Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

2
bakteri

Setidaknya 300 spesies bakteri yang berbeda ditemukan dalam kotoran satu individu.
Sebagian besar bakteri ini adalah anaerob ketat. Mayoritas bakteri yang tersisa
adalah anaerob fakultatif.Escherichia coliadalah anaerob fakultatif umum dalam tinja.

Bakteri dari limbah tinja serta ratusan bakteri tanah dan air yang masuk ke sistem
pengangkutan melalui aliran masuk dan infiltrasi (I/I) ditemukan pada influen proses
pengolahan air limbah kota. Untuk tujuan teks ini, bakteri yang umum ditemukan dalam
proses pengolahan air limbah dibagi menjadi kelompok-kelompok berdasarkan 1)
responsnya terhadap oksigen molekul bebas (O2) dan 2) kemampuan enzimatiknya untuk
mendegradasi substrat dalam digester anaerobik.

RESPON TERHADAP OKSIGEN MOLEKULER GRATIS

Bakteri dapat dibagi lagi menjadi tiga kelompok sesuai dengan respon mereka terhadap
molekul oksigen bebas (Tabel 2.1). Kelompok-kelompok ini adalah 1) aerob ketat, 2)
anaerob fakultatif, dan 3) anaerob, termasuk bakteri pembentuk metana.
Aerob yang ketat aktif dan mendegradasi substrat hanya dengan adanya oksigen
molekuler bebas. Organisme ini hadir dalam jumlah yang relatif besar dalam proses
film tetap aerobik, misalnya, trickling filter, dan proses pertumbuhan tersuspensi
aerobik, misalnya, lumpur aktif. Di hadapan oksigen molekuler bebas mereka
melakukan peran penting dalam degradasi limbah. Namun, aerob ketat mati dalam
digester anaerobik di mana oksigen molekuler bebas tidak ada.
Anaerob fakultatif aktif dengan ada atau tidak adanya oksigen molekuler bebas.
Jika ada, oksigen molekuler bebas digunakan untuk aktivitas enzimatik dan

Mikrobiologi Digester Anaerobik, oleh Michael H. Gerardi ISBN

0-471-20693-8 Hak Cipta © 2003 oleh John Wiley & Sons, Inc.

11
12 BAKTERI

TABEL 2.1 Kelompok Bakteri Menurut Respon Mereka terhadap Oksigen Molekul Bebas

Kelompok Contoh Makna

Aerobik ketat Hidrosis haliscomenobacter Mendegradasi senyawa organik terlarut; berkontribusi

untuk bulking lumpur berfilamen
bakteri nitrosp. Mengoksidasi NO2-untuk TIDAK
3 -
nitrosomonassp. mengoksidasi NH+ 4untuk TIDAK2-

Sphaerotilus natans Mendegradasi senyawa organik terlarut; berkontribusi

untuk bulking lumpur berfilamen
Zoogloea ramigera Mendegradasi senyawa organik terlarut; berkontribusi
untuk pembentukan flok

fakultatif Escherichia coli Mendegradasi senyawa organik terlarut; berkontribusi

anaerob untuk pembentukan flok; berkontribusi terhadap denitrifikasi atau

penggumpalan

Basilsp. Mendegradasi senyawa organik terlarut; berkontribusi

untuk denitrifikasi atau penggumpalan

anaerob Desulfovibriosp. Mengurangi SO2-4ke H2S

Methanobacterium formicium Menghasilkan CH4

TABEL 2.2 Kelompok Bakteri Anaerob

Kelompok Contoh Makna

Toleran oksigen Desulfovibriosp. Mengurangi SO2-4 ke H2S

desulfomarkulumsp. Mengurangi SO2-4 ke H2S
Intoleransi oksigen Methanobacterium formicium Menghasilkan CH4
Methanobacterium propionicium Menghasilkan CH4

degradasi limbah. Jika oksigen molekul bebas tidak ada, molekul lain, untuk
contoh, ion nitrat (NO– 3), digunakan untuk mendegradasi limbah seperti metanol (CH3OH)
(Persamaan 2.1). Ketika ion nitrat digunakan, denitrifikasi terjadi dan gas dinitrogen
(N2) diproduksi.

6TIDAK
3 –+ 5CH3OHÆ 2N2+ 5CO2+ 7H2O + 6OH– (2.1)

Sebagian besar bakteri dalam proses film tetap dan proses pertumbuhan
tersuspensi adalah anaerob fakultatif, dan organisme ini juga melakukan banyak
peran penting dalam degradasi limbah. Sekitar 80% bakteri dalam proses aerobik ini
adalah anaerob fakultatif. Organisme ini ditemukan dalam jumlah yang relatif besar
tidak hanya dalam proses aerobik tetapi juga dalam proses anaerobik.
Selama degradasi limbah dalam digester anaerobik, bakteri anaerob
fakultatif, misalnya,Enterobakterspp., menghasilkan berbagai asam dan alkohol,
karbon dioksida (CO2), dan hidrogen dari karbohidrat, lipid, dan protein.
Beberapa organisme, misalnya,Escherichia coli, menghasilkan senyawa berbau
busuk seperti indole dan skatole.
Anaerob tidak aktif dengan adanya molekul oksigen bebas dan dapat dibagi menjadi
dua subkelompok: spesies yang toleran oksigen dan spesies yang tidak toleran oksigen
atau anaerob ketat (Tabel 2.2). Beberapa anaerob adalah penghasil asam kuat, seperti,
Streptokokusspp., sedangkan anaerob lainnya, sepertidesulfomarkulumspp., kurangi
sulfat (SO2– 4) menjadi hidrogen sulfida (H2S) (Persamaan 2.2). Meskipun toleran oksigen
anaerob bertahan hidup dengan adanya oksigen molekuler bebas, organisme ini tidak dapat
 RESPON TERHADAP OKSIGEN MOLEKULER GRATIS 13

melakukan aktivitas seluler normal, termasuk degradasi substrat, dengan adanya

oksigen molekuler bebas. Anaerob yang ketat, termasuk bakteri pembentuk metana,
mati dengan adanya oksigen molekuler bebas.

CH3COOH + SO2– 4Æ 2CO2+ 2H2O + H2S (2.2)

Banyak bakteri pembentuk asam berhubungan dengan bakteri pembentuk metana.

Organisme ini termasuk anaerob fakultatif yang memfermentasi senyawa organik sederhana
yang larut dan anaerob ketat yang memfermentasi protein dan karbohidrat kompleks.
Produk fermentasi sangat bervariasi tergantung pada bakteri yang terlibat dalam
proses fermentasi. Oleh karena itu, perubahan kondisi operasional yang
mengakibatkan perubahan bakteri dominan juga mengakibatkan perubahan
konsentrasi asam dan alkohol yang dihasilkan selama fermentasi. Perubahan
konsentrasi asam dan alkohol secara signifikan mengubah substrat yang tersedia
untuk bakteri pembentuk metana, aktivitasnya, dan, akibatnya, kinerja digester.
Kebanyakan anaerob ketat adalah pemulung. Organisme ini ditemukan di mana
kondisi anaerobik ada di danau, dasar sungai, saluran usus manusia, dan digester
anaerobik. Anaerob bertahan dan mendegradasi substrat paling efisien ketika potensi
reduksi oksidasi (ORP) lingkungannya antara –200 dan –400 milivolt (mV). Setiap jumlah
oksigen terlarut dalam digester anaerobik meningkatkan ORP lumpur dan menghambat
aktivitas anaerobik termasuk hidrolisis, asetogenesis, dan metanogenesis. Oleh karena itu,
lumpur dan air limbah yang diumpankan ke digester anaerobik seharusnya tidak memiliki
oksigen molekuler. Lumpur yang mengendap dan mengental biasanya tidak memiliki
konsentrasi oksigen terlarut sisa. Lumpur ini biasanya memiliki ORP rendah (–100 hingga –
300mV).
ORP air limbah atau lumpur dapat diperoleh dengan menggunakan pengukur
pH elektrometri dengan skala milivolt dan probe ORP. ORP air limbah atau
lumpur diukur pada skala milivolt pH meter.
ORP adalah pengukuran jumlah relatif bahan teroksidasi, seperti:
sebagai ion nitrat (NO– 3) dan ion sulfat (SO2– 4), dan bahan tereduksi, seperti amunisi
ion nium (NH+ 4) (Tabel 2.3). Pada nilai ORP lebih besar dari +50mV, molekul bebas
oksigen tersedia dalam air limbah atau lumpur dan dapat digunakan oleh aerob
dan anaerob fakultatif untuk degradasi senyawa organik. Degradasi ini terjadi di
bawah kondisi oksik.
Pada nilai ORP antara +50 dan –50mV, oksigen molekuler bebas tidak tersedia
tetapi ion nitrat atau ion nitrit (NO– 2) tersedia untuk degradasi organik
senyawa. Degradasi senyawa organik tanpa molekul oksigen bebas adalah
kondisi anaerobik. Penggunaan ion nitrat atau ion nitrit terjadi di bawah kondisi
anoksik dan disebut sebagai denitrifikasi, penggumpalan, dan lumpur naik di
clarifier sekunder dari proses lumpur aktif.
Pada nilai ORP kurang dari –50mV, ion nitrat dan ion nitrit tidak tersedia tetapi ion
sulfat tersedia untuk degradasi senyawa organik. Degradasi ini juga terjadi tanpa
molekul oksigen bebas. Ketika sulfat digunakan untuk mendegradasi senyawa
organik, sulfat direduksi dan hidrogen sulfida terbentuk bersama dengan berbagai
asam dan alkohol.
Pada nilai ORP kurang dari –100mV, degradasi senyawa organik berlangsung
sebagai satu bagian dari senyawa berkurang sementara bagian lain dari
senyawa teroksidasi. Bentuk degradasi anaerobik dari senyawa organik adalah
14 BAKTERI

