Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Chem. 331
 pengantar
 HPLC adalah bentuk kromatografi cair digunakan untuk
memisahkan senyawa yang terlarut dalam larutan.
instrumen HPLC terdiri dari reservoir fase mobile,
pompa, injektor, kolom pemisahan, dan detektor.

 Senyawa dipisahkan dengan menyuntikkan campuran

sampel ke kolom. Komponen yang berbeda dalam
campuran melewati kolom pada membedakan karena
perbedaan dalam perilaku partisi mereka antara fase
gerak dan fase diam. Fase gerak harus degassed untuk
menghilangkan pembentukan gelembung udara.
sistem HPLC
 EMPAT JENIS KROMATOGRAFI
CAIR
 kromatografi partisi

 Adsorpsi, atau cair-padat

 kromatografi

 kromatografi pertukaran ion

 Eksklusi ukuran, atau gel, kromatografi

 KOMPOSISI SISTEM CAIR
kromatografi
 Pelarut
 Pengiriman pelarut System (Pump)
 Penyuntik
 Mencicipi
 Kolom
 Detektor (Diode Array)
 Kolektor sampah
 Recorder (Pengumpulan Data)
Gambar instrumen HPLC
 Penggunaan HPLC
 Teknik ini digunakan untuk kimia dan biokimia penelitian
menganalisis campuran kompleks, senyawa kimia pemurni,
mengembangkan proses untuk sintesis senyawa kimia,
mengisolasi produk alami, atau memprediksi sifat fisik. Hal ini
juga digunakan dalam kontrol kualitas untuk memastikan
kemurnian bahan baku, untuk mengontrol dan meningkatkan
hasil proses, untuk mengukur tes produk akhir, atau untuk
mengevaluasi stabilitas produk dan memantau degradasi.

 Selain itu, digunakan untuk menganalisis polutan udara dan air,

untuk memantau bahan-bahan yang dapat membahayakan
keselamatan atau kesehatan kerja, dan untuk memantau tingkat
pestisida dalam lingkungan. Federal dan negara bagian badan
pengatur menggunakan HPLC untuk survei produk makanan
dan obat, untuk mengidentifikasi disita narkotika atau untuk
memeriksa kepatuhan terhadap klaim label.
 injector HPLC Kromatografi
 Fungsi dari injektor adalah menempatkan sampel ke
dalam aliran tekanan tinggi dalam volume sesempit
mungkin sehingga sampel memasuki kolom sebagai
homogen, volume rendah plug. Untuk meminimalkan
penyebaran volume disuntikkan selama transportasi ke
kolom, panjang sesingkat mungkin dari tabung harus
digunakan dari injektor ke kolom.

 Ketika suntikan dimulai, aktuator udara berputar katup:

pelarut pergi langsung ke kolom; dan jarum injektor
terhubung ke jarum suntik. Tekanan udara mengangkat
jarum dan botol tersebut akan dipindahkan ke posisi
bawah jarum. Kemudian, jarum diturunkan ke botol.
 kolom HPLC
 Kolom merupakan salah
satu komponen yang paling
penting dari kromatografi
HPLC karena pemisahan
komponen sampel dicapai
ketika komponen-
komponen melewati kolom.
Kinerja tinggi alat
kromatografi cair terbuat
dari tabung stainless steel
dengan diameter 3 sampai
5mm dan panjang mulai
dari 10 sampai 30cm.
 Biasanya, kolom diisi dengan
silika gel karena bentuknya
partikel, sifat permukaan, dan
struktur pori bantuan untuk
mendapatkan pemisahan
yang baik. Silika dibasahi
oleh hampir setiap fase gerak
potensial, adalah inert untuk
sebagian besar senyawa dan
memiliki aktivitas permukaan
yang tinggi yang dapat
dimodifikasi dengan mudah
dengan air dan agen lainnya.
Silika dapat digunakan untuk
memisahkan berbagai
senyawa kimia, dan perilaku
kromatografi yang umumnya
diprediksi dan direproduksi.
Gambar kolom HPLC
 APA MEMPENGARUHI
SISTEM
Parameter kolom Parameter instrumen

 kolom Material  Suhu

 Penonaktifan  Mengalir
 Tahap stasioner  Sinyal
 Coating Material  Sensitivitas sampel
 Detektor
 APA MEMPENGARUHI
SISTEM
Parameter sampel

