Diterjemahkan dari bahasa Esti ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

ARTIKEL ASLI

Karakterisasi sifat probiotik pada strain lactobacilli

vagina manusia
Pirje Hutt1.2, Eleri Lapp1.2, Jelena tšepetova1.2, Imbi Smidt1.2,
Heleri Taelma1, Natalya Borovkova1.2, Helen Oopkaup1, Ave
Ahelik1, Tiiu Rööp1.2, Dagmar Hoidmets1.2, Kulli Samuel2, Andres
Salumets2 dan Reet Mändar1.2*
1Departemen Mikrobiologi, Universitas Tartu, Tartu, Estonia; 2Pusat Kompetensi Teknologi
Kesehatan, Tartu, Estonia

Latar belakang: Lactobacillus vagina menawarkan perlindungan terhadap infeksi saluran kemih berulang, vaginosis bakteri, dan
kandidiasis vagina.
Objektif: Untuk mengkarakterisasi strain lactobacilli vagina yang diisolasi untuk sifat probiotiknya dan untuk membandingkan
potensi probiotiknya.
Metode: NS Lactobacillus strain diisolasi dari sampel vagina dengan kultur konvensional dan
diidentifikasi dengan pengurutan fragmen 16S rDNA. Beberapa sifat fungsional terdeteksi (produksi
hidrogen peroksida dan asam laktat; aktivitas antagonis terhadapEscherichia coli, Candida albicans,
Candida glabrata, dan Gardnerella vaginalis; auto-agregasi dan adhesi) serta keamanan (aktivitas
hemolitik, kerentanan antibiotik, adanya gen resistensi yang dapat ditransfer).
Hasil: Sebanyak 135 strain lactobacilli vagina dari tiga spesies, Lactobacillus crispatus (56%), Lactobacillus jensenii (
26%), dan Lactobacillus gasseri (18%) dikarakterisasi menggunakan beberapa tes fungsional dan keamanan.
KebanyakanL.cristatus (89%) dan L.jenseni (86%) strain menghasilkan H2HAI2. Penghasil asam laktat terbaik adalah
L.gasseri (18.292,2 mg / ml) dibandingkan dengan L.cristatus (15.692,8 mg / ml) dan L.jenseni (11.692,6 mg/ml)
(PB0,0001; PB0,0001, masing-masing). L. crispatus strain menunjukkan secara signifikan lebih tinggi anti-E. coli aktivitas dibandingkan
dengan L.jensenii. L. gasseristrain menyatakan aktivitas antikandida secara signifikan lebih rendah dibandingkan dengan
L. crispatus dan L.jensenii (pB0,0001). Tidak ada perbedaan yang signifikan antara spesies dalam aktivitas antagonis
terhadapG. vaginalis. Hampir sepertiga dari galur mampu beragregasi otomatis sementara semua galur yang diuji
menunjukkan kemampuan yang baik untuk melekat pada sel HeLa. Tak satu pun dari lactobacilli yang diuji
menyebabkan hemolisis. Meskipun resistensi fenotipikal tidak ditemukan terhadap ampisilin, kloramfenikol,
eritromisin, gentamisin, tetrasiklin, dan vankomisin,eh (B), tet (M), dan tet (K) terdeteksi pada beberapa strain. Semua
strain resisten terhadap metronidazol, trimetoprim/sulfametoksazol, dan kanamisin.
Kesimpulan: Studi kami mengungkapkan bahwa produksi metabolit antimikroba yang berbeda sangat spesifik terhadap
strain dan bahwa metabolit tidak berkorelasi satu sama lain. L. crispatus menampilkan aktivitas antagonis yang lebih baik
terhadap E. coli dan Kandidat sp. dibandingkanL. gasseri dan L.jensenii; karena itu; kandidat probiotik potensial dapat
ditemukan di antaraL. crispatus ketegangan.

Kata kunci: laktobasilus vagina; probiotik;Lactobacillus crispatus; Lactobacillus gasseri; Lactobacillus jensenii

* Korespondensi ke: Reet Mändar, Departemen Mikrobiologi, Universitas Tartu, Ravila 19, EE-50411
Tartu, Estonia, Email: reet.mandar@ut.ee

Diterima: 22 November 2015; Revisi: 14 Juni 2016; Diterima: 29 Juni 2016; Diterbitkan: 12 Agustus 2016

L
actobacilli adalah gram positif, anaerobik ketat atau
aerotoleran, bakteri berbentuk batang yang termasuk dalam
mikrobiota saluran pencernaan dan genitourinari manusia.
Telah disarankan bahwa lactobacilli dalam mikrobiota vagina seorang
wanita premenopause yang sehat menawarkan perlindungan
terhadap berbagai penyakit termasuk infeksi saluran kemih berulang,
vaginosis bakteri, dan kandidiasis vagina.
Dengan demikian, probiotik lactobacillary vagina dapat mencegah
dan / atau mengobati kondisi ini. Selain itu, telah ditunjukkan baru-
baru ini bahwa juga strain vagina yang diberikan secara oral
Lactobacillus rhamnosus GR-1 dan Lactobacillus reuteri
RC-14 dapat memulihkan mikrobiota vagina (1). Ada banyak probiotik
untuk aplikasi saluran cerna tetapi hanya sedikit probiotik untuk
saluran urogenital yang saat ini beredar di pasaran.