TABEL 2.3 Potensi Pengurangan Oksidasi (ORP) dan Aktivitas Seluler

perkiraan Molekul Pembawa untuk Kondisi Pernafasan

ORP, mV Degradasi Organik
senyawa

> +50 HAI2 Oksi Aerobik

+ 50 hingga -50 TIDAK3-atau tidak2- anaerobik anoksik
<-50 JADI42- anaerobik Fermentasi, reduksi sulfat
<-100 Senyawa Organik anaerobik Fermentasi, asam campuran
produksi
<-300 BERSAMA2 anaerobik Fermentasi, metana
produksi

Substrat yang tidak larut

eksoenzim Endoenzim

Lendir eksoseluler Membran sel

Dinding sel

Gambar 2.1 Ada dua jenis enzim yang digunakan oleh bakteri untuk mendegradasi substrat. exoen-
zim diproduksi di dalam sel dan dilepaskan melalui membran sel dan dinding sel untuk menghidrolisis
substrat yang tidak larut yang teradsorpsi ke lendir eksoseluler. Limbah terlarut masuk ke dalam sel bakteri
dan didegradasi oleh endoenzim.

umumnya dikenal sebagai fermentasi asam campuran karena campuran asam,

misalnya, asetat, butirat, format, dan propionat, diproduksi. Campuran alkohol
juga diproduksi selama fermentasi.
Pada nilai ORP kurang dari –300mV, terjadi degradasi anaerobik senyawa organik
dan produksi metana. Selama produksi metana, senyawa organik sederhana seperti
asetat diubah menjadi metana, dan karbon dioksida dan hidrogen digabungkan
untuk membentuk metana.

KEMAMPUAN ENZIM UNTUK MENGURANGI SUBSTRAT

Bakteri mendegradasi substrat melalui penggunaan enzim. Enzim adalah

molekul protein yang mengkatalisis reaksi biokimia. Dua jenis enzim terlibat
dalam degradasi substrat—endoenzim dan eksoenzim (Gambar 2.1).
Endoenzim diproduksi di dalam sel dan mendegradasi substrat terlarut di dalam
sel. Eksoenzim juga diproduksi di dalam sel tetapi dilepaskan melalui "lendir" yang
melapisi sel ke substrat tidak larut yang menempel pada lendir. Setelah kontak
dengan substrat, eksoenzim melarutkan substrat partikulat dan koloid. Satu kali
 BAKTERI PEMBENTUK ASETAT 15

TABEL 2.4 Eksoenzim dan Substrat

Substrat menjadi eksoenzim Contoh Bakteri Produk

terdegradasi Diperlukan

Polisakarida Sakarolitik Selulase Selulomonas gula sederhana

Protein proteolitik protease Basil Asam amino
Lemak lipolitik Lipase Mycobacterium Asam lemak

larut, substrat ini masuk ke dalam sel dan didegradasi oleh endoenzim. Produksi
eksoenzim dan pelarutan substrat partikulat dan koloid biasanya memakan
waktu beberapa jam.
Semua bakteri menghasilkan endoenzim, tetapi tidak semua bakteri menghasilkan
eksoenzim. Tidak ada bakteri yang menghasilkan semua eksoenzim yang diperlukan untuk
mendegradasi berbagai macam substrat partikulat dan koloid yang ditemukan dalam lumpur
dan air limbah (Tabel 2.4). Setiap eksoenzim serta setiap endoenzim hanya mendegradasi
substrat atau kelompok substrat tertentu. Oleh karena itu, komunitas bakteri yang besar dan
beragam diperlukan untuk memastikan bahwa jenis eksoenzim dan endoenzim yang tepat
tersedia untuk degradasi substrat yang ada.
Kelimpahan relatif bakteri dalam digester anaerobik seringkali lebih besar dari
1016sel per mililiter. Populasi ini terdiri dari bakteri sakarolitik (~108sel/ml),
bakteri proteolitik (~106sel/ml), bakteri lipolitik (~105sel/ml), dan bakteri
pembentuk metana (~108sel/ml).
Ada tiga kelompok bakteri penting dalam digester anaerobik sehubungan dengan
substrat yang digunakan oleh masing-masing kelompok. Kelompok-kelompok ini
termasuk bakteri pembentuk asetat (asetogenik), bakteri pereduksi sulfat, dan
bakteri pembentuk metana. Bakteri pembentuk asetat dan bakteri pereduksi sulfat
dibahas dalam bab ini, dan bakteri pembentuk metana dibahas pada Bab 3.

BAKTERI PEMBENTUK ASETAT

Bakteri pembentuk asetat (asetogenik) tumbuh dalam hubungan simbiosis dengan

bakteri pembentuk metana. Asetat berfungsi sebagai substrat bagi bakteri
pembentuk metana. Misalnya, ketika etanol (CH3CH2OH) diubah menjadi asetat,
karbon dioksida digunakan dan asetat dan hidrogen dihasilkan (Persamaan 2.3).

CH3CH2OH + CO2Æ CH3COOH + 2H2 (2.3)

Ketika bakteri pembentuk asetat menghasilkan asetat, hidrogen juga diproduksi. Jika
hidrogen terakumulasi dan terjadi tekanan hidrogen yang signifikan, tekanan tersebut
mengakibatkan penghentian aktivitas bakteri pembentuk asetat dan hilangnya produksi
asetat. Namun, bakteri pembentuk metana memanfaatkan hidrogen dalam produksi
metana (Persamaan 2.4) dan tekanan hidrogen yang signifikan tidak terjadi.

BERSAMA2+ 4H2Æ CH4+ 2H2HAI (2.4)

Bakteri pembentuk asetat adalah produsen hidrogen obligat dan hanya bertahan
hidup pada konsentrasi hidrogen yang sangat rendah di lingkungan. Mereka hanya bisa
bertahan jika sisa metabolisme mereka—hidrogen—terus dibuang. Hal ini dicapai dalam
16 BAKTERI

Asetat
JADI42-
H2

BERSAMA2

Pengurang sulfat pembentuk metana

bakteri bakteri

H2S CH4

Gambar 2.2Banyak kelompok bakteri yang berbeda dalam digester anaerobik sering bersaing untuk substrat
dan akseptor elektron yang sama. Contoh kompetisi ini adalah penggunaan asetat dan hidrogen oleh bakteri
pereduksi sulfat dan bakteri pembentuk metana. Asetat digunakan sebagai substrat oleh kedua kelompok
bakteri tersebut. Metana diproduksi oleh bakteri pembentuk metana dan berbagai asam dan alkohol
diproduksi oleh bakteri pereduksi sulfat. Hidrogen digunakan dengan sulfat (SO2- 4)
oleh bakteri pereduksi sulfat dan hidrogen sulfida (H2S) diproduksi.

hubungan simbiosis mereka dengan bakteri yang memanfaatkan hidrogen atau bakteri
pembentuk metana. Bakteri asetogenik berkembang biak dengan sangat lambat. Waktu
generasi untuk organisme ini biasanya lebih dari 3 hari.

