoh dengan 0-5% NaF (Gambar. 3) hidrolisis
dan benar-benar terhambat di kedua.
Ketika dua 500 ml. bagian dari yang Tabel 3. Protein sintesis di hadapan NaCJ
sama rumen minuman keras diinkubasi selama 3
jam. dengan 1-8 gram. pati dan 0- 3 g. urea,
sintesis atau untuk dipengaruhi oleh 103-5 33-0 103-3 27-3
beberapa lainnya. kehadiran carbo, 5-7
penyebab Jika sintesis hidrat protein dan
0,5% NaCl
adalah penjelasan, asam amino.
pertanyaan muncul mg. N/100 gram. Jumlah N
Awalnya Setelah 3 jam.
apakah itu memang mikrobiologi Sifat Sintesis NPN
karena dari synthesi.s Kontrol 33-4 103-4 103-7 27-4
mikro-organisme, dan
mg. N/100 gram. Jumlah N 6-0
apakah besarnya
NPN

Bukti bahwa perubahan N partisi

diamati pada inkubasi yang biologis in asal didominasi atas sintesis. Tindakan dari
pertama kali diperoleh. NaF adalah 'karena itu khusus satu
Pengaruh natrium fluoride. pertama berhubungan dengan yang diakui hambat
Metode pendekatan adalah untuk tindakan pada enzim dan mikro \
mempelajari pengaruh inkubasi organisms.-

PEMANFAATAN UREA DENGAN RUMINANSIA

_- 157
VOI. 37
Sintesis (+)
tampak Oleh karena bahwa perubahan
selama incu bation di selisih antara atau

total N dan NPN adalah-resultan dari dua
yang prosesberbeda, satu syn sintetik, yang
lainnya, hidrolitik dan bahwa keduanya
asal
mikrobiologis. Sebagai konsentrasi
NaF meningkat, sintesis berkurang dan
menjadi com pletely disembunyikan oleh
hidrolisis. Ketika, namun, konsentrasi
NaF meningkatkan atas 0-2 atau
hidrolisis juga berkurang; akhirnya, pada
Concentra tion dari 1-2% NaF, minuman
rumen keras becomes- 'tetap'.
Pengaruh suhu. Semua atas experi KASIH
menunjukkan bahwa diamati protein
sintesis adalah hasil dari biologis.
proses Jika demikian, perubahan suhu mungkin
juga diharapkan mempengaruhi-besarnya
sintesis. yang berbeda Bagian dari yang
sama sampel minuman rumen keras karena
itu diinkubasi dengan urea dan pati
selama 1 jam. di tem peratures bervariasi
0-3% antara 0 dan 900. Gambar 4 menunjukkan
0
II

Tabel 4. Pengaruh kuinon pada protein

(I
8ynthes8
hidrolisis (-..) mg N / 100 g
kuinon
+ 12-2 10L
+ 8-5 A21
Tidak
ada, 0-005 0-01 0-05 0-01
+ 5-4 0 20 40 60-80 Suhu Inkubasi (° C)

+ 5-1 Gambar . 4. jumlah sintesis

-.
6-4 atau hidrolisis diperoleh
+ 10-5
dengan menginkubasi rumen
+ + 10-9
0-001 H2S minuman keras selama 14 jam
H2S + air saja 0 pada yang temperaturberbeda.
11

