Analisis makanan dan minuman

Fitratul wahyuni
1921012017
• Pengukuran mikroplastik dalam biota dan matriks abiotik pada beberapa
elemen. Kami menyelidiki mikroplastik di field-biota, sedimen dan air.
• Metode ekstraksi sedimen yang diimproved, berdasarkan density
separation dikembangkan. Untuk analisis mikroplastik dalam biota kami
menemukan bahwa protokol pencernaan enzimatik yang disesuaikan
menggunakan K proteinase paling baik, dengan pemulihan 97% dari
partikel plastik dan tidak ada efek degradasi yang teramati plastik dalam
analisis Raman berikutnya.
• Analisis lapangan mengungkapkan bahwa 8 dari 9
spesies invertebrata yang diuji dari Laut Utara
dan 68% individu yang dianalisis dari ikan trout
coklat ( Salmo trutta ) dari Pantai Barat Swedia
memilikinya mikroplastik di
dalamnya. Berdasarkan jumlah partikel plastik
per kg d.w konsentrasi mikroplastik ditemukan di
kerang kira-kira seribu kali lipat lebih tinggi
dibandingkan dengan sampel sedimen dan air
permukaan dari lokasi yang sama.
• Tujuan keseluruhan dari penelitian ini adalah untuk lebih
memahami bagaimana mikroplastik didistribusikan di lingkungan
laut dan potensinya terakumulasi dalam rantai makanan.
• Dalam studi ini, oleh karena itu kami melakukan:
1) mengoptimalkan metode untuk mengekstraksi mikroplastik dari
sedimen dan biota;
2) Screening berbagai spesies invertebrata dari pantai Laut Utara
Belanda
3) evaluasi kecenderungan kontaminasi mikroplastik dalam jalur
gastrointestinal trout coklat ( Salmo trutta ) dari pantai Swedia
Barat dan seluruh kerang ( Mytilus edulis ) dari Laut Utara, di mana
sampel air dan sedimen juga dianalisis untuk perbandingan.
 Materials and methods
2.1. Prevention dan assesment kontaminasi
• Selama semua langkah-langkah perawatan dan analisis
sampel, tindakan pencegahan dilakukan diambil untuk
menghindari kontaminasi plastik.
• Semua peralatan dibilas dengan air MilliQ® (Millipore
Corporation) sebelum pemakaian.
• Kontaminasi plastik melalui paparan udara
diminimalkan dengan menutup sampel, subsampel dan
filter. Gelas digunakan sebagai gantinya peralatan
plastik sedapat mungkin
• Untuk setiap metode, blanko long term diukur : satu
blanko per tiga analisis sampel.
2.2. Tes metode
2.2.1. recovery mikroplastik dari sedimen
• recovery untuk ekstraksi sedimen diuji dengan 5 jenis berbeda plastik rumah
tangga, dibeli sebagai kemasan untuk produk-produk lokal toko kelontong: dua
jenis low-density polyethylene (LDPE), density polyethylene (HDPE),
polypropylene (PP) dan polystyrene (EPS).
• Plastik dipotong menjadi 0,25 mm 2 buah dan ditambahkan ke 20 g tanah standar
(“pasir berlumpur”, LUFA 2.1).
• Sepuluh potong setiap plastik jenis digunakan per sampel, dan total 5 sampel
tanah. Tanah itu telah diolah dengan larutan garam jenuh untuk dihilangkan
kelebihan bahan organik dan kontaminasi plastik potensial. Bobot dan kelimpahan
diukur, dan setiap perubahan morfologi atau warna dicatat.

