MAKALAH

BIOESAY
JURNAL
“In vitro dan in vivo bukti aktivitas Hypouricemic dan anti-inflamasi dari
Maclura cochinchinensis (Lour.) Ekstrak kayu teras sudut”

DISUSUN OLEH :

NAMA : NIA MARZA

NO . BP : 1804017

KELAS : A

Dosen : Apt, Diza Sartika, M. Fram

UNIVERSITAS PERINTIS INDONESIA

 KATA PENGANTAR

Puji syukur saya panjatkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Kuasa karena berkat rahmat-
Nya saya dapat menyelesaikan makalah Bioesay yang berjudul “In vitro dan in vivo bukti
aktivitas hypouricemic dan anti-inflamasi dari Maclura cochinchinensis (Lour.) Ekstrak kayu
teras sudut” ini.Makalah ini diajukan guna memenuhi tugas mata kuliah Bioesay

Saya menyadari makalah ini masih jauh dari sempurna, oleh karena itu sangat
diharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun demi kesempurnaan makalah ini.
Semoga makalah ini memberikan informasi bagi seluruh mahasiswa Farmasi bahkan
masyarakat dan bermanfaat untuk pengembangan ilmu pengetahuan bagi kita semua.
Akhirnya besar harapan saya kiranya makalah ini dapat membantu teman-teman.

Padang, 04 Desember 2021

Penyusun
 BAB I
PENDAHULUAN

1. Latar Belakang Jurnal

Maclura cochinchinensis (Lour.) Ekstrak kayu teras Corner (MC) telah digunakan
untuk pengobatan asam urat, hiperurisemia, dan peradangan dalam pengobatan tradisional
Thailand. Meskipun penggunaan tradisional mereka, mekanisme aksi mereka tetap tidak
diketahui.

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui mekanisme aktivitas ekstrak
kayu teras MC menggunakan keduanyain vitro dan in vivo model. Metode ekstraksi
dioptimalkan untuk menghasilkan kandungan tertinggi senyawa biokimia dan aktivitas
antioksidan. Efek ekstrak kayu teras MC pada xantin oksidase dan kinetika enzimnya
ditentukanin vitro dan efek antihiperurisemia dievaluasi pada tikus hiperurisemia yang
diinduksi kalium oksonat (PO). Efek anti-inflamasi ekstrak MC heartwood juga diuji
terhadap upregulasi mRNA proinflamasi yang diinduksi lipopolisakarida dalam sel
makrofag tikus RAW 264,7. Ekstraksi soxhlet kayu teras MC dengan etanol 70%
menghasilkan aktivitas antioksidan yang lebih kuat, dan kandungan total fenolik dan
flavonoid yang lebih tinggi daripada metode konvensional (maserasi atau rebusan).

Dengan menggunakan HPLC, kami menemukan bahwa MC mengandung morin

sebagai konstituen utama, yang dapat menjelaskan aktivitas farmakologisnya. Selain itu,
pemberian ekstrak kayu teras MC (500 mg/kg) secara nyata menurunkan kadar asam urat
pada tikus hiperurisemia yang diinduksi PO (p < 0,05). Ekstrak kayu teras MC
menghambat aktivitas hati xantin oksidaseex vivo sekitar 53%. Selain itu, ekstrak MC
heartwood secara nyata menurunkan regulasi ekspresi mRNA dari mediator inflamasi
(TNF-A, TGF-B, iNOS, dan COX-2) dan penghambatan ini sebanding dengan
deksametason. Oleh karena itu, ekstrak kayu teras MC adalah kandidat yang menjanjikan
sebagai pengobatan alami untuk peradangan dan hiperurisemia yang menyebabkan asam
urat.
 BAB II
PEMBAHASAN

A. PEMBAHASAN

Maclura cochinchinensis (Lour.) Pojok, pemanjat bercabang atau berkayu, termasuk

dalam famili Moraceae. Namanya jugaCudrania cochinchinensis dan Cudrania javanensis,
dan biasa disebut duri cockspur atau "Kae Lae" dalam bahasa Thailand. Ini tersebar luas di
banyak negara di Asia, seperti Cina Selatan, Jepang, Korea, Taiwan, India, dan Thailand.
Kayu inti dari M.cochinchinensis(MC) telah digunakan dalam pengobatan tradisional
Thailand sebagai agen tonik. yang memiliki beberapa sifat biologis seperti aktivitas
antioksidan, antiinflamasi, dan antidiabetes. Di Thailand, beberapa pasien menggunakan
ekstrak kayu empulur MC sebagai obat tradisional untuk pengobatan diabetes,
peradangan, dan asam urat. Namun, bukti farmakologis mekanistik yang mendukung
relevansi medisnya masih terbatas hingga saat ini.

