Machine Translated by Google

INTERNASIONAL ISO
STANDAR 21527-2

Edisi pertama
01-07-2008

Mikrobiologi makanan dan bahan pakan

ternak — Metode horizontal untuk
pencacahan khamir dan kapang —
Bagian 2:
Teknik penghitungan koloni pada produk
dengan aktivitas air kurang dari atau sama
dengan 0,95 iTeh PREVIEW STANDAR
Mikrobiologi pangan — Metode horizontal untuk pencacahan
(standards.iteh.ai)
ragi dan kapang —

Bagian 2: Teknik menghitung

21527-2:2008 koloni
kurang dari atau pada
samaproduk
dengandengan aktivitas air ISO
0,95 https://
standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/2b0fca40-f356-488a -8b9b
bd2ae5e787bd/iso -21527-2-2008

Nomor referensi
ISO 21527-2:2008(E)

© ISO 2008
Machine Translated by Google

ISO 21527-2:2008(E)

penafian PDF

File PDF ini mungkin berisi tipografi tersemat. Sesuai dengan kebijakan lisensi Adobe, file ini dapat dicetak atau dilihat tetapi tidak boleh diedit kecuali tipografi
yang disematkan dilisensikan dan diinstal pada komputer yang melakukan pengeditan. Dalam mengunduh file ini, pihak menerima tanggung jawab untuk tidak
melanggar kebijakan lisensi Adobe. Sekretariat Pusat ISO tidak bertanggung jawab dalam hal ini.

Adobe adalah merek dagang dari Adobe Systems Incorporated.

Detail produk perangkat lunak yang digunakan untuk membuat file PDF ini dapat ditemukan di Info Umum terkait dengan file tersebut; parameter pembuatan
PDF dioptimalkan untuk pencetakan. Setiap kehati-hatian telah dilakukan untuk memastikan bahwa file tersebut cocok untuk digunakan oleh badan anggota
ISO. Jika ditemukan masalah yang berkaitan dengan hal tersebut, harap beri tahu Sekretariat Pusat di alamat yang diberikan di bawah ini.

PREVIEW STANDAR iTeh

(standards.iteh.ai)
ISO 21527-2:2008
https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/2b0fca40-f356-488a-8b9b
bd2ae5e787bd/iso-21527-2-2008

DOKUMEN YANG DILINDUNGI HAK CIPTA

©ISO 2008

Seluruh hak cipta. Kecuali ditentukan lain, tidak ada bagian dari publikasi ini yang boleh direproduksi atau digunakan dalam bentuk apapun atau dengan cara
apapun, elektronik atau mekanik, termasuk fotokopi dan mikrofilm, tanpa izin tertulis baik dari ISO di alamat di bawah atau badan anggota ISO di negara pemohon.

Kantor hak cipta ISO

Posting kasus 56 • CH-1211 Jenewa 20 Telp
+ 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-
mail copyright@iso.org Web www.iso.org

Diterbitkan di Swiss

ii © ISO 2008 – Semua hak dilindungi undang-undang

Machine Translated by Google

ISO 21527-2:2008(E)

Kata pengantar

ISO (Organisasi Internasional untuk Standardisasi) adalah federasi dunia dari badan standar nasional (badan anggota ISO).
Pekerjaan menyiapkan Standar Internasional biasanya dilakukan melalui komite teknis ISO. Setiap badan anggota yang tertarik
pada subjek yang komite teknisnya telah dibentuk memiliki hak untuk diwakili dalam komite itu. Organisasi internasional, pemerintah
dan non-pemerintah, yang berhubungan dengan ISO, juga ambil bagian dalam pekerjaan tersebut. ISO bekerja sama erat dengan
International Electrotechnical Commission (IEC) dalam semua hal standardisasi elektroteknik.

Standar Internasional dirancang sesuai dengan peraturan yang diberikan dalam Arahan ISO/IEC, Bagian 2.

Tugas utama panitia teknis adalah menyiapkan Standar Internasional. Rancangan Standar Internasional yang diadopsi oleh komite
teknis diedarkan ke badan anggota untuk pemungutan suara. Publikasi sebagai Standar Internasional membutuhkan persetujuan
setidaknya 75% dari badan anggota yang memberikan suara.