 Konsentrasi
 Matriks
 Pengaruh pelarut
 Efek sampel
 Beberapa jenis kolom
(Dapat diklasifikasikan sebagai)

 fase normal

 fase terbalik

 eksklusi ukuran

 Pertukaran ion
 fase normal

 Pada tipe kolom ini, retensi diatur oleh

interaksi dari bagian kutub dari fase diam
dan zat terlarut. Untuk retensi terjadi pada
fase normal, kemasan harus lebih polar
dari fase gerak sehubungan dengan
sampel
 fase terbalik
 Dalam kolom ini bahan kemasan relatif nonpolar
dan pelarut polar terhadap sampel. Retensi
merupakan hasil interaksi dari komponen-
komponen nonpolar dari zat terlarut dan fase
diam nonpolar. fase stasioner khas adalah
hidrokarbon nonpolar, cairan lilin, atau
hidrokarbon terikat (seperti C18, C8, dll) dan
pelarut adalah campuran air-organik polar
seperti metanol-air atau asetonitril-air.
 eksklusi ukuran
 Dalam eksklusi ukuran kolom HPLC terdiri
dari zat-zat yang telah dikendalikan
ukuran pori dan mampu disaring dalam
biasanya fase sesuai dengan ukuran
molekulnya. molekul kecil menembus ke
dalam pori-pori dalam kemasan
sementara molekul yang lebih besar
hanya sebagian menembus pori-pori.
Molekul-molekul besar mengelusi sebelum
molekul yang lebih kecil.
 Pertukaran ion
 Dalam kolom ini ketik komponen sampel
dipisahkan berdasarkan kekuatan ionik
menarik antara molekul yang membawa
kelompok dikenakan biaya berlawanan
dengan yang biaya pada fase diam.
Pemisahan yang dibuat antara cairan
ponsel polar, biasanya air yang
mengandung garam atau sejumlah kecil
alkohol, dan fase diam mengandung baik
situs tetap asam atau basa.
 selektivitas Factor

 nilai K' memberitahu kita di mana band-

band mengelusi relatif terhadap volume
kosong. Nilai-nilai ini tidak terpengaruh
oleh variabel seperti kecepatan aliran dan
dimensi kolom. nilai memberitahu kita di
mana dua puncak mengelusi relatif satu
sama lain. Hal ini disebut sebagai faktor
selektivitas atau faktor pemisahan
(sekarang dan kemudian sebagai faktor
kimia).
 Jenis kromatografi kolom cair
(LCC)

 LLC (Liquid Liquid)

 GLC GSC

 LSC (Liquid Padat -  SFC (Supercritical

adsorpsi) Fluid)

 SEC (Ukuran
Pengecualian)
 Jenis Detektor
 Absorbansi (UV  Menguapkan Light
dengan Filter, UV Hamburan Detector
dengan (ELSD)
monochromators)
 elektrokimia
 IR Absorbance
 Massa-
 fluoresensi spektrometri

 Indeks bias  Foto-Diode Array

 PARAMETER EVALUASI
 EFISIENSI
 RESOLUSI
 inertness
 RETENSI INDEX
 KOLOM BLEED
 FAKTOR KAPASITAS
 Referensi
 http://192.215.107.101/ebn/942/tech/techfocus/1071main.html
 http://www.chem.usu.edu/~sbialk/Classes/565/opamps/opam
ps.html
 Skoog, Holler, dan Neiman. Prinsip Analisis Instrumental.
Edisi ke-5. Orlando: Harcourt Brace & Co, 1998.
 http://weather.nmsu.edu
 http://elchem.kaist.ac.kr/vt/chem-ed/sep/lc/hplc.htm
 http://www.chemistry.nmsu.edu/Instrumentation/Lqd_Chroma.
html
 http://weather.nmsu.edu/Teaching_Material/SOIL698/Student
_Material/HPLCHP1090/HPLCINJ.HTM
 http://test-
equipment.globalspec.com/LearnMore/Labware_Scientific_In
struments/Analytical_Instruments/Chromatographs/HPLC_Col
umns
 http://www.chemistry.adelaide.edu.au/external/soc-
rel/content/lc-col.htm