Tabel 5. pengaruh borat asam .change curred, tetapi bahwa pada 30

oc

dan boraks pada protein 8yntheis8 dan jumlah biasa yang of'protein
400
sintesis berlangsung. Ketika,
sintesis
bagaimanapun, inkubasi suhu adalah-=
mg. N / 100 g. rumen minuman keras
500 hidrolisis
yang padadi suhu bawah 160 sedikit
 3-6 2-2 - - 4-2 (Gambar. 3), kecuali bahwa
Conc. borat asam atau boraks
hidrolisis dengan tidak
Kontrol adanya NaF mencapai yang
0-01 lebih besar magnitude pada
0-03 60 ° dari
0-05 diamati dengan konsentrasi
1-00 2-00
NaF pada 39 °. ini
0-10
0-30 Perbedaan mungkin
0-50 disebabkan penggunaan yang
1-4 1-6 3-2 0-2 *
berbeda sampel dari rumen
0-06 0-5 0Y0
0-2 *
Hidrolisis isi dalam dua contoh.
Contoh 1 Contoh 2 Namun, yang lebih tinggi
-..didominasi Hidrolisis suhu (hingga 50 atau 600)
Borat Boric acid Borax asam mencapai maksimum pada mungkin sangat menghambat
9-1 9-1 5-9 - 5-8 sekitar 60 ° dan hampir sintesis tetapi dapat
seluruhnya dihambat pada benar-benar meningkatkan
900. Dari 40 900 kurva proses hidrolitik,
sangat mirip memang dengan sedangkan NaF cenderung
yang diperoleh dengan menghambat kedua, lebih
meningkatnya sensitif sintetik proses
3-0 dariNaF menghilang pertama.
concentrationq
Pengaruh dari kuinon. serupa Percobaan
dibuat dengan kuinon sendirian dan
dengan kuinon di hadapan H2S (Tabel
4). Sintesis adalah nyata berkurang di
hadapan bahkan 0-005% kuinon, dan pada
konsentrasi 0-05% hidrolisis pra
didominasi. Di hadapan H2S kuinon
tampaknya kehilangan beracun. sifat Ini
sesuai dengan perilaku kuinon di
hadapan thiol senyawa yang sebelumnya
dicatat untuk kedelai kacang urease oleh
Quastel [1933], dan juga mengamati
dengan rumen-urease aktivitas oleh
Pearson & Smith [1943b].
Pengaruh asam borat. Dua percobaan
serupa dengan mereka yang NaF dan
kuinon dilakukan, satu dengan borat
asam dan yang lainnya dengan boraks.
Tabel 5 menunjukkan bahwa sintesis
lagi-lagi sangat berkurang dan dengan
dua tertinggi concen
trations boraks hidrolisis didominasi. Pengaruh toluena. Pearson & Smith
[1943b] telah menunjukkan bahwa toluena
tidak berpengaruh pada urease aktivitas
of-the rumen minuman keras. Sebuah tes Oleh
karena itu dilakukan untuk melihat apakah
sintesis dipengaruhi oleh ini. zat Dua
500ml . bagian-bagian dari yang sama
sampel minuman rumen keras diinkubasi
dengan pati dan urea selama 3 jam. Untuk
satu sampel ditambahkan 50 ml. toluena.
Kontrol memberikan sintesis 7-4 mg. N/100
gram. rumen minuman keras, sedangkan dengan
toluena hydro
lisis terjadi sebesar 13-7 mg. N/100
gram. ini Lagi menunjukkan
howreadilysintesis dapat-berkurang,
memungkinkan hidrolisis untuk
mendominasi. urease Kegiatan dalam ini
hal tetap tidak terpengaruh.
Pengaruh filtrasi. Rumen minuman keras
disaring melalui Chamberland filter jenis NH4HCO3. Sejak
'F'. jelas Filtrat kemudian diinkubasi
di hadapan 0-4% pati dan sekitar 0-5%

