BIOTEKNOLOGI

“Hair regrowth in alopecia areata patients

following Stem Cell Educator therapy”

Nama : Fitratul wahyuni

No Bp : 1921012017
Dosen pengampu : Dr. Marlina, MS, Apt.
 Stem Cell
Defenisi
Sel punca/Stem cell merupakan sel yang belum
berdiferensiasi sehingga memiliki kemampuan untuk tumbuh
menjadi berbagai sifat sel tergantung dari lingkungan mikro (niche)
di sekitarnya
Berdasarkan asalnya sel punca dibedakan menjadi 3 bagian :

Sel punca
embrional • yang diperoleh dari blastokista,sy

sel punca • Yang diperoleh dari tali pusat, plasenta dan cairan
amnion serta
ekstraembrional

• Yang diperoleh dari jaringan dewasa sesuai dengan

sel punca dewasa jenis jaringan tempat diperolehnya sel,
• misalnya sumsum tulang, darah, lemak maupun kulit
Differentiate yaitu kemampuan
untuk berdifferensiasi menjadi
sel lain. Sel Punca mampu
berkembang menjadi berbagai
jenis sel yang khas (spesifik)
misalnya sel saraf, sel otot
jantung, sel otot rangka, sel
pankreas dan lain-lain
Sifat
khas dari
stem cell
Self regenerate/self renew yaitu
kemampuan untuk
memperbaharui atau
meregenerasi dirinya sendiri.
Stem cells mampu membuat
salinan sel yang persis sama
dengan dirinya melalui
pembelahan sel.
 Jenis Stem Cell

Totipoten: Sel batang ini dapat berdiferensiasi menjadi semua jenis sel yang
mungkin. Beberapa sel pertama yang muncul ketika zigot mulai membelah
adalah totipoten.

Pluripotent: Sel-sel ini dapat berubah menjadi hampir semua sel. Sel-sel dari
embrio awal bersifat pluripoten.

Multipoten: Sel-sel ini dapat berdiferensiasi menjadi keluarga sel yang terkait
erat. Adult hematopoietic stem cells, misalnya, bisa menjadi sel darah merah
atau putih atau platelet.

Oligopoten: Ini dapat berdiferensiasi menjadi beberapa tipe sel yang

berbeda. Contohnya Adult lymphoid or myeloid stem cells

Unipoten: Ini hanya dapat menghasilkan sel dari satu jenis, contohnya adult
muscle stem cells
 Alopecia Aerata
Alopesia areata umumnya adalah penyebab
kebotakan yang terjadi tiba-tiba. Alopesia
areata merupakan penyakit autoimun spesifik
organ, bersifat kronis, dimediasi oleh sel T
autoreaktif CD8+, yang menyerang folikel
rambut dan kadang-kadang kuku.

Alopesia areata diduga sebagai penyakit

autoimun yang disebabkan oleh respons
imun yang tidak adekuat pada folikel
rambut, dan berhubungan dengan
antigen
Alopesia areata diduga terjadi sebagai akibat dari kerusakan pada daya tahan tubuh
khusus pada folikel rambut. Antigen yang berhubungan dengan folikel rambut
mengaktifkan respons imun yang tidak sesuai, menyerang folikel rambut yang berada
pada fase anagen, dan menyebabkan gangguan pertumbuhan.
Abstrack
• Background : Alopecia areata (AA) adalah salah satu penyakit autoimun yang
menyerang folikel rambut,dampaknya pada kualitas hidup dan kepercayaan diri
pasien karena rambut rontok.
• Methode : Terapi Stem Cell Educator di mana darah pasien diedarkan melalui
sistem loop tertutup yang memisahkan sel mononuklear dari seluruh darah, sel
berinteraksi secara singkat dengan sel induk multipoten yang berasal dari darah
pada tali pusar (CB-SC), dan mengembalikan autologous yang “educated“ sel ke
sirkulasi pasien. Dalam studi label terbuka, fase 1 / fase 2, pasien (N = 9) dengan AA
parah menerima satu pengobatan dengan terapi Sel Induk educator. Usia rata-rata
adalah 20 tahun (durasi rata rata alopecic, 5 tahun)
Hasil
• Data klinis menunjukkan bahwa pasien dengan AA parah mencapai peningkatan
pertumbuhan kembali rambut dan kualitas hidup setelah menerima terapi Stem cell
educator.
• Flow cytometry mengungkapkan regulasi sitokin dan restorasi Th2 menyeimbangkan
produksi sitokin Th1 / Th2 / Th3 dalam darah tepi pada subjek AA.
• Imunohistokimia menunjukkan pembentukan "ring of transforming growth factor beta 1
(TGF-β1))" di sekitar folikel rambut, yang mengarah untuk pemulihan folikel rambut dan
perlindungan folikel rambut yang baru dihasilkan terhadap penghancuran oleh
autoimun.
• Studi mekanis mengungkapkan bahwa kultur CB-SC dapat mengatur ekspresi molekul
penghambat B dan T limfosit atenuator (BTLA) dan reseptor death-1 (PD-1) yang telah
diprogram pada Sel T efektor CD8β + NKG2D + dan menekan proliferasi mereka dengan
ligan herpesvirus entry mediator (HVEM) dan diprogramkan death-1 ligand (PD-L1) yang
diprogram pada CB-SCs.