Perhatian tertuju pada kemungkinan bahwa beberapa elemen dari dokumen ini dapat menjadi subjek dari hak paten. ISO tidak
bertanggung jawab untuk mengidentifikasi salah satu atau semua hak paten tersebut.

ISO 21527-2 disiapkan oleh Komite Teknis ISO/TC 34, Produk makanan, Subkomite SC 9, Mikrobiologi.

PREVIEW STANDAR iTeh

ISO 21527 terdiri dari bagian-bagian berikut, dengan judul umum Mikrobiologi makanan dan bahan pakan ternak — Metode
horizontal untuk pencacahan ragi dan kapang:
(standards.iteh.ai)
ÿ Bagian 1: Teknik penghitungan koloni pada produk dengan aktivitas air lebih besar dari 0,95
ISO 21527-2:2008
https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/2b0fca40-f356-488a-8b9b
ÿ Bagian 2: Teknik penghitungan koloni pada produk dengan aktivitas air kurang dari atau sama dengan 0,95
bd2ae5e787bd/iso-21527-2-2008

Bagian ISO 21527 ini, bersama dengan ISO 21527-1, membatalkan dan mengganti ISO 7698:1990, ISO 7954:1987 dan ISO
13681:1995.

© ISO 2008 – Semua hak dilindungi undang-undang aku aku aku

Machine Translated by Google

ISO 21527-2:2008(E)

pengantar

Karena banyaknya variasi produk pangan dan pakan, penerapan metode horizontal yang ditentukan dalam ISO 21527
(semua bagian) mungkin tidak sesuai untuk produk tertentu. Dalam hal ini, metode berbeda, yang khusus untuk produk
ini, dapat digunakan jika benar-benar diperlukan untuk alasan teknis yang dapat dibenarkan. Namun demikian, setiap
upaya harus dilakukan untuk menerapkan metode horizontal sebagaimana ditentukan dalam ISO 21527 (semua bagian)
sejauh mungkin.

Ketika ISO 21527 (semua bagian) selanjutnya ditinjau, semua informasi yang tersedia kemudian akan diperhitungkan
mengenai sejauh mana metode horizontal telah diikuti dan alasan penyimpangan dari metode ini dalam kasus produk
tertentu.

Penyelarasan metode pengujian tidak dapat dilakukan secara langsung, dan untuk kelompok produk tertentu Standar
Internasional dan/atau standar nasional mungkin sudah ada yang tidak sesuai dengan metode horizontal sebagaimana
ditentukan dalam ISO 21527 (semua bagian). Diharapkan ketika standar tersebut ditinjau, mereka akan diubah untuk
memenuhi ISO 21527 (semua bagian) sehingga pada akhirnya satu-satunya penyimpangan yang tersisa dari metode
horizontal ini adalah yang diperlukan untuk alasan teknis yang sudah mapan.

PREVIEW STANDAR iTeh

(standards.iteh.ai)
ISO 21527-2:2008
https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/2b0fca40-f356-488a-8b9b
bd2ae5e787bd/iso-21527-2-2008

iv © ISO 2008 – Semua hak dilindungi undang-undang

Machine Translated by Google

STANDAR INTERNASIONAL ISO 21527-2:2008(E)

Mikrobiologi makanan dan bahan pakan ternak — Metode horizontal

untuk pencacahan khamir dan kapang —
Bagian 2:
Teknik perhitungan koloni pada produk dengan aktivitas air kurang
dari atau sama dengan 0,95

PERINGATAN — Pencacahan jamur harus dilakukan dengan sangat hati-hati untuk melindungi operator dan
mencegah kontaminasi atmosfer dengan spora jamur.

