Metode analisis karbohidrat

Kelompok 8
 Persiapan sampel untuk penetapan
gula
Prinsip nya : sampel dalam bentuk cairan dibuat basa dengan penambahan CaCO3 agar asam-
asam yang terdapat dalam sampel tidak menghidrolisa gula yang ada selama pemanasan.
Pemanasan sampel diperlukan untuk menginaktivasi enzim-enzim penghidrolisa gula.
untuk menghilangkan pigmen, senyawa berwarna dan senyawa koloid maka dalam
sampel ditambahkan Pb asetat basa. Kelebihan Pb asetat basa dihilangkan dengan penambahan
Na/K oksalat.
 Alat dan Bahan
Alat : timbangan analitik Bahan : CaCO3
gelas piala 600 ml Pb asetat
penangas air Natrium Oksalat
labu takar 500 ml, alkohol 80%
250 ml
kertas whatman no 2
Ph meter
waring blender
kapas
 Cara Kerja
A. Sampel Cair
 sampel ditimbang kemudian dilarutkan dengan air
 Sampel dipindahkan dalam gelas piala 600 ml
 Ditambahkan 200-300 ml air dan CaCO3 2gram
 Didihkan selama 30 menit, selama pendidihan ditambahkan air secukupnya agarvolumenya tetap
 Didingan dan dipindahkan dalam labu ukur 500ml, dan ditambahkan Pb asetat jenuh sampai
larutan jernih
 Tepatkan volume larutan sampia tanda tera dengan air
 Dikocok kemudian dilakukan penyaringan
 Ditambahkan natrium oksalat kering secukupnya
 Dicampur dan disaring lagi
 Filtrat siap dipakai untuk penetapan karbohidrat. Jika tidak langsung dipakai ditambahkan sedikit
asam benzoat
 Lanjutan...
B. Sampel Padat
 Sampel ditimbang sebanyak 20-30 gram
 Ditambahkan alkohol 80% dengan perbandingan 1:1
 Sampel dibelnder sampai gula terekstrak
 Sampel dipindahkan dalam gelas piala secara kuantitatif
 Disaring dengan kapas. Padatan dicuci dengan alkohol 80% sampai seluruh gula terlarut dalam
filtrat
 Ph nya diukur. Jika asam tambahkan CaCO3 sampai cukup basa.
 Dipanaskan pada suhu 100 derajat celcius selama 30 3nit
 Disaring kembali
 Alkohol yangterkandung dihilangkan dengan cara dipanaskan filtrat dengan suhu 85 derajat celcius,
jika akan kering ditambah air secukupnya
 Jika ada endapan sampel perlu disaring kembali
 Dilakukan penambahan Pb asetat jenuh dan menghilangkan Pb dengan Na oksalat seperti persiapan
sampel cair
 Ditepatkan volume larutan sampai tanda tera dengan air. Dan dilakukan pengocokkan
 Larutan siap digunakan untuk penetapan gula.
 Penetapan Gula pereduksi, Non
pereduksi dan total gula
A. Metode Lane-Eynon
Prinsipnya : berdasarkan atas pengukuran
volume larutan gula pereduksi standar yang
dibutuhkan untuk mereduksi pereaksi tembaga
basa yang diketahui volume nya.
 Alat dan Bahan
Alat : erlenmeyer 125ml, Bahan : larutan tembaga
300ml sulfat
gelas ukur 50ml larutan tartrat basa
hot plate larutan fehling
buret dengan modifikasi soxhlet
labu ukur 100 ml larutan dekstrosa
penangas air standar
kertas saring Larutan metilen biru 0,2%
whatman dalam air
 Cara kerja
A. Standarisasi larutan Fehling
 10 ml larutan fehling dimasukkan dalam
erlenmeyer 125ml
 Ditambahkan 20ml air dan 7ml larutan
dekstrosa standar
 Dipanaskan diatas hotplate
 Ditambahkan 3-4 tetes larutan metilen blue
 Larutan dititrasi dengan larutan dekstrosa
standar sampai metilen blue tidak berwarna
dan titikakhir merah bata
 Dilakukan secara duplo
B. INVERSI GULA-GULA
 filtrat dimasukkan kedalam dua labu ukur
100ml masing-masing sebanyak 50ml
 Ditambahkan 20ml air dan 10 ml hcl
 Dilakukan pemanasan dengan suhu 60derajat
selsius
 Digoyang goyang dengan tetap selama
3menit. Biarkan labu ukur didalam
penangasselama 7menit.
 Kemudian di dinginkan dalam air 20 derajat
celsius
 Dinetralkan dengan NaOH dan tepatkan
dengan air sampai volume 100ml
 Jika ada endapan disaring
 Sampel ini untuk penetapan gula pereduksi
 Lanjutan....
C. Penetapan Sampel
 Sampel disiapkan seperti prosedur A
 10ml filtrat yang didapat dimasukkan dalam
erlenmeyer
 Ditambahkan 10ml larutan Fehling dan 5ml
larutan dekstrosa standar
 Dilakukan titrasi dengan larutan dekstrosa
standar
 Dihitung % gula pereduksi sebagai dekstrosa
dari titar penetapan larutan satndar, blanko,
dan sampel
 Penetapan Total Gula
Metode DNS
Prinsipnya : dalam suasan alkali gula pereduksi
akan mereduksi asam 3,5 dinitrosolisilat (DNS)
membentuk senyawa yang dapat diukur
absorbansinya pada panjang gelombang 550 nm
 Alat dan bahan
Alat : penangas air Bahan : pereaksi DNS
spektrofotpmeter Larutan glukosa
standar 0,2-0,5 mg/ml
 Cara kerja
 sampel dalam bnetuk cairan jernih
 1ml sampel dimasukkan dalam tabung reaksi dan ditambahkan 3ml pereaksi DNS
 Ditempatkan dalam air mendidih selama 5 menit
 Kemudian di dinginkan sampai suhu ruang
 Diencerkan bila diperlukan dengan kisaran 20-80% T pada panjang gelombang 550 nm. Gunakan air
sebagai blanko
 Dibuat kurva standar dengan menggunakan larutan glukosa standar dengan kisaran 0,2-5mg/ml
 Untuk sampel yang sedikit mengandung glukosa ditambahkan 0,1 mg glukosa ke masing-masing
sampel
 3 mililiter pereaksi DNS akan bereaksi dengan lebih kurang 10mg glukosa. Oleh karena itu smapel
diencerkan lebih dulu