Kesimpulan:
Data klinis saat ini menunjukkan keamanan dan efektivitas terapi Stem Cell
Educator untuk pengobatan AA. Pendekatan inovatif ini menghasilkan
peningkatan dalam pertumbuhan kembali rambut pada subjek dengan AA
sedang atau berat
 Introduction
• Alopecia areata (AA) adalah salah satu penyakit kulit
autoimun yang dimediasi oleh sel T, mengakibatkan
rambut rontok
• AA mempengaruhi anak-anak dan orang dewasa dari
segala usia dan rambut dari semua warna
kemungkinan pemicu autoimunitas pada AA
adalah genetik, epigenetik, fisik, emosional, Faktor-faktor ini dapat bertindak untuk memecah
sosial, dan faktor lingkungan “immune privilage“ dari folikel rambut,
mengakibatkan penghancuran autoimun dari folikel
rambut oleh banyak sel imun, seperti CD4+ atau
CD8+, Sel T dan sel Natural Killer (NK). Jadi,
diperlukan pendekatan komprehensif untuk
memulihkan “immune privilage” folikel rambut dan
mengatasi beberapa disfungsi kekebalan tubuh.
• CB-SC secara fenotip dan fungsional berbeda
dari jenis stem cell lain
• Uji Praklinis menunjukkan kemampuan
modulasi kekebalan tubuh CB-SCs dalam
diabetic non-obes (NOD) diabetik yang
disebabkan autoimun pada tikus. Sama
dengan sel T manusia yang autoreaktif dari
pasien diabetes tipe 1
• Selain itu, fase 1/2 Studi klinis menunjukkan bahwa
terapi Stem Cell educator dapat mengontrol disfungsi
kekebalan tubuh dan mengembalikan kekebalan tubuh
menyeimbangkan melalui modulasi monosit /
makrofag, yang mengarah pada peningkatan
sensitivitas insulin yang tahan lama dan kontrol
metabolik pada pasien diabetes tipe 2.
• Gabungan data klinis dan praklinis meningkatkan
kemungkinan Terapi Stem cell educator juga dapat
berguna dalam mengatasi autoimunitas terlibat dalam
AA.
 Methods
Proliferasi sel dan kultur ex vivo

pada 50 U / ml
Unit darah PBMC distimulasi
Sel mononuklear yang rekombinan human IL-2
manusia buffy selama 5 hari dengan
berasal dari darah (rIL-2) dan 5 ng / ml IL-7
Dynabeads ditambah
coat dibeli dari manusia (PBMC)
dengan anti-CD3, anti-
rekombinan human (rIL-7)
Pusat Darah New dipanen seperti yang (Sistem R&D, Minneapolis,
CD28, dan anti-CD137
Jersey dijelaskan sebelumnya MN), dan diinkubasi pada
antibody
suhu 37 ° C dalam 8% CO2

Proliferasi limfosit
diwarnai dan dianalisis
dengan CellTrace ™ CFSE
Cell Proliferation kit (Life
Tech-
nologies). Dynabeads
dihapus untuk flow
cytometry dengan
menggunakan DynaMag-
15 (Life Technologies)
sesuai dengan instruksi
facturer
Semua sampel darah tali
pusat disaring untuk
alanine aminotransferase
(ALT) dan antibodi antigen
patogenik dan hanya darah
tali pusat yang bebas unit
patogen digunakan untuk
mengisolasi CB-SC
Sel-sel mononuklear darah tali pusat
dilapisi pada free-serum media kultur
(Lonza, Walkersville, MD, USA) dan
diinkubasi pada suhu 37 ° C, dalam
8% CO 2 . Setelah 2 hingga 3 minggu,
CB-SC tumbuh pada pertemuan 80-
90% sebelum disiapkan untuk kultur
bersama dengan limfosit alogenik
 Flow cytometry
Analisis flow cytometric dilakukan seperti sebelumnya
Sel diinkubasi dengan mouse anti-human antibodi monoklonal

Sel-selnya ternoda selama 30 menit pada suhu

kamar dan kemudian dicuci dengan PBS sebelum
aliran dianalisis

Isotype-matched anti-mouse antibodi IgG manusia

(Beckman Coulter) berfungsi sebagai kontrol negatif untuk
semua IgG mAb terkonjugasi fluorescein. Untuk pewarnaan
intraseluler, sel-sel tetap dan permeabel menggunakan kit
PerFix-nc (Beckman Coulter).