Ekologi Mikroba dalam Kesehatan & Penyakit 2016. # 2016 Pirje Hütt et al. Ini adalah artikel Akses Terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuan Creative Commons 1
Lisensi Internasional Attribution-NonCommercial 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/), mengizinkan semua penggunaan, distribusi, dan reproduksi non-
komersial dalam media apa pun, asalkan karya asli dikutip dengan benar.
Kutipan: Ekologi Mikroba dalam Kesehatan & Penyakit 2016, 27: 30484 - http://dx.doi.org/10.3402/mehd.v27.30484
(nomor halaman bukan untuk tujuan kutipan)
Pirje Hutt dkk.
Penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa sifat
probiotik sangat spesifik spesies dan strain (2). Oleh karena
itu, beberapa telitiin vitro ujian juga in vivo penelitian pada
hewan dan uji klinis diperlukan untuk mengembangkan
probiotik baru. Kandidat probiotik harus dinilai untuk
keberadaan sifat fungsional termasuk produksi senyawa
antimikroba (misalnya hidrogen peroksida, asam organik,
dan bakteriosin) dan aktivitas antimikroba langsung
terhadap patogen tertentu.
Meskipun genus Lactobacillus memiliki status keamanan yang
diakui, serta memiliki sejarah panjang penggunaan yang aman untuk
fermentasi makanan, beberapa kriteria harus dipertimbangkan ketika
memilih probiotik yang aman. Lactobacillus tekanan
(3 5). Untuk alasan keamanan,in vitro tes harus
mencakup identifikasi yang benar dari strain probiotik
diduga ke tingkat spesies, penentuan pola resistensi
antibiotik, dan pengujian aktivitas hemolitik.
Tujuan utama dari penelitian ini adalah untuk mengkarakterisasi
laktobasilus vagina yang diisolasi sebelumnya untuk sifat
probiotiknya dan untuk membandingkan potensi probiotik antara
bakteri yang berbeda. Lactobacillus jenis.
Bahan dan metode
Peserta dan pengambilan sampel
Sampel vagina diperoleh dari wanita sukarelawan yang
berpartisipasi dalam studi mikrobioma saluran
reproduksi. Studi ini disetujui oleh Komite Peninjau Etika
untuk Penelitian Manusia dari Universitas Tartu, Estonia
(protokol No. 193 / T-16, 31 Mei 2010). Sebanyak 70
wanita dari pasangan tidak subur (48 dari pasangan pria
sehat, 22 dari pasangan pria dengan inflamasi prostatitis)
dan 64 wanita subur sehat terdaftar dalam penelitian ini.
Strain bakteri dan ragi
Strain Lactobacillus
Semua spesimen vagina diinokulasi ke agar MRS (de Man-
Rogosa Sharpe agar, Oxoid Ltd., Basingstoke, UK) dan cawan
diinkubasi baik secara mikroaerob maupun anaerob pada
suhu 378C selama 48 jam. Koloni diskrit diambil dan
disubkultur untuk mendapatkan kultur murni. Lactobacilli
awalnya diidentifikasi sampai tingkat genus dengan
pewarnaan Gram, morfologi koloni, dan uji katalase negatif.
Selanjutnya, lactobacilli diidentifikasi dengan mengurutkan
fragmen 16S rDNA seperti yang dijelaskan sebelumnya (6).
Mikroorganisme oportunistik
Stafilokokus aureus ATCC 25923 dan Streptococcus
pyogenes ATCC 19615 digunakan sebagai kontrol positif
untuk menguji aktivitas hemolitik laktobasilus vagina.
Aktivitas antagonis dari strain probiotik diduga
dinilai terhadap bakteri target berikut: strain
pielonefritis anaerob fakultatif dari Escherichia coli
ATCC 700336, strain kistik dari E. coli ATCC 700414, tiga
isolat klinis dari E.coli (terisolasi dari wanita dengan
2
(nomor halaman bukan untuk tujuan kutipan)
Kutipan: Ekologi Mikroba dalam Kesehatan & Penyakit 2016, 27: 30484 - http://dx.doi.org/10.3402/mehd.v27.30484
vaginosis bakteri), Candida albicans ATCC32032, Candida
albicans RTN 071, Candida glabrata RTN 009, Gardnerella
vaginalis ATCC 14018 (DSM 4944), dan satu isolat klinis dari
G. vaginalis.
Deteksi produksi hidrogen peroksida
Semua lactobacilli diuji untuk produksi H2HAI2
pada pelat agar tetramethylbenzidine (TMB, Sigma Chemical
Co., St. Louis, Mo, USA) (7). Strain lactobacilli dilapiskan pada
agar TMB yang mengandung TMB, horseradish peroxidase,
Brucella agar base, hemin, pati, dan vitamin.
K, dan diinkubasi selama 48 jam pada suhu 378C dalam kondisi
anaerob. Setelah terpapar udara sekitar, koloni penghasil
hidrogen peroksida berubah menjadi biru. Perubahan warna
dinilai secara semi-kuantitatif setelah 30 menit. Intensitas warna
ditetapkan sebagai berikut: (negatif), (positif lemah),
(positif sedang), dan (positif kuat).
Deteksi produksi asam laktat
Produksi asam laktat diperkirakan dengan kromatografi gas
seperti yang dijelaskan oleh Holdeman et al. (8). Analisis
dilakukan setelah budidaya lactobacilli pada suhu 378C dalam
kaldu MRS yang dimodifikasi selama 48 jam dalam ruang sarung
tangan anaerobik (Konsep 400, Biotrace, Bridgend, UK) dengan
campuran gas CO2/ H2/ N2: 5/5/90%. Sampel kemudian
disentrifugasi pada 6.000 g selama 10 menit.
Sampel metilasi asam laktat disiapkan dengan menambahkan
0,4 g natrium klorida, 0,2 ml asam sulfat 50%, dan 2 ml
metanol dalam 1 ml kaldu kultur yang disiapkan. Tabung
dipanaskan pada suhu 608C selama 1,5 jam; Ditambahkan 1
ml air dan 0,5 ml kloroform. Bentuk emulsi disentrifugasi
pada 3000 rpm selama 3 menit. Satu mikroliter sampel
kloroform disuntikkan ke dalam kolom GC. Stasiun Kimia HP
untuk sistem GC (revisi A.06) digunakan. Kromatografi gas
(Hewlett Packard, Palo Alto, CA, USA) dilengkapi dengan
detektor ionisasi nyala hidrogen, autosampler (model 7683),
dan kolom GC kapiler HP-INNOWax (Hewlett-Packard) 15 m
0,25 mm (id ), dilapisi dengan polietilen glikol ikatan silang
(ketebalan film 0,15 mm). Suhu detektor adalah 2508C dan
suhu injektor adalah 2008C, masing-masing. Program suhu
oven adalah sistem gradien; suhu awal adalah 608C selama 1
menit yang ditingkatkan menjadi 1208C dengan kecepatan
108C/menit dan ditahan disana selama 10 menit. Asam laktat
(Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo, USA) digunakan sebagai
standar. Larutan stok termetilasi berada pada konsentrasi
masing-masing asam yang berbeda, yaitu 0,15, 0,3, 0,6, 1,2,
2,4, 3,6, dan 4,8 mg/ml. Setiap larutan standar disuntikkan
dalam rangkap dua untuk mendapatkan waktu retensi dan
luas area di bawah kurva. Area puncak kromatografi
diintegrasikan dengan integrator jaringan Hewlett-Packard.
Deteksi aktivitas hemolitik
Satu baris kultur laktobasilus (ditumbuhkan dalam kaldu MRS selama
48 jam) digoreskan ke piring agar darah yang mengandung

