MEDIA PERTUMBUHAN

MIKROORGANISME

Media pertumbuhan mikroorganisme

adalah suatu bahan yang terdiri dari
campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang
diperlukan mikroorganisme untuk
pertumbuhannya.
 Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dan
dikembangkan pada suatu substrat yang
disebut medium. Medium harus mengandung
nutrien yang merupakan substansi dengan
berat molekul rendah dan mudah larut dalam
air. Nutrien ini adalah degradasi dari nutrien,
dengan molekul yang kompleks. Nutrien
dalam medium harus memenuhi kebutuhan
dasar makhluk hidup, yang meliputi air,
karbon, energi, mineral dan faktor tumbuh .
 Persyaratan agar bakteri tumbuh dengan baik
yaitu:
1. Media harus mengandung semua unsur hara yang
diperlukan untuk pertumbuhan dan perkembangan
bakteri.
2. Media harus mempunyai tekanan osmosis,
tegangan permukaan dan pH yang sesuai dengan
kebutuhan bakteri.
3. Media harus dalam keadaan steril, artinya
sebelum ditanami bakteri yang dimaksud tidak
ditumbuhi oleh mikroba lain.
 JENIS-JENIS MEDIA
Berdasarkan konsistensinya, media dapat dibedakan
menjadi tiga macam yaitu:
1. Media Padat
Medium padat yaitu media yang mengandung
agar 15% sehingga setelah dingin media menjadi
padat.
2. Media cair
Media yang tidak mengandung agar dan
berbent5uk cair, contohnya adalah NB (Nutrient
Broth), LB (Lactose Broth),glukosa, pepton.
 lanjutan
3. Medium setengah padat
yaitu media yang mengandung agar 0,3-0,4%
sehinggamenjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak
begitu cair
Berdasarkan komposisi kimianya, media dapat
dibagi menjadi tiga macam yaitu:

1. Medium sintesis
Yakni media yang mempunyai kandungan dari isi
bahan yang telah dketahui secara terperinci. Media
sintetik sering digunakan untuk mempelajari sifat
faali dan genetika mikroorganisme.
2. Media semi sintesis
Medium semi sintesis yaitu media yang sebagian
komposisinya diketahui secara pasti, misanya PDA
(Potato Dextrose Agar) yang mengandung agar,
dekstrosa dan ekstrak kentang.
 Lanjutan

3. Media nonsinesis
Komposisi yang tidak dapat diketahui
secara pasti dan biasanya langsung diekstrak
dari bahan dasarnya, misalnya Tomato Juice
Agar, Brain Heart Infusion Agar, Pancreatic
Extract.
Berdasarkan sifatnya, media dapat dibagi menjadi
tiga macam yaitu:
1. Media dasar/ umum
Yaitu media pembiakan sederhana yang
mengandung zat-zat yang umum diperlukan
oleh sebagian besar mikroorganisme dan dipakai
juga sebagai komponen dasar untuk membuat
media pembiakan lain.
2. Media khusus
Yaitu media yang hanya dapat digunakan
untuk menumbuhkan satu macam
3. Media eksklusif
Pada media eksklusif ,hanya dapat tumbuh
satu jenis bakteri,sedangkan baktri lain akan mati.
 Berdasarkan fungsi dan aplikasinya,
dapat dibagi beberapa macam yaitu:
• Media Diperkaya
• Media diferensial
• Media Selektif
• Media Uji
• Media Enumerasi
• Mediauntuk peremajaan kultur,
• Media untuk karakterisasi bakteri,
 Beberapa contoh media selektif dan media
diferensial yang sering digunakan di laboratorium
mikrobiologi adalah sebagai berikut:

 Agar-darah (Blood agar)