Mengenai patofisiologi asam urat, kelarutan maksimumnya dalam darah adalah 6,4-
6,8 mg/dL dan hiperurisemia menyebabkan pengendapan kristal urat. Urat direabsorbsi
dan diekskresikan di tubulus proksimal ginjal, di mana beberapa jenis transporter urat
seperti urat/anion exchanger 1 (URAT1) dan glukosa transporter tipe 9 (GLUT9) berada
dan mungkin bertanggung jawab untuk penanganan urat di ginjal.

Hiperurisemia dapat terjadi karena penurunan ekskresi atau peningkatan produksi

asam urat dan diakui sebagai faktor risiko utama asam urat. Pengobatan saat ini untuk
hiperurisemia didasarkan pada penghambatan xanthine oxidase (XOD), yang merupakan
target obat gout yang terkenal, allopurinol. Namun, efek samping yang parah, seperti
reaksi hipersensitivitas, telah menjadi perhatian. Selanjutnya, penelitian terbaru
menemukan bahwa pengendapan kristal monosodium urat (MSU) pada hiperurisemia
kronis dapat menginduksi reaksi inflamasi.yaitu, produksi mediator inflamasi terkait
seperti interleukin-1 (IL-1)). Menurunkan kadar asam urat melalui penghambatan XOD
telah dilaporkan berkorelasi dengan redaman stres oksidatif. Stres oksidatif menyebabkan
disfungsi endotel dan berkontribusi pada patofisiologi diabetes, hipertensi, arteriosklerosis,
dan gagal jantung kronis

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui mekanisme molekuler ekstrak
kayu teras MC terhadap aktivitas antioksidan, hipourisemia, dan antiinflamasinya
 menggunakanin vitrodan in vivo model. Selain itu, kinetika enzim XOD diukur
menggunakan plot Lineweaver-Burk untuk menentukan jenis penghambatan enzim oleh
ekstrak kayu teras MC.

1.1. Bahan kimia

Allopurinol, Asetonitril, asam galat, morin, pereaksi Folin-Ciocalteu,
karboksimetilselulosa (CMC-Na), kuersetin, troloks, natrium asetat trihidrat, natrium
oktan sulfonat, asam urat, enzim xantin oksidase dari susu sapi, 2,20-azinobis-(3-
ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS), 2,2-Diphenyl-1- picrylhydrazyl (DPPH),
2,4,6-tripyridyl-S-triazine dan potassium oxonate dibeli dari Sigma Aldrich Chemical .
(St. Louis, MO, AS). Aluminium klorida, asam askorbat, kalium persulfat dan natrium
bikarbonat diperoleh dari Ajax Finechem, Australia. Media Elang (DMEM) Dulbecco
yang dimodifikasi, serum janin sapi (FBS), dan reagen kultur jaringan lainnya diperoleh
dari Gibco, AS. Semua reagen kimia lainnya adalah kelas analitis dan digunakan tanpa
pemurnian lebih lanjut.

1.2. Bahan Tanaman

Kayu inti dari M.cochinchinensis (MC) diperoleh dari Amphoe Mueang, Provinsi
Nakhon Pathom oleh Assist. Prof. Dr. Boonyadist Vongsak, Fakultas Ilmu Farmasi,
Universitas Burapha pada Agustus 2016. Bahan-bahan ini diidentifikasi dengan
membandingkan dengan sampel otentik oleh Tuan Sarawit Phisutthinusart. Spesimen
voucher (SCFC-0816-01) telah disimpan di Departemen Kimia Pangan, Fakultas
Farmasi, Universitas Mahidol, Thailand. Kayu teras kering dari
M.cochinchinensisdipotong kecil-kecil dan digiling menjadi sedang hingga kasar bubuk,
dan kemudian disimpan di tempat yang kering sampai ekstraksi.

