Pewarnaan Bakteri

Bacterial Staining
Nadya Putri Amini Aritonang
nadyaputriaminiaritonang.bio19@fkip.unsyiah.ac.id
Abstrak
Pewarnaan bakteri adalah kegiatan pengamatan morfologi sel bakteri yang memerlukan cara-cara
khusus yaitu pewarnaan dan tanpa pewarnaan. Fungsi pewarnaan adalah untuk memberi warna pada
sel, membedakan bakteri satu dengan lainnya dan untuk mengetahui sifat bakteri yang dicat.
Pewarnaan gram merupakan pewarnaan diferensial yaitu penggunaan dua noda yang kontras
dipisahkan oleh agen dekolorisasi (alkohol). Praktikum ini bertujuan untuk mempelajari cara
pengecatan Gram dan mengamati bentuk serta sifat bakteri terhadap pewarnaan Gram. Praktikum ini
dilakukan dengan pendekatan kualitatif yaitu dengan metode deskriptif dengan mengamati langsung.
Berdasarkan praktikum yang dilakukan teknik pewarnaan ini menghasilkan dua warna yaitu warna
ungu sebagai gram positif daan warna merah sebagai gram negatif.
Kata Kunci: pewarnaan, bakteri, dekolorasi
Abstract
Bacterial staining is the activity of observing the morphology of bacterial cells that requires
special methods, namely staining and without staining. The function of staining is to give color to
cells, differentiate bacteria from one another and to determine the nature of the bacteria being
stained. Gram stain is a differential stain that is the use of two contrast stains separated by a
decolorizing agent (alcohol). This practicum aims to study how to stain Gram and to observe the
shape and properties of bacteria against Gram stain. This practicum was carried out with a
qualitative approach, namely by using descriptive methods by observing directly. Based on the
practicum, this coloring technique produces two colors, namely purple as gram-positive and red as
gram-negative.
Keywords: staining, bacteria, decolorization