R. M. Pearson DAN J. A. B. SMITH

158 I943
Pearson & Smith [1943b] telah inkubasi. bawah Fraksi juga sama-sama
menunjukkan bahwa filtrat ini jenis dirawat. Dari hasil pada Tabel 6 dua
memiliki tidak ada urease, aktivitas N utama fakta muncul. Pertama, bahwa
ditambahkan dalam bentuk NH4HCO3 dan Tabel 6. protein sintesis dengan dua
bukan sebagai urea. Dengan tidak adanya fraksi minuman rumen keras dipisahkan
urease aktivitas dicatat dalam oleh mensentrifugasi
sebelumnya pekerjaan itu tidak
Sintesis (+) atau
mengherankan bahwa baik sintesis maupun
hidrolisis (-)
hidrolisis terdeteksi di ini bekas mg. N/100 gram.
periment, yang lagi-lagi menunjukkan
bahwa sintetis dan hidrolitik proses Imme- Setelah 24 jam.
diately di 00
secara konsisten diamati dalam
incubations ini harus dikaitkan dengan
mikro-organisme dari yang rumen.
Pengaruh fraksinasi dengan centrifuge.
Pada al melenguh rumen cairan untuk
berdiri untuk bahkan yang sangat
waktusingkat, yang Protozoa dan yang
lebih besar bakteri cenderung sedimen.
Pada sentrifugasi selama 5 menit. pada
1000 rpm kecenderungan ini sangat
ditandai memang. bawah Lapisan terdiri
dari lumpur kaya Pro tozoa dan besar
bakteri yang berwarna biru dengan yodium
[Baker, 1942 a, b; 1943]. merupakan
percobaan Karena itu dilakukan untuk
melihat apakah jumlah sintesis lebih
besar atau kurang di atas dan fraksi
bawah rumen minuman keras daripada di
sampel minuman rumen keras secara
keseluruhan. Pada yangsama saat efek
menjaga rumen minuman keras dan
fraksinya sekitar 00 selama 24 jam.
sebelum inkubasi, dipelajari. Sebuah 3
1. sampel minuman rumen keras
disentrifugasi dalam 250 ml. cangkir
selama 5 menit. pada 1000 rpm Isi dari
dua cangkir kemudian secara menyeluruh
remix dengan gemetar. Satu bagian
dari remix ingesta diinkubasi dengan 1
g. pati dan 0-5 g. urea sebagai kontrol.
Yang lain pertama kali disimpan dalam
lemari es selama 24 jam. dan kemudian
diperlakukan dengan yang carasama. 50
ml. dari minuman keras di bagian atas
dan 50 ml. dari lumpur di bawah bagian
kemudian kembali dipindahkan
masing-masing dari tersisa centrifuge
cangkirsepuluh. Atas pecahan dicampur
bersama-sama dan setengah dari sampel
diinkubasi segera dengan pati dan urea,
lainnya setengah ditempatkan dalam
lemari es selama 24 jam. sebelum
 fraksi dengan pemusingan, bagian
atas bagian menunjukkan sangat
jauh lebih besar jumlah syn
tesis daripada bawah, bagian
apakah berbagai minuman keras
diinkubasi segera atau setelah 24
jam. di 00. Kemungkinan pentingnya
ini temuan dibahas nanti.
Dari semua ini percobaan tampak
bahwa ketika rumen minuman keras
diinkubasi dengan pati dan urea di
390 N metabolisme sistem
melibatkan kedua sintetik dan
hidrolitik proses yang mungkin
melanjutkan secara bersamaan.
Proses ini mikro
biologi asal dan keseimbangan di
antara mereka sangat mudah
berubah, sehingga baik syn tesis
atau hidrolisis bersifat lebih
dominan sesuai dengan kondisi
selama inkubasi. ini terakhir Hal
sangat penting dalam hubungan
dengan urea utiliza tion, karena jika
proses dalam rumen setiap saat
adalah sebagian besar hidrolitik
dengan NH3 sebagai akhir, produk
pemanfaatan, jika ada, harus karena
proses selain konversi ini sub
sikap untuk protein dalam tersebut.
perut Faktor-faktor yang mungkin
diharapkan mempengaruhi besarnya
sintesis dan yang dominasi lebih
hidrolisis karena itu diselidiki
berikutnya.
Pengaruh pH. PH rumen ingesta
bervariasi sedikit dari waktu ke
waktu tetapi jarang di bawah 6-3
atau di atas 7-4. Dalam banyak
incubations dilakukan selama ini
pekerjaan pH penentuan telah
dibuat, dan nilai-nilai biasanya
telah antara 6-3 dan 7-4, bahkan
setelah inkubasi selama 3-4 jam. pada
39°. Tidak ada korelasi yang
ditemukan antara pH selama
inkubasi dan jumlah pro
Tein sintesis, disediakan pH
kebohongan kira-kira antara batas
atas. Dengan demikian tiga
sampel minuman yang sama rumen
keras diinkubasi selama 5k jam.
dengan 4 g. K2HPO4, 0-1 g. FeSO4, 5
gram. glukosa, 5 gram. pati dan
sekitar 1 g. urea / l., C02 yang
melewati masing-masing labu
sepanjang inkubasi. masa Dalam
kasus 1 sampel (M) pH diukur
organisme hadir dalam rumen yang
pada sering interval yang dan
mudah dinonaktifkan. Kedua, bahwa pada
disesuaikan dengan menambahkan yang
membagi rumen minuman keras menjadi 2
benar jumlah dari jenuh solu
 tion Na2CO3. Untuk 2 sampel (N) mengukur pH. Untuk - ke3 sampel (P)
yang jumlah sama Na2CO3 ditambahkan 10 g. bubuk CaCO3/l. ditambahkan
pada yang sama waktu untuk M, tanpa awalnya. Gambar. 5
sebelumnya menghapus sampel untuk
Rumen minuman keras menunjukkan bahwa pH 7-2 menurun selama
Top fraksi dalam pertama dua sampel inkubasi untuk 6-3. padat
Bawah fraksi cukup dekat dengan sosok CaCO3 adalah Oleh karena
ilmu hitung berarti dari atas 7-2 di seluruh, sedangkan itu nilai kecil yang dalam
dan bawah fraksi menjaga awal. pH
di3 sampel nilai awal
+ 11-1 + 2-8 + 14-7 + 5-0
Memegang rumen isi pada 0 ° selama 24 diukur secara akurat karena begitu
jam. sangat mengurangi jumlah sintesis banyak sampel dihapus untuk mengukur
tidak hanya dalam total rumen minuman
pH sebelum dan setelah penyesuaian,
keras tetapi juga di bagian atas dan
bawah fraksi-fakta yang lagi menunjukkan namun hasil untuk N dan P menunjukkan
bahwa ini sintesis dikaitkan dengan bahwa jumlah sintesis ketika pH
tertentu dari mikro tetap konstan tidak
jumlah sintesis di M tidak dapat
PEMANFAATAN UREA 159
dENGAN RUMINANSIA
berbeda secara signifikan dari jumlah seperti yang ditemukan yang sintesis
diamati ketika pH turun dari 7 -2 mungkin akan terpengaruh banyak oleh
hingga 6-3. jenis buffer digunakan untuk
Dalam sebelumnya makalah dari ini memperoleh pH sebagai oleh pH sendiri.
seri besar penyangga kekuatan dari yang Sintesis dapat sangat
rumen minuman keras dibahas. Dalam
dipengaruhi, bagaimanapun, dengan
pandangan ini tampaknya tidak perlu
untuk mempelajari efek pada sintesis
abnormal tinggi pH ditunjukkan
dalam eksperimen yang mengikuti, di
hidrogen-ion konsentrasi di luar
kisaran normal 7-4 untuk 6-3, khususnya mana incubations dilakukan di
hadapan yang gasberbeda.
Pengaruh dari C02-N2. Komposisi
Jumlah nitrogen P |
gas dalam rumen bervariasi sedikit dari
Total
N p i t
waktu ke waktu, tetapi khas analitis
nitrogen
angka seperti yang ditemukan oleh