darah manusia, domba, atau kuda. Aktivitas hemolitik
probiotik diduga diverifikasi secara visual setelah 24 jam
dan 48 jam inkubasi dalam anaerobik (90% N2.5% CO2.5%
H2) lingkungan. Pelat agar darah diperiksa untuk tanda-
tandaB-hemolisis (zona bening di sekitar koloni),
A-hemolisis (halo hijau di sekitar koloni), atau G-hemolisis
(tidak ada zona di sekitar koloni) (9). NSStafilokokus aureus
regangan (ATCC 25923) dan Streptococcus pyogenes strain
(ATCC 19615) digunakan sebagai kontrol positif.
Deteksi agregasi otomatis
Agregasi otomatis diuji menurut metode modifikasi yang
dijelaskan sebelumnya (10). Strain diinkubasi dalam
kaldu MRS (de Man Rogosa Sharp, Oxoid Ltd.,
Basingstoke, UK) selama 18 jam pada suhu 378C dalam
kondisi anaerob (CO2/ H2/ N2: 5/5/90%). Setelah itu,
lactobacilli dicuci dua kali dalam buffer PBS dan
disuspensikan kembali dalam PBS hingga konsentrasi 108
CFU / ml (McFarland 3.0). Suspensi divortex selama 10
detik. Selanjutnya, 0,2 ml lapisan atas dipipet ke dalam
sumur pelat mikrotiter, dan densitas optik (OD) pada 600
nm diukur (A0). Deteksi OD kedua (AT) dilakukan setelah
suspensi disimpan pada suhu kamar selama 2 jam.
Agregasi otomatis terdeteksi dengan perhitungan
berikut:
Agregasi otomatis %1 DAT= A0NS 100
Agregasi otomatis juga diperkirakan skor positif
visual dicatat ketika partikel seperti pasir yang terlihat
jelas dibentuk oleh sel-sel agregat dan menetap di
bagian bawah tabung, meninggalkan supernatan
yang jernih. Hasilnya diberi skor pada skala 3 poin,
tergantung pada waktu agregasi otomatis. Jika
agregasi otomatis terdeteksi dalam waktu 15 menit,
reaksi diberi skor 3; dalam waktu 15 30 menit, skor
dianggap 2, dan dalam 30 60 menit, reaksi diberi skor
1 (11). Semua pengukuran dilakukan tiga kali dan rata-
rata deteksi terpisah dihitung.
Deteksi adhesi
Secara keseluruhan, 10 berbeda L. crispatus strain dengan
sifat autoagregasi dan L. rhamnosus GG ATCC 53103 sebagai
kontrol positif diuji kemampuannya untuk melekat pada sel
HeLa. Untuk pengujian adhesi, 2 ml suspensi sel HeLa
ditambahkan ke masing-masing sumur di piring kultur
jaringan enam sumur pada konsentrasi 2 105 sel/ml dan
diinkubasi dalam 5% CO2 suasana di 378C selama 48 jam
sampai sel tumbuh menjadi sekitar 60% pertemuan (12, 13).
Setelah 48 jam, sel yang tumbuh dicuci dua kali dengan PBS.
Lactobacilli diinkubasi selama 48 jam pada suhu 378C dalam
MRS cair (0,1 ml bank benih dalam 4 ml MRS), disentrifugasi pada
3.000 rpm selama 4 menit dan dicuci dua kali dengan PBS.
Suspensi Lactobacilli disiapkan dalam PBS menurut McFarland
3.0. Suspensi Lactobacilli (0,1 ml) ditambahkan ke 0,9 ml DMEM /
Ham's F-12 dengan glutamin stabil
Kutipan: Ekologi Mikroba dalam Kesehatan & Penyakit 2016, 27: 30484 - http://dx.doi.org/10.3402/mehd.v27.30484
Karakterisasi laktobasilus vagina
(GE Healthcare, Logan, Utah) dan diinkubasi dalam sumur 1
ml pada suhu 378C selama 1 jam dalam 10% CO2.
Selanjutnya, sel dicuci dalam 1 ml PBS lima kali dan 1 ml
0,05% Triton X100 ditambahkan selama 10 menit (14).
Menerapkan metode pengenceran 10 kali lipat, lactobacilli
diunggulkan ke agar MRS; koloni dihitung setelah inkubasi
dan dinyatakan dalam% adhesi (15).
Adhesi %n1= N0NS 100%
n1 jumlah bakteri yang melekat (log10CFU / ml);
n0 jumlah bakteri yang digunakan (log10CFU/ml).
Semua strain lactobacilli diuji dalam dua pengulangan
tiga kali.
Tes kepekaan antibiotik
Kerentanan terhadap ampisilin, kloramfenikol,
klindamisin, eritromisin, gentamisin, kanamisin,
metronidazol, nitrofurantoin, norfloksasin,
streptomisin, tetrasiklin, trimetoprim /
sulfametoksazol, dan vankomisin dinilai sesuai
dengan rekomendasi Komisi Uni Eropa
Konsentrasi hambat minimum (MIC) ditentukan oleh
Etestkan metode (BioMérieux, Marcy l'Etoile, Prancis).
Pengujian dilakukan dengan menangguhkan koloni
individu yang diambil dari kultur segar pada agar LSM
(90% Iso-Sensitest (Oxoid Ltd., Basingstoke, UK) dan 10%
MRS (Oxoid)) piring yang diinkubasi selama 24 jam pada
suhu 378C dalam ruang sarung tangan anaerobik
(Concept 400, Biotrace, Bridgend, UK) ke standar
McFarland 1 dalam larutan NaCl 0,85% steril. Suspensi itu
diusap dalam tiga arah pada LSM agar dan dibiarkan
kering sebelum menerapkan strip Etest (18, 19). Pelat
diinkubasi pada suhu 378C selama 48 jam dalam kondisi
anaerobik sebelum hasil akhir dicatat. MIC dibaca
langsung dari strip uji sesuai dengan instruksi dari
pabriknya. Strain yang menunjukkan MIC kurang dari
breakpoint EFSA dianggap sensitif; jika tidak, mereka
dianggap resisten (16, 17).
Deteksi gen resistensi antimikroba
DNA total dari Lactobacillus strain diekstraksi menggunakan
QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen GmbH, Hilden, Jerman)
mengikuti protokol pabrikan. Campuran uji PCR (volume
total, 50Ml) mengandung 20 pmol masing-masing primer
(Tabel 1), 1 buffer XPCR (Fermentas, Lithuania), masing-
masing deoksinukleosida trifosfat pada konsentrasi 200 MM,
dan 2U Taq DNA polimerase. Porsi 50 ng dari total DNA
murni digunakan sebagai cetakan. Dalam uji PCR pertama,
tet gen yang mengkode protein perlindungan ribosom
(RPPs) terdeteksi dengan primer terdegenerasi DI dan DII
(20). Jika positif, tes PCR tambahan dilakukan dengan primer
spesifik untuktetM, tetHAI, tetS, tetW, dan tetgen Q. Semua
Lactobacillus
strain diuji untuk keberadaan gen penghabisan
tetrasiklin tetK dan tetL. Reaksi berantai polimerase
3
(nomor halaman bukan untuk tujuan kutipan)
Pirje Hutt dkk.

Tabel 1. Primer PCR dan kondisi amplifikasi

anil Amplikon Referensi

Pasangan utama Gen sasaran Urutan 5? 3? suhu (8C) ukuran (bp) untuk primer

DI RPP GAYACNCCNGGNCAYRTNGAYTT 50 1.083 Clermont dkk., 1997 (20)

DII GCCCARWANGGRTTNGGNGGNACYTC
DI tet (M) GAYACNCCNGGNCAYRTNGAYTT 55 1,513 Clermont dkk., 1997 (20)
TetM-R CACCGAGCAGGGATTTCTCCAC
TetS-F tet (S) ATCAAGATATTAAGGAC 55 573 Charpentier dkk., 1993 (21)
TetS-R TTCTCTATGTGGTAATC
TetO-F tet (O) AATGAAGATTTCCGACAATTT 55 781 Sougakoff dkk., 1987 (22)
TetO-R CTCATGCGTTGTAGTATTCCA
TetK-F tet (K) TTATGGTGTTGTAGCTAGAAA 55 348 Gevers et al., 2003 (23)
TetK-R AAAGGTTAGAAAACTCTTGAAA
TetL-F tet (L) GTMGTTGCGCGCTATATTCC 55 696 Gevers et al., 2003 (23)
TetL-R GTGAAMGRWAGCCCACCTAA
TetQ-F tet (Q) AGAATCTGCTGTTTGCCAGTG 56 169 Ge et al., 2007 (24)
TetQ-R CGGAGTGTCAATGATATTGCA
TetW-F tet (W) GAGAGCCTGCTATATGCCAGC 64 168 Kastner dkk., 2006 (25)
TetW-R GGGCGTATCCACAATGTTAAC
ErmB-F eh (B) CATTTAACGACGAACTGGC 56 405 Jensen dkk., 1999 (26)
ErmB-R GGAACATCTGTGGTATGGCG
ermA-F eh (A) AAGCGGTAAACCCCCTGA 55 190 Klare dkk., 2007 (27)
ermA-R TTCGCAAATCCCTTCTCAAC
Int ke dalam GGCATCCAAGCAGCAAG 55 Levesque dkk., 1995 (28)
AAGCAGACTTGACCTGA