Endo agar
EMB (Eosin Methylene Blue)
Mac Conkey Agar
Mannitol Salt Agar
Selenite Broth
Gram Negatif Broth
DCA
TSI (Triple Sugar Iron Agar)
 Teknik Kultur Murni
• Dalam teknik biakan murni diperlukan bagaimana
memelihara serta mencegah pencernaan dari luar.
Medium untuk membiakan mikroba haruslah steril
sebelum digunakan pencermaran (kontaminasi) dari
luar terutama berasal dari udara yang mengandung
banyak mikroorganisme.
• Untuk mempelajari sifat-sifat suatu organisme adalah
penting untuk mempelajarinya dari biakan murni
yang bebas dari semua tipe organisme lain. Untuk
melakukan ini, sel tunggal harus diisolasi dari seluruh
sel lainnya dengan cara sedemikian rupa sehingga
progeny yang terkumpul juga masih terpisah.
Persyaratan utama bagi isolasi dan kultivasi fage
adalah harus adanya kondisi optimum untuk
pertumbuhan organisme inangnya. Sumber
bakteriofage yang paling baik dan paling utama
adalah habitat inang. Sebagai contoh fage koli yang
dijumpai di dalam pencernaan dapat diisolasi dari
limbah atau pupuk kandang. Hal ini dilakukan
dengan sentifugasi atau filtrasi bahan sumbernya
dan penambahan kloroform untuk membunuh sel-
sel bakterinya
Metode biakan murni untuk spesies
dengan beberapa cara yaitu :

• Cara penuangan
• Cara penggoresan
• Cara penyebaran
 Cara Penggoresan

Prinsip metode ini yaitu mendapatkan koloni

yang benar-benar terpisah dari koloni yang
lain, sehingga mempermudah proses isolasi.
Cara ini dilakukan dengan membagi 3-4 cawan
petri. Ose steril yang telah disiapkan diletakkan
pada sumber isolat , kemudian menggoreskan
ose tersebut pada cawan petri berisi media
steril.
 Cara Penuangan

Cara ini lebih menggunakan bila ditinjau dari

sudut ekonomi dan waktu tetapi memerlukan
keterampilan yang diperoleh dari latihan
penggoresan yang sempurna akan
menghasilkan koloni yang terpisah. Tetapi
kelemahan cara ini adalah bakteri-bakteri
anaerob tidak dapat tumbuh
 Cara Penyebaran

Pengenceran sampel sama seperti pada

cara-cara penuangan, dengan memipet
sebanyak 0,1 ml cairan dari botol
pengencer dan biarkan cairan mengalir
keatas permukaan agar.
 Teknik Inokulasi
Ada beberapa tahap yang harus dilakukan :
1. Menyiapkan ruangan
Ruang tempat penanaman bakteri harus bersih dan
keadannya harus steril
2. Pemindahan dengan kawat inokulasi
Ujung kawat inokulasi sebaliknya dari platina atau
nikel. Ujungnya boleh lurus juga boleh berupa kolongan
yang diametrnya 1-3mm. Dalam melakukuan
penanaman bakteri kawat ini terlebih dahulu dipijarkan
sedangkan sisanya tungkai cukup dilewatkan nyala api
saja setelah dingin kembali kawat itu disentuhkan lagi
dalam nyala
 Metode dalam Inokulasi

Metode yang paling umum digunakan dalam teknik

inokulasi adalah metode gores. Metode gores ini lebih
menguntungkan jika ditinjau dari sudut ekonomi dan
waktu, tetapi memerlukan ketrampilan-ketrampilan
yang diperoleh dengan latihan. Penggoresan yang
sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah.
Inokulum digoreskan di permukaan media agar
nutrien dalam cawaan petri dengan jarum pindah (lup
inokulasi).
Gambar Metode Gores
Ada beberapa macam metode goresan