75
'PV

Mm.~~~~~~.-
keepconstanToata7-ciompaed

wihtaMbandwe
50- s
untuk
nthepHisallowed
decreasefproteinnitroge6

25 ll l
O 100 200 300
Min.
Gambar. 5. Jumlah sintesis diperoleh whien
konstan pada 7-2 dibandingkan
pH dijaga
dengan yang diperoleh saat
pH
diperbolehkan untuk menurunkan 7-2 ke 6-3.
 rendah konsentrasi dari 02 di
ini, gas percobaan dilakukan
untuk menemukan apakah dari
sifat gas yang melewati medium
memiliki pengaruh pada jumlah
sintesis. Satu sampel minuman
rumen keras dibagi menjadi 6
bagian. Tiga dari diinkubasi
selama 3 jam. dengan 3 g. pati dan
800 mg. urea-N/i. sementara
lainnya 3 diinkubasi dengan pati
saja. Ada demikian 3 pasang
sampel, satu di masing-masing
pasangan yang mengandung
menambahkan urea dan lainnya
yangmengandung tidak urea.
Sebuah aliran lambat CO2
dilewatkan melalui pasangan 1,
N2 melalui 2 dan udara melalui
ke-3. Dari hasil pada Tabel 7
berikut poin muncul. (1) Tanpa
menambahkan urea, protein
sintesis di hadapan CO2 begitu
sedikit lebih besar dari itu dengan
N2 dan udara yang diragukan apakah
itu signifikan. (2) Ketika ap
proxima 800 mg. urea-N/i. yang
hadir, protein sintesis di
hadapan C02 adalah substansial,
tetapi dengan N2 dan udara
hidrolisis didominasi. (3)
Hidrolisis terjadi dengan N2 dan
udara mungkin karena dengan kedua
gas pH meningkat selama
incubations ke 8-7, sedangkan
dengan C02 itu tetap antara 6-8
dan 6-6. Untuk melihat apakah ini
dominasi hidrolisis adalah
karena sifat dari gas atau
perubahan pH, kedua percobaan
dilakukan di mana jumlah urea-N
ditambahkan ke 3 dari 6 termos
hanya 150 mg./l . Dalam ini hal
pH N2 dan udara sampel tidak
melebihi nilai awal 6-9. Dari
Eks. 2 (Tabel 7) berikut
diskusi-conclu dapat ditarik. (1)
Dengan tidak adanya menambahkan
NPN sintesis di udara dan di N2
tidak signifikan kurang dari yang
diperoleh dengan C02. (2) Dengan
jumlah urea cukup untuk
menyebabkan cukup perubahan yang
pH ketika urea itu dikonversi
ke NH3, C02 dan N2 memberikan
sangat mirip jumlah yang
sintesis. Tapi dengan udara ada
signifikan. kurang Hal ini jelas
dari ini dua percobaan bahwa
Olson [1940] adalah: CO262%, CH4 hidrolisis di
15%, N2 18% dan O ° 1%' Dalam udara dan di N2 di Exp. 1 adalah karena
pandangan dominan besar C02 dan
munculnya pH dan tidak terutama untuk percobaan penulis menyimpulkan
gas sendiri. Dari banyak serupa
pH mg. N/100 gram.
Tabel 7. Pengaruh yang berbeda
gas pada protein sintesis
Eks. 2
Exp. 1
- A
el A I

Sintesis (+) atau Sintesis( ±+)

hidrolisis ( - ) pH mg. N/100 gram.
Tanpa menambahkan 6-8-5-9 + 3-9 6-8-6-3 6-9-5-9 +4-9 6-9-6- 3
Co2 N2Air
urea + 2-1 6-8-6-6 + 2-1 +4-6 6-9-6-2 +4-7
80 mg. urea Exp. 1 dan 15 6-8-6-6* + 7-9 4-26-6
Co2 N2Udara - -
N/100 gram. rumen mg. di Eks. 2 6-8-8-76-8-8-7 * + 14-0 9-2 +8-2 6-9-6-8 +
minuman keras di 6-9-6-16-9- 5-4

7-1-6-1 +5-0 *
Tanpa urea; 0-1g . K2HPO4/100 gram. C02 Pada pH 8-7 NH3 lolos dari
kerugian
media selama inkubasi. Dalam memperkirakan jumlah hidrolisis total nitrogen
karena itu diperbolehkan untuk.
160 B. SMITH I943,
J. 4.
R. M. PEARSON AN-D
bahwa terbesar sintesis selalu
ketika Disahkan
diperoleh CO.
perlahan melalui mediunA,
CO2 memiliki
keuntungan atas N2 yang di hadapan
cukup sejumlah kecil urea atau NH4HCO3
itu dicegah tidak peningkatan
inpHmenguntungkan.
Dalam Eks. 2 (Tabel 7) pH sampel
incu tertahan dengan C02 tanpa
ditambahkan urea menurun dari 6-9 sampai
5 9. Oleh karena itu protein sintesis
mungkin telah secara signifikan lebih
besar dari 4-9 mg. N / 100 g memiliki
pH tidak berkurang sejauh ini. Sebuah
7 inkubasi Oleh karena itu dilakukan
secara bersamaan di mana 0-1 g.
K2HPO4/100 gram. rumen Isi hadir. PH
dalam ini hal berkurang hanya untuk 6-1
tetapi protein sintesis tetap tidak
berubah.