amplikon untuk tet gen dilakukan dalam Sistem PCR Eppendorf
(Eppendorf AG, Hamburg, Jerman) dengan program berikut:
denaturasi awal pada 948C selama 5 menit; 35 siklus 948C
selama 1 menit, suhu anil yang sesuai (Tabel 1) selama 1 menit,
dan 728C selama 2 menit; dan langkah ekstensi terakhir pada 728
C selama 10 menit. Spesifikasi amplifikasi untuk integrase Int1
adalah sebagai berikut: 948C selama 5 menit, diikuti oleh 25
siklus 948C selama 30 detik, 558C selama 30 detik, dan 728C
selama 30 detik, dan perpanjangan akhir pada 728C selama 7
menit. Amplikon dielektroforesis pada
1,5% gel agarosa, dan tangga 1-kb atau 100 bp (Fermentas)
digunakan sebagai penanda ukuran molekul.
Deteksi aktivitas antagonis
Aktivitas antagonis laktobasilus terhadap
patogen kemih
Bakteri target berikut digunakan untuk mendeteksi
aktivitas antimikroba lactobacilli: E. coli ATCC 700414,
E. coli ATCC 700336, dan tiga E. coli strain yang sebelumnya
diisolasi dari wanita dengan vaginosis bakteri.
Efek penghambatan strain vagina adalah E. coli strain
ditentukan dengan metode spot agar yang dimodifikasi
seperti yang dijelaskan sebelumnya (29, 30). Secara singkat,
kultur lactobacilli yang diuji terlihat (1Ml) pada permukaan
agar MRS (20 ml) dan diinkubasi secara anaerob selama 24
jam pada suhu 378C. Budaya semalam E.coli (sekitar 8 108
sel) dicampur dengan agar lembut (0,7%) nutrisi agar (20 ml)
(Oxoid Ltd., Basingstoke, UK) dan dituangkan di atas
piring di mana lactobacilli tumbuh. Setelah inkubasi
anaerobik selama 24 jam pada 378C, pelat diperiksa
untuk zona hambat di sekitar Lactobacillus bercak dan
diameternya dicatat. Semua tes mengenai deteksi
aktivitas antimikroba diulang tiga kali dalam tiga
percobaan independen.
Aktivitas antagonis lactobacilli terhadap Kandidat sp.
Ragi target berikut digunakan untuk mendeteksi aktivitas
antikandida lactobacilli: Candida albicans ATCC
32032, Candida albicans RTN 071, dan Candida glabrata
RTN 009.
Aktivitas antikandida dideteksi dengan teknik overlay agar yang
dimodifikasi yang dijelaskan oleh Strus et al. (31). Secara singkat,
Lactobacillus isolat dikultur dalam kaldu MRS selama 24 jam
pada suhu 378C dalam kondisi anaerob. Setelah itu, laktobasilus
dibiakkan di tengah pelat agar MRS sebagai strip selebar 2 cm
menggunakan kapas steril. Pelat diinkubasi dalam kondisi
anaerob pada suhu 378C selama 48 jam. NSLactobacillus sp.
pertumbuhan kemudian dilapis dengan agar MRS cair. Setelah
pemadatan lapisan agar, suspensiC. albicans atau C. glabrata (
diperoleh dari biakan semalaman agar Sabouraud (Oxoid)),
dalam saline steril dengan skor kekeruhan 0,5 MacFarland
digoreskan di atas permukaan agar dengan kapas. Pelat
dipreinkubasi pada suhu 48C selama 4 jam dalam lemari es,
kemudian disimpan pada suhu

4
(nomor halaman bukan untuk tujuan kutipan)
Kutipan: Ekologi Mikroba dalam Kesehatan & Penyakit 2016, 27: 30484 - http://dx.doi.org/10.3402/mehd.v27.30484