BAKTERI PENURUN SULFATE

Bakteri pereduksi sulfat juga ditemukan dalam digester anaerobik bersama dengan bakteri
pembentuk asetat dan bakteri pembentuk metana. Jika terdapat sulfat, bakteri pereduksi sulfat
sepertiDesulfovibrio desulfuricansberkembang biak. Perbanyakan atau reproduksinya seringkali
membutuhkan penggunaan hidrogen dan asetat—substrat yang sama yang digunakan oleh
bakteri pembentuk metana (Gambar 2.2).
Ketika sulfat digunakan untuk mendegradasi senyawa organik, sulfat direduksi menjadi
hidrogen sulfida. Hidrogen diperlukan untuk mereduksi sulfat menjadi hidrogen sulfida.
Kebutuhan hidrogen menghasilkan persaingan hidrogen antara dua kelompok bakteri,
bakteri pereduksi sulfat dan bakteri penghasil metana.
Ketika bakteri pereduksi sulfat dan bakteri penghasil metana bersaing untuk
mendapatkan hidrogen dan asetat, bakteri pereduksi sulfat memperoleh hidrogen dan
asetat lebih mudah daripada bakteri pembentuk metana di bawah konsentrasi asetat
rendah. Pada rasio substrat-sulfat <2, bakteri pereduksi sulfat bersaing dengan bakteri
pembentuk metana untuk asetat. Pada rasio substrat-sulfat antara 2 dan 3, persaingan
sangat ketat antara kedua kelompok bakteri. Pada rasio substrat-sulfat >3, bakteri
pembentuk metana lebih disukai.
Hidrogen sulfida yang dihasilkan oleh bakteri pereduksi sulfat memiliki efek penghambatan yang
lebih besar pada konsentrasi rendah pada bakteri pembentuk metana dan bakteri pembentuk asetat
daripada pada bakteri pembentuk asam.
 3
Bakteri pembentuk metana

Bakteri pembentuk metana dikenal dengan beberapa nama (Tabel 3.1) dan merupakan
kelompok organisme yang beragam secara morfologis yang memiliki banyak bentuk, pola
pertumbuhan, dan ukuran. Bakteri dapat ditemukan sebagai batang individu, batang
melengkung, spiral, dan kokus (Gambar 3.1) atau dikelompokkan sebagai kelompok sel yang
tidak teratur, rantai sel atau filamen, dan susunan sarcina atau kubus (Gambar 3.2). Kisaran
ukuran diameter sel individu adalah 0,1–15mm. Filamen bisa sampai 200mm panjangnya.
Bakteri motil dan nonmotil (Gambar 3.3) serta bakteri pembentuk spora dan non-spora dapat
ditemukan.
Bakteri pembentuk metana adalah beberapa bakteri tertua dan dikelompokkan dalam
domain Archaebacteria (dariarachaeyang berarti "kuno") (Gambar 3.4). Domain tumbuh
subur dalam panas. Archaebacteria terdiri dari semua bakteri pembentuk metana yang
diketahui, bakteri yang sangat halofilik, bakteri termoasidofilik, dan bakteri yang sangat
termofilik. Namun, bakteri pembentuk metana berbeda dari semua bakteri lainnya.

Bakteri pembentuk metana adalah bakteri anaerob yang peka terhadap oksigen, rewel, dan
merupakan organisme darat dan akuatik yang hidup bebas. Meskipun bakteri pembentuk metana
sensitif terhadap oksigen, ini bukan kerugian yang signifikan. Bakteri pembentuk metana ditemukan
di habitat yang kaya akan senyawa organik yang dapat terdegradasi. Di habitat ini, oksigen dengan
cepat dihilangkan melalui aktivitas mikroba. Banyak terjadi sebagai simbion dalam saluran
pencernaan hewan. Bakteri pembentuk metana juga memiliki kandungan belerang yang sangat
tinggi: Sekitar 2,5% dari total berat kering sel adalah belerang.
Bakteri pembentuk metana diklasifikasikan dalam domain Archaebacteria karena
beberapa karakteristik unik yang tidak ditemukan pada bakteri sejati atau Eubacteria.
Fitur-fitur ini termasuk 1) dinding sel "tidak kaku" dan lipid membran sel yang unik, 2)
degradasi substrat yang menghasilkan metana sebagai limbah, dan 3)

Mikrobiologi Digester Anaerobik, oleh Michael H. Gerardi ISBN

0-471-20693-8 Hak Cipta © 2003 oleh John Wiley & Sons, Inc.

17
18 BAKTERI PEMBENTUK METAN

TABEL 3.1 Nama yang Biasa Digunakan untuk Bakteri

Pembentuk Metana

Bakteri metanogenik
Metanogen
Bakteri pembentuk metana
Bakteri penghasil metana

koenzim khusus. Dinding sel kekurangan asam muramat, dan membran sel tidak
mengandung lipid eter sebagai konstituen utamanya (Gambar 3.5). Koenzim yang unik
untuk bakteri pembentuk metana adalah koenzim M dan koenzim F yang mengandung
nikel.420dan F430. Koenzim M digunakan untuk mereduksi karbon dioksida (CO2) menjadi
metana. Koenzim yang mengandung nikel adalah pembawa hidrogen penting dalam
bakteri pembentuk metana.
Koenzim adalah asam organik sarat logam yang dimasukkan ke dalam enzim dan
memungkinkan enzim bekerja lebih efisien. Koenzim adalah komponen sistem
transfer elektron penghasil energi yang memperoleh energi untuk sel bakteri dan
membuangnya

Gambar 3.1Bentuk umum sel bakteri pembentuk metana. Bentuk umum dari bakteri pembentuk
metana termasuk batang atau basil (a), batang melengkung (b), spiral (c), dan kokus atau bulat (d).
Gambar 3.2Com
pola meta

Gambar 3.3Bakteri pembentuk metana non-motil dan motil. Bakteri pembentuk metana mungkin
nonmotil (a) atau motil (b, c, dan d). Bakteri motil memiliki flagel atau beberapa flagela. Flagel atau
flagela dapat terletak di salah satu ujung sel atau di seluruh permukaan sel bakteri.
20 MET

Eucarya
Hewan

bakteri
Tanaman
Selulosa-
mencerna
bakteri

Spirochetes
ganggang

E. coli

archaea

pecinta asam
archaea
Metanogen

Gram-positif
bakteri

Termofil

Gambar 3.4Lokasi bakteri pembentuk metana pada pohon filogenetik. Pohon filogenetik (perkembangan sejarah
berbagai bentuk kehidupan) mengandung (arachae) kehidupan terbentuk paling dekat dengan pangkal pohon,
sedangkan kehidupan baru terbentuk paling dekat dengan ujung cabang. Pohon itu berisi domain Thermopiles,
Archaea, Eubacteria (bakteri sejati), dan Eucarya (bentuk kehidupan yang lebih tinggi). Bakteri pembentuk metana
ditemukan paling dekat dengan pangkal pohon.
 SEBUAH 21

kapsul

Sel
{
dinding

membran sel

(sebuah)

kapsul

{
muram
Sel asam
dinding

membran sel

(b)
Gambar 3.5Dinding sel bakteri pembentuk metana. Dinding sel bakteri pembentuk metana (a) tidak
mengandung asam muramat, sedangkan sel bakteri lain (b) mengandung asam muramat dalam jumlah yang
bervariasi.

Dinding sel Membran sel

- C-e- H -
e

Gambar 3.6Elektron (e) dilepaskan dari ikatan kimia yang rusak dari substrat di dalam sel bakteri
dikeluarkan melalui penggunaan sistem transpor elektron. Sistem ini menggunakan penggunaan
protein yang mengandung ko-enzim seperti logam dan vitamin.
22 BAKTERI PEMBENTUK METAN

TABEL 3.2 Contoh Bakteri Pembentuk Metana dengan dan

tanpa Amplop Pelindung

Marga Amplop

bakteri metanobakteri Absen

Methanobrevibacter Absen
metanosarina Absen
Metanococcus Hadiah
Metanogenium Hadiah
Metanomicrobium Hadiah
Methanospirillum Hadiah

Gambar 3.7Kehadiran amplop pada beberapa bakteri pembentuk metana. Beberapa bakteri pembentuk
metana memiliki selubung (a) yang memberikan perlindungan tambahan untuk sel bakteri. Bakteri
pembentuk metana yang tidak memiliki selubung (b) mudah dilisiskan dengan adanya surfaktan.

Komposisi kimia unik dari dinding sel membuat bakteri “sensitif” terhadap toksisitas
dari beberapa asam lemak. Juga, banyak bakteri pembentuk metana tidak memiliki
selubung pelindung di sekitar dinding selnya (Tabel 3.2). Surfaktan atau kejutan hipotonik
dengan mudah melisiskan bakteri pembentuk metana yang tidak memiliki selubung ini
(Gambar 3.7).
Semua bakteri pembentuk metana menghasilkan metana. Tidak ada organisme lain yang
menghasilkan metana. Bakteri pembentuk metana memperoleh energi dengan mereduksi
senyawa atau substrat sederhana seperti karbon dioksida dan asetat (CH3COOH). Beberapa
bakteri pembentuk metana mampu memfiksasi molekul nitrogen (N2).
Bakteri pembentuk metana diklasifikasikan menurut strukturnya,
pemanfaatan substrat, jenis enzim yang dihasilkan, dan kisaran suhu
pertumbuhan. Ada sekitar 50 spesies bakteri pembentuk metana yang
diklasifikasikan dalam tiga ordo dan empat famili (Tabel 3.3).
Bakteri pembentuk metana tumbuh sebagai konsorsium mikroba, mentolerir garam
konsentrasi tinggi, dan anaerob obligat. Bakteri tumbuh dalam jumlah terbatas
 BAKTERI PEMBENTUK METAN 23