1.3. Metode Ekstraksi

Ekstraksi soxhlet

Serbuk kayu teras MC (20 g) direfluks menggunakan alat Soxhlet dalam tiga
pelarut yang berbeda, yaitu etanol 70%, etil asetat, dan air dengan perbandingan 1:20
(MC:pelarut) selama 4 jam/ekstraksi. Larutan yang diperoleh disaring melalui kertas
saring Whatman No. 1, kemudian dipekatkan dan dikeringkan pada suhu 45-C
menggunakan rotavapor. Persentase hasil dihitung. Ekstrak kayu teras MC yang
diperoleh disimpan pada suhu -20-C sampai percobaan lebih lanjut.
 Kelelahan

Serbuk kayu teras MC (20 g) direndam dalam etanol 70% atau etil asetat dengan
perbandingan 1:20 (MC: pelarut) selama 24 jam. Marc diekstraksi ulang tiga kali dengan
metode yang sama. Larutan yang diperoleh disaring melalui kertas saring Whatman No.
1, kemudian dipekatkan dan dikeringkan pada suhu 45-C menggunakan rotavapor.
Persentase hasil dihitung. Ekstrak kayu teras MC yang diperoleh disimpan pada suhu
-20-C sampai percobaan lebih lanjut.

Rebusan

Serbuk kayu teras MC (20 g) diekstraksi dengan merebus tiga kali dalam air
dengan perbandingan 1:20 (MC: pelarut) selama 15 menit/ekstraksi. Ekstrak yang
terkumpul disaring melalui kertas saring Whatman No.1, kemudian dipekatkan dan
dikeringkan pada suhu 45-C menggunakan rotavapor. Persentase hasil dihitung. Ekstrak
kayu teras MC yang diperoleh disimpan pada suhu -20-C sampai percobaan lebih lanjut.

1.4. Efek Hipourisemia Dari Ekstrak Kayu Teras MC

Pengaruh ekstrak kayu teras MC pada aktivitas XOD secara in

VitroPenghambatan aktivitas XOD dianalisis berdasarkan penurunan

pembentukan asam urat pada suhu 37 . -C menggunakan sistem HPLC pada 295 nm.
Sampel uji dilarutkan dalam DMSO (konsentrasi akhir 0,1% (v/v)) hingga konsentrasi
akhir yang sesuai untuk dosis uji. Campuran reaksi terdiri dari 0,1 M pirofosfat (pH 7,4),
0,08 unit enzim XOD, dan sampel uji (10e100 Mg/mL ekstrak kayu teras MC,
allopurinol sebagai kontrol positif, atau buffer sebagai kontrol negatif). Reaksi dimulai
dengan menambahkan 120Mlarutan M xanthine dan inkubasi pada 25 -C selama 10
menit. Reaksi dihentikan dengan penambahan 1 mL HCl 1 N, dan konsentrasi asam urat
ditentukan dengan HPLC. Aktivitas penghambatan ekstrak kayu teras MC pada XOD
dihitung sebagai IC50 nilai, ditentukan oleh analisis regresi linier dari kurva konsentrasi-
respon (persen penghambatan versus konsentrasi log). Setiap IC50 nilai adalah rata-rata
dari tiga percobaan.
Analisis kinetik enzim in vitro dari penghambatan XOD olehekstrak kayu teras
MC
Jenis penghambatan XOD oleh ekstrak kayu teras MC ditentukan dengan analisis
plot Lineweaver-Burk. Tiga konsentrasi ekstrak kayu teras MC (15, 30, dan 45Mg/mL)
dinilai dengan konsentrasi larutan xantin yang berbeda (15, 30, 60, dan 120 MM). Reaksi
enzim XOD dilakukan seperti yang dijelaskan pada bagian 2.6.1 di atas. Konstanta
penghambat (Ki) untuk penghambatan XOD oleh ekstrak kayu teras MC ditentukan
dengan regresi kuadrat terkecil dari data yang diamati menggunakan Microsoft Excel
2010 dilengkapi dengan Solver Add-in, menggunakan persamaan berikut