Setelah pewarnaan, sel dikumpulkan dan dianalisis menggunakan Gallios Flow

Cytometer (Beckman Coulter), dilengkapi dengan 3 laser (488 nm biru, 638 merah,
dan 405 laser violet) untuk konektor bacaan saat ini hingga 10 warna. Data akhir
adalah dianalisa menggunakan perangkat lunak analisis aliran cytometry Kaluza
(Beckman Coulter)
 Pasien

Subjek AA adalah pasien berturut-turut

yang menerima perawatan melalui
Departemen Dermatologi di RS Pertama
Universitas Kedokteran Hebei
(Shijiazhuang, Hebei, Tiongkok) yang
terdaftar dalam fase 1 / fase 2.

30 subjek didekati untuk

penelitian. Persidangan dilakukan dengan
sembilan subjek dengan AA yang telah
ditentukan (durasi alopecic rata-rata 5
tahun)
 Semua subjek yang
menerima terapi Stem
Cell educator sudah
pernah diterapi dengan
terapi biasa tetapi
treatment gagal.

Dengan setidaknya 3
bulan washout periode,
subyek menerima satu
perawatan dengan terapi
Stem cell educator.
Terapi dan follow up Stem Cell Educator
• Sembilan peserta menerima satu perawatan
dengan Stem Cell Educator dan follow up
studi seperti yang dijelaskan dalam diagram
(Gambar 1 )
Persiapan kultur CB-SC dan
Stem Cell educator dilakukan
seperti yang dijelaskan
sebelumnya. Secara singkat,
unit darah tali pusat manusia
berasal dari alogenik yang sehat
diperoleh dari RS Kesehatan Ibu
dan Anak (Jinan, Shandong,
Cina).
Semua sample darah tali pusat
disaring untuk alanine
aminotransferase (ALT) dan
antibodi antigen patogen
(termasuk anti-HCV, anti-
HBsAg, anti-HIV, dan anti-
Sifilis), dan hanya unit darah tali
pusat bebas patogen digunakan
untuk mengisolasi CB- SC.
CB-SC manusia dihasilkan seperti
yang telah dirancang sebelumnya.
ditulis dengan modifikasi berikut
[ 18 , 23]. Tali sel mononuklear
darah dilapisi dalam kultur bebas
serum sedang (Lonza, Walkersville,
MD) dan diinkubasi pada suhu 37 °
C, dalam 8% CO 2 . Setelah 2
hingga 3 minggu, CB-SC tumbuh
pada 90% disiapkan untuk uji
klinis. Endotoksin levelnya <0,05
EU / ml. Satu perangkat educator
diambil dari satu unit darah tali
pusat, dan digunakan untuk satu
subjek.
• Untuk terapi Stem Cell Educator, jarum 16-gauge IV ditempatkan di c,
dan darah pasien dilewatkan melalui Sel Darah Separator MCS +
(Haemonetics®, Braintree, MA, USA) untuk 6 hingga 7 jam mengisolasi
sel mononuklear sesuai dengan protokol yang direkomendasikan
pabrikan.
• sel mononuklear yang dikumpulkan dipindahkan ke dalam perangkat
untuk paparan allogeneic CB-SCs, dan komponen darah lainnya secara
otomatis dikembalikan ke pasien.
• Dalam Stem Cell Educator, sel mononuklear dipisahkan dari darah
pasien secara perlahan melalui disk yang ditumpuk dengan adheren CB-
SC. Setelah 2 hingga 3 jam di perangkat, CB-SC sel mononuklear
dikembalikan ke sirkulasi pasien melalui vena dorsal di tangan dengan
saline fisiologis (2 hingga 3 ml / menit)
• Seluruh proses memakan waktu 8 hingga 9 jam. Selama apheresis,
beberapa pasien menerima kalsium oral larutan glukonat (10%, 10 ml)
untuk meringankan kesemutan bibir atau jari kaki
• Pasien dirawat di rumah sakit selama satu hari memantau suhu dan
melakukan tes hitung darah untuk reaksi yang merugikan setelah
perawatan. Kunjungan follow up dijadwalkan 4, 12, 24, 40, 56, 84, dan
112 minggu setelahnya perawatan untuk penilaian klinis dan tes
laboratorium. Biopsi kulit kepala dilakukan sebelum perawatan dan
pada 12 minggu setelah perawatan
Study end points