TABEL 3.3 Kelompok Bakteri Pembentuk Metana

Memesan Keluarga

Methanobacteriales Methanobacteriaceases
Metanokokus Methanococcaceae
Mikroba metanomik Methanomicrobiaceae
Methanosarcinaceae

substrat.Methanobacterium formicium, misalnya, tumbuh pada format, karbon dioksida,

dan hidrogen dan merupakan salah satu bakteri pembentuk metana yang lebih melimpah
dalam digester anaerobik.Methanobacterium formiciummemainkan peran penting dalam
pencernaan lumpur dan produksi metana.Methanobacterium formiciumdan
Methanobrevibacter arboriphilusadalah dua bakteri pembentuk metana yang dominan
dalam digester anaerobik. Aktivitas organisme ini dan semua bakteri pembentuk metana
biasanya ditentukan dengan mengukur perubahan konsentrasi asam volatil atau produksi
metana.
Di alam, bakteri pembentuk metana melakukan dua peran yang sangat khusus. Mereka
berpartisipasi dalam degradasi banyak senyawa organik yang dianggap biorekalsitran,
yaitu, hanya dapat terdegradasi secara perlahan, dan mereka menghasilkan metana dari
degradasi senyawa organik. Metana kurang larut dalam air, inert dalam kondisi anaerobik,
tidak beracun, dan mampu keluar dari lingkungan anaerobik.
Bakteri pembentuk metana sebagian besar merupakan organisme darat dan air
dan ditemukan secara alami dalam bahan organik yang membusuk, ventilasi vulkanik
laut dalam, sedimen dalam, mata air panas bumi, dan lumpur hitam danau dan rawa.
Bakteri ini juga ditemukan di saluran pencernaan manusia dan hewan, terutama
rumen herbivora dan sekum hewan non-ruminansia.
Rumen adalah organ khusus dalam saluran pencernaan tempat terjadi degradasi
selulosa dan polisakarida kompleks. Sapi, kambing, domba, dan rusa merupakan contoh
hewan ruminansia. Bakteri, termasuk bakteri pembentuk metana, yang tumbuh di saluran
pencernaan hewan ruminansia adalah simbion dan memperoleh sebagian besar karbon
dan energinya dari degradasi selulosa dan polisakarida kompleks lainnya dari tumbuhan.
Hewan ruminansia tidak dapat bertahan hidup tanpa bakteri. Bakteri dan substrat yang
dihasilkan oleh bakteri melalui aktivitas fermentasinya menyediakan sebagian besar
karbon dan energinya bagi ruminansia.
Bakteri pembentuk metana tumbuh dengan baik di lingkungan perairan di
mana kondisi anaerobik yang ketat ada. Kondisi anaerobik lingkungan perairan
dinyatakan dalam potensi oksidasi-reduksi atau ORP (Tabel 3.4). Bakteri
pembentuk metana tumbuh paling baik di lingkungan dengan ORP kurang dari
– 300mV. Kebanyakan anaerob fakultatif bekerja dengan baik di lingkungan perairan dengan
ORP antara +200 dan –200mV.
Ada bakteri pembentuk metana Gram-negatif dan Gram-positif yang berkembang
biak dengan lambat. Hasil pewarnaan Gram (negatif, positif, dan variabel) berbeda
dalam ordo bakteri pembentuk metana yang sama karena perbedaan tipe dinding
selnya (Gambar 3.8).
Waktu reproduksi atau waktu generasi bakteri pembentuk metana berkisar antara 3 hari
pada suhu 35 °C hingga 50 hari pada suhu 10 °C. Karena waktu generasi yang lama dari bakteri
pembentuk metana, waktu retensi yang tinggi diperlukan dalam digester anaerobik untuk
memastikan pertumbuhan populasi besar bakteri pembentuk metana untuk
24 BAKTERI PEMBENTUK METAN

TABEL 3.4 Potensi Pengurangan Oksidasi (ORP) dan Aktivitas Seluler

perkiraan Molekul Digunakan untuk Jenis Degradasi atau Respirasi

Nilai ORP, mV Degradasi Substrat

> +50 Oksigen (O2) Oksik (aerobik)

+ 50 hingga -50 Nitrit (TIDAK-2) atau nitrat (NO- 3) Anoxic (anaerobik)
<-50 Sulfat (SO2- 4) Pengurangan sulfat (anaerobik) Fermentasi
<-100 Organik (CHO) (campuran asam dan alkohol
produksi)
<-300 Organik (CHO), CO2, CO, H2 Fermentasi (produksi metana)

urutan dari Reagen warna dari warna dari

Reagen Gram-positif Gram-negatif
bakteri bakteri

Noda Primer kristal ungu Ungu Ungu

Pedas Yodium Ungu Ungu

Agen penghilang warna 95% Alkohol Ungu Tanpa warna

Counter Noda Safranin Ungu Merah

Gambar 3.8Pewarnaan Gram adalah teknik laboratorium yang memisahkan bakteri menjadi dua grous,
Grampositif dan Gram-negatif, tergantung pada respon bakteri terhadap pewarnaan Crystal violet dan
Safranin. Teknik ini dikembangkan pada tahun 1884 oleh ahli bakteriologi Denmark Christian Gram. Meskipun
teknik ini dikembangkan sebagai prosedur untuk mendeteksi bakteri patogen, teknik ini digunakan untuk
tujuan taksonomi (klasifikasi) dan identifikasi.
Respon bakteri terhadap pewarnaan Gram ditentukan dengan pemeriksaan mikroskopis bakteri yang telah
berturut-turut diwarnai dengan pewarna dasar (Crystal violet), diperlakukan dengan larutan yodium atau mordan, dan
dibilas dengan pelarut organik seperti aseton atau alkohol. Bakteri gram positif mempertahankan noda ungu dan
berwarna ungu di bawah pemeriksaan mikroskopis. Bakteri gram negatif dihilangkan warna oleh pelarut. Bakteri
Gram-negatif yang tidak berwarna diwarnai dengan pewarna counter Safranin untuk memberikan warna merah muda
atau merah.

degradasi senyawa organik. Setidaknya diperlukan 12 hari untuk mendapatkan

populasi besar bakteri pembentuk metana.
Bakteri pembentuk metana memperoleh energinya untuk reproduksi dan aktivitas
seluler dari degradasi sejumlah kecil substrat sederhana (Tabel 3.5). Substrat ini
termasuk hidrogen, senyawa 1-karbon, dan asetat sebagai senyawa 2-karbon.
Senyawa satu karbon termasuk format, metanol, karbon dioksida, karbon monoksida
(CO), dan metilamin. Substrat bakteri pembentuk metana yang paling dikenal dan
sering dikenal adalah asetat dan hidrogen. Asetat umumnya dipecah untuk
membentuk metana sementara hidrogen digabungkan dengan karbon dioksida
untuk membentuk metana. Pemecahan asetat untuk membentuk metana dikenal
sebagai pembelahan asetiklastik.
Setiap bakteri pembentuk metana memiliki substrat atau kelompok substrat tertentu yang
dapat didegradasi (Tabel 3.6). Hidrogen dapat berfungsi sebagai substrat universal untuk
 BAKTERI PEMBENTUK METAN 25

TABEL 3.5 Substrat yang Digunakan oleh Pembentuk Metana

bakteri

Substrat Rumus Kimia

Asetat CH3COOH
Karbon dioksida BERSAMA2

Karbon monoksida BERSAMA

Format HCOOH
Hidrogen H2
metanol CH3OH
metilamina CH3NH2

TABEL 3.6 Spesies Bakteri Pembentuk Metana dan Substratnya

Jenis Substrat

Methanobacterium formicium Karbon dioksida, format, hidrogen Hidrogen,

Methanobacterium thermoantotrophicum karbon dioksida, karbon monoksida
Methanococcus frisius Hidrogen, metanol, metilamin
Methanococcus mazei Asetat, metanol, metilamin Asetat, karbon
Methanosarcina bakerii dioksida, hidrogen, metanol,
metilamin

bakteri pembentuk metana, dan karbon dioksida berfungsi sebagai karbon anorganik
sumber dalam bentuk karbonat (CO2– 3) atau bikarbonat (HCO– 3). Karbon dioksida
juga berfungsi sebagai akseptor terminal elektron yang dilepaskan oleh substrat yang terdegradasi.
Senyawa 1-karbon lainnya yang dapat diubah menjadi substrat untuk bakteri
pembentuk metana termasuk dimetil sulfida, dimetilamin, dan trimetilamina.
Beberapa alkohol termasuk 2-propanol dan 2-butanol serta propanol dan butanol
dapat digunakan dalam reduksi karbon dioksida menjadi metana.
Mayoritas metana yang dihasilkan dalam digester anaerobik terjadi dari
penggunaan asetat dan hidrogen oleh bakteri pembentuk metana. Fermentasi
substrat seperti asetat (pembelahan aceticlastic) menghasilkan produksi metana
(Persamaan 3.1), dan pengurangan karbon dioksida juga menghasilkan produksi
metana (Persamaan 3.2).