1 Lingkup
Bagian ISO 21527 ini menetapkan metode horizontal untuk pencacahan ragi osmofilik dan kapang xerofilik yang layak
dalam produk yang ditujukan untuk konsumsi manusia atau makanan hewan yang memiliki aktivitas air kurang dari atau
PREVIEW STANDAR iTeh
sama dengan 0,95 (buah kering, kue, selai, daging kering, ikan asin, biji-bijian, serealia dan produk serealia, tepung,
kacang-kacangan, rempah-rempah dan bumbu, dll. [Lampiran A]), dengan teknik penghitungan koloni pada suhu 25 °C
± 1 °C (Referensi [3]) .
(standards.iteh.ai)
Bagian ISO 21527 ini tidak berlaku untuk produk dehidrasi dengan aktivitas air kurang dari atau sama dengan 0,60 ISO
tanaman polongan,
mengizinkan pencacahan
biji-bijian,
spora
bubuk
kapang
untuk 21527-2:2008
(Referensi
minuman (sereal
2b0fca40-f356-488a-8b9b
[3]).
instan, dehidrasi,
produkproduk
untuk berminyak,
bd2ae5e787bd/iso-21527-2-2008
https kering: rempah-rempah,
//standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/
hewan
Baikpeliharaan,
identifikasi dll.)
floradan
jamur
tidak
maupun
21527 ini. Metode yang(yaitu
kering. pemeriksaan
ditentukan
Polypaecilum makanan
dalam bagian
pisce, untuk ini
mikotoksin
Basipetospora
ISO 21527 tidak tidak
halophila)
sesuai termasuk
seperti
untuk yang dalam
pencacahan ruang lingkup
dapat ditemukan
xerofilik bagian
halofilik
pada ikan
jamurISO

2 Referensi normatif

Dokumen referensi berikut sangat diperlukan untuk penerapan dokumen ini. Untuk referensi bertanggal, hanya edisi
yang dikutip yang berlaku. Untuk referensi yang tidak bertanggal, berlaku edisi terbaru dari dokumen referensi (termasuk
amandemen).

ISO 6887 (semua bagian), Mikrobiologi makanan dan bahan makanan hewan — Persiapan sampel uji, suspensi awal
dan pengenceran desimal untuk pemeriksaan mikrobiologi

ISO 7218, Mikrobiologi makanan dan bahan pakan ternak — Persyaratan umum dan panduan untuk pemeriksaan
mikrobiologi

ISO 8261, Susu dan produk susu — Panduan umum untuk penyiapan sampel uji, suspensi awal, dan pengenceran
desimal untuk pemeriksaan mikrobiologi

ISO/TS 11133 (semua bagian), Mikrobiologi makanan dan bahan pakan ternak — Panduan persiapan dan produksi
media kultur

ISO 21527-1, Mikrobiologi bahan makanan dan pakan ternak — Metode horizontal untuk pencacahan khamir dan kapang
— Bagian 1: Teknik penghitungan koloni pada produk dengan aktivitas air lebih besar dari 0,95

© ISO 2008 – Semua hak dilindungi undang-undang 1

Machine Translated by Google

ISO 21527-2:2008(E)

3 Istilah dan definisi

Untuk tujuan dokumen ini berlaku istilah dan definisi yang diberikan dalam ISO 21527-1 dan berikut ini.

3.1
jamur kapang
xerofilik ragi osmofilik
yang mampu tumbuh pada aktivitas air kurang dari atau sama dengan 0,95

4 Prinsip

4.1 Pelat yang diinokulasi permukaan disiapkan menggunakan media biakan selektif tertentu. Bergantung pada jumlah koloni yang
diharapkan, jumlah sampel tertentu (jika produknya cair), atau suspensi awal (dalam kasus produk lain), atau pengenceran desimal dari
sampel/suspensi digunakan.

Pelat tambahan dapat disiapkan di bawah kondisi yang sama, menggunakan pengenceran desimal dari sampel uji atau suspensi awal.

4.2 Pelat kemudian diinkubasi secara aerobik pada suhu 25 °C ± 1 °C selama 5 hari hingga 7 hari. Jika perlu, pelat agar dibiarkan
berdiri di siang hari yang menyebar selama 1 hari hingga 2 hari.