1
Nadya Putri Amini Aritonang: Pewarnaan Bakteri
Pendahuluan
Pada sel Gram-negatif, alkohol
meningkatkan porositas dinding sel dengan
melarutkan lipid lapisan luar. Jadi, kompleks
KV-I dapat lebih mudah dihilangkan dari
lapisan peptidoglikan yang tidak tertaut silang
dengan kuat. Oleh sebab itu, efek pencucian
alkohol memfasilitasi pelepasan kompleks KV-I
yang tidak terikat, yang membuat sel-sel
menjadi kehilangan warna atau tidak berwarna.
Karena hanya sel-sel Gramnegatif yang
mengalami kehilangan warna sehingga sel-
selnya menyerap pewarna tandingan.
Sedangkan Gram-positif mempertahankan
warna ungu dari pewarna primer (Bambang,
2014, p.331).
Proses identifikasi dilakukan dengan
mengetahui karakteristik bakteri yang tumbuh.
Isolat yang digunakan dalam identifikasi ini
adalah biakan murni. Pengamatan morfologi
koloni dilakukan secara makroskopis dan
mikroskopis. Secara makroskopis meliputi
bentuk koloni bakteri, warna koloni, tepi
koloni, dan elevasi koloni. Secara mikroskopis
diamati bentuk sel, susunan sel dengan
mikroskop pada perbesaran 1000x (Putri, 2018,
p.7).
Tahapan isolasi bertujuan memperoleh
bakteri dalam koloni tunggal dari campuran
populasi bakteri termofilik yang berasal dari
sumber air panas Way Panas Bumi. Isolasi
bakteri termofilik yaitu dengan menginkubasi
sampel pada suhu 50°C selama 48 jam. Sampel
air panas diinokulasi pada media PCA (Plate
Count Agar) dengan metode cawan tuang untuk
menumbuhkan bakteri termofilik, inkubasi pada
suhu 50°C selama 48 jam. Koloni bakteri yang
tumbuh, diisolasi dan dikultur kembali dengan
media PCA untuk mendapatkan koloni tunggal,
lalu dilanjutkan identifikasi bakteri untuk
mengetahui karakteristik dari masing-masing
koloni bakteri tersebut (Tuntun, 2014, p.299).
Identifikasi mikroskopis dilakukan dengan
melakukan pewarnaan Gram pada koloni
tunggal (single colony) bakteri. Bakteri Gram
positif memiliki dinding sel yang tebal,
2
membran sel selapis, serta tidak memiliki
membaran luar, sedangkan bakteri Gram negatif
mempunyai dinding sel yang tipis yang berada
diantara dua lapis membaran sel. Pulasan Gram
dalam pemeriksaan mikrobiologi diagnostik
memungkinkan untuk klasifikasi cepat bakteri
menjadi empat kategori sederhana : kokus
Gram positif, basil Gram positif, kokus Gram
negatif dan basil Gram negatif (Putri, 2018,
pp.22-23).
Reaksi-reaksi Perbedaan reaksi kedua
golongan bakteri tersebut terhadap pewarnaan
gram disebabkan bakteri gram positif memiliki
dinding sel tebal yang terdiri dari peptidoglikan
dan asam teikoat yang akan menyebabkan pori-
porinya menutup dan mencegah keluarnya
kompleks pewarna primer pada saat pembilasan
gram C (alkohol asetoin). Sedangkan dinding
sel bakteri gram negatif mengandung sedikit
peptidoglikan dan banyak lipid yang akan larut
dalam gram C (alkohol aseton) pada saat
pembilasan (Sardiani, 2015, p.6).
Metode/ Cara Kerja
Waktu dan Tempat
Praktikum dilakukan pada hari Rabu, 7
April 2021 pada pukul 09.50-11.30 WIB di
Laboratorium Pendidikan Biologi FKIP
Universitas Syiah Kuala.
Target/Populasi/Sampel
Praktikum ini dilakukan dengan target
umum yaitu untuk mengetahui cara-cara dalam
melakukan pewarnaan pada bakteri dan
menentukan apakah bakteri tersebut termasuk
bakteri gram positif atau bakteri gram negatif.
Adapun alat dan bahan yang digunakan adalah
slide, biakan bakteri, Bunsen dan korek api,
aquades, Kristal violet, lugol/iodine, alcohol,
safranin, ose, penjepit slide, steaning jar, bak
slide, dan slide dryer.
Prosedur
Langkah pertama yaitu dinyalakan bunsen,
slide disterilkan diatas bunsen beserta ose,
diambil setetes aquades menggunakan ose dan
diletakkan pada silde. Bakteri biakan disterilkan
Nadya Putri Amini Aritonang: Pewarnaan Bakteri
dengan cara digilirkan kemudian ose disterilkan
kembali dengan memanaskannya sampai
merah. Bakteri biakan diambil menggunakan
ujung ose dan diletakkan pada slide dengan cara
melingkar dan dikeringkan pada bunsen dengan
cara dilewat-lewatkan. Setelah cetakan bakteri
jadi, saatnya pewarnaan.
Pewarnaan mengunakan kristal violet
adalah dengan diambil kristal violet
menggunakan pipet dan ditunggu semenit dan
diteteskan pada slide hingga menutupi cetakan
dan ditunggu selama satu menit. Setelahnya
bilas menggunakan aquades. Tahap kedua
menggunakan lugol dengan mengambil cairan
lugol menggunakan pipet tetes dan diteteskan
pada slide hingga menutupi cetakan dan
didiamkan selama satu menit setelahnya slide
dibilas menggunakan aquades. Tahap ketiga
menggunakan alkohol yang diambil
menggunakan pipet tetes dan dialirkan pada
slide selama lima detik dan dibilas
menggunakan aquades. Tahap akhir
menggunakan safranin yang diteteskan pada
slide hingga menutupi cetakan dan didiamkan
selama satu menit setelahnya dibilas
menggunakan aquades.
Data Instrumen
Data pada praktikum ini berupa gambar di
pembahasan dari objek yang diamati disertai
dengan deskripsi dan paparan dari proses
praktikum. Data instrumen diperoleh
pengamatan langsung (observasi).
Teknik Analisis Data
Teknik analisis data pada pengamatan
praktikum ini adalah dengan metode diskriptif.
Adapun metode yang dilakukan pada
pengamatan ini adalah pengamatan langsung
dengan metode diskriptif, yaitu menjelaskan
secara rinci. Foto hasil pengamatan di
laboratorium disertai dengan penjelasan yang
disajikan di dalam pembahasan laporan
praktikum.
Hasil dan Pembahasan
3
Pada praktikum yang telah dilakukan,
praktikan menggunakan pewarnaan gram.
Pewarnaan gram terbagi dua yaitu Gram positif
dan Gram negatif. Gram positif, apabila bakteri
yang telah diwarnai oleh pewarna dasar dan
warnanya tidak terhapus oleh alkohol, maka
yang tampak adalah warna dari bakteri kristal
violet dan tidak menyerap tidak warna safarin.
Bisa dikatakan warna dari bakteri Gram positif
adalah ungu. Sedangkan Gram negatif, apabila
bakteri yang telah diwarnai oleh pewarna dasar
lalu warnanya terhapus oleh pencucian dengan
alkohol akan menyerap warna safarin dengan
warna mrah muda. Sehingga warna dari bakteri
Gram negatif adalah merah muda.
Pewarnaan gram atau metode gram adalah
suatu metode empiris untuk membedakan
spesies bakteri menjadi dua kelompok besar,
yakni gram positif dan gram negatif.
Pengecetan gram juga merupakan pengecetan
yang sangat penting dan paling banyak dipakai
untuk mengidentifikasi dan determinasi bakteri.
Pengecetan tersebut termasuk pengecetan
deferensial, banyak modifikais dari pewarnaan
gram, tetapi semuanya berdasarkan prinsip yang
sama yaitu, mewarnai organisme dengan
pewarna dasar, yaitu engan kristal violet, fiksasi
warna untu menguatkan melekatnya warna
dasar misalnya dengan iodin, fungsi larutan
lugol, yaitu meningkatkan aktivitas peningkatan
zat warna oleh bakteri, memperjelas zat warna,
dan mempersuit kelarutan zat warana pencucian
atau penghausan warna dasar dengan alkohol,
dan pewarnan kembali dengan pewarna
pembanding atau kontras yang berbeda dengan
pewarna dasar yaitu mewarnai sel–sel yang
telah hilang warnanya oleh penghapusan warna,
pewarna yang digunakan misalnya safranin
karbol fukhsin (Fitrah, 2017).
Bakteri merupakan salah satu golongan
organisme prokariotik (tidak mempunyai
selubung inti) namun bakteri memiliki
informasi genetik berupa DNA berbentuk
sirkuler, panjang dan bisa disebut nucleoid. Tes
biokimia pewarnaan gram merupakan kriteria
yang efektif untuk klasifikasi. Hasil pewarnaan
Nadya Putri Amini Aritonang: Pewarnaan Bakteri