Goresan T
- Lempengan dibagi menjadi 3
bagian membentuk T
- Inokulasikan daerah 1 dengan
gerakan sinambung.
- Panaskan ose dan biarkan
dingin kembali.
- Teruskan goresan didaerah 2
- Pijarkan kembali ose dan
biarkan dingin kembali.
- Prosedur diatas diulangi.
 Goresan kuadran
Sama dengan
goresan T
hanya
lempengan
agar dibagi
menjadi 4
 Goresan radian
- Goresan dimulai dari
bagian pinggir
lempengan.
- Pijarkan ose dan
dinginkan kembali.
- Putar lempengan agar 90°
dan buat goresan
terputus diatas goresan
sebelumnya.
- Pijarkan ose.
 Cara sinambung
- Ambil satu mata ose
suspensi dan goreskan
setengah permukaan
lempengan agar.
- Jangan pijarkan ose, putar
lempengan 180 ° gunakan
sisi mata ose yang sama
dan gores pada sisa
permukaan lempengan
agar
 Reproduksi Bakteri
• Proses pembelahan diri pada bakteri terjadi
secara biner melintang. Pembelahan biner
melintang adalah pembelahan yang diawali
dengan terbentuknya dinding melintang yang
memisahkan satu sel bakteri menjadi dua sel
anak
• Reproduksi bakteri dapat berlangsung dengan
sangat cepat. Pada keadaan optimal, beberapa
jenis bakteri dapat membelah setiap 20 menit.
• Dalam satu jam bakteri dapat berkembang biak
menjadi berjutajuta sel. Coba kamu hitung
kalau setiap 20 menit bakteri dapat membelah,
berapa jumlah bakteri yang dihasilkan dari 1
bakteri dalam waktu 24 jam.
• Akan tetapi, ada pula jenis bakteri yang akan
mati karena perubahan faktor lingkungan.
Faktor lingkungan ini adalah cahaya matahari
yang terus-menerus, kenaikan suhu,
kekeringan, dan adanya zat-zat penghambat
dan pembunuh bakteri, seperti antibiotika dan
desinfektan.
• Keadaan tersebut juga menunjukkan bahwa
meskipun populasi bakteri sangat besar, tetap
saja dapat dikendalikan oleh faktor-
faktor penghambat sehingga peranan bakteri di
alam sebagai salah satu pengurai dapat
seimbang dengan makhluk hidup produsen dan
konsumen. Dalam keadaan normal, spora akan
tumbuh kembali menjadi satu sel bakteri.
 Perkembangbiakan parasekual bakteri dapat
terjadi dengan tiga cara, yaitu transformasi,
konjugasi, dan transduksi.
1. Transformasi adalah pemindahan potongan
materi genetik atau DNA dari luar ke sel
bakteri penerima. Dalam proses ini,
tidak terjadi kontak langsung antara bakteri
pemberi DNA dan penerima.
2. Konjugasi adalah penggabungan antara DNA
pemberi dan DNA penerima melalui kontak
langsung. Jadi, untuk memasukkan DNA dari
sel pemberi ke sel penerima, harus terjadi
hubungan langsung.
• 3. Transduksi adalah pemindahan DNA dari
sel pemberi ke sel penerima dengan
perantaraan virus. Dalam hal ini, protein
virus yang berfungsi sebagai cangkang
digunakan untuk pembungkus dan membawa
DNA bakteri pemberi menuju sel penerima.
Kurva pertumbuhan bakteri mempunyai 4
faseyaitu:
1) Lag fase
2) Exponenential phase
3) Stationary phase dan
4) Death phase
 Perhitungan Jumlah Bakteri

• Perhitungan secara langsung

• Perhitungan secara tidaklangsung

 Perhitungan secara langsung
• Perhitungan jumlah mikrobia secara langsung,
dipakai untuk menentukan jumlah mikrobia
keseluruhan baik yang mati maupun yang hidup.
Ada beberapa cara perhitungan antara lain:
1. Menggunakan cara pengecatan dan pengamatan
mikrospis
2. Menggunakan filter membrane (miliphore filter)
3. Menggunakan counting chamber
Pehitungan secara tidak langsung
• Perhitungan mikrobia secara tidak langsung,
dipakai untuk menentukan jumlah mikrobia
keseluruhan baik yang mati maupun yang
hidup atau hanya menentukan jumlah
mikrobia yang hidup saja.
1. Menggunakan sentrifuge
2. Berdasarkan kekeruhan
3. Menggunakan perhitungan elektronik
(electronic counter)
 Perhitungan jumlah bakteri secara
langsung maupun secara tidak langsung
dipengaruhi oleh beberapa faktor, yakni :
1. Faktor pengenceran, semakin tinggi pengenceran
suatu suspensi maka akan semakin sedikit jumlah
bakteri yang dikandung atau tidak ada sama sekali
2. Temperatur dan pH, berkaitan dengan pertumbuhan
bakteri pada suhu dan pH optimum
3. Komposisi medium, medium yang digunakan untuk
penanaman harus sesuai dengan bakteri yang akan
dihitung
4. Segi teknis yaitu Alat yang digunakan dan tingkat
ketelitian dalam penghitungan.