4.3 Koloni/propagul kemudian dihitung dan, jika diperlukan (untuk membedakan koloni ragi dari koloni bakteri), identitas koloni yang
meragukan dikonfirmasi dengan pemeriksaan dengan kaca pembesar teropong atau mikroskop.
PREVIEW STANDAR iTeh
(standards.iteh.ai)
4.4 Jumlah khamir dan kapang per gram atau per mililiter sampel dihitung dari jumlah koloni/propagul/kuman yang diperoleh pada
cawan yang dipilih pada tingkat pengenceran yang menghasilkan koloni yang dapat dihitung. Jamur dan ragi dihitung secara terpisah,
jika perlu.
ISO 21527-2:2008
https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/2b0fca40-f356-488a-8b9b
bd2ae5e787bd/iso-21527-2-2008
5 Pengencer dan media biakan

Untuk praktik laboratorium saat ini, lihat ISO/TS 11133 (semua bagian).

5.1 Pengencer

5.1.1 Umum

Lihat ISO 6887 (semua bagian), ISO 8261 dan Standar Internasional khusus yang berhubungan dengan produk yang bersangkutan.

Penggunaan pengencer yang mengandung zat terlarut dalam jumlah yang cukup [misalnya larutan gliserol atau D-glukosa 20% sampai
35% (konsentrasi massa)] dianjurkan untuk meminimalkan guncangan osmotik terhadap jamur xerofilik dan sel ragi osmofilik ketika
pengenceran serial dilakukan sebelumnya. untuk pelapisan (Referensi [1], [3]).

CATATAN Dimungkinkan untuk menambahkan zat aktif permukaan seperti natrium poli(oksietilen)sorbitanmonooleat 1) [0,05 %
(konsentrasi massa)] ke dalam pengencer untuk mengurangi penggumpalan spora kapang dan konidia (Referensi [3]).

Kecuali untuk penyiapan khusus sampel uji, penggunaan kaldu air pepton 0,1% (konsentrasi massa) sebagai pengencer
direkomendasikan .

1) Tween 80 adalah contoh produk yang sesuai yang tersedia secara komersial. Informasi ini diberikan untuk kenyamanan pengguna
Standar Internasional ini dan bukan merupakan pengesahan oleh ISO untuk produk ini.

2 © ISO 2008 – Semua hak dilindungi undang-undang

Machine Translated by Google

ISO 21527-2:2008(E)

5.1.2 Komposisi kaldu air pepton 0,1 % (konsentrasi massa).

Pencernaan enzimatik dari jaringan hewan atau tumbuhan 1,0g

Air 1.000 ml

5.1.3 Pembuatan kaldu air pepton 0,1 % (konsentrasi massa).

Larutkan komponen dalam air, dengan pemanasan jika perlu.

Jika perlu, sesuaikan pH sehingga setelah sterilisasi menjadi 7,0 ± 0,2 pada 25 °C.

5.2 Media kultur

5.2.1 Dikloran 18 % (konsentrasi massa) agar gliserol (DG18) (Referensi [4], [5], [6])

5.2.1.1 Komposisi

Pencernaan enzimatik kasein 5,0g

D-Glukosa (C6H12O6) 10,0g

Potassium dihydrogenphosphate (KH2PO4) 1,0 g iTeh

STANDAR PREVIEW Magnesium sulfat (MgSO4 · H2O) 0,5 g

(standards.iteh.ai)
Dikloran (2,6-dikloro-4-nitroanilin) 0,002 g

Gliserol anhidrat 220g

ISO 21527-2:2008
Agar 12 g hingga 15 g https://
sebuah

standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/2b0fca40-f356-488a-8b9b
Kloramfenikol bd2ae5e787bd/iso-21527-2-2008 0,1 g

Air, suling atau deionisasi 1000 ml

sebuah

Tergantung pada kekuatan gel agar-agar.

5.2.1.2 Persiapan

5.2.1.2.1 Umum

Tangguhkan semua bahan kecuali kloramfenikol di dalam air dan didihkan hingga larut sepenuhnya. Jika perlu, sesuaikan pH
(6,4) sehingga setelah sterilisasi menjadi 5,6 ± 0,2 pada 25 °C.