Pengaruh dari makanan faktor pada

pemanfaatan non-protein 'nitrogen
NH4HCO3 dan (NH4) 2SO4 sebagai urea.
pengganti Karena urea sekarang sangat
diperlukan untuk banyak indus mencoba
kurang tersedia sebagai binatang
menyusui
 bahkan segera setelah makan. Sangat
diragukan, karena itu, jika akan
ada terdeteksi perbedaan dalam
efisiensi pemanfaatan ini tiga
yang berbeda bentuk dari N.
Berdasarkan hasil ini,
bagaimanapun, preferensi harus
diberikan untuk urea atau NH4HCO3
..
Pengaruh urea konsentrasi. Dalam
rangka untuk melihat apakah urea
konsentrasi memiliki banyak
berpengaruh pada jumlah protein
sintesis serangkaian incubations
dilakukan di mana 1 besar, sampel
minuman rumen keras dibagi menjadi
7 yang sama bagian dan yang berbeda
jumlah dari urea ditambahkan ke
setiap. Incuba
tion berlangsung 3 jam. dalam arus
lambat 002; 3g. pati ditambahkan
per 1. rumen. minuman keras Tabel 9
menunjukkan bahwa di bawah ini
kondisi jumlah maksimum sintesis
diperoleh ketika yang ditambahkan
urea-N berjumlah 75 atau 100
mg./100 g. Bawah dan di atas ini
konsentrasi jumlah sintesis
secara signifikan kurang. Sejak urea
begitu cepat dikonversi menjadi NH3
dalam rumen, minuman keras ini hasil
harus sama-sama benar untuk
NH4HCO3.

sekitar 25 mg. N/100 gram. isi rumen,

Tabel 8. Protein synthe8i8 dengan urea, NH4HCO3 dan (NH4)2SO4*

 Exp. 1 Eks. 2
NPN Protein NPN Protein
ditambahkan disintesis ditambahkan disintesis
(mg. g.) (mg.
ig. N/100 g.) (mg. N/100 g.) pH NII0O NIIOO g.) pH

Suplemen (m
Urea instance, and a slow stream of C02
*
NH4HCO3 (NH4)2804 Analar. was passed through all the flasks.
-t 4-0 6- 7-5-7 -t 1-3 6-5-5-6 100 11.5 Incubation lasted 2 hr. Two series of
experiments
6-7-6-8 16 5-1 6-5-5-9 80 1 1-3
It early became clear that the
7-2-6-7 15 5-4 6-5-5-6 85
utilization of wPN by the ruminant
rumen isi tanpa penambahan awalnya
t NPN may depend on the nature of the diet
11-4 di dan 6-9 di 2. as a whole, and particularly on
Exp. 1 Exp.
whether the entire ration is correctly
hal-hal. NH4HCO3 dan (NH4) 2504 balanced. If adding
yang lebih banyak dan lebih mudah
disiapkan dalam besar. skala Incu Table 9. Influence of
bations were therefore carried out to concentration of urea on
see whether with these substances
protein 8ynthe&i8
protein synthesis equalled that Urea added Synthesis
obtained with urea. 3 g. starch were
present per 1. rumen liquor in every
were made. In one the rumen liqu\or was 150 6-4
amount of NPN added in increased by the addition 400 6*7
650 2-0
the different forms was of NPN and secondly, with
90-l100mg./lOOg., in NH4HCO3 it was equal to Final pH*
another it was about 15 that with urea and 5-7
6-2
mg./100 g. It can be seen
(mg. N/100g.) mg. N/100 g. - 6-4
from the results (Table ~~~~5-2 6-6
8), first, that the amount 50 78 7-1
of synthesis with these 75 11-3 7*6
particular samples of 100 11-2 7-8

greater than that with (NH4)2SO4. It is throughout.

not clear why sulphate should be less urea upsets the proper proportions of
efficient-than bicar bonate in promoting protein and potential protein to
protein synthesis. This differ carbohydrate, the urea itself may not be
ence was, however, only significant in
efficiently utilized. This may explain
the first instance when a relatively
some of the conflicting results cited in
large amount of sul phate was added,
Krebs's [1937] review and which have
but in practice the quantity of
been obtained from time to time during
cow to
(NH4)2SO4 fed to a lactating the past 40 years in experiments in
replace a portion of the dietary which rq.PN has been added to the diet
protein would be equivalent, if given of rumi
in two equal portions per day, to only
*
The initial pH in this instance was 6-2

UTILIZATION. OF UREA BY RUMINANTS 1 161

nants. Presumably the greatest carbohydrates on the amount of protein
efficiency of urea as a partial protein synthesis observed in the in vitro
substitute would beshown when the incubations was therefore studied. The
dietary protein equivalent was low results were of such interest that a
compared with the starch equivalent. In further series of experiments was made
such a diet starch itself would probably in which the effect of different
be present in relatively large amounts. proteins and amino-acids was studied.
The effect of different concentrations
of starch and also of different
 0

30

Giycero

O 2 3 4 Time of incubation (hr.)

