KONSEP DASAR BLOTTING

Blot adalah suatu teknik memindahkan bagian protein yang telah

dipisahkan, RNA atau DNA dari gel ke lembaran tipis atau matriks
membran agar bagian protein tersebut mengalami imobilisasi.
Keuntungan Teknik Blot

Pola yang
Akses yang
terbentuk
lebih besar
dapat
kepada Lebih sedikit Dapat dibuat
Waktu dapat dikeringkan
molekul yang reagen yang banyak replika
lebih singkat. dan disimpan
telah terikat ke dibutuhkan. pola tersebut.
berbulan-
permukaan
bulan sebelum
lembaran.
dianalisis.
Matriks Yang Di Gunakan Dalam Metode Blot

Nitroselulosa (NC)
• Kekurangannya yaitu beberapa komponen yang memiliki
afinitas lemah dapat hilang selama pemrosesan.
Diazobenzyloxymethyl (DBM)

Iazophenylthioeter (DPT)
Southern Blot
Metode untuk menyelidiki keberadaan sekuens DNA tertentu dalam
sampel DNA.

Membran tersebut kemudian

DNA sampel sebelum atau
Kemudian ditransfer ke terkena probe DNA berlabel
setelah pencernaan enzim
membran dengan blotting yang memiliki urutan basa
restriksi dipisahkan dengan
melalui aksi kapiler. pelengkap untuk urutan DNA
elektroforesis gel
pada bunga.
 Tahapan Southern Blot

Pendigestian DNA
Gel membran
dengan enzim
DNA dipisahkan Membran nitroselulosa
restriksi
sesuai ukuran Pemindahan DNA ke nitroselulosa Tekanan diberikan dipanaskan dengan
endonuklease
dengan membran diletakkan pada secara merata pada suhu tinggi (60oC-
sehingga terbentuk
elektroforesis nitroselulosa. bagian atas dari gel gel 100oC) kemudian
fragmen-fragmen
agarosa. agarosa. membran diberi
DNA yang lebih
radiasi UV.
kecil.
Membran dicampur dengan
probe (pelacak) yang telah
dilabel radioaktif tetapi Probe diinkubasi dengan
dapat juga digunakan tag
nonradioaktif yang dapat
berpendar.
Probe yang tidak terikat
Pola hibridisasi kemudian
dicuci dari membran
dideteksi dengan visualisasi
sehingga yang tinggal
membran pada film X-ray melalui
hanya probe yang hibrid
autoradiografi.
dengan DNA di membran.