Efek in vivo ekstrak kayu batang MC pada kadar asam urat plasma pada tikus
hiperurisemia yang diinduksi kalium oksonat (PO)
Tikus ICR jantan (30e40 g, 6 minggu) ditempatkan di pusat hewan Fakultas
Farmasi, Universitas Mahidol, Bangkok, Thailand, pada suhu terkontrol (23 ± 2 -C)
dengan siklus terang-gelap 12 jam dan akses ke diet standar dan air ad libitum. Mencit
diaklimatisasi selama 7 hari sebelum memulai percobaan. Hewan-hewan tersebut
menerima perawatan sesuai dengan Panduan Perawatan dan Penggunaan Hewan
Laboratorium, Pusat Hewan Laboratorium Nasional, Universitas Mahidol. Perawatan
hewan dan protokol eksperimental telah disetujui oleh komite etik hewan Fakultas
Farmasi, Universitas Mahidol (nomor izin PYT 008/2560).
B. HASIL

2.1. Hasil ekstraksi dan kandungan antioksidan dengan metode ekstraksi yang
berbeda.
Hasil ekstraksi yang diperoleh dengan tiga metode ekstraksi yang berbeda
disajikan dalam Meja 2. Diamati bahwa maserasi dengan etanol 70% menunjukkan
hasil ekstraksi tertinggi (30,2%). Kandungan total fenolik dan aktivitas antioksidan
dari metode ekstraksi yang berbeda dari ekstrak kayu teras MC ditunjukkan pada:. Di
antara semua metode ekstraksi, ekstraksi soxhlet dengan etanol 70% secara signifikan
menunjukkan kandungan total fenolik tertinggi dan aktivitas pemulungan ABTS (p <
0,05).

2.2. Analisis Fitokimia

Kromatogram HPLC dari ekstrak kayu teras MC menunjukkan puncak yang

menonjol pada waktu retensi 6,88 menit, yang sesuai dengan standar referensi morin .
Kurva kalibrasi standar morin menghasilkan persamaan regresi, y¼ 11668x - 8204.7,
dengan koefisien determinasi yang baik (R2 dari 0,9982). Kandungan morin dalam
setiap ekstrak MC ditunjukkan pada. Meskipun ekstraksi Soxhlet dengan etil asetat
memberikan kandungan morin tertinggi (1,10± 0,08% b/b), aktivitas antioksidannya
lebih rendah dibandingkan ekstraksi Soxhlet dengan etanol 70%. Oleh karena itu,
ekstraksi Soxhlet dengan etanol 70% merupakan metode ekstraksi yang paling sesuai,
dan memberikan rendemen, aktivitas antioksidan, dan kandungan morin yang lebih
tinggi dibandingkan dengan metode maserasi dan decoction. Ekstrak kayu teras MC
yang dihasilkan oleh ekstraksi Soxhlet dengan etanol 70% dipilih untuk eksperimen
lebih lanjut.
2.3. Efek Hipourisemia Dari Ekstrak Kayu Teras MC
Efek pada aktivitas XOD in vitro
Ekstrak kayu teras MC menghambat aktivitas XOD in vitro dengan cara yang
bergantung pada konsentrasi; IC50 ditentukan menjadi 32,24 Mg/mL, sedangkan
allopurinol adalah 2,58 Mg/mL.

BAB III
 PENUTUP & KESIMPULAN

1.1 . Kesimpulan
Maclura cochinchinensis (Lour.) Ekstrak kayu teras Corner (MC) telah
digunakan untuk pengobatan asam urat, hiperurisemia, dan peradangan dalam
pengobatan tradisional Thailand. Meskipun penggunaan tradisional mereka, mekanisme
aksi mereka tetap tidak diketahui. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui
mekanisme aktivitas ekstrak kayu teras MC menggunakan keduanyain vitro dan in vivo
model. Metode ekstraksi dioptimalkan untuk menghasilkan kandungan tertinggi
senyawa biokimia dan aktivitas antioksidan. Efek ekstrak kayu teras MC pada xantin
oksidase dan kinetika enzimnya ditentukanin vitro dan efek antihiperurisemia
dievaluasi pada tikus hiperurisemia yang diinduksi kalium oksonat (PO).
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui mekanisme aktivitas ekstrak
kayu teras MC menggunakan keduanyain vitro dan in vivo model. Metode ekstraksi
dioptimalkan untuk menghasilkan kandungan tertinggi senyawa biokimia dan aktivitas
antioksidan. Efek ekstrak kayu teras MC pada xantin oksidase dan kinetika enzimnya
ditentukanin vitro dan efek antihiperurisemia dievaluasi pada tikus hiperurisemia yang
diinduksi kalium oksonat (PO). Efek anti-inflamasi ekstrak MC heartwood juga diuji
terhadap upregulasi mRNA proinflamasi yang diinduksi lipopolisakarida dalam sel
makrofag tikus RAW 264,7. Ekstraksi soxhlet kayu teras MC dengan etanol 70%
menghasilkan aktivitas antioksidan yang lebih kuat, dan kandungan total fenolik dan
flavonoid yang lebih tinggi daripada metode konvensional (maserasi atau rebusan).