CH3COOHÆ CH4+ CO2 (3.1)

BERSAMA2+ 4H2Æ CH4+ 2H2HAI (3.2)

Pembelahan asetat klastik dan reduksi karbon dioksida adalah dua jalur
utama produksi metana. Fermentasi propionat (CH3CH2COOH) dan butirat (CH3
CH2CH2COOH) adalah jalur kecil untuk produksi metana. Namun, fermentasi
asam propionat menjadi metana membutuhkan dua spesies bakteri yang
berbeda dan dua langkah degradasi mikroba (Persamaan 3.3 dan 3.4). Pada
reaksi pertama, metana dan asetat dihasilkan dari fermentasi propionat oleh
bakteri pembentuk asam volatil (Syntrophobacter wolinii) dan bakteri
pembentuk metana. Pada reaksi kedua, metana dihasilkan dari pembelahan
asetat oleh bakteri pembentuk metana. Reaksi ini hanya terjadi jika hidrogen dan
format tetap rendah (digunakan) oleh
26 BAKTERI PEMBENTUK METAN

bakteri pembentuk metana. Dengan demikian, akumulasi propionat merupakan

indikator umum stres dalam digester anaerobik.

4CH3CH2COOH + 2H2HAIÆ 4CH3COOH + CO2+ 3CH4 (3.3)

4CH3COOHÆ 4CH4+ 4CO2 (3.4)

Butirat juga terdegradasi menjadi metana melalui dua langkah degradasi mikroba
(Persamaan 3.5 dan 3.6). Langkah-langkah degradasi lagi dimediasi oleh dua bakteri
yang berbeda. Pada reaksi pertama, metana dan asetat dihasilkan dari fermentasi
butirat oleh bakteri pembentuk asam volatil dan bakteri pembentuk metana. Pada
reaksi kedua, metana dihasilkan dari pembelahan asetat oleh bakteri pembentuk
metana. Karena butirat dapat digunakan secara tidak langsung oleh bakteri
pembentuk metana, akumulasinya merupakan indikator stres dalam digester
anaerobik.

CH3CH2CH2COOH + 2H2HAIÆ 4CH3COOH + CO2+ CH4 (3.5)

4CH3COOHÆ 4CH4+ 4CO2 (3.6)

Tidak ada spesies bakteri pembentuk metana yang dapat memanfaatkan semua substrat.
Oleh karena itu, keberhasilan fermentasi substrat dalam digester anaerobik membutuhkan
tidak hanya sejumlah besar bakteri pembentuk metana tetapi juga keragaman besar bakteri
pembentuk metana.
Ada tiga kelompok utama bakteri pembentuk metana. Kelompok-kelompok ini adalah
1) metanogen hidrogenotrofik, 2) metanogen asetotrofik, dan 3) metanogen
metilotrofik. Istilah "trofik" (daripiala, "makanan") mengacu pada substrat yang
digunakan oleh bakteri.

METANOGEN HIDROGENOTROFIK KELOMPOK 1

Metanogen hidrogenotrofik menggunakan hidrogen untuk mengubah karbon dioksida menjadi

metana (Persamaan 3.7). Dengan mengubah karbon dioksida menjadi metana, organisme ini
membantu mempertahankan tekanan hidrogen parsial yang rendah dalam digester anaerobik yang
diperlukan untuk bakteri asetogenik.

BERSAMA2+ 4H2Æ CH4+ 2H2HAI (3.7)

KELOMPOK 2 METHANOGEN ACETOTROFIK

Metanogen acetotrophic “membelah” asetat menjadi metana dan karbon dioksida (Persamaan
3.8). Karbon dioksida yang dihasilkan dari asetat dapat diubah oleh metanogen hidrogenotrofik
menjadi metana (Persamaan 3.7). Beberapa metanogen hidrogenotrofik menggunakan karbon
monoksida untuk menghasilkan metana (Persamaan 3.9).

4CH3COOHÆ 4CO2+ 2H2 (3.8)

4CO + 2H2HAIÆ CH4+ 3CO2 (3.9)
 METANOGEN METILOTROFIK KELOMPOK 3 27

Metanogen asetotrofik bereproduksi lebih lambat daripada metanogen

hidrogenotrofik dan dipengaruhi secara merugikan oleh akumulasi hidrogen. Oleh
karena itu, pemeliharaan tekanan hidrogen parsial yang rendah dalam digester
anaerobik menguntungkan untuk aktivitas tidak hanya bakteri pembentuk asetat
tetapi juga metanogen asetotrofik. Di bawah tekanan parsial hidrogen yang relatif
tinggi, produksi asetat dan metana berkurang.

METANOGEN METILOTROFIK KELOMPOK 3

Metilotrofik metanogen tumbuh pada substrat yang mengandung gugus metil (–

CH3). Contoh substrat ini termasuk metanol (CH3OH) (Persamaan 3.10) dan
metilamin [(CH3)3–N] (Persamaan 3.11). Grup 1 dan 2 metanogen menghasilkan
metana dari CO2dan H2. Metanogen golongan 3 menghasilkan metana langsung
dari gugus metil dan bukan dari CO2.

3CH3OH + 6HÆ 3CH4+ 3H2HAI (3.10)

4(CH3)3– N + 6H2HAIÆ 9CH4+ 3CO2+ 4NH3 (3.11)

Penggunaan substrat yang berbeda oleh bakteri pembentuk metana menghasilkan

perolehan energi yang berbeda oleh bakteri. Misalnya, produksi metana yang
mengonsumsi hidrogen menghasilkan lebih banyak energi untuk bakteri pembentuk
metana daripada degradasi asetat. Meskipun produksi metana menggunakan hidrogen
adalah proses penangkapan energi yang lebih efektif oleh bakteri pembentuk metana,
kurang dari 30% metana yang dihasilkan dalam digester anaerobik adalah dengan
metode ini. Sekitar 70% dari metana yang dihasilkan dalam digester anaerobik berasal
dari asetat. Alasan untuk ini adalah terbatasnya pasokan hidrogen dalam digester
anaerobik. Mayoritas metana yang diperoleh dari asetat diproduksi oleh dua genera
metanogen asetotrofik,metanosarinadanmetanotrix.
Reproduksi bakteri pembentuk metana sebagian besar melalui pembelahan, tunas,
penyempitan, dan fragmentasi (Gambar 3.9). Bakteri pembentuk metana berkembang
biak dengan sangat lambat. Laju pertumbuhan yang lambat ini disebabkan oleh relatif
kecilnya jumlah energi yang diperoleh dari penggunaan substrat yang jumlahnya
terbatas. Oleh karena itu, jumlah substrat yang relatif besar harus difermentasi agar
populasi bakteri pembentuk metana berlipat ganda, yaitu, jumlah sel atau lumpur yang
dihasilkan relatif kecil untuk jumlah substrat yang terdegradasi secara relatif besar. Oleh
karena itu, digester anaerobik menghasilkan jumlah sel bakteri atau lumpur (padatan)
yang relatif kecil.
Dalam kondisi optimal, rentang waktu generasi bakteri pembentuk metana mungkin
dari beberapa hari hingga beberapa minggu. Oleh karena itu, jika waktu retensi padatan
(SRT) pendek atau hubungan arus pendek atau penarikan awal lumpur digester terjadi,
ukuran populasi bakteri pembentuk metana sangat berkurang. Kondisi ini mengurangi
waktu yang tersedia untuk reproduksi bakteri pembentuk metana, yaitu bakteri
dikeluarkan dari digester lebih cepat daripada yang dapat mereka reproduksi. Hal ini
mengakibatkan kinerja digester yang buruk atau kegagalan digester.
Dengan bertambahnya waktu retensi, produksi bakteri pembentuk metana baru secara
bertahap menurun sebagai akibat dari peningkatan kebutuhan energi sel secara berurutan
28 METHA

Gambar 3.9Cara reproduksi untuk bakteri pembentuk metana. Bakteri pembentuk metana berkembang biak
dengan sangat lambat. Waktu generasi untuk organisme ini biasanya lebih dari 3 hari. Reproduksi adalah
aseksual dan dapat terjadi melalui pembelahan (a), tunas (b), fragmentasi (c), dan penyempitan (d).

