Akselerasi Apoptosis Melalui Jalur Ekstrinsik

dengan sensitivasi sekrotom dan CSF-2

pada Peripheral Blood Mononuclears
(PBMCs) terhadap Mesenchymal Stem Sell
Osteosarcoma (OS-MSCs)

dr.Fachrizal Arfani Prawiragara

Pembimbing :
Dr. Ferdiansyah, dr., SpOT(K)
dr. Mouli Edward, M.Kes.,Sp.OT(K)
Prof.Dr. Fedik A. Rantam, drh
  Osteosarcoma umumnya adalah tumor yang bersifat agresif dan
cenderung bermetastasis secara dini dan memiliki beberapa tipe,
Latar dimana secara konvensional dibagi berdasarkan tipe sel
(osteoblastik, chondroblastic dan fibroblastic)
Belakang
 Osteosarcoma merupakan neoplasma yang dapat didiagnosa
berdasarkan pemeriksaan histologi terhadap produksi osteoid
berhubungan dengan malignant mesenchymal cells.
 Berdasarkan data WHO 2012, bahwa osteosarcoma adalah tumor
tulang primer paling umum dengan estimasi kejadian 4-
5/1.000.000 per tahun.
 Di Eropa, didapatkan angka kejadian 0,2-3/100.000 per tahun
dalam grup usia 15-19 tahun.1
 Di Taiwan menunjukkan angka survival rate 2 tahun sebesar
46.9%, sementara survival rate 5 tahun menunjukkan sebesar
37.5%.2
 Di Indonesia, kejadian tertinggi osteosarcoma selama masa
remaja sampai dengan dewasa awal yang didominasi laki laki
sebesar 60%.3
  Pembedahan
 Chemotherapy
 Radioterapi
Terapi  Immunotherapy
Osteosarcoma  Gentherapy
 Semua terapi diatas masih belum komprehensif untuk itu perlu
dicara alternatif yang lebih efektif
  Peripheral blood mononuclear cell (PBMCs) adalah sel berinti dalam
pembuluh darah perifer.
 PBMCs secara fisiologi mempunyai sifat atau berfungsi sebagai
Peripheral clock mekanisme yang mengatur faktor transkripsi dan translasi di
jaringan dan sel imun yang menghasilkan berbagai macam
blood molekul pro dan anti inflamasi, dan sitokin lainnya dari sel imun.

mononuclear  PBMCs terdiri dari beberapa sel (limfosit (Th1, Th2, Th17), monosit,
Natural Killer Cell, dendritic Cell) yang mempunyai fenotip dan
cell (PBMCs) aktivasi berbeda dalam sistem imun. Karena itu PBMCs
memegang peranan penting dalam mengendalikan sistem imun
melalui cytokine network.
  Apakah sensitivasi PBMC dengan sekretom dan M-CSF dapat
meningkatkan sekresiTNF-alfa, ekspresiTRAIL, sekresi IL-2, IL-6 ?
 Apakah sensitivasi PBMCs dapat meningkatkan ekspresi Caspase 8,
caspase 3 pada mesenchymal stem cell osteosarcoma ?
 Apakah sensitivasi PBMCs dapat menurunkan ekspresi HSP70
Permasalahan pada mesenchymal stem cell osteosarcoma ?
 Apakah sensitivasi PBMCs dapat meningkatkan ekspresi HSP60
pada mesenchymal stem cell osteosarcoma ?
 Apakah sensitivasi PBMCs dapat meningkatkan jumlah
mesenchymal stem cell osteosarcoma yang apoptosis ?
Tujuan  Menjelaskan sensitivitas PBMCs dalam percepatan apoptosis
berdasarkan sekresi TNF-, ekspresi TRAIL, HSP 70, HSP60,
Umum caspase-8, caspase-3, IL-2, IL-6.
  Isolasi dan karakterisasi fenotip stem cell osteosarcoma
berdasarkan ekspresi CD105 dan CD45
 Menganalisis peningkatan sekresi TNF- pada sensitivasi PBMCs
dengan sekretom dan makrofage stimulating factor (M-SCF)
Tujuan  Menganalisis peningkatan ekspresi TRAIL pada sensitifasi PBMCs
dengan sekretom dan makrofage stimulating factor (M-SCF)
Khusus
 Menganalisis ekspresi caspase 8 pada stem cell osteosarcoma
setelah dikokultivasi dengan sensitivasi PBMCs
 Menganalsis ekspresi caspase 3 pada stem cell osteosarcoma
setelah dikokultivasi dengan sensitivasi PBMCs
 Menganalsis ekspresi HSP70 pada stem cell osteosarcoma setelah
dikokultivasi dengan sensitivasi PBMCs
 Menganalsis ekspresi HSP60 pada stem cell osteosarcoma setelah
dikokultivasi dengan sensitivasi PBMCs
 Menganalisis apoptosis berdasarkan fragmentasi DNA
  Manfaat Ilmiah: hasil penelitian ini dapat memberikan penjelasan
secara scientific proses apoptosis mesenchymal osteosarcom
ayang merupakan efek transduksi dan sesnsitivasi dari PBMCs
Manfaat
Penelitian  Manfaat praktis: hasil penelitian ini diharapkan dapat
memberikan informasi dan dapat dikembangkan menjadi terapi
alternatif terhadap osteosarcoma
 Kerangka Konseptual Penelitian
KERANGKA KONSEP Sensitivasi PBMCs dg
Secretome + CSF
CD56 (perforin &
granzym-B), TNF-alfa,
FSL, TRAIL, cytokine Cytokines (IL-2,
Ext factors Death Receptor: IL-6)
TNFR, FSLR
Cytokine receptor Int factors
FADD/TRADD