Hiperurisemia dapat terjadi karena penurunan ekskresi atau peningkatan

produksi asam urat dan diakui sebagai faktor risiko utama asam urat. Pengobatan saat
ini untuk hiperurisemia didasarkan pada penghambatan xanthine oxidase (XOD), yang
merupakan target obat gout yang terkenal, allopurinol. Namun, efek samping yang
parah, seperti reaksi hipersensitivitas, telah menjadi perhatian.

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui mekanisme molekuler ekstrak
kayu teras MC terhadap aktivitas antioksidan, hipourisemia, dan antiinflamasinya
menggunakanin vitrodan in vivo model. Selain itu, kinetika enzim XOD diukur
menggunakan plot Lineweaver-Burk untuk menentukan jenis penghambatan enzim
oleh ekstrak kayu teras MC.
1.2.Saran
Mohon maaf jika dalam makalah ini ada yang kurang lengkap dan
masih banyak kekurangan dan lebih jelas lagi isi dari judul yang dibahas.

DAFTAR PUSTAKA
1. Mokkhasmit M, Swatdimongkol K, Satrawaha P. Studi toksisitas tanaman obat Thailand.
Banteng Dept Med Sci. 1971;12:36e65.

2. Kummee S, Intaraksa N. Aktivitas antimikroba dari Desmos chinensis daun dan Maclura
cochinchinensis ekstrak kayu. Songklanakarin J Sci Technol. 2008;30: 635e 639.

3. Bunyapraphatsara N, Dechsree S, Yoosook C, Herunsalee A, Panpisutchai Y. Komponen

virus herpes simpleks diisolasi dari Maclura cochinchinensis. Fitomedika. 2000; 6:421e424.

4. Sithisarn P, Rojsanga P, Sithisarn P, Kongkiatpaiboon S. Aktivitas antioksidan dan efek

antibakteri pada isolasi klinis Streptococcus suis dan Stafilokokus intermedius ekstrak dari
beberapa bagian Cladogynos orientalis dan skrining fitokimia mereka. Evid Based
Complement Alternat Med. 2015;2015: 908242.

5. Kementerian Kesehatan Masyarakat. Daftar Obat Esensial Nasional (Daftar Produk Obat
Herbal). 2013. Thailand).

6. Swargiary A, Ronghang B. Penyaringan konstituen fitokimia, sifat antioksidan dan

antibakteri dari ekstrak kulit kayu metanol Maclura cochinchinensis (Lour.) pojok. Int J
Pharma Bio Sci. 2013;4:P449eP459.

7. Zheng ZP, Zhu Q, Fan CL, Tan HY, Wan M. Phenolic tirosinase inhibitor dari batang
Cudrania cochinchinensis. Fungsi Makanan.2011;2:259e264.

8. Chen Y, Li Y, Xu H, Li G, Ma Y, Pang YJ. Morin mengurangi stres oksidatif, apoptosis

dan peradangan pada tikus iskemik otak.Afr J Tradit, Pengobatan Alternatif Pelengkap.
2017;14:348e355.

9. Yu Z, Fong WP, Cheng CH. Aksi ganda morin (3,5,7,2',4'-pentahydroxyflavone) sebagai

agen hipourisemia: efek urikosurik dan aktivitas penghambatan xantin oksidase.J Pharmacol
Exp Ada. 2006;316:169e175.

10. Gliozzi M, Malara N, Muscoli S, Mollace V. Pengobatan hyperuricemia. Int J Cardiol.

2016;213:23e2237.