378C selama 24 jam dalam kondisi aerobik, dan dibiarkan selama
24 jam pada suhu kamar sebelum membaca hasilnya. Setelah
pertumbuhan yang memadai, zona penghambatanKandidat sp.
dievaluasi menggunakan ukuranLactobacillus sp. garis gores
dengan zona hambat dan dibagi 2.
Aktivitas antagonis lactobacilli terhadap Gardnerella
vaginalis regangan
Regangan referensi dari Gardnerella vaginalis ATCC 14018
(DSM 4944) dan satu isolat klinis dari G. vaginalis digunakan
sebagai bakteri target.
Supernatan kultur dari strain lactobacilli terpilih disiapkan
dengan mengkultur lactobacilli dalam kaldu MRS secara
anaerob pada suhu 378C selama 48 jam. Setelah itu,
pengangkatan sel dengan sentrifugasi pada 6.000G selama
15 menit dilakukan. Masing-masing supernatan diukur
pHnya (Hanna Instruments HI 9024C, Singapore) dan
supernatan disterilkan menggunakan 0,20Mm filter milipore
(Sarstedt, Nümbrecht, Jerman). Supernatan kultur bebas sel
alami dari laktobasilus vagina yang diisolasi diperiksa
aktivitas antibakterinya pada pelat mikrotiter 96 sumur.
G. vaginalis strain ditanam di BD Gardnerella
Selective Agar dengan 5% darah manusia dalam lingkungan
anaerobik selama 48 jam. G. vaginalis koloni disuspensikan dalam
larutan garam steril untuk mencapai kekeruhan sekitar 0,5 McFarland.
Lebih-lebih lagi, G. vaginalis suspensi (20 Ml), 5% manusia
serum (Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo, USA) dalam kaldu
Schaedler (Oxoid) (150 Ml), dan supernatan bebas sel alami
(30 Ml) dipindahkan ke microplate 96-sumur (berfungsi
sebagai sumur uji). G. vaginalis suspensi (20 Ml) dan 5%
serum manusia dalam kaldu Schaedler (180 Ml) dipindahkan
ke microplate yang berfungsi sebagai kontrol positif (control
well). Pertumbuhan dan penghambatan pertumbuhanG.
vaginalis ditentukan dengan memantau perubahan OD pada
600 nm yang diukur dengan pembaca pelat mikro
absorbansi (Sunrise, Tecan, Austria) setelah inkubasi 0 dan
48 jam. Pembacaan dari waktu inkubasi 0 jam digunakan
untuk menentukan absorbansi media dan inokulum.
Persentase pengurangan pertumbuhan bakteri
target karena supernatan bebas sel dihitung sesuai
rumus berikut:
% penurunan pertumbuhan ¼ ðNilai OD dari sumur kontrol
uji sumur nilai OD dari
sumur kontrolNS 100
Percobaan diulang tiga kali dengan dua ulangan.
penghambatanG. vaginalis pertumbuhan persen
menduduki peringkat tinggi (78,0%), menengah (67,3
77,0%), atau rendah (B67,2%).
Analisis statistik
Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan R-2.14.0 (A
Language and Environment, www.r-project.org). Data
produksi asam laktat dan aktivitas antagonisnya
Kutipan: Ekologi Mikroba dalam Kesehatan & Penyakit 2016, 27: 30484 - http://dx.doi.org/10.3402/mehd.v27.30484
Karakterisasi laktobasilus vagina
strain lactobacilli probiotik diduga dianalisis menggunakan
Student's T-tes atau tes jumlah peringkat Mann-Whitney
dengan koreksi Bonferroni untuk beberapa kelompok. Data
dinyatakan sebagai mean9standar deviasi. Perbandingan dari
Lactobacillus jumlah kelompok mata pelajaran yang berbeda
dilakukan dengan menggunakan x2-tes. Korelasi orde rank
spearman digunakan untuk membandingkan hidroksida
peroksida dan produksi asam laktat. Perbedaan dianggap
signifikan ketikaP-nilai adalah B0,05.
Hasil
Sebanyak 135 lactobacilli vagina diisolasi dari wanita
usia reproduksi. Semua vagina terisolasiLactobacillus
strain akhirnya diidentifikasi dengan mengurutkan fragmen
16S rDNA dan termasuk dalam tiga spesies: Lactobacillus
crispatus (56%), Lactobacillus jensenii (26%), dan
Lactobacillus gasseri (18%). Tidak ada perbedaan yang signifikan
dalam distribusi ketiga spesies ini antara kelompok pasangan
sehat dan tidak subur (data tidak ditampilkan).
Produksi hidrogen peroksida diuji pada semua 135 galur
laktobasilus vagina dengan uji semi-kualitatif
TMBperoksidase. Totalnya 108Lactobacillus strain dari 135
menghasilkan sejumlah hidrogen peroksida. Kebanyakan
L.cristatus (89%) dan L.jenseni (86%) strain dan hanya 42%
dari L. gasseri strain menghasilkan hidrogen peroksida
(dibandingkan dengan L. crispatus (pB0,0001) dan
dibandingkan dengan L.jensenii (p 0,0003)). Selain itu, strain
lactobacilli dari wanita sehat menunjukkan produksi
hidrogen peroksida yang lebih tinggi dibandingkan dengan
strain dari pasangan infertil.P 0,025) (Gbr. 1).
Produksi asam laktat diukur antara produksi hidrogen
peroksida Lactobacillus ketegangan. Di antara yang diuji
Lactobacillus strain, produsen asam laktat terbaik adalah
L.gasseri (18.292,2 mg / ml) diikuti oleh L. crispatus
(15.692,8 mg / ml) dan L.jenseni (11.692,6 mg/ml)
(PB0,0001; PB0,0001, masing-masing). Produksi asam laktat
tidak berkorelasi dengan produksi hidrogen peroksida dan
tidak ada perbedaan yang ditemukan antara kelompok
donor.
ARA. 1.H2HAI2 produksi pada strain lactobacilli dari kelompok
studi yang berbeda (135 Lactobacillus strain). , negatif; , lemah
positif; , positif sedang; , positif kuat.
5
(nomor halaman bukan untuk tujuan kutipan)
Pirje Hutt dkk.
Selanjutnya, 56 strain lactobacilli dipilih sesuai
dengan produksi hidrogen peroksida dan asam laktat
untuk menguji aktivitas antagonis terhadap E. coli
dan Kandidat sp. strain menggunakan metode agar spot yang dimodifikasi.
L. crispatus strain menunjukkan anti-E. coli aktivitas (Tabel 2)
dan aktivitas antagonis tertinggi terhadap keduanya
Candida albicans dan Candida glabrata (ARA. 2).
Setelah itu, 31 strain lactobacilli yang paling menjanjikan dipilih
dari 56 untuk percobaan lebih lanjut. Kami menemukan bahwa galur
dari ketiga spesies lactobacilli memiliki aktivitas antagonis yang
sangat mirip terhadap dua spesies yang berbedaG. vaginalis
strain (data tidak ditampilkan). Hanya 12 galur lactobacilli dari 31
yang dapat beragregasi otomatis dan tidak ada perbedaan
statistik dalam agregasi otomatis di antara berbagai
Lactobacillus spesies (data tidak ditampilkan). Tak satu pun
dari 31 lactobacilli menunjukkan agregasi otomatis dalam
periode deteksi 15 menit. Semua diujiL. crispatus strain
melekat pada sel HeLa; persentase adhesi adalah antara
92,1 dan 78,5%.
Tes penilaian keamanan menunjukkan bahwa tidak ada
lactobacilli yang diuji menyebabkan lisis eritrosit pada agar
darah manusia, domba, atau kuda sementara lisis lengkap
(B-hemolisis) terdaftar dalam kasus kontrol positif
(Streptococcus pyogenes dan stafilokokus aureus). Tidak ada
resistensi yang terdeteksi terhadap ampisilin, kloramfenikol,
eritromisin, gentamisin, tetrasiklin, dan vankomisin. Semua
31 strain lactobacilli yang diuji resisten terhadap
metronidazol, trimetoprim / sulfametoksazol, dan kanamisin,
dan 21L. crispatus strain dari 26 serta semua L. gasseri dan
L.jensenii resisten terhadap norfloksasin (Tabel 3). Gen
resistensi terdeteksi di vaginaLactobacillus galur tercantum
dalam Tabel 4. Meskipun semua galur yang diuji secara
fenotip rentan terhadap tetrasiklin dan eritromisin, kami
mendeteksi gen resistensi berikut pada beberapa galur: eh (
B), tet (M), dan tet (K).
Diskusi
Lactobacillus crispatus adalah spesies yang paling sering
dikultur dalam sampel vagina diikuti oleh L. gasseri dan
L.jensenii yang sesuai dengan penelitian sebelumnya (32,
33). Kehadiran dariL. crispatus dianggap sebagai penentu
utama stabilitas mikrobiota vagina normal pada wanita usia
reproduksi (34). Secara umum, laktobasilus vagina
menawarkan perlindungan dari berbagai penyakit termasuk
infeksi saluran kemih berulang, vaginosis bakteri, dan
Meja 2. Aktivitas antimikroba dari isolat lactobacilli vagina terhadap urogenital E. coli strain ditentukan dengan metode agar-spot yang dimodifikasi
(zona hambat dalam mm, dinyatakan sebagai mean9SD)
Jenis E. coli RTN038A E. coli RTN047A
L. crispatus 8.6291,25 * 10.7091.21
L. gasseri 7.8991.10 10.0791.22
L.jensenii 6.4792.23 * 9.6791.75
ATiga E. coli strain sebelumnya diisolasi dari wanita dengan vaginosis bakterial; Bstrain referensi: strain pielonefritis dari E. coli
ATCC 700336 dan strain kistik dari E. coli ATCC 700414. *P 0,0002; **P 0,003; ***P 0,006.
6
(nomor halaman bukan untuk tujuan kutipan)
Kutipan: Ekologi Mikroba dalam Kesehatan & Penyakit 2016, 27: 30484 - http://dx.doi.org/10.3402/mehd.v27.30484
kandidiasis vagina melalui produksi berbagai senyawa
antimikroba (misalnya hidrogen peroksida, asam laktat) dan
kapasitas untuk melekat dan bersaing untuk tempat adhesi
di epitel vagina (35). Karena sifat menguntungkan ini sangat
spesifik terhadap galur, beberapa spesies dan galur harus
disaring ketika probiotik baru dikembangkan.
Dalam penelitian kami, strain lactobacilli yang diisolasi dari
wanita sehat menghasilkan jumlah hidrogen peroksida yang
jauh lebih tinggi dibandingkan dengan strain wanita pasangan
tidak subur. Telah ditunjukkan sebelumnya bahwa H2HAI2-
penghasil laktobasilus terdapat di vagina sebagian besar wanita
sehat tetapi tidak ada pada sebagian besar wanita dengan
vaginosis bakterial (36). Dalam penelitian kami, 108Lactobacillus
strain dari 135 menghasilkan hidrogen peroksida. Sebagian besar dari
L. crispatus dan L.jensenii, dan kurang dari setengah dari L. gasseri
strain menghasilkan hidrogen peroksida. Ini sesuai dengan data
sebelumnya dari literatur yang menunjukkan bahwaL. crispatus dan
L.jensenii menghasilkan hidrogen peroksida lebih sering dan dalam
jumlah yang lebih besar daripada
L.gasseri (7).
Asam laktat adalah senyawa antimikroba kuat lainnya
yang diproduksi oleh bakteri asam laktat. Produksi asam
laktat oleh lactobacilli menghasilkan penurunan pH yang
penting untuk mencegah kolonisasi dan proliferasi
organisme patogen non-pribumi di vagina (35). Produksi
asam laktat telah terdeteksi dalam penelitian sebelumnya di
antara isolat lactobacilli vagina. Gil dkk. (37) melaporkan
bahwaL. salivarius merupakan penghasil asam laktat
tertinggi. Dalam penelitian kami, produsen asam laktat
terbaik di antara yang diujiLactobacillus spesies adalah
L.gasseri, diikuti oleh L. crispatus dan L.jensenii.
Kami kemudian menguji aktivitas antagonis lactobacilli
terhadap patogen terpilih menggunakan tiga metode modifikasi
yang berbeda. L. crispatus strain menunjukkan secara signifikan
lebih tinggi anti-E. coli aktivitas dibandingkan dengan L.jensenii,
ketika L. gasseri strain menyatakan aktivitas antikandida secara signifikan
lebih rendah dibandingkan dengan L. crispatus dan L.jensenii.
Penghambatan E. coli dan Kandidat sp. oleh lactobacilli vagina
telah dilaporkan dalam beberapa penelitian (37, 38). Meskipun
Aroucheva et al. (39) sebelumnya telah menunjukkan efek
penghambatan bakteriosin yang diperoleh oleh laktobasilus
vagina terhadapG. vaginalis, kami tidak menemukan perbedaan
yang signifikan antara strain lactobacilli kami dalam aktivitas
antagonis terhadap dua yang berbeda G. vaginalis ketegangan.
E. coli RTN100A E. coli ATCC 700414B E. coli ATCC 700336B
9.3691,67 ** 10.1491,00*** 10.4291.28
8.7492.74 9.9291.52 9.6391.24
6.9093.18 ** 8.5892.66*** 8.8293.15
 Karakterisasi laktobasilus vagina

