Reseptor Tergandeng Protein G,

Struktur dan Aktifasi

Kelompok :
1.
2.
 PENDAHULUAN

Lebih dari 50% dari semua obat yang beredar di perdagangan meregulasi G-protein
couple receptor(GPCRs) dan 30% dari obat ini secara langsung ditargetkan untuk GPCRs.

GPCRs dianggap penting berdasarkan perannya dalam proses transmisi sinyal sel.

Menerjemahkan rangsangan ekstraseluler dalam sinyal intraseluler.

Reseptor ini terlibat dalam mekanisme utama dari sel-sel eukariotik untuk menerima,
menafsirkan, dan mengaktifkan berbagai rangsangan ekstraseluler yang berbeda

Ada lebih dari 800 GPCRs yang unik, dimana sekitar 460 diperkirakan reseptor penciuman
STRUKTUR
Struktural Umum GPCRs
Berdasarkan kesamaan urutan dalam 7 segmen TM, reseptor ini dapat
dikelompokkan menjadi :

Rhodopsin
(701
anggota)

Secretin (15 Adhesi (24

anggota) anggota)

Frizzled /
Glutamat perasa
(15
anggota) (24
anggota)
STRUKTUR
Struktural Umum GPCRs
GPCRs memiliki tujuh transmembran hidrofobik (TM) segmen, dengan ujung amino ekstraseluler
dan ujung intraseluler karboksil.

Perbedaan antar ujung karboksil, loop intraseluler mencakup TM5 dan TM6, dan ujung amino
yang mempengaruhi pembagian jenis GPCRs. Keanekaragaman terbesar diamati di ujung amino
STRUKTUR
Struktural Rhodopsin
Rhodopsin lebih cocok untuk studi struktural daripada kebanyakan GPCRs lain karena jumlah
protein besar yang sangat banyak dari retina sapi.

Rhodopsin juga GPCR sangat stabil, mempertahankan fungsi dalam kondisi yang mengubah sifat
banyak GPCRs lainnya
STRUKTUR
Struktural Lainnya
Analisis struktur dari GPCRs lainnya sebagian besar telah terbatas pada
penggunaan mutagenesis sitedirected dan sistein scanning mutagenesis
untuk mendeteksi reseptor - interaksi ligan, dan penggunaan ion rekayasa
logam situs mengikat untuk menyelidiki interaksi intramolekul

Kendala utama untuk memperoleh struktur GPCRs lainnya termasuk

produksi protein dan pemurnian, dan stabilitas protein dan homogenitas.

Masalah yang lebih besar adalah stabilitas GPCRs dimurnikan dalam

deterjen kompatibel dengan kristalografi.

• Contoh : β 2 adrenoseptor ( β 2 AR) dan banyak GPCRs lainnya tidak stabil dalam deterjen
yang digunakan untuk mendapatkan kristal rhodopsin
 AKTIVASI GPCR
Aktivasi Rhodopsin

Elektron paramagnetik spektroskopi resonansi (EPR) penelitian memberikan bukti bahwa photoactivation rhodopsin
melibatkan rotasi dan miring dari TM6 relatif TM3

Dukungan lebih lanjut untuk gerakan TM6 selama rhodopsin aktivasi disediakan oleh pengukuran reaktivitas kimia dan
spektroskopi fluoresensi , spektroskopi serapan ultraviolet dan dengan seng silang dari histidine.

Perubahan konformasi cahaya-induced juga telah diamati dalam domain sitoplasmik yang mencakup TM1 dan TM2, dan
ujung sitoplasma TM7. Memperoleh struktur resolusi tinggi dari metarhodopsin II, bentuk aktif dari rhodopsin telah
terhalang oleh ketidakstabilan kristal rhodopsin setelah aktivasi cahaya.

Dua kristal dimensi dan peta resolusi rendah dari metarhodopsin . Metarhodopsin adalah perantara dalam proses
rhodopsin aktivasi yang terjadi setelah photoisomerization dari 11-Cisretinal, tapi sebelum perubahan struktural yang
diperlukan untuk aktivasi transdusin (metarhodopsin II).