TABEL 3.7 Suhu Pertumbuhan Optimal Beberapa

Bakteri Pembentuk Metana

Marga Rentang Suhu, °C

bakteri metanobakteri 37–45

Methanobrevibacter 37–40
Metanofaera 35–40
metanothermus 83–88
Metanococcus 35–40
65–91
Metanokorpuskulum 30–40
Metanoculleus 35–40
Metanogenium 20–40
Metanoplanus 30–40
Methanospirillum 35–40
Metanokokoid 30–35
Metanohalobium 50–55
Metanohalophilus 35–45
metanolobus 35–40
metanosarina 30–40
50–55
metanotrix 35–50
 METANOGEN METILOTROFIK KELOMPOK 3 29

untuk mempertahankan aktivitas seluler (lebih banyak degradasi substrat). Oleh karena itu,
peningkatan waktu retensi dari digester anaerobik yang dioperasikan dengan benar menghasilkan
penurunan produksi lumpur. Peningkatan waktu retensi menghasilkan konsumsi substrat yang besar
dengan memperlambat reproduksi bakteri sebagai kebutuhan energi sel tua (lumpur) untuk
pemeliharaan aktivitas seluler.
Sebagian besar bakteri pembentuk metana adalah mesofil atau termofil,
dengan beberapa bakteri tumbuh pada suhu di atas 100°C (Tabel 3.7). Mesofil
adalah organisme yang tumbuh paling baik dalam kisaran suhu 30-35 ° C, dan
termofil adalah organisme yang tumbuh paling baik dalam kisaran suhu 50-60 °
C. Beberapa genera bakteri pembentuk metana memiliki spesies mesofilik dan
termofilik.
Sulit untuk menumbuhkan bakteri pembentuk metana dalam kultur murni. Teknik
pencacahan laboratorium standar tidak cocok untuk bakteri pembentuk metana. Kesulitan
ini disebabkan oleh 1) sifat anaerobik obligat yang ekstrim dan kemungkinan bahwa
mereka mati dengan cepat oleh paparan udara yang relatif singkat dibandingkan dengan
anaerob lainnya dan 2) jumlah substrat yang terbatas. Untuk mengoreksi sensitivitas
oksigen bakteri pembentuk metana dalam percobaan laboratorium dengan biakan murni,
teknik "Hungate" digunakan. Pertumbuhan atau massa sel bakteri pembentuk metana
dapat berwarna abu-abu, hijau, hitam kehijauan, oranye-coklat, merah muda, ungu,
kuning, atau putih.
 4
Pernafasan

Respirasi adalah salah satu dari banyak proses seluler. Untuk tujuan teks ini, respirasi dianggap
sebagai degradasi substrat untuk memperoleh nutrisi seluler. Selama respirasi, senyawa besar
dengan kandungan energi tinggi dipecah menjadi senyawa kecil dengan kandungan energi
rendah (Gambar 4.1). Sebagian besar energi yang hilang oleh senyawa besar ditangkap oleh
organisme yang bernafas. Penangkapan ini menghasilkan keuntungan dalam jumlah energi
yang berguna.
Dua jenis nutrisi diperoleh dari degradasi substrat karbon dan energi. Karbon
diperlukan untuk sintesis bahan seluler untuk pertumbuhan dan reproduksi.
Energi diperlukan untuk aktivitas seluler termasuk reproduksi. Bakteri dapat
memperoleh makanan mereka dari satu substrat atau dua substrat. Substrat
energi dapat berupa organik atau anorganik.
Sebagian besar bakteri menggunakan senyawa organik untuk memperoleh
karbon dan energi. Organisme ini dikenal sebagai organotrof. Istilah "trof" berasal
dari bahasa Yunanipiala, yang berarti "makanan". Organotrof memperoleh karbon
dan energinya dari degradasi senyawa organik seperti glukosa (C6H12HAI6). Contoh
organotrof adalahZoogloea ramigera. Bakteri ini merupakan pembentuk flok yang
mendegradasi senyawa organik terlarut dalam proses lumpur aktif dan trickling
filter. Contoh organotrof lainnya adalahPseudomonas aeruginosa. Bakteri ini
mendegradasi senyawa organik terlarut dalam lumpur aktif dan proses trickling filter
dan digester anaerobik.
Beberapa bakteri menggunakan senyawa anorganik untuk mendapatkan karbon
dan energi. Organisme ini dikenal sebagai kemoautotrof. Mereka memperoleh
karbon dari karbon dioksida (CO2) dan energinya dari senyawa anorganik. Contoh
kemoautotrof adalahNitrobacter winogradski. Bakteri ini mengoksidasi ion nitrit
(TIDAK2–) menjadi ion nitrat (NO– 2) untuk memperoleh energi dan menggunakan karbon dioksida dalam bentuk

Mikrobiologi Digester Anaerobik, oleh Michael H. Gerardi ISBN

0-471-20693-8 Hak Cipta © 2003 oleh John Wiley & Sons, Inc.

31
32 PERNAFASAN

Glukosa,
senyawa energi tinggi

fermentasi

senyawa energi rendah

Asetat H2HAI

etanol BERSAMA2

Gambar 4.1Degradasi senyawa organik menghasilkan produksi senyawa kecil yang

mengandung energi lebih sedikit daripada senyawa yang terdegradasi. Senyawa anorganik
maupun senyawa organik dihasilkan dari degradasi senyawa organik.

alkalinitas bikarbonat (HCO)– 3 ) sebagai sumber karbonnya.Nitrobacter winogradskiadalah

ditemukan dalam lumpur aktif dan proses trickling filter.
Ketika substrat terdegradasi dalam sel bakteri, energi diperoleh dari elektron yang
dilepaskan dari ikatan kimia substrat yang rusak (Gambar 4.2). Elektron yang
dilepaskan dari substrat ditransfer sepanjang serangkaian molekul pembawa
elektron—sistem transpor elektron (Gambar 4.3). Saat elektron dipindahkan dari satu
molekul pembawa ke molekul pembawa lainnya, sebagian energi dari elektron
diambil oleh molekul pembawa untuk membentuk ikatan fosfat berenergi tinggi
dalam molekul adenosin trifosfat, atau ATP (Gambar 4.4). Ikatan fosfat adalah "mata
uang" energi sel. Ketika sel membutuhkan energi, energi "ditarik" dengan
memutuskan ikatan fosfat. Ketika ini terjadi, ATP diubah menjadi adenosin difosfat,
atau ADP. Ketika sel menyimpan energi, energi "diendapkan" dengan menghasilkan
ikatan fosfat. Ketika ini terjadi, ADP diubah menjadi ATP. Penyimpanan dan
pelepasan energi didasarkan pada penggabungan dan pelepasan gugus fosfat
(PO2–3).
Akhirnya, elektron dikeluarkan dari sel oleh molekul pembawa elektron terakhir.
Molekul ini mengambil elektron dari sistem transpor elektron dan melepaskan
elektron ke lingkungan sekitarnya (Gambar 4.5). Beberapa molekul pembawa
elektron akhir dapat digunakan oleh bakteri (Tabel 4.1). Molekul yang digunakan oleh
bakteri menentukan bentuk respirasi (Tabel 4.2).
Molekul pembawa elektron terakhir yang digunakan oleh bakteri tergantung
pada beberapa faktor. Faktor-faktor ini meliputi 1) ada tidaknya molekul, 2) ada
tidaknya enzim bakteri yang diperlukan untuk menggunakan molekul, dan 3)
oksidasi- potensial reduksi (ORP) dari air limbah atau lumpur yang menampung
molekul dan bakteri (Tabel 4.3).
 PERNAFASAN 33

Dinding sel Membran sel

- C-e- H -
e

Energi dari elektron ditangkap dalam sistem transpor elektron.

Gambar 4.2Energi dari senyawa organik yang terdegradasi diperoleh dengan menangkap elektron yang
dilepaskan dari ikatan kimia yang terputus. Elektron yang ditangkap diangkut sepanjang sistem transpor
elektron. Elektron melepaskan energi saat mereka bergerak di sepanjang sistem transpor.

digunakan untuk membuat energi tinggi

ikatan fosfat
e

SEBUAH

B
e

C
e

D
e

ke elektron akhir
molekul transportasi, misalnya,
HAI2, TIDAK
3 JUGA42-
dan dikeluarkan dari sel
Gambar 4.3 Sistem transpor elektron terdiri dari serangkaian molekul transpor elektron yang saling mengunci.
molekul yang melewatkan elektron dari satu molekul ke molekul lain. Saat elektron dilewatkan di sepanjang
sistem transpor, energi dari elektron dilepaskan dan ditangkap oleh sel bakteri. Energi penangkapan
digunakan untuk membentuk ikatan fosfat berenergi tinggi.

Agar molekul pembawa elektron terakhir dapat digunakan oleh bakteri, molekul
tersebut harus tersedia dan bakteri harus memiliki kemampuan (enzim) untuk
menggunakan molekul tersebut. Akhirnya, ORP dari lingkungan bakteri (air limbah atau
lumpur) menentukan urutan atau urutan pemanfaatan molekul pembawa elektron akhir.
Respirasi mungkin lengkap atau tidak lengkap. Respirasi lengkap menghasilkan
transfer karbon dalam substrat organik menjadi karbon dioksida dan bakteri baru
34 PERNAFASAN

Obligasi Energi Tinggi

adenin Fosfat Fosfat Fosfat

Ribosa

Adenosin diposfat (ADP)

Adenosin trifosfat (ATP)

Gambar 4.4Energi yang ditangkap oleh sel bakteri oleh sistem transpor elektronnya digunakan untuk
membentuk ikatan fosfat berenergi tinggi. Ketika ikatan terbentuk, ATP diproduksi. Ketika ikatan putus,
energi dilepaskan dan ADP dihasilkan.

