KLONING GEN

Kelompok 3
Anissa Tresna Asih
Anggin Tiara Lestari
Syifa Ayudia Finuzi
Winda Rahayu Agustin

http://www.free-powerpoint-templates-design.com
 AGENDA

Vektor Kloning Gen Transformasi DNA

Opening 1 2 3 4 Closing

Isolasi dan Seleksi Sel

Karakterisaasi DNA Trasnforman
What’s the Meaning of
Isolasi DNA?
Definisi Manfaat Isolasi DNA
Isolasi DNA merupakan Isolasi DNA diperlukan untuk
langkah mempelajari DNA. analisis genetik, yang
Salah satu prinsip isolasi digunakan untuk tujuan
DNA yaitu dengan ilmiah, medis, atau forensik.
sentrifugasi.

Teknik Pemotongan Rantai DNA

Pada tahun 1960, Werner Arber & Hamilton Smith menemukan enzim dari
mikroba yang dapat memotong DNA utas ganda. Enzim tersebut
sekarang dikenal dengan enzim restriksi atau endonuklease restriksi.
Enzim tersebut mengenal dan memotong DNA pada sekuen spesifik yang
panjang 4 sampai dengan 6 pasang basa. Enzim tersebut dikenal dengan
enzim restriksi atau enzim endonuklease restriksi.
 Karakterisasi DNA
Karakterisasi DNA Tujuan dilakukannya karakterisasi DNA adalah
untuk mengetahui sifat-sifat (karakter) molekul DNA. Karakterisasi
DNA dilakukan dengan mengamati kelarutan DNA dalam beberapa
pelarut yang telah ditentukan, diantaranya pelarut akuadest, etanol
96%, eter, kloroform dan n-heksana.
 Macam-macam Teknik Isolasi DNA
Teknik random Phenol : chloroform
amplified polymorphic
DNA (RAPD)
1 4 Guanidine
5 Isotiocyanate

Metode CTAB
2 6 PCR (polymerase
chain reaction)

Salting Out 3 7 Silica gel

 TAHAPAN ISOLASI DNA

1 2 3 4 5

Isolasi Jaringan Pelisisan Pengekstraksian Purifikasi Praesipitasi

dinding sel dan dalam larutan
membran sel
 Vektor Kloning Gen
Definisi
 MACAM-MACAM VEKTOR
Plasmid
Plasmid dapat didefinisikan
sebagai molekul DNA sekuler
untai ganda di luar kromosom
yang dapat melakukan replikasi
sendiri. Contoh pBR322
Macam-
macam
Fasmid
Fasmid merupakan vektor sintesis Vektor
gabungan antara plasmid dan fag
λ. Fasmid ini membawa segmen
DNA λ yang berisi tempat att.
Bakteriofag
1. Bakteriofag λ
2. Bakteriofag M13
Kosmid
Kosmid merupakan vektor yang
dikontruksi dengan menggabungkan
kos dari DNA λ dengan plasmid.
Kemampuannya membawa fragmen
DNA sepanjang 32 hingga 47 kb.
 BAKTERIOFAG λ
Bakteriofag atau fag λ merupakan virus kompleks yang menginfeksi bakteri E.coli. DNA yang diisolasi dari
partikel fag ini mempunyai konformasi linier untai ganda dengan panjang 48,5 kb. Namun masing-masing
ujung fosfatnya berupa untai tunggal sepanjang 12 pb yang komplementer satu sama lain sehingga
memungkinkan DNA λ untuk berubah konformasinya menjadi sirkuler.
 BAKTERIOFAG M13
Ada jenis bakteriofag lainnya yang dapat menginfeksi E.coli. Contoh yang paling penting adalah M13, yang
mempunyai genom berupa untai DNA sirkuler sepanjang 6.408 basa. Infeksinya pada sel inang
berlangsung melalui pili, suatu penonjolan pada permukaan sitoplasma.
Thank You
KELOMPOK 4