Studi difraksi elektron mengungkapkan bahwa pembentukan metarhodopsin tidak disertai dengan gerakan kaku-tubuh
yang besar di segmen TM terbukti terlibat dalam aktivasi rhodopsin
 AKTIVASI GPCR
Perubahan Struktural Umum Di Antara GPCRs

GPCRs yang paling mirip di ujung sitoplasma segmen transmembran berdekatan dengan domain sitoplasma kedua dan ketiga, daerah yang dikenal untuk
berinteraksi dengan protein G sitoplasma.

Anggota keluarga besar GPCRs transduce sinyal dengan mengaktifkan satu atau lebih anggota keluarga yang relatif kecil yang sangat homolog protein G
heterotrimeric.

•Sebagai contoh, follicle stimulating hormone (FSH) reseptor diaktifkan oleh hormon glikoprotein besar yang mengikat ujung amino sementara β 2 AR
diaktifkan oleh adrenalin (sekitar ukuran dari asam amino tunggal) yang mengikat segmen TM; namun kedua reseptor ini mengaktifkan G protein yang
sama (Gs), menunjukkan bahwa perubahan struktural dalam domain sitoplasma dari dua reseptor ini harus sangat mirip. Selain itu, banyak GPCRs
menunjukkan kopling promiscuous untuk lebih dari satu protein G. Misalnya, rhodopsin istimewa pasangan untuk transdusin sementara β 2 AR istimewa
pasangan untuk Gs; Namun, keduanya mampu mengaktifkan Gi.

penelitian yang lebih baru dari β 2 AR diberi label dengan probe neon pada akhir sitoplasma TM6 memberikan bukti bahwa agonis menginduksi rotasi atau
memiringkan pergerakan akhir sitoplasma TM6 mirip dengan yang diamati di rhodopsin
AKTIVASI GPCR
Aktivasi Oleh Agonis Diffusable

Rhodopsin tidak aktif, hampir tidak ada

aktivitas terhadap G protein transdusin.
Penyerapan foton cahaya mengkonversi
kovalen terikat 11-Cisretinal (agonis
terbalik) untuk semua retina trans (agonis
penuh) dalam femptoseconds. Rhodopsin
kemudian dengan cepat mengalami
serangkaian perubahan konformasi yang
ditandai spektroskopi (rhodopsin>
bathorhodopsin> lumirhodopsin>
metarhodopsin I> metarhodopsin II).
Perubahan struktural terkait dengan
pembentukan metarhodopsin II, bentuk
aktif dari rhodopsin, yang diamati dalam
mikrodetik dari photoactivation
 β 2 AR sebagai sistem model untuk mempelajari perubahan
konformasi igan-induced

Model Pengikatan Berurutan. (A)