Tambahkan 10 ml larutan kloramfenikol 1% (konsentrasi massa) dalam etanol dan campur. Keluarkan media dalam jumlah
banyak ke dalam wadah yang sesuai (6.5) dengan kapasitas yang sesuai. Sterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 °C selama
15 menit.

Segera dinginkan media dalam penangas air (6.3) dengan suhu 44 °C hingga 47 °C. Dinginkan hingga di bawah 50 °C dan
tuangkan 15 ml ke dalam cawan Petri steril (6.6).

Biarkan media mengeras, dan keringkan, jika perlu, permukaan pelat seperti yang dijelaskan dalam ISO 7218 dan ISO/TS
11133 (semua bagian).

Gunakan segera, atau simpan di tempat gelap, menurut ISO/TS 11133 (semua bagian) hingga diperlukan.

PERHATIAN — Hindari pemaparan media terhadap cahaya, karena produk penguraian sitotoksik dapat mengakibatkan
meremehkan mycoflora dalam sampel.

© ISO 2008 – Semua hak dilindungi undang-undang 3

Machine Translated by Google

ISO 21527-2:2008(E)

5.2.1.2.2 Penambahan klortetrasiklin hidroklorida opsional

Jika pertumbuhan bakteri yang berlebihan dapat menjadi masalah, kloramfenikol (50 mg/l) dan klortetrasiklin (50 mg/l)
direkomendasikan. Dalam hal ini, siapkan media dasar seperti dijelaskan di atas, hanya dengan kloramfenikol 50 mg,
keluarkan dalam jumlah 100 ml dan sterilkan. Karena relatif tidak stabil, siapkan juga larutan 0,1% (konsentrasi massa)
chlortetracycline hydrochloride dalam air dan sterilkan dengan penyaringan. Sesaat sebelum digunakan, tambahkan 5 ml
larutan ini secara aseptik ke dalam 100 ml media dasar, dan tuang ke piring. Gentamisin tidak dianjurkan, karena telah
dilaporkan menyebabkan penghambatan beberapa spesies ragi (Referensi [3]).

5.2.1.2.3 Penambahan elemen jejak opsional

Agar kapang menunjukkan morfologi penuhnya, khususnya pigmen apa pun yang biasanya mereka hasilkan, mereka
membutuhkan elemen jejak yang mungkin tidak ada di DG18. Untuk mengidentifikasi cetakan pada media ini, tambahkan
larutan elemen jejak berikut pada 1 ml per liter media, sebelum autoklaf: ZnSO4 · 7H2O 1g; CuSO4 · 5H2O 0,5 g; air,
suling atau deionisasi 100 ml (Referensi [2]).

5.2.1.3 Pengujian kinerja untuk penjaminan mutu media kultur

5.2.1.3.1 Umum

Media DG18 adalah media padat. Produktivitas dan selektivitas harus diuji menurut ISO/TS 11133 (semua bagian)
menurut spesifikasi berikut:

5.2.1.3.2 Produktivitas

Inkubasi:
PREVIEW STANDAR iTeh
5 hari pada 25 °C ± 1 °C

Strain:
(standards.iteh.ai)
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763
Wallemia sebi ATCC 42694 ISO
21527-2:2008
Aspergillus restriktus ATCC 42693 https://
standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/2b0fca40-f356-488a-8b9b
Eurotium rubrum ATCC 42690 bd2ae5e7875bd/iso-27 -2-2008
atau strain yang tercatat setara dalam koleksi jamur lainnya
Media referensi: media batch SDA (Sabouraud D-glucose agar) yang sudah divalidasi

Metode kontrol: kuantitatif

Kriteria: rasio produktivitas, PR W 0,5

Reaksi karakteristik: karakteristik koloni/propagul/kuman menurut masing-masing spesies

5.2.1.3.3 Selektivitas

Inkubasi: 5 hari pada 25 °C ± 1 °C

Strain: Escherichia coli ATCC 25922

Bacillus subtilis ATCC 6633
atau strain yang tercatat setara dalam koleksi bakteri lainnya
Metode kontrol: kualitatif

Kriteria: penghambatan total

4 © ISO 2008 – Semua hak dilindungi undang-undang

Machine Translated by Google

ISO 21527-2:2008(E)

6 Peralatan dan barang pecah belah

Peralatan sekali pakai adalah alternatif yang dapat diterima untuk peralatan gelas yang dapat digunakan kembali, asalkan memiliki
spesifikasi yang sesuai.

