ELEKTROFORESIS

Untuk memverifikasi apakah PCR kita berhasil

menggandakan gen maka digunakanlah teknologi
elektroforesis gel.
Elektroforesis gel merupakan suatu teknik
analisis penting dan sangat sering dipakai dalam
bidang biokimia dan biologi molekular.
Secara prinsip, teknik ini mirip dengan
kromatografi: memisahkan campuran bahan-
bahan berdasarkan perbedaan sifatnya.
Dalam elektroforesis gel, pemisahan dilakukan
terhadap campuran bahan dengan muatan listrik
yang berbeda-beda.
 Suatu alat yang digunakan untuk
mendeteksi molekul DNA dari hasil
isolasi DNA
Prinsip dasar adalah perpindahan
partikel bermuatan karena pengaruh
medan listrik
Karena kecepatan perpindahan
(pergerakan atau mobilitas) partikel
berbeda maka akan terjadi
pemisahan
Peralatan elektroforesis gel
poliakrilamida (SDS-PAGE)
ION ASAM
OR/ANOR
PROTEIN ASAM
NUKLEAT
 Pemisahan DNA dg elektroforesis

Elekt. Gel Elektroforesis Konsentrasi Ukuran DNA

poliakrilamida untuk gel (% w/v) yg dpt dipisah
memisahkan DNA (kb)
ukuran kecil (sekitar Poliakrilamida 3.5 1.2
6 -2000 psg basa) 5.0 0.08 - 0.5
8.0 0.06 - 0.4
Elekt. Gel agarosa 12.0 0.04 0.2
untuk memisahkan 15.0 0.025 0.15
DNA ukuran besar 20.0 0.006 0.1
(sekitar0.1 20 kb)
Kemampuan Agarosa 0.1 < 750
pemisahan DNA 0.3 5 60
pada elektroforesis 0.6 1 20
juga ditentukan oleh 0.7 0.8 10
Konsentrasi dari 0.9 0.5 7
masing-masing gel 1.2 0.4 6
1.5 0.2 3
2.0 0.1 2
ELEKTROFORESIS STANDAR

DNA migrasi menuju anoda

hanya sedikit pemisahan

ELEKTROFORESIS GEL
 FUNGSI BUFFER DALAM ELEKTROFORESIS
-Mempertahankan pH didalam reservoir dan dalam gel
- sebagai elektrolit pembawa aliran listrik

Pengamatan hasil elektroforesis harus dibawah sinar UV dgn bantuan

EtBr yg dapat berfluoresensi bila disinari UV
EtBr membentuk khelat dgn molekul DNA sehingga jml molekul EtBr
sebanding dgn ukuran rantai DNA yg dpt diamati
 Sebagai contoh hasil dari analisa pada gel
elektroforesis
Dari gambar terlihat bahwa
si peneliti makai dua buah
primer pada positive
control.
Peneliti juga menyiapkan
ladder (di ujung kanan)
sebagai rujukan.
Dari tiga buah sampel,
Tissue 1 tidak memiliki gen
yang dicari karena terlihat
tidak memiliki garis hitam
pada hasil elektroforesis.
HASIL ELEKTROFORESIS
DIBAWAH SINAR UV
Data elektroforesis bakteriosin
dari Lb. plantarum