STEM Cell OSTEOSARCOMA

HSP70 P53
Procaspase 8 HSP60 JAKS

BID BAX/BAK, Bcl2 STAT 3,5

Caspase 8
Bcl-xL
Caspase 6,7 Cytochrome- C

APAF-1

Caspase 3 Caspase 9

APOPTOSIS

Cell Death
  Sensitivasi PBMC dengan sekretom dan M-CSF dapat
meningkatkan sekresiTNF-alfa, ekspresiTRAIL, sekresi IL-2, IL-6
 Sensitivasi PBMCs dapat meningkatkan ekspresi Caspase 8,
caspase 3 pada mesenchymal stem cell osteosarcoma
 Sensitivasi PBMCs dapat menurunkan ekspresi HSP70 pada
Hipotesis mesenchymal stem cell osteosarcoma
 Sensitivasi PBMCs dapat meningkatkan ekspresi HSP60 pada
mesenchymal stem cell osteosarcoma
 Sensitivasi PBMCs dapat meningkatkan jumlah mesenchymal stem
cell osteosarcoma yang apoptosis
 OS-MSCs
2,4,6 h
(2,4,6 h)

OS-MSCs
+Act
PBMCs 2
h
Randomisasi
Desain OS-MSCs
Kokultivasi
OS-MSCs

Penelitian OS-MSCs +
PBMCs
+Act
PBMCs 4
h
Randominasi
Act-PBMCs
OS-MSCs
+Act
PBMCs 6
h

Act PBMCs
2,4,6 h
  Besar sampel : (r:1) (K-1) ≥ 15
 r=replikasi (unit eksperimen besar sampel perkelompok)
Desain  K=6 (r:1) (K-1) ≥ 15
Penelitian  (r:1) (K-1) ≥ 15
 (r:1) 5 ≥ 15 (r:1) ≥ 3 r = 4
 Sayatan Jaringan Tumor 3-5

Kerangka Operasional cm dalam Conicle Tube 50

ml mengandung 5 ml
medium dan penstrep
1/1000
Isolasi Stem Cell
Osteosarcoma (trypsin 0,2%;
collagenase IV)

Kultur stem cell Osteosarcoma

Isolasi PBMCs darah sampai 90% confluent
perifer

Sensitivasi dengan secretom Karakterisasi OS-MSCs dengan

dan SCF (200 ul) marker CD133, CD44

Kokultivasi stem cell Osteosarcoma

dengan PBMCs (1:5)

Kelompok 1 Kelompok 2 Kelompok 2 Kelompok 2 Kelompok 2

(Activated (PBMCs + OS- (PBMCs + OS- (PBMCs + OS- (OS-MSCs)
PBMCs) MSCs) (24 h) MSCs) (2 hari) MSCs) (5 hari)

Observasi TNF-, IL- Observasi Caspase 8,3, HSP70,

2, Il-6 (supernatant) HSP60, DNA fragment (OS-
dengan ElISA MSCs ekspresi protein) dengan
ICC

Pengumpulan Data

Analisis Data
TERIMA KASIH