akan menunjukkan perbedaan besar dan

kompleks pada sel bakteri sehingga bakteri
dibagi menjadi 2 kelompok (Holderman, 2017).
Pewarnaan gram bertujuan untuk
mengamati morfologi sel bakteri dan
mengetahui kemurnian sel bakteri, juga
membedakan bakteri ke dalam dua kelompok Gambar 3. Mengambil bakteri secara aseptis
yakni, bakteri gram positif dan bakteri gram dengan menggunakan jarum ose.
negative (Dewi, 2013).
Bakteri gram positif terlihat berwarna ungu
karena asam-asam ribonukleat pada sitoplasma
sel-sel gram positif membentuk ikatan yang
lebih kuat dengan kompleks ungu kristal violet
sehingga ikatan kimiawi tersebut tidak mudah
dipecahkan oleh pemucat warna. Reaksi Gambar 4. Kaca Benda Ditetesi Aquades,
diratakan dan dikeringkan.
tersebut didasarkan atas perbedaan komposisi
kimiawi dinding sel. Sel gram positif
mempunyai dinding dengan lapisan
peptidoglikan yang tebal (Safrida, 2012).
Bakteri gram negatif adalah bakteri yang
tidak mempertahankan zat warna metil ungu
pada metode pewarnaan gram. Banyak spesies Gambar 5. Dibubuhkan pewarna kristal violet
bakteri gram negatif yang bersifat pathogen
yang berarti bahaya bagi organisme inang. Sifat
pathogen ini umumnya berkaitan dengan
komponen tertentu pada dinding sel gram-
negatif terutama lapisan lipopolisakarida
(Ampou, 2015).
Gambar 6. Diteteskan larutan iodium/lugol