Fig. 6. The synthesis obtained by

incubating rumen liquor in the presence of
0.3 % starch compared with the hydrolysis
obtained when starch is replaced by
glycerol of the same concentration.

Influence of concentration and nature of

carbo hydrates. Preliminary tests showed
that when 3 g. starch/l. were added to
the rumen liquor the amount of
synthesis was always greater than when
rumen liquor was incubated alone.
Moreover, when starch

was replaced by glycerol synthesis was

very re stricted in amount and was
sometimes replaced by hydrolysis.
Typical results for an experiment in
which two samples of the same rumen
liquor were incubated, one with starch
and one with glycerol (both 3-6 g./l.)
are shown in Fig. 6. 2-4 g./l. urea were
present and CO2 was passed through the
samples during incubation. Whereas with
starch protein synthesis was equivalent
to 7-4mg. N/100 g., glycerol was
responsible for hydrolysis amounting to
3-5 mg. N/100 g. Four separate portions
of the same rumen liquor were therefore
incubated at one time with different
carbohydrates (Exp. 1, Table 10). One
contained 3 g. starch/l., the 2nd 3 g./l.
galactose, the 3rd sucrose and the 4th
mal tose. Similar comparisons of the
influence of starch with that of other
carbohydrates were also made. Thus the
protein synthesis obtained in every in
stance could be related to that obtained
with starch. Onily the average amounts
of synthesis in this first experiment are
shown in Table 10, as the average values
are so typical of all the reslts that
there is no'necessity to quote the
individual values. But for Exps. 2-4
(Table 10) in which 7 incubations were
carried out at one time, the individual
results are quoted. In all these
experiments no urea was included in the
diet of the steer, and since in Exp. 1
(Table 10) none was added to the rumen
liquor, the initial NPN was very low,
4-10 mg. N/100 g. In Exps. 2-4,
however, the NPN was much higher, due
to the addition of about 100 mg.
urea-N/100 g. rumen liquor in each
incubation. Presumably the greater
amount of synthesis in the three latter
experiments was due to this. The
results, which confirm the fact that
synthesis and hydrolysis are progressing
simultaneously, but that synthesis pre
dominates under certain conditions, lead
to the following conclusions. (1) That
the amount of synthesis depends to some
extent on the starch

Table 10. Protein synthess in presence .of

carbohydrates Exp. 1
Average +1-9 2 13-3
Wt. synthesis -1-9 2 10-5 10-9
added g./l. (+) or No. -33 6 9-6 5-7
Carbohydrat 10 of 9.4 4-5
+3-5 5
e Starch 7 hydrolysis +1-3 5 3-2 -2-0
3 3-5
deter +3-7 4 14-1
1 ( -)
0-5 mg. N/100 +2-7 3 3.7
Final pH*
g. minations
'+1-6 4 Synthesis 7-0
No addition 3 0-2
+0-5 5 (mg. 6-9
Galactose +3-7 2 10-5
-3 -04 6 6-9
Sucrose 3 9.3
-2-0 3 N/1OOg.) 6-9
Maltose 3 6-6
Lactose 3 Exp. 3 3-4 6-4
Glucose 3 0-1
Dextrin +3-5 2
3 Exp. 2 13-7 1-6
Glycerol 3 +4-0 18
Lactic acid Exp. 4 13-7

*
The initial pH was 7-0 in all inoubationsa

R. M. PEARSON AND J. A. B. SMITH

162- I943
concentration, eg in the absence of exceeded that obtained with 3 g./l.
starch an hydrolysis of'2-0mg. N/100g. Below 3 g./l. synthesis decreased
was observed, but in its presence significantly. (2) That the amount of
synthesis predominated. In Exp. 4 synthesis depends on the nature of the
protein synthesis attained a maximum at carbohydrate added, being always
a starch concentration of 7 or 10 g./l. greatest with starch, galactose and
maltose; dextrin, glucose, glycerol and
On the average, however, the synthesis
lactic acid being all relatively poor
with 7 and 10 g. starch/I. rarely
stimulants. (3) That with all these
substances protein synthesis was much
greater with, than without, urea.
Influence of amino-acids and protein8.
In this section only preliminary
-experiments have been completed. The
results are therefore presented