Peralatan laboratorium mikrobiologi biasa (lihat ISO 7218) dan, khususnya, berikut ini.

6.1 Inkubator, mampu beroperasi pada suhu 25 °C ± 1 °C.

6.2 Pipet pengiriman total, steril, dengan kapasitas nominal 1 ml, dan lulus dalam divisi 0,1 ml.

6.3 Penangas air, atau peralatan serupa, mampu beroperasi pada suhu 44 °C hingga 47 °C.

6,4 pH meter, akurat hingga 0,1 unit pH pada 25 °C.

6.5 Botol, termos dan tabung, untuk merebus dan menyimpan media biakan, dan untuk membuat pengenceran.

6.6 Cawan petri, steril, dalam gelas atau plastik, dengan diameter 90 mm sampai 100 mm.

6.7 Mikroskop, untuk membedakan ragi dari sel bakteri (bidang terang, perbesaran 250 sampai 1000 kali).

6.8 Penyebar, terbuat dari kaca atau plastik (diameter kurang dari 2 mm dan panjang 80 mm). Diameter tidak boleh melebihi 2 mm untuk
meminimalkan jumlah sampel yang menempel pada penyebar di akhir prosedur.

6.9 Kaca pembesar teropong, untuk membedakan dan membedakan koloni/sel khamir dan kapang (pembesaran 6,5 sampai 50 kali).
PREVIEW STANDAR iTeh (standards.iteh.ai)

7 Pengambilan sampel

Sampel yang representatif seharusnya dikirim ke laboratorium. Seharusnya tidak rusak atau ISO 21527-2:2008 diubah selama transportasi atau penyimpanan.
Sampel laboratorium tidak boleh dibekukan. https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/2b0fca40-f356-488a-8b9b bd2ae5e787bd/iso-21527-2-2008

Pengambilan sampel bukan bagian dari metode yang ditentukan dalam bagian ISO 21527 ini. Pengambilan sampel harus dilakukan
sesuai dengan Standar Internasional khusus yang sesuai dengan produk yang bersangkutan. Jika tidak ada Standar Internasional khusus,
disarankan agar para pihak yang berkepentingan mencapai kesepakatan tentang hal ini.

8 Persiapan sampel uji

Siapkan sampel uji sesuai dengan ISO 6887 (semua bagian), ISO 7218, ISO 8261 dan Standar Internasional khusus yang berhubungan
dengan produk yang bersangkutan. Jika tidak ada Standar Internasional khusus, disarankan agar para pihak yang berkepentingan
mencapai kesepakatan tentang hal ini.

9 Prosedur

9.1 Porsi uji, suspensi awal dan pengenceran

Siapkan bagian uji, suspensi awal (pengenceran primer) dan pengenceran selanjutnya sesuai dengan ISO 6887 (semua bagian), ISO
7218, ISO 8261 dan Standar Internasional khusus yang sesuai dengan produk yang bersangkutan.

Kecuali untuk persiapan khusus dari sampel uji, disarankan untuk menggunakan 0,1 % (konsentrasi massa) kaldu air pepton (5.1.3)
sebagai pengencer. Gunakan homogeniser peristaltik daripada blender atau pengocok.

Karena sedimentasi spora yang cepat di dalam pipet, pertahankan pipet (6.2) dalam posisi horizontal (bukan vertikal) saat diisi dengan
volume suspensi awal dan pengenceran yang sesuai.

Suspensi awal dan pengenceran dikocok untuk menghindari pengendapan partikel yang mengandung mikroorganisme.

© ISO 2008 – Semua hak dilindungi undang-undang 5