Dinding sel Membran sel

O2 atau NO3- atau SO42- H2O atau N2 atau H2S

Gambar 4.5Elektron yang dilepaskan dari degradasi limbah organik dikeluarkan dari sel bakteri
oleh molekul transpor elektron akhir seperti molekul oksigen bebas, ion nitrat, dan ion sulfat.
Pilihan molekul transpor elektron terakhir menentukan bentuk respirasi.
 PERNAFASAN 35

TABEL 4.1 Molekul Pembawa Elektron Final Berdasarkan Urutan Pemanfaatannya di

Instalasi Pengolahan Air Limbah

Urutan Urutan Elektron Kejadian Produk yang Dikurangi

pemanfaatan Pembawa (Example)

1 HAI2 Tangki aerasi H2HAI

2 TIDAK3- Tangki denitrifikasi dan sekunder N2, N2HAI

klarifikasi
3 JADI42- Penjernih dan pengental sekunder S2-(H2S)
4 CH2HAI* Pengental dan digester anaerobik Digester Asam organik yang mudah menguap

5 BERSAMA2 anaerob dan saluran pembuangan CH4

sistem

* Senyawa organik

TABEL 4.2 Bentuk Respirasi

Pernafasan Reaksi Biokimia Respirasi Lengkap/Tidak Lengkap

Aerobik atau oksik CH2O + O2Æ BERSAMA2+ H2O + Menyelesaikan

sel
Anaerobik: anoksik CH2O + TIDAK-3Æ BERSAMA2+ H2O + Menyelesaikan

(denitrifikasi) N2+ N2sel O +

Anaerobik: fermentasi CH2O + SO2-4Æ BERSAMA2+ H2O + Tidak lengkap dengan pengecualian
(reduksi sulfat) H2S + asam + alkohol +
sel
Anaerobik: fermentasi CH2HAIÆ BERSAMA2+ H2O + asam Tidak lengkap
(campuran asam dan + alkohol + sel CH2O + CO2
alkohol) Anaerobik: fermentasi Æ H2O + CH4+ Tidak lengkap
(produksi metana) sel

TABEL 4.3 Potensi Oksidasi-Reduksi dan Respirasi

perkiraan elektron akhir Terjadinya Respirasi

Milivolt (mV) Molekul Pembawa

> +50 HAI2 Aerobik atau oksik

+ 50 hingga -50 TIDAK3- Anaerobik atau anoksik
<-50 JADI42- Pengurangan anaerobik atau sulfat
<-100 CH2HAI Fermentasi asam anaerob atau campuran dan alkohol
Molekul organik
<-300 BERSAMA2(karbonat, CO2- 3)* Fermentasi anaerobik atau metana
* Karbon dioksida sebagai karbonat

sel. Respirasi yang tidak sempurna menghasilkan transfer karbon dalam substrat organik
menjadi karbon dioksida, sel bakteri baru, dan produk organik seperti asam sederhana
dan alkohol.
Urutan penggunaan untuk molekul pembawa adalah: O2, TIDAK– 3, JADI2– 4, CH2O, dan

BERSAMA2. Dengan menggunakan O2untuk mendegradasi senyawa organik, sel bakteri memperoleh lebih
banyak energi dari senyawa organik daripada melalui penggunaan molekul pembawa lainnya (Tabel 4.4).
Dengan lebih banyak energi, lebih banyak pertumbuhan bakteri (reproduksi) atau lumpur
diproduksi (Tabel 4.4). Jika O2tidak tersedia untuk penggunaan bakteri dan NO– 3tersedia,
36 PERNAFASAN

TABEL 4.4 Molekul Pembawa Elektron Akhir, Hasil Energi, dan Produksi Sel (Lumpur)

elektron akhir Bentuk dari Energi Pound Sel yang Diproduksi

Molekul Pembawa Pernafasan Peringkat Hasil per
Pound COD Terdegradasi

HAI2 Aerobik atau oksik 1 ~0,4–0,6

TIDAK3- Anaerobik atau anoksik 2 ~0.4
JADI42- Anaerobik: 3 0,04–0,1
reduksi sulfat
Molekul organik Anaerobik: 4 0,04–0,1
asam campuran dan
alkohol
BERSAMA2 Anaerobik: 5 0,02–0,04
produksi metana

TIDAK–3digunakan berikutnya, jika bakteri memiliki kemampuan enzimatik untuk menggunakan ion nitrat. Itu
penggunaan NO–3memberikan hasil energi terbesar kedua untuk sel bakteri dan
hasil terbesar kedua dalam pertumbuhan bakteri (produksi lumpur). Karena
penurunan hasil energi dan pertumbuhan bakteri dengan molekul pembawa yang
berbeda, ada urutan berurutan sehubungan dengan pilihan molekul pembawa
elektron akhir. Urutan ini ditentukan oleh ORP dari lingkungan bakteri.
ORP merupakan indikator kapasitas molekul dalam air limbah atau lumpur untuk
melepaskan atau memperoleh elektron (oksidasi atau reduksi masing-masing). Pengukuran ini
juga merupakan indikator bentuk respirasi yang mungkin terjadi (Tabel 4.3).
Umumnya, pada nilai yang lebih besar dari +50mV respirasi aerobik dapat terjadi dan dari
+ 50 hingga –50mV respirasi anoksik (denitrifikasi) dapat terjadi. Pada nilai kurang dari
– 100mV, respirasi anaerob dapat terjadi. Pada nilai kurang dari –50mV sulfat (SO2– 4)
reduksi (juga dikenal sebagai fermentasi) dapat terjadi. Pada nilai kurang dari -100mV, asam
campuran dan fermentasi alkohol dapat terjadi. Fermentasi metana dapat dimulai pada nilai
kurang dari –200mV. Namun, dalam kultur campuran organisme fermentasi seperti yang akan
ada dalam digester anaerobik, fermentasi metana atau pertumbuhan bakteri pembentuk
metana tidak terjadi sampai ORP kurang dari –300mV. Hal ini disebabkan ketidakmampuan
bakteri pembentuk metana untuk berhasil bersaing dengan organisme fermentasi lainnya pada
nilai yang lebih besar dari –300mV.
penggunaan O2(Persamaan 4.1) dan NO– 3(Persamaan 4.2) sebagai pembawa elektron terakhir
molekul menghasilkan degradasi lengkap CH2O. Dalam degradasi lengkap, semua
karbon dalam CH2O diasimilasi ke dalam sel bakteri baru dan CO2. Namun,
penggunaan NO– 3menghasilkan produksi sel bakteri yang lebih kecil dan
produksi CO2(Tabel 4.4).

CH2O + O2Æ sel + CO2+ H2HAI (4.1)

CH2O + TIDAK– 3Æ sel + CO2+ H2O + N2+ N2HAI (4.2)

Penggunaan ion nitrat oleh bakteri untuk mendegradasi senyawa karbon dikenal
sebagai respirasi anoksik atau denitrifikasi. Terjadinya denitrifikasi pada clarifier
sekunder dari proses lumpur aktif dikenal dengan istilah rising sludge atau clumping.
Banyak kelompok bakteri yang berbeda mampu menggunakan ion nitrat untuk
 PERNAFASAN 37

TABEL 4.5 Senyawa Organik Signifikan Yang Dihasilkan

Selama Fermentasi Anaerobik

Nama Rumus

Asetat CH3COOH
Aseton CH3COCH3
asetaldehida CH3CHO
butanol CH3(CH2)2CH2OH
butanon C2H5COCH3
Butiraldehida C2H5CHO
asam kaproat CH3(CH2)4COOH
Formaldehida CH2HAI
Format HCOOH
etanol CH3CH2OH
laktat CH3CHOHCOOH
metana CH4
metanol CH3OH
propanol CH3CH2CH2OH
propionat C H3CH2COOH
Asam valerat CH3(CH2)3COOH

TABEL 4.6 Kelompok Kemolitotrof Ditemukan di

Instalasi Pengolahan Air Limbah

Kelompok Substrat Produk

Pengoksidasi amonium NH4+ TIDAK2-

bakteri hidrogen H2 H+
bakteri besi Fe2+ Fe3+
Pengoksidasi nitrit TIDAK2- TIDAK3-

bakteri belerang H2S S Hai

SHai JADI32-
JADI32- JADI42-

mendegradasi senyawa karbon. Bakteri ini termasuk bakteri fakultatif dan

anaerobik.
Dengan pengecualian, semua bentuk respirasi lainnya (fermentasi anaerobik)
tidak lengkap. Selama bentuk-bentuk respirasi ini, karbon di dalam CH2O
diasimilasi ke dalam sel bakteri baru, CO2, dan berbagai molekul organik yang
sederhana dan mudah larut, kebanyakan asam dan alkohol (Tabel 4.5). Karena
sebagian karbon dari CH2O berasimilasi menjadi berbagai molekul organik,
produksi sel bakteri sangat berkurang (Tabel 4.4). Namun, beberapa bakteri
pereduksi sulfat mampu melakukan respirasi lengkap. Bakteri pereduksi sulfat
ini memberikan pengecualian untuk respirasi lengkap di bawah respirasi
anaerob.
Untuk sebagian besar bakteri anaerob obligat untuk tumbuh, tidak adanya oksigen
molekuler bebas dan potensial redoks yang rendah diperlukan. Bakteri pembentuk metana
hanya tumbuh dalam lumpur digester anaerobik dengan potensi redoks kurang dari –300mV.
Juga, lumpur digester harus memiliki senyawa yang mengandung gugus tiol (–SH). Senyawa ini
menghasilkan lingkungan pereduksi.
38 PERNAFASAN