ARA. 2.Aktivitas antikandida dari lactobacilli vagina (56 Lactobacillus strain). Perbedaan yang signifikan dalam penghambatanKandidat sp.
di antaraLactobacillus sp.: *PB0,0001, **PB0,001.

Kolonisasi dan adhesi bakteri mungkin dipengaruhi oleh auto-
agregasi. Pengujian kemampuan auto-agregatif merupakan
indikator sifat adhesi karena mendukung kolonisasi melalui
pembentukan film bakteri dan juga berkontribusi untuk
menyingkirkan patogen (40). Kami menemukan bahwa agregasi
otomatis hanya diekspresikan dalam sepertiga strain lactobacilli.
Pada saat yang sama, strain menunjukkan kemampuan adhesi
yang baik ke sel HeLa.
Meskipun lactobacilli memiliki sejarah panjang penggunaan yang
aman, mereka dapat menyebabkan kondisi klinis seperti bakteremia
dan endokarditis dalam kasus yang jarang terjadi (41). Oleh karena
itu, beberapa tes keamanan harus dilakukan. Penilaian keamanan
strain lactobacilli dalam penelitian kami termasuk deteksi hemolisis,
kerentanan antibiotik, dan gen resistensi antibiotik yang dapat
ditransfer. Strain kami yang diuji tampaknya aman, karena tidak ada
strain lactobacilli yang diuji menyebabkan lisis eritrosit darah
manusia, domba, atau kuda. Adapun resistensi antibiotik, beberapa
penelitian memberikan bukti resistensi terhadap eritromisin dan /
atau tetrasiklin di antara feses manusia.Lactobacillus isolat (42).
Dalam dekade terakhir, beberapa kekhawatiran telah diungkapkan
bahwa mikroorganisme yang digunakan dalam makanan dapat
menjadi kendaraan untuk transmisi gen resistensi antibiotik (16, 17).
Di sana-
kedepan, penilaian keamanan Lactobacillus strain harus
mencakup deteksi profil resistensi antibiotik mereka (43). Dalam
penelitian kami, tidak ada resistensi di antara laktobasilus yang
diuji yang ditemukan terhadap ampisilin, kloramfenikol,
eritromisin, gentamisin, tetrasiklin, dan vankomisin. Namun
demikian, tingkat resistensi yang tinggi terhadap norfloksasin,
metronidazol, dan trimetoprim sulfametoksazol mirip dengan
beberapa laporan lain (42, 44) yang dapat ditafsirkan sebagai
resistensi alami yang tinggi terhadap antibiotik ini. Meskipun
semua galur yang diuji secara fenotip rentan terhadap tetrasiklin
dan eritromisin, kami mendeteksi gen resistensi berikut pada
beberapa galur:eh (B), tet (M), dan tet (K). Co-terjadinya beberapa
gen diperlukan untuk menampilkan resistensi fenotipik.
Beberapa penelitian telah menunjukkan risiko yang lebih tinggi
dari transfer resistensi antibiotik daripada yang diyakini
sebelumnya, terutama selama pengobatan dengan antibiotik (45
47). Oleh karena itu, penting untuk menghindariLactobacillus
strain yang membawa gen resistensi selama pengembangan
probiotik baru.
Sebagai kesimpulan, penelitian kami mengungkapkan bahwa
produksi metabolit antimikroba yang berbeda sangat spesifik
terhadap strain dan bahwa metabolit tidak berkorelasi satu sama
lain. L. crispatus menampilkan aktivitas antagonis yang lebih baik

Tabel 3. Kerentanan antibiotik dari 31 Lactobacillus regangan diukur dengan metode E-test

NS CL cm EM GM km MZ NI NX SM TC TS VA

L. crispatus (n 26) S 26 26 24 26 26 0 0 26 5 23 26 0 26
R 0 0 2 0 0 26 26 0 21 3 0 26 0
L. gasseri (n 3) S 3 3 0 3 3 0 0 2 0 2 3 0 3
R 0 0 3 0 0 3 3 1 3 1 0 3 0
L.jensenii (n 2) S 2 2 2 2 2 0 0 2 0 1 2 0 2
R 0 0 0 0 0 2 2 0 2 1 0 2 0

AM, ampisilin; CL, kloramfenikol; CM, klindamisin; EM, eritromisin; GM, gentamisin; KM, kanamisin; MZ, metronidazol; NI, nitrofurantoin;
NX, norfloksasin; SM, streptomisin; TC, tetrasiklin; TS, trimetoprim / sulfametoksazol; VA, vankomisin; S, rentan; R, tahan menurut EFSA
2008.

