PRINSIP REKAYASA GENETIKA

 ADIVA SIDANGOLI
 APRIYANI BOTUTIHE
 HINDUN B. GENTI
 MOH. HERDIANSYAH
 MUNIVA AK. NASIB  RAHMAT M. GANI
 NURSAFITRI I. MEERADJI  SUPRIYANTO M. HUSAIN
SITTI HARDIYANTI YUNIAR BAGI
 ZEIN M. KAAWOAN
Isolasi DNA dan cDNA

Analisis restriksi, ligase,

transformasi, seleksi dan skrining
 Isolasi DNA dan cDNA

 Isolasi DNA merupakan langkah awal yang harus

dikerjakan dalam proses rekayasa genetika
sebelum melangkah ke proses selanjutnya.
 Mengekstraksi molekul DNA dari sel
DNA dapat diisolasi, baik dari sel hewan, manusia,
maupun pada tumbuhan.
DNA manusia dapat diisolasi melalui darah. Darah
manusia terdiri atas plasma darah, globulus
lemak, substansi kimia (karbohidrat, protein dan
hormon), dan gas (oksigen, nitrogen dan karbon
dioksida). Plasma darah terdiri atas eritrosit (sel
darah merah), leukosit (sel darah putih) dan
trombosit (platelet). Komponen darah yang
diisolasi yaitu sel darah putih. Sel darah putih
dijadikan pilihan karena memiliki nukleus,
dimana terdapat DNA di dalamnya.
Isolasi DNA memiliki beberapa tahapan,
yaitu:

1) Isolasi sel
2) Lisis dinding dan membran sel
3) Ekstraksi dalam larutan
4) Purifikasi
5) Presipitasi.
Prinsip-prinsip dalam melakukan isolasi
DNA
Prinsip Sentrifugasi
Memisahkan substansi berdasarkan berat jenis molekul dengan
cara memberikan gaya sentrifugal sehingga substansi yang lebih
berat akan berada di dasar, sedangkan substansi yang lebih
ringan akan terletak di atas. Teknik sentrifugasi tersebut
dilakukan di dalam sebuah mesin yang bernama mesin
sentrifugasi dengan kecepatan yang bervariasi. contohnya 2500
rpm (rotation per minute) atau 3000 rpm.
 Prinsip Presipitasi
Bertujuan untuk mmengendapkan protein histon sehingga
untaian-untaian DNA tidak lagi menggulung (coilling) dan
berikatan dengan protein histon, yang menyebabkan DNA
menjadi terlihat
 cDNA (Complementary DNA)

DNA komplemen, atau jauh lebih dikenal dengan

singkatannya cDNA (dari complementary DNA),
merupakan DNA untai tunggal (single-stranded)
sintetik/buatan yang disalin dari untai mRNA
menggunakan teknik PCR dengan memanfaatkan
enzim reverse transcriptase.
Analisis restriksi, ligase,
transformasi, seleksi dan skrining
 Analisis Restriksi DNA:

• Teknik paling sederhana

• DNA diisolasi dari sel-sel hasil transformasi DNA
asing yang telah ditumbuhkan dalam media
selektif
• Selanjutnya DNA dipotong dg enzim restriksi
spesifik, kemudian dianalisis ukuran pita DNA
hasil potongan enzim restriksi tersebut
 LIGASE

Untuk menyambung DNA

Pemotongan DNA genomik dan DNA vektor
menggunakan enzim restriksi harus
menghasilkan ujung-ujung potongan yang
kompatibel.
Transformasi
 Transformasi,

Transfer DNA yang umumnya berasal dari satu sel

bakteri ke dalam sel yang berbeda. Prosesnya
adalah ketika sebuah sel bakteri pecah atau lisis
maka DNA sirkular akan terlepas ke lingkungan.
 SELEKSI

Sel yang mengandung plasmid/vector rekombinan

SKRINING

keberadaan DNA sisipan (ukuran dan urutan

nukleotida)