Sulfat, karbonat (CO2– 3 ), dan bikarbonat adalah pembawa elektron primer

molekul untuk bakteri anaerobik dan anaerobik fakultatif. Jika sulfat digunakan
sebagai molekul pembawa elektron terakhir, terjadi reduksi sulfat disimilasi
(Persamaan 4.2). Selama reduksi sulfat disimilasi, sulfat berfungsi sebagai akseptor
elektron dan hidrogen sulfida (H2S) diproduksi. Hanya sejumlah kecil genera bakteri
yang mampu mereduksi sulfat disimilasi.Desulfovibrioadalah genus utama yang
bertanggung jawab atas konversi sulfat menjadi hidrogen sulfida. Desulfotomakulum
juga mampu mereduksi sulfat. Sebaliknya, dalam lingkungan pengoksidasi, sulfida
(HS–) dioksidasi menjadi sulfat. Genera bakteri yang mengandung spesies bakteri
pengoksidasi sulfida adalahThiobacillus,Thiobacterium, danTiospira.

4+
JADI2– CH2HAIÆ H2S + CO2+ H2HAI (4.2)

Dengan tidak adanya molekul pembawa elektron akhir anorganik, senyawa organik
dapat digunakan untuk mencapai respirasi. Jika senyawa organik digunakan, fermentasi
asam campuran terjadi.
Substrat yang terdegradasi atau senyawa pelepas elektron yang digunakan selama respirasi
dapat berupa organik, misalnya glukosa, atau anorganik, misalnya ion amonium.
(NH+4). Bakteri yang bernafas dengan menggunakan substrat organik adalah organotrof, sedangkan
Bakteri yang bernafas dengan menggunakan substrat anorganik adalah kemolitotrof. Beberapa
kelompok chemolithotrophs yang penting ditemukan dalam proses pengolahan air limbah
(Tabel 4.6). Kelompok-kelompok ini termasuk pengoksidasi amonium, bakteri hidrogen, bakteri
besi, pengoksidasi nitrit, dan bakteri belerang.
 5
Rantai Makanan Anaerobik

Di habitat alami yang tidak memiliki oksigen molekuler bebas dan ion nitrat, senyawa
organik yang tidak larut dan kompleks didegradasi oleh berbagai kelompok bakteri
melalui berbagai reaksi biokimia anaerobik atau fermentatif. Reaksi-reaksi ini
menghasilkan produksi senyawa organik yang larut dan sederhana. Senyawa ini tidak
terakumulasi di habitat alami.
Karena satu kelompok bakteri menghasilkan senyawa larut, mereka dengan cepat
didegradasi sebagai substrat oleh kelompok bakteri lain. Bakteri membentuk rantai—rantai
makanan anaerobik—di mana senyawa kompleks yang besar didegradasi menjadi senyawa
yang lebih sederhana saat mereka melewati rantai makanan (Gambar 5.1).
Di habitat air tawar, fermentasi metana adalah mata rantai terakhir dalam rantai
makanan anaerobik. Di sini, senyawa organik kompleks telah didegradasi atau direduksi
menjadi metana, karbon dioksida, dan mineral. Beberapa karbon dioksida yang dihasilkan
selama degradasi senyawa organik direduksi menjadi metana.
Agar senyawa organik dapat terdegradasi melalui rantai makanan, senyawa tersebut
harus didegradasi menjadi senyawa organik dan anorganik sederhana yang dapat
digunakan sebagai substrat oleh bakteri pembentuk metana. Senyawa ini termasuk
format organik, metanol, metilamin, dan asetat dan anorganik hidrogen dan karbon
dioksida.
Metana diproduksi oleh bakteri pembentuk metana dari senyawa organik
seperti asetat (Persamaan 5.1) atau dari kombinasi karbon anorganik
dioksida [sebagai bikarbonat (HCO– 3) atau karbonat (CO2–3)] dengan hidrogen (H2) (Persamaan-
tions 5.2 dan 5.3).

CH3COOHÆ CH4+ CO2 (5.1)

4H2+ HCO– 3+ H+Æ CH4+ 3H2HAI (5.2)

Mikrobiologi Digester Anaerobik, oleh Michael H. Gerardi ISBN

0-471-20693-8 Hak Cipta © 2003 oleh John Wiley & Sons, Inc.

39
40 RANTAI MAKANAN ANAEROBIK

Substrat Kompleks,
Karbohidrat, Lipid, Protein

substrat sederhana,
Gula, Asam Lemak, Asam Amino

Asam dan
alkohol

CO2 + H2 Asetat

metanol,
Format metilamina

metana

Gambar 5.1Rantai makanan anaerobik terdiri dari beberapa kelompok fakultatif anaerob dan anaerob yang
mendegradasi dan mengubah senyawa organik kompleks menjadi senyawa organik sederhana. Senyawa
organik terakhir yang dihasilkan dalam makanan anaerobik adalah metana. Senyawa ini adalah bentuk
karbon yang paling tereduksi.

4H2+ CO2– 3+ 2H+Æ CH4+ 3H2HAI (5.3)

Metana adalah senyawa organik yang paling tereduksi. Produksi metana adalah
langkah terakhir dari rantai makanan anaerobik. Bakteri pembentuk metana bertanggung
jawab untuk langkah ini, dan karena itu mereka sangat penting untuk keberhasilan rantai
makanan anaerobik.
Senyawa organik yang tidak dapat digunakan secara langsung sebagai substrat oleh bakteri
pembentuk metana dapat digunakan secara tidak langsung jika diubah menjadi senyawa seperti:
 RANTAI MAKANAN ANAEROBIK 41

asetat. Contoh senyawa yang dapat diubah menjadi asetat termasuk butirat dan
propionat.
Dalam rantai makanan anaerobik ada hubungan sintrofik antara bakteri.
Dalam hubungan ini setidaknya dua bakteri yang berbeda terlibat dan aktivitas
satu organisme tergantung pada aktivitas organisme lain. Contoh hubungan
sintrofik dalam rantai makanan anaerobik adalah hubungan antara bakteri
penghasil hidrogen dan bakteri pemakan hidrogen. Dalam asosiasi ini bakteri
penghasil hidrogen mendegradasi senyawa organik menjadi senyawa yang lebih
sederhana dan hidrogen (Persamaan 5.4).

glukosa + 4H2HAIÆ 2 asetat + 2HCO– 3+ 2H++ 4H2 (5.4)

Namun, degradasi senyawa organik oleh bakteri penghasil hidrogen hanya terjadi
jika tekanan parsial hidrogen dijaga tetap rendah, yaitu <10–4atmosfer. Oleh karena
itu, penting agar hidrogen tidak terakumulasi pada tekanan parsial≥10–4atmosfer.
Dalam rantai makanan anaerobik, hidrogen dikonsumsi dan tekanan parsial
hidrogen dipertahankan pada nilai rendah oleh bakteri pemakan hidrogen, termasuk
bakteri pembentuk metana. Organisme ini menggabungkan hidrogen dengan
karbon dioksida untuk menghasilkan metana.
Selama tekanan parsial hidrogen dipertahankan pada tingkat rendah, bakteri
penghasil hidrogen terus mendegradasi senyawa organik dan rantai makanan
anaerobik terus berfungsi. Fermentasi di bawah tekanan parsial hidrogen yang
rendah membantu memastikan bahwa produk fermentasi selain metana dan karbon
dioksida tidak menumpuk.
Tekanan parsial hidrogen dalam rumen, lumpur, dan digester anaerobik dijaga tetap
rendah oleh aktivitas mikroba bakteri pembentuk metana. Ini menguntungkan organisme
yang menghasilkan hidrogen dan asetat. Pemeliharaan tekanan hidrogen rendah
diperlukan untuk aktivitas mikroba yang tepat dalam rantai makanan anaerobik.
Asetat adalah senyawa organik terpenting dalam rantai makanan anaerobik. Asetat
adalah substrat yang paling umum digunakan oleh bakteri pembentuk metana dan dapat
terdegradasi tanpa adanya sulfat. Dengan adanya sulfat, asetat tidak terurai menjadi
metana dan karbon dioksida.