Kutipan: Ekologi Mikroba dalam Kesehatan & Penyakit 2016, 27: 30484 - http://dx.doi.org/10.3402/mehd.v27.30484 7
(nomor halaman bukan untuk tujuan kutipan)
Pirje Hutt dkk.
Tabel 4. Gen resistensi antimikroba di 31 dipilih Lactobacillus regangan
eh (B)
L. crispatus (n 26) Hadiah
Tidak hadir
L. gasseri (n 3) Hadiah
Tidak hadir
L.jensenii (n 2) Hadiah
Tidak hadir
RPP, tet gen yang mengkode protein perlindungan ribosom.
melawan E. coli dan Kandidat sp. dibandingkanL. gasseri dan
L.jensenii; oleh karena itu, kandidat probiotik potensial dapat
ditemukan di antara L. crispatus ketegangan.
Ucapan Terima Kasih
Studi ini didukung oleh Estonian Research Council (hibah No.
IUT34-19), Kementerian Pendidikan dan Penelitian Estonia (hibah
No. KOGU-HUMB), dan Enterprise Estonia (hibah No. EU30020;
EU48695).
Benturan kepentingan dan pendanaan
Tidak ada konflik kepentingan yang diumumkan. Para penulis belum
menerima dana atau manfaat dari industri atau tempat lain untuk
melakukan penelitian ini.
Referensi
1. Macklaim JM, Clemente JC, Knight R, Gloor GB, Reid G.
Perubahan mikrobiota vagina setelah terapi antimikroba
dan probiotik. Mikrob Ecol Kesehatan Dis 2015; 26: 27799,
doi: http://dx.doi.org/10.3402/mehd.v26.27799
2. Sanders SAYA. Probiotik: definisi, sumber, seleksi, dan kegunaan.
Clin Infect Dis 2008; 46 (Suppl 2): S58 61; diskusi S144 51.
3. EFSA. Panduan tentang persyaratan ilmiah untuk klaim kesehatan
yang terkait dengan antioksidan, kerusakan oksidatif, dan kesehatan
kardiovaskular. EFSA J 2011; 9: 2474.
4. FAO/WHO (2002). Pedoman evaluasi probiotik dalam makanan.
Laporan kelompok kerja bersama FAO / WHO tentang
penyusunan pedoman untuk evaluasi probiotik dalam
makanan. London, Ontario, Kanada.
5. Reid G, Jass J, Sebulsky MT, McCormick JK. Potensi penggunaan
probiotik dalam praktik klinis. Mikrobiol Clin Rev 2003; 16:
658 72.
6. Smidt I, Kiiker R, Oopkaup H, Lapp E, Rööp T, Truusalu K,
dkk. Perbandingan metode deteksi laktobasilus vagina.
Manfaat Mikroba 2015; 6: 747 51.
7. Eschenbach DA, Davick PR, Williams BL, Klebanoff SJ, Young-
Smith K, Critchlow CM, dkk. Prevalensi penghasil hidrogen
peroksidaLactobacillus spesies pada wanita normal dan
wanita dengan vaginosis bakterial. J Clin Mikrobiol 1989; 27:
251 6.
8. Holdeman LV, Cato EP, Moore WEC. Pedoman laboratorium
anaerob. Blacksburg, VA: Institut Politeknik Virginia dan
Laboratorium Negara; 1977
9. Ruoff KL. Algoritma untuk Identifikasi Aerobic Gram-Positive
Cocci. Dalam: Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Landry ML,
Pfaller MA, eds. Manual Mikrobiologi Klinik. edisi ke-9
(2007). Washington, DC: ASM Press; 2006, hal. 365 367.
8
(nomor halaman bukan untuk tujuan kutipan)
Kutipan: Ekologi Mikroba dalam Kesehatan & Penyakit 2016, 27: 30484 - http://dx.doi.org/10.3402/mehd.v27.30484
tet (M) tet (S) tet (HAI) tet (K) tet (L) RPP
14 0 0 0 6 0 6
12 26 26 26 20 26 20
3 0 0 0 2 0 2
0 3 3 3 1 3 1
1 1 0 0 0 0 1
1 1 2 2 2 2 1
10. Kos B, Suskovic J, Vukovic S, Simpraga M, Frece J, Matosic S.
Kemampuan adhesi dan agregasi strain probiotik
Lactobacillus acidophilus M92. J Appl Mikrobiol 2003; 94:
981 7.
11. Bujnakova D, Kmet V. Agregasi hewan lactobacilli dengan
O157 enterohemorrhagic Escherichia coli. J Vet Med B Infect
Dis Vet Public Health 2002; 49:152 4.
12. Kaewnopparat S, Dangmanee N, Kaewnopparat N, Srichana
T, Chulasiri M, Settharaksa S. Sifat probiotik in vitro dari
Lactobacillus fermentum SK5 diisolasi dari vagina wanita
sehat. Anaerob 2013; 22:6 13.
13. Verdenelli MC, Coman MM, Cecchini C, Silvi S, Orpianesi C,
Cresci A. Evaluasi aktivitas antipatogenik dan sifat
kepatuhan manusia Strain Lactobacillus untuk formulasi
vagina. J Appl Mikrobiol 2014; 116:1297 307.
14. Goh YJ, Azcarate-Peril MA, O'Flaherty S, Durmaz E, Valence F,
Jardin J, dkk. Pengembangan dan penerapan a
naik-sistem penggantian gen counterselective berbasis untuk
studi protein S-layer SlpX dari Lactobacillus acidophilus
NCFM. Mikrobiol Lingkungan Appl 2009; 75: 3093 105.
15. Malik S, Petrova MI, Claes IJ, Verhoeven TL, Busschaert P,
Vaneechoutte M, dkk. Fenotipe vagina yang sangat
autoagregatif dan adhesifLactobacillus plantarum strain
CMPG5300 bergantung pada sortase. Mikrobiol Lingkungan
Appl 2013; 79: 4576 85.
16. EFSA. Pedoman penilaian kerentanan bakteri terhadap
antimikroba yang penting bagi manusia dan hewan. EFSA J
2012; 10: 2740.
17. EFSA. Bimbingan teknis. Pembaruan kriteria yang digunakan
dalam penilaian resistensi bakteri terhadap antibiotik yang
penting bagi manusia atau hewan. Disiapkan oleh Panel Aditif
dan Produk atau Zat yang digunakan dalam Pakan Ternak
(Pertanyaan No. EFSA-Q-2008-004). EFSA J 2008; 732: 1 15.
18. Mayrhofer S, Domig KJ, Mair C, Zitz U, Huys G, Kneifel W.
Perbandingan metode mikrodilusi kaldu, Etest, dan agar-
agar disk untuk pengujian kerentanan antimikroba dari
Lactobacillus acidophilus anggota kelompok. Mikrobiol
Lingkungan Appl 2008; 74: 3745 8.
19. Rubio R, Jofre A, Martin B, Aymerich T, Garriga M.
Karakterisasi bakteri asam laktat yang diisolasi dari kotoran
bayi sebagai kultur starter probiotik potensial untuk sosis
fermentasi. Mikrobiol Pangan 2014; 38: 303 11.
20. Clermont D, Chesneau O, De Cespedes G, Horaud T. Penentu
resistensi tetrasiklin baru yang mengkode perlindungan
ribosom pada streptokokus dan urutan nukleotida tet (T) yang
diisolasi dari Streptococcus pyogenes A498. Agen Antimikroba
Kemother 1997; 41:112 6.
21. Charpentier E, Gerbaud G, Courvalin P. Karakterisasi kelas
baru gen resistensi tetrasiklin tet (S) dalam Listeria
monocytogenes BM4210. Gen 1993; 131: 27 34.
22. Sougakoff W, Papadopoulou B, Nordmann P, Courvalin P.
Urutan nukleotida dan distribusi gen tet (O) pengkodean

