Nama:alifian iqnadzar(2014201057)

Kls:idk2 b
Dosen:dr.aminah
pewarnaan Gram dimulai dari pengambilan spesimen, kemudian dilanjutkan
dengan persiapan apusan, pewarnaan Gram, dan pemeriksaan di bawah
mikroskop. Bakteri Gram positif memiliki lapisan peptidoglikan yang tebal
(20-80 nm), sehingga akan mengambil kompleks primer dan akan tampak
biru atau ungu di bawah mikroskop. Sementara itu, bakteri Gram negatif
memiliki lapisan peptidoglikan yang tipis (1-3 nm) dan persentase ikatan
silang yang rendah diikuti dengan lapisan membran luar yang tipis (7-8 nm),
sehingga tidak mengikat kompleks dan akan tampak merah di bawah
mikroskop.

peralatan yang perlu dipersiapkan dalam melakukan pewarnaan Gram antara

lain: Mikroskop cahaya, Kaca objek, Pipet, Kertas saring, Inoculation
loop,kompor spirtus
Bahan-bahan yang diperlukan dalam melakukan pewarnaan Gram antara lain:
-Sampel yang akan diperiksa

-Cairan pewarna: larutan gentian violet atau kristal violet

-Larutan A: kristal violet 2 g, etanol 95% 20 ml

-Larutan B: ammonium oksalat 0,8 g, air steril 80 mL

-Mordant larutan iodin Gram: iodin 1 g, potassium iodida 2 g, air steril 300

ml
-Zat dekolorisasi (peluntur): etanol 95% 50 ml atau aseton 50 ml

-Counterstain:
-Stock solution: safranin O 2,5 g, etanol 95% 100 ml
-Working solution: stock solution 10 ml, air steril 90 mL[1]
Cara mempersiapkan apusan yang akan diwarnai adalah :
1. Sterilkan inoculating loop pada api bunsen hingga memerah, kemudian
tunggu dingin selama sekitar 30 detik. Jika loop masih panas saat spesimen
diambil, sel bakteri bisa rusak
2. Dengan menggunakan kaca objek (slide) bersih, letakkan spesimen di
tengah kaca objek. Jika spesimen diambil dari agar plate, beri 1 tetes air
untuk membuat suspensi terlebih dulu
3. Dengan menggunakan inoculating loop, apuskan spesimen di atas kaca
objek sampai didapatkan lapisan yang tipis, kemudian keringkan di udara
4. Panaskan kaca objek dengan melewatkannya di atas api bunsen
sebanyak 2-3 kali agar terfiksasi

Pewarnaan Gram dilakukan dengan cara :

1. Tuangkan cairan pewarna kristal violet pada preparat secara merata,

tunggu selama 1 menit

2. Miringkan preparat dan bilas dengan sedikit air mengalir

3. Tuangkan cairan mordant pada preparat, tunggu selama 1 menit

4. Miringkan kembali preparat dan bilas dengan sedikit air mengalir

5. Lakukan dekolorisasi dengan cara meneteskan cairan dekolorisasi

sedikit demi sedikit pada preparat hingga tidak ada zat warna yang mengalir
keluar dari preparat

6. Bilas preparat dengan air mengalir

7. Tuangkan counterstain (safranin) pada preparat, tunggu selama 30

detik sampai 1 menit
8. Bilas preparat dengan air mengalir, kemudian keringkan preparat

9. Lakukan pengamatan preparat menggunakan mikroskop dengan

perbesaran 100 kali, 400 kali, hingga 1000 kali