Gambar 1. Kaca benda setelah dibersihkan

dengan alkohol lalu dikeringkan di atas nyala
api spiritus. Gambar 7. Dicuci dengan larutan alkohol

Gambar 8. Diberikan safranin

Gambar 2. Sterilisasi ose

4
Nadya Putri Amini Aritonang: Pewarnaan Bakteri
Gambar 9. Dicuci dengan air mengalir
Gambar 10. Sel bakteri di bawah mikroskop
Simpulan dan Saran
Simpulan
Dari pratikum yang telah dilakukan
diperoleh bahwa Pewarnaan bakteri adalah
kegiatan pengamatan morfologi sel bakteri yang
memerlukan cara-cara khusus yaitu pewarnaan
dan tanpa pewarnaan. Fungsi pewarnaan adalah
untuk memberi warna pada sel, membedakan
bakteri satu dengan lainnya dan untuk
mengetahui sifat bakteri yang dicat. Pewarnaan
gram merupakan pewarnaan diferensial yaitu
penggunaan dua warna yang kontras dipisahkan
oleh agen dekolorisasi (alcohol). Berdasarkan
praktikum yang dilakukan teknik pewarnaan ini
menghasilkan satu warna yaitu warna merah
sebagai gram negatif.
Saran
Dari hasil praktikum ini, diharapkan
mahasiswa dapat memahami materi terlebih
dahulu sebelum memulai praktikum, agar
proses praktikum dapat berjalan dengan baik
dan lancar.
Daftar Pustaka
Ampou, E. E., dkk. 2015. Bakteri Asosiasi pada
Karang Scleractinia Kaitannya dengan
5
Fenomena La-Nina di Pulau Bunaken.
Jurnal Kelautan Nasional, 10 :2, 55-63.
Bambang, G., A., dkk. 2014. Analisis Cemaran
Bakteri Coliform dan Identifikasi
Escheria coli pada Air Isi Ulang dari
Depot di Kota Manado. Jurnal Ilmiah
Farmasi, 3:3, 325-334.
Dewi, A. K. 2013. Isoloasi, Identifikasi dan Uji
Sensitivitas Staphylococcus aureus
Terhadap Amoxilin dari Sampel Susu
Kambing Peranakan Ettawa (PE)
Penderita Mastitis di Wilayah Girimulyo,
Kulonprogo, Yogyakarta. Jurnal Sain
Veteriner, 31:2, 138-150.
Fitrah, R., dkk. 2017. Analisis Bakteri Tanah di
Hutan Larangan Adat Rumbio. Jurnal
Agroteknologi. 8:1, 17-22.
Holderman, M. V., dkk. 2017. Identifikasi
Bakteri pada Pegangan Eskalator di Salah
Satu Pusat Pemberlanjaan di Kota
Manado. Jurnal Ilmiah Sains, 17:1, 13-
18.
Putri, O., L., & Kusdiyantini, E. 2018. Isolasi
dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat dari
Pangan Fermentasi Berbasis Ikan
(Inasua) yang Diperjualbelikan di
Maluku-Indonesia. Jurnal Biologi
Tropika, 1:2, 6-12.
Putri, W., Y., dkk. 2018. Identifikasi dan
Karakteristik Bakteri Asam Laktat yang
Diisolasi dari Vagina Wanita Usia Subur.
Jurnal Kesehatan Andalas, 1:1, 20-25.
Safrida, Y. D., dkk. 2012. Isolasi dan
Karakterisasi Bakteri Berpotensi
Probiotik pada Ikan Kembung. Jurnal
Depik, 1:3, 200-203.
Sardiani, N., dkk. 2015. Potensi Tunikata
Rhopalaea sp. Sebagai Sumber Inokulum
Bakteri Endosimbion Penghasil Anti
Bakteri; 1. Karakterisasi Isolat. Jurnal
Alam dan Lingkungan, 6:11, 1-10.
Tuntun, M., & Huda, M. 2014. Isolasi dan
Identifikasi Bakteri Termofilik dari
Sumber Air Panas Way Panas Bumi
Natar Lampung Selatan. Jurnal Analisis
Kesehatan, 3:1, 297-304.
Nadya Putri Amini Aritonang: Pewarnaan Bakteri