resistensi tetrasiklin dalam Campylobacter coli. Mikrobiol FEMS
Lett 1987; 44:153 9.
23. Gevers D, Danielsen M, Huys G, Swings J. Karakterisasi
molekuler dari tet (M) gen dalam Lactobacillus isolat dari
berbagai jenis sosis kering fermentasi. Mikrobiol
Lingkungan Appl 2003; 69: 1270 5.
24. Ge B, Jiang P, Han F, Saleh NK, Dhiman N, Fedorko DP, dkk.
Identifikasi dan kerentanan antimikroba bakteri asam laktat
dari makanan fermentasi ritel. J Food Protect 2007; 70: 2606
12.
25. Kastner S, Perreten V, Bleuler H, Hugenschmidt G, Lacroix C, Meile L.
Pola kerentanan antibiotik dan gen resistensi kultur starter dan
bakteri probiotik yang digunakan dalam makanan. Sistem Aplikasi
Mikrobiol 2006; 29: 145 55.
26. Jensen LB, Frimodt-Moller N, Aarestrup FM. Kehadiran darierm
kelas gen pada bakteri gram positif asal hewan dan
manusia di Denmark. Mikrobiol FEMS Lett 1999; 170: 151 8.
27. Clare I, Polisi C, Werner G, Huys G, Vankerckhoven V, Kahlmeter
G, dkk. Kerentanan antimikroba dariLactobacillus, Pediococcus
dan Lactococcus isolat manusia dan kultur yang ditujukan untuk
penggunaan probiotik atau nutrisi. J Antimicrob Chemother
2007; 59:900 12.
28. Levesque C, Piche L, Larose C, Roy PH. Pemetaan PCR dari
integron mengungkapkan beberapa kombinasi baru dari gen
resistensi. Agen Antimikroba Kemother 1995; 39: 185 91.
29. Jacobsen CN, Rosenfeldt Nielsen V, Hayford AE, Moller PL,
Michaelsen KF, Paerregaard A, dkk. Skrining aktivitas probiotik
dari empat puluh tujuh galurLactobacillus sp. dengan teknik in
vitro dan evaluasi kemampuan kolonisasi dari lima strain yang
dipilih pada manusia. Mikrobiol Lingkungan Appl 1999; 65:
4949 56.
30. Schillinger U, Lucke FK. Aktivitas antibakteri dariLactobacillus
sake diisolasi dari daging. Mikrobiol Lingkungan Appl 1989; 55:
1901 6.
31. Strus M, Kucharska A, Kukla G, Brzychczy-Wloch M, Maresz
K, Heczko PB. Aktivitas in vitro vagina
Lactobacillus dengan sifat probiotik terhadap Kandida. Menginfeksi
Dis Obstet Gynecol 2005; 13 (2): 69 75.
32. Martinez-Pena MD, Castro-Escarpulli G, Aguilera-Arreola MG.
Lactobacillus spesies yang diisolasi dari sekresi vagina wanita
Meksiko menengah vaginosis bakteri dan sehat: sebuah studi
prospektif. BMC Infect Dis 2013; 13:189.
33. Pendharkar S, Magopane T, Larsson PG, de Bruyn G, Gray
GE, Hammarstrom L, dkk. Identifikasi dan karakterisasi
laktobasilus vagina dari wanita Afrika Selatan. BMC Infect
Dis 2013; 13:43.
34. Verstraelen H, Verhelst R, Claeys G, De Backer E,
Temmerman M, Vaneechoutte M. Analisis longitudinal
Kutipan: Ekologi Mikroba dalam Kesehatan & Penyakit 2016, 27: 30484 - http://dx.doi.org/10.3402/mehd.v27.30484
Karakterisasi laktobasilus vagina
mikroflora vagina pada kehamilan menunjukkan bahwa L. crispatus
mempromosikan stabilitas mikroflora vagina normal dan itu
L. gasseri dan / atau L. iner lebih kondusif untuk terjadinya
mikroflora vagina yang abnormal. Mikrobiol BMC 2009; 9:116.
35. Borges S, Silva J, Teixeira P. Peran lactobacilli dan probiotik
dalam menjaga kesehatan vagina. Arch Ginekol Obstet
2014; 289: 479 89.
36. Klebanoff SJ, Hillier SL, Eschenbach DA, Waltersdorph AM.
Kontrol flora mikroba vagina oleh H2HAI2- menghasilkan
laktobasilus. J Menginfeksi Dis 1991; 164: 94 100.
37. Gil NF, Martinez RC, Gomes BC, Nomizo A, De Martinis EC.
Lactobacilli vagina sebagai probiotik potensial melawan
Kandidat sp. Braz J Mikrobiol 2010; 41: 6 14.
38. Stoyancheva G, Marzotto M, Dellaglio F, produksi Torriani S.
Bacteriocin dan analisis sekuensing gen dari vagina
Lactobacillus ketegangan. Mikrobiol Lengkung 2014; 196: 645 53.
39. Aroucheva A, Gariti D, Simon M, Shott S, Faro J, Simoes JA,
dkk. Faktor pertahanan laktobasilus vagina. Am J Obstet
Ginjal 2001; 185: 375 9.
40. Collado MC, Surono I, Meriluoto J, Salminen S. Bakteri asam
laktat dadih asli: sifat permukaan sel dan interaksi dengan
patogen. J Food Sci 2007; 72: M89 93.
41. Snydman DR. Keamanan probiotik. Clin Infect Dis 2008; 46
(Suppl 2): S104 11; diskusi S144 51.
42. Delgado S, Florez AB, Mayo B. Kerentanan antibiotik terhadap
Lactobacillus dan Bifidobacterium spesies dari saluran
pencernaan manusia. Mikrobiol Curr 2005; 50:202 7.
43. Bernardeau M, Vernoux JP, Henri-Dubernet S, Gueguen M.
Penilaian keamanan mikroorganisme susu: Lactobacillus
marga. Mikrobiol Pangan Int J 2008; 126: 278 85.
44. Danielsen M, Angin A. Kerentanan Lactobacillus sp. terhadap
agen antimikroba. Mikrobiol Pangan Int J 2003; 82: 1 11.
45. Jacobsen L, Wilcks A, Hammer K, Huys G, Gevers D,
Andersen SR. Transfer horizontal plasmid resistensi tet (M)
dan erm (B) dari galur makananLactobacillus plantarum ke
Enterococcus faecalis JH2 2 di saluran pencernaan tikus
gnotobiotik. FEMS Mikrobiol Ecol 2007; 59:
158 66.
46.Toomey N, Monaghan A, Fanning S, Bolton D. Transfer gen
penanda resistensi antibiotik antara bakteri asam laktat dalam
model rumen dan lingkungan tanaman. Mikrobiol Lingkungan
Appl 2009; 75: 3146 52.
47. Miller JH, Novak JT, Knocke WR, Pruden A. kelangsungan hidup
bakteri resisten antibiotik dan transfer gen horizontal
mengontrol konten gen resistensi antibiotik dalam digester
anaerobik. Mikrobiol Depan 2016; 7: 263.
9
(nomor halaman bukan untuk tujuan kutipan)