These results, however, were not

confirmed in the two subsequent
experiments. Thus histidine ap peared to
 cause a decrease in protein synthesis
(Table 11) and leucine actually brought
about hydrolysis unless urea was present
with the amino acid (Table 12). The
explanation is not at present clear.
Perhaps some amino-acids only promote
synthesis in certain samples of rumen
liquor or when certain other non-protein
nitrogenous con stituents are present.
Further work may clear this up. Table
tentatively. Rumen liquor amino-acids and proteins. S l A 2 Sample 1 Sample 2
12 shows that asparagine causes hydro
lysis rather than synthesis.
Table 13. Protein synthesi8 or
hydrolysis in presence of protein or
substances rich in protein
Synthesis ( + ) or
hydrolysis ( )
mg. N/100 g. rumen liquor
-

was incubated with various In all instances

Protein added
3 g. starch/l. were Exp. 1 (Table 11) tyrosine had little, 0-5 Gelatine 1.0
present and CO2 wasshow that arginine if any, effect. +5-0 +5-2 +1-0 - 6-4
passed through the was particularly None + 4.0
medium. The period active in promoting Blood meal 0-1 Egg
of incubation was 3 syn white * Casein 0.1
thesis, whereas Gelatine 0-2 Gelatine - 12-5 - 27-2 -47-0
hr. The data for
In two other experiments with casein in
Table 11. Protein synthesis or which different samples of rumen contents
hydrolysis in presence of were used, hydrolysis was 3-5 and 31-3 mg.
amino-acids N/100 g. compared with synthesis of 7-7
Synthesis and 10-4 mg. N/100 g. respectively in the
controls.
mg. N/100 g. rumen liquor
*
Equivalent to about 01 % albumen.
absence of added protein.
No. of exp.... No addition 7-9
Glycine 13-2 5.5 Fresh uncoagulated 1-0 4-6
Alanine 2 3 egg white gave a much
Valine
328 3-8 2-3 2.3 The results reduced synthesis, whereas
Leucine 1-8 - with soluble casein,
Lysine of preliminary experiments
prepared freshly from
Histidine
with four' milk, - - hydrolysis
Arginine proteins are
Tyrosine
recorded in Table 13. With predominated. Hydrolysis
.1
blood meal 4-3 the amount also pre vailed when
of synthesis was the same gelatine was present and
4-2 6-0
3-5 5-6 increased
as that in the
8-9

.
protein. DISCUSSION
- I I . - 7-I . . I

Table 12. Protein synthe8si or

hydrolys's in presence of
leucine and asparagine
with increasing amounts of this

Leucine has been to find whether

Syn Syn there is any evidence
thesis ( + ) thesis ( + ) for the conversion of
Asparagine
_A The objeot of this work NPN
or hydro ingesta of the caused entirely
Added ox. It has been by a fall in the
-
lysis ( ) shown that when ammonia-N
None mg. N/100 g.
the rumen fraction of the
047 -07 --2-0
1-13 ingesta are incu NPN It has not
-0 7 bated in vitro yet been proved
2-26
+6-6 the total NPN
047 +05 urea 0 5 +4-8 that this
+3-0 +1-1 usually
urea alone decrease in
Added -4.5 diminishes
or hydro ammonia-N
-1-2 during the first actually denotes
lysis( - ) None 0-62 to protein in 3 hr. and that a synthesis of
mg. N/100 g. +2.7 1-25 the rumen
2-5 the decrease is pro tein, but a
 decrease in NPN with no change in the
of protein synthesis. It has been shown
How far this is due to arginase activity that this supposed synthesis is
in the rumen will be investigated in characteristic of rumen contents but not
future work. Histidine and leucine were of incubations with faeces, soil or
effective but much less so than arginine. feeding-stuffs,
total N is usually regarded as evidence

UTILIZATION OF UREA. BY RUMINANTS

163
VoI. 37
and that it occurs in vitro during the the rumen do not survive in other media,
first few hours of incubation when, as
and it seemed possible that these less
shown by Baker [1942 a, b; 1943], the viable organisms might be concerned in
microbiology of the medium closely the utilization of NPN Thus it was
resembles that of fresh rumen contents. observed that on incubating rumen
ingesta synthesis of protein appears to
That this synthesis is microbiological
be accompanied by protein breakdown.
in origin has been shown by incubations
with various toxic substances such as Hence, it is clear that the problem of
NaF, quinone and boric acid in minute NPN utiliza tion by ruminants can
amounts which caused a decrease in ultimately be solved only when the
synthesis which changed to hydrolysis as different factors influencing these two
the concentration of the inhibitor processes have been studied. The
increased; with the highest concen centrifuging ex periments (p. 158)
trations both synthesis andhydrolysis strongly suggest that protein
were inhibited. This indicates that in decomposition is associated particularly
the rumen synthesis and hydrolysis of with the heavier micro-organisms which
protein proceed simultaneously, and sediment rapidly, ie synthesis greatly
predominates in the top layers of the
that either one or the other may
centrifuged rumen-liquor.
predominate ac
That either protein synthesis or protein
cording to the conditions. Abundance of
break down may predominate, according
starch, for example, favours synthesis,
to the conditions in the rumen ingesta,
whereas its equivalent of glucose,
gives rise to at least two important
glycerol or lactic acid does not. Some
considerations. (1) That NPN may be of
substances, eg lactic acid and gelatine,
value to the animal only if it is fed in
may even promote conditions in which
a correctly balanced diet in which the
hydrolysis predomi
starch equivalent is sufficiently high to
nates. -In such instances, however,
balance almost all the N present. (2)
hydrolysis is not accompanied by
destruction of the urease activity of the That for ruminants the biological value
of a
rumen ingesta. This occurs only when
hydrolysis predominates owing to the
presence of small concentrations of
toxic substances such as NaF, quinone or
boric acid.
While the present work was in the
early stages Wegner et al. [1940]
demonstrated the conversion of
inorganic N to protein by inoculating
appro priate media with micro-organisms
from the cow's rumen. But we have
studied this problem not by the
inoculation of media in which conditions
may differ markedly from those in the
rumen but by incubating the rumen
liquor itself under conditions as similar
as possible to those in the rumen. This
was done originally because many of the
micro organisms most characteristic of