Titik akhir studi sekunder

adalah bukti awal untuk efek
terapi dalam memodulasi
Titik akhir studi utama autoimunitas dengan flow
adalah kelayakan dan cytometry. Sampel darah
keamanan terapi Stem Cell baseline dan jaringan kulit
Educator hingga 24 minggu kepala dengan biopsi
pasca perawatan dan dikumpulkan sebelum terapi
evaluasi awal efek terapi Stem Cell educator
untuk meningkatkan
pertumbuhan rambut pada
subjek AA
Immunohistochemistry and histology
• Jaringan kulit kepala yang dibiopsi diperbaiki
dalam formaldehida 10%, tertanam dalam
parafin, dan diproses untuk hematoxylin dan
pewarnaan eosin (H&E). Untuk menentukan
fenotipe leukosit yang diinfiltrasi dan
melepaskan sitokin, cryosections jaringan
beku digunakan.
Analisis statistik
• Pendekatan intention-to-treat digunakan, dengan
sembilan pasien.
• pasien yang menjalani terapi Sel Induk
educator. Semua pasien dilibatkan dalam analisis
keselamatan.
• Yang utama titik akhir efikasi adalah pertumbuhan
kembali rambut dan perubahannya dalam penanda
kekebalan antara awal dan tindak lanjut.
• Analisis statistik data dilakukan dengan menggunakan
dua sisi Student t -test untuk menentukan statistik
signifikan
• Nilai diberikan sebagai mean ± SD (standar deviasi)
Hasil
Suppressed proliferation of antigen-specific T cells by
co-culture with CB-SCs
Hair regrowth in alopecia areata subjects
All patients tolerated the procedure well,
without any significant adverse
events during the course of treatment.

At 4 weeks post-treatment with Stem Cell

Educator therapy, there was hair regrowth in
subjects with patchy AA and alopecia totalis
(Figure 4).
All of these improvements were maintained
throughout the final follow-up at 2 years
• Flow cytometri menunjukkan peningkatan ekspresi TGF-β1 ditandai
oleh darah sel mononuklear 4 minggu setelah menerima Stem cell
educator ( P = 0,015, Gambar 5A )
• Selain itu, peserta menunjukkan up-regulasi sitokin Th2 IL-4 yang
signifikan dan ekspresi IL-5 pada follow-up 4 minggu ( P = 0,012
dan P = 0,022, masing-masing, Gambar 5A)
• Ekspresi IL- 12 juga meningkat secara signifikan pada 6/9 peserta
(3,69 ± 3,27 berbanding 15,55 ± 7,48, P = 0,005). Tidak ada
perubahan diamati pada tingkat Th1 sitokin IL-12 ( P = 0,24,
Gambar 5A )
• kami memeriksa limfosit untuk mereka tingkat CD28 dan indimible
costimulator (ICOS). Flow sitometri menunjukkan bahwa ekspresi
CD28 secara nyata meningkat pada 8/9 peserta 4 minggu setelah
Terapi stem cell educator ( P = 0,013, Gambar 5B )
• Jaringan kulit segar dikumpulkan dari kulit kepala melalui
biopsi untuk pengujian imunohistokimia pada peserta
dengan alopecia totalis sebelum pengobatan dan 12
minggu setelah menerima Stem Cell educator . Pewarnaan
TGF-β1 mengelilingi folikel rambut partisipan AA setelah
menerima terapi Stem Cell Educator, dengan bagian vertikal
rambut folikel (panel atas) dan bagian horizontal folikel
rambut. IgG1 yang dicocokkan dengan isotipe berfungsi
sebagai kontrol negatif untuk imunostaining TGF-β1 secara
serial bagian folikel rambut. Gambar representatif
diperoleh dari lima percobaan. Bilah skala, 25 μm. (gambar
5C)
• H&E pewarnaan jaringan kulit kepala. Bilah skala, 25 μm.
(gambar 5D)
 Conclusions
• AA adalah salah satu penyakit autoimun kulit
yang paling umum, yang secara signifikan
mempengaruhi kualitas hidup pasien.
• Penelitian fase 1 / fase 2 saat ini menunjukkan
keamanan dan kelayakan terapi Educator Stem
Cell dalam pengobatan subjek AA.
• Temuan dari percobaan ini memberikan bukti
nyata bahwa terapi Stem Cell Educator dapat
mengendalikan autoimunitas dan menyebabkan
pertumbuhan kembali rambut.