Pengaturan domain TM dari β2AR
dilihat dari permukaan ekstraseluler.
Domain yang mengikat agonis
ditampilkan warna merah (TM3), hijau
(TM5) dan biru (TM6). (B) Kartun
mewakili komponen struktural
norepinefrin. (C-E) Dengan tidak
adanya ligan, reseptor (R) adalah
fleksibel secara global. Kondisi
konformasi R1 distabilkan oleh
interaksi antara TM 5 dan 6 dan cincin
katekol. Transisi ke keadaan R2 terjadi
ketika Asp 113 di TM3 mengikat
nitrogen amina. Transisi dari R ke R2
cepat. Transisi yang lambat dari R2 ke
R3 melibatkan interaksi antara β-
hydroxyl kiral dan Asn293 pada TM6
Perubahan konformasi yang diinduksi oleh agonis yang dideteksi oleh spektroskopi fluoresensi pada label β2AR pada
Cys265 dengan tetramethylrhodamine maleimide (TMRβ2AR). (A) Perubahan intensitas TMR-β2AR sebagai respons
terhadap norepinefrin dan dopamin. Respons terhadap norepinefrin paling sesuai dengan eksponensial dua-situs
fungsi. Komponen respons yang cepat dan lambat diilustrasikan oleh garis putus-putus. (B) Perubahan intensitas TMR-
β2AR sebagai respons terhadap dopamin dan katekol. (C) Catechol dan dopamine menstimulasi [35S] GTPγS yang
mengikat ke β2AR murni yang direkonstitusi dengan Gs yang dimurnikan. (D) Perubahan intensitas TMR-β2AR sebagai
respons terhadap salbutamol parsial non-katekol diikuti oleh penambahan katekol. Katekol dapat menginduksi
perubahan konformasi dalam TMR-β2AR yang terikat pada a konsentrasi jenuh salbutamol, menunjukkan bahwa
salbutamol dan katekol menempati tempat pengikatan yang tidak tumpang tindih. (E) Perubahan intensitas TMR-β2AR
di Menanggapi norepinefrin diikuti dengan penambahan katekol. Tidak ada respon katekol yang diamati pada TMR-
β2AR yang terikat pada konsentrasi jenuh norepinefrin menunjukkan bahwa ligan ini berbagi situs pengikatan yang
umum. (F) Tidak ada perubahan signifikan dalam intensitas TMR-β2AR dalam menanggapi kebalikannya agonis
ICI118,551. Katekol dapat menginduksi perubahan konformasi di β2AR terikat ke konsentrasi jenuh ICI118,551,
menunjukkan bahwa ligan ini tidak menempati ruang pengikatan yang sama. (G) [35S] GTPγS mengikat ke β2AR murni
yang direkonstitusi dengan Gs yang dimurnikan. Catechol lemah menstimulasi [35S] GTPγS yang mengikat dan
ICI118,551 menghambat pengikatan GTPγS basal [35S]. Yang menarik, katekol dapat menstimulasi [35S] GTPγS yang
AKTIVASI KUNCI IONIK
Spektroskopi fluoresensi untuk memantau
gangguan kunci ionik di β2AR. (A) Model TM3
(merah) dan TM6 (biru) dari β2AR yang
menggambarkan amino asam yang membentuk
kunci ionik pada ujung sitoplasma segmen TM
ini. (B) Tampilan dekat kunci ionik dan
modifikasi yang dibuat untuk memantau
perubahan konformasi di wilayah ini. Alanine
271 dimutasi menjadi sistein (C271) dan
isoleusin 135 bermutasi menjadi tryptophan
(W135). C271 diberi label monobromobimane
dalam β2AR yang dimurnikan. Setelah aktivasi,
W135 bergerak lebih dekat ke bimane pada
C271 dan memadamkan fluoresensi. (C)
Spektrum emisi bimane pada C271 sebelum dan
sesudah aktivasi oleh agonis isoproterenol. (D)
Pengaruh ligan yang berbeda pada gangguan
kunci ionik yang ditentukan oleh fluoresensi
bimana. Parsial agonis dopamin dan salbutamol
sama efektifnya dalam mengganggu kunci ionik
sebagai norepinefrin agonis penuh dan
isoproterenol. Hanya catechol tidak
berpengaruh pada tempat ionik
 KESIMPULAN
Berdasarkan studi fluoresensi ini kami mengusulkan sebuah model di mana agonis menstabilkan
sebagian atau sepenuhnya aktif dengan menggunakan kelompok kimia yang berbeda untuk
mengaktifkan kombinasi yang berbeda dengan pertukaran molekuler, yang tidak selalu saling
bergantung.

Dalam keadaan tidak aktif dari GPCR, pengaturan Segmen TM distabilkan oleh interaksi non-kovalen
antara rantai samping. Ligan yang berbeda secara struktural mampu istirahat kombinasi yang berbeda
dari stabilisasi keadaan basal interaksi baik secara langsung dengan mengikat asam amino yang ada
terlibat dalam interaksi intramolecular ini, atau secara tidak langsung oleh menstabilkan interaksi
intramolekul baru.

Perubahan konformasi spesifik ligan ini mungkin bertanggung jawab untuk aktivasi diferensial dari
kaskade sinyal reseptor.

Afinitas ligan tertentu kemudian akan tergantung pada biaya energi dan keuntungan yang terkait
dengan masing-masing terganggu dan menciptakan interaksi, sementara kemanjurannya akan
tergantung pada kemampuan untuk memicu pertukaran yang terkait dengan aktivasi. Ini Saklar
molekuler biasanya diaktifkan oleh agonis yang mengikat, tetapi juga akan terungkap dalam mutan
yang konstitutif aktif, di mana mutasi titik tunggal di hampir semua domain struktural dapat
menyebabkan peningkatan aktivitas basal.

Pemahaman yang lebih baik tentang proses di mana ligan mengikat dan memodifikasi struktur GPCR
mungkin akhirnya membantu dalam desain obat yang lebih selektif dengan khasiat yang tepat untuk
fungsi fisiologis yang diinginkan