protein may depend not only on its
amino-acid content but also on whether
its presence in the paunch promotes
protein synthesis or hydrolysis. Thus
with blood meal, which is very
insoluble in the rumen liquor and
can be seen apparently intact in
the rumen ingesta some hours
after feeding, syn
thesis occurred in the in vitro
incubations, but with other
water-soluble proteins less
protein synthesis, and even
marked production of NH3, took
place. Possibly therefore blood
meal, due to its insoluble nature,
passes through the rumen
practically un
affected and is digested in the
small intestine as with
non-ruminant animals, whereas
other more soluble forms of
protein may be broken down
slightly but significantly to NH3
as they pass through the rumen.
To what extent a protein is
broken down to NH3 may partly
depend on the nature and amount
of the non-protein nitrogenous
substances present at the time.
Thus in the presence of leucine
only (Table 11) slight hydrolysis
to NH3 took place, but when urea
was also present synthesis
predominated. Note that these
suggestions are based on only one
experiment and that they there
fore require confirmation.
Nevertheless such indi cations
did appear from time to time.
The value of NPN to the ruminant
may therefore be, that though it
can be utilized for protein
synthesis, under certain
conditions it also diminishes
protein breakdown.
SUMMARY
1. Many experiments have been
carried out in which liquid rumen
contents have been incubated
under different conditions and
with different sub stances.
2. During a 2-4 hr. incubation,
when the micro biology appeared
to be practically unaltered, the
NPN of the medium diminished
while the total N remained
unchanged, which suggests that
synthesis of protein took place.
3. The amount of synthesis
occurring in a hr. in the presence
of 0-3 g. starch/100 g. rumen
liquor was usually equivalent to about 8
mg. N/100 g. rumen liquor. If this rate
were maintained for 24 hr. in the inact
rumen there should be protein synthesis
equivalent to 72 g. N or 450 g. protein. have the most stimulating effect.
4. That the synthesis is 6. Similar but preliminary experiments
microbiological in nature has been shown have been carried out with proteins and
amino-acids. 7. Protein synthesis
by experiments with NaF, quinone and
occurring during the incu bation of
boric acid, and by incubations at
different temperatures. rumen liquor is accompanied by protein
5. Relative amounts of synthesis in breakdown. Either process may
the presence of various carbohydrates predominate ac
have been studied. Starch appears to

164 R. M. PEARSOIT AND J. A. B. SMITH I943

cording to the general conditions or to for ruminants is briefly discussed.
the sub stances present. The possible
bearing of this on the utilization of NPN The authors wish to thank those who
and on the biological value of proteins have helped them in these
investigations; Dr M. P. Applebey of
Imperial Chemical Industries Limited,
Prof. A. C. Chibnall, FRS, and Dr N. C.
Wright for their interest and
encouragement; Mr Frank Baker for
many invaluable discussions,
particularly on the microbiological
aspects; Dr P. S. Watts, MRCVS, for
making the rumen fistula in the steer
and for maintaining the animal in
excellent condition for almost 4 years;
and various members of the Institute
staff; also the directors of Imperial
Chemical Industries Limited for allowing
a member of their staff (R. M. P.) to
assist in this work at the Hannah
Institute, and for a grant towards
expenses,

Baker, F. [1942a]. Nature, Lond., 149, 220.

[1942b]. Nature, Lond., 149, 582.
- [1943]. Ann. appl. Biol. (in the Press).
REFERENCES

Pearson, R. M. & Smith, J. A. B. [1943a].

Biokimia. J. 37, 142.
[1943 b]. Biokimia. J. 37, 148.
Krebs, K. [1937]. Biederm. Zbl.,
Tiererndhrung, 9, 394.
Olson, T. M. [1940]. J. Dairy Sci. 23, 351.
Quastel, J. H. [1933]. Biokimia. J. 27, 1116.
Wegner, M. I., Booth, A. N., Bohstedt, G. &
Hart, E. B. [1940]. J. Dairy Sci. 23, 1123.