2.2.2. Recovery mikroplastik dari biota

• recovery untuk metode desruksi biota diukur dengan tujuh jenis plastik.
• Dua adalah plastik referensi dari Sigma Aldrich; PP dan PE, (~ 3 mm) dan lima
lainnya adalah plastik rumah tangga dari poliamida (PA), polietilen tereftalat
(PET), EPS, dan dua jenis LDPE, masing-masing dipotong menjadi 0,25
mm 2 . Lima potong masing-masing jenis plastik digunakan.
• Partikel-partikel dikenai gelombang mikro dan protokol enzimatik, dijelaskan di
bawah “digestion dan ekstraksi". Tidak ada jaringan biologis yang dimasukkan
memastikan bahwa potongan plastik terpapar secara maksimal selama treatmen.
• Selanjutnya, partikel diuji untuk perubahan kelimpahan dan bobot. Perubahan
morfologis dan warna juga dicatat
2.3. Pengambilan sampel, pra-perawatan, dan penyimpanan
• Tiga pengambilan sampel lapangan yang berbeda dilakukan untuk
mengumpulkan biota :
i) skrining mikroplastik dalam invertebrata multipel ( n = 9) spesies
(lihat Tabel 1 ),
ii) pengukuran mikroplastik pada ikan ( Salmo trutta ) dan
iii) perbandingan antara kerang biru ( Mytilus edulis ), sedimen dan
sampel air diambil di lokasi dan waktu yang sama
2.3.1. Studi skrining multispesies
• Untuk studi skrining, 9 spesies invertebrata diambil sampelnya (lihat
Tabel 1) pada bulan April 2014 dan disimpan dalam etanol. Sampel
itu kemudian
• disiapkan dengan menguapkan etanol dalam tudung asap dengan
N 2 , dimana pada bagian tubuh lunak diisolasi melalui
mengeluarkan cangkang dan eksoskeleton.
• Setelah dibilas dengan ultrapure, kelas analitik MilliQ® air (Millipore
Corporation), sampel dipisahkan dan dikeringkan membersihkan
aluminium foil.
• Organisme individu dari lokasi yang sama dikumpulkan dan sampel
kemudian ditimbang dan disimpan pada suhu -20 ° C selama
minimal 2 jam, dan dikeringkan dalam pengering beku selama 48
jam. Itu sampel kering ditumbuk menjadi bubuk homogen
menggunakan bagian pisau langsung di gelas sampel
2.3.2. Ikan (Salmo trutta)
• Salmo trutta ditangkap secara elektrik (Smith-Root LR-20B, Smith-Root, Inc., USA)
di Stenungsån
• Mereka dibius 0,5 mL – 1 L solusi benzocaine (10%, Vetofish, Châteauneuf-les-
Martigues, Perancis) dan eutanasia dengan pukulan tajam ke kepala Ikan
• kemudian secara individual dibungkus dengan aluminium foil dan disimpan di atas
es sebelum pembedahan.
• Ikan dicairkan pada suhu kamar selama 1 jam, dimana saluran pencernaan, tidak
termasuk kandung empedu dimasukkan ke dalam botol yang ditandai secara
individual bersama dikumpulkan selama pembedahan. Sampel kemudian
dikeringkan dalam pengering beku selama 48 jam.

2.3.3. Sedimen, air, dan kerang

• Pengambilan sampel sedimen dilakukan di pantai Laut Utara di perairan rendah
garis dermaga selatan IJmuiden, Belanda).
• Sedimen dikumpulkan dari Atas 1 cm dengan sendok logam pada titik-titik acak
dalam 10 m 2 daerah dan disimpan dalam botol kaca 1 L.
• Air permukaan dikumpulkan dalam kondisi yang sama area dalam botol kaca 1
L. Sampel sedimen dan air disimpan pada suhu 4 ° C dalam gelap, selama 1-3
bulan sampai analisis.
• Pengambilan kerang dilakukan bersamaan dengan sedimen dan air contoh; 15
kerang dikumpulkan dan disimpan di etanol (96%, Sigma Aldrich) di lokasi untuk
menghindari peningkatan feses, Seluruh tubuh yang lunak diisolasi dan dibekukan
kering seperti yang dijelaskan untuk invertebrata lain dalam studi skrining
2.4. Digestion dan ekstraksi
2.4.1. Studi skrining multispesies
• Sembilan spesies invertebrata dikumpulkan selama pengambilan sampel pertama
• dicerna sesuai dengan protokol microwave oleh Van der Horst
• Untuk pra-analisis, pembuluh dibersihkan, Selanjutnya 0,2 g sampel ditambahkan ke setiap wadah
diikuti oleh 5 mL MilliQ dan 5 mL HNO 3 (65%).
• Dipre-program, program pencernaan kemudian digunakan dan diikuti dengan penambahan 1 mL
H 2 O 2 terkonsentrasi (> 30%) dan program pencernaan kedua.
• Rangkap tiga sampel blanko dianalisis per seri dari 9 sampel biota
• Ke setiap wadah 30 mL MilliQ dan 10 mL NaOH (2 M) ditambahkan menetralkan solusi.
• Sampel kemudian disaring pada Whatman Filter GF / C (ukuran pori 0,7 μm, ⌀ 25 mm), dibilas
dengan 30 mL H 2 O 2 (30%) setelah itu wadah dan peralatan filtrasi dibilas jumlah MilliQ yang
cukup (> 100 mL).

2.4.2. Penelitian Ikan (Salmo trutta)

• sampel, selanjutnya dioptimalkan untuk analisis mikroplastik dalam biota. Saluran pencernaan
termasuk feses dari masing-masing individu kering-beku dan ditumbuk dengan mortar.
• Sampel ditambahkan ke wadah gelas bersih (100 mL) dengan tutup atas sekrup
polypropylene. Setelah menambahkan 15 mL homogenisasi buffer (400 mM Tris-HCl, pH 8, 0,5%
SDS, keduanya dari Sigma Aldrich), sampel diinkubasi selama 60 menit pada 60 ° C untuk
mendenaturasi protein. Kemudian 500 mg / mL proteinase K (3,0-15,0 Unit / mg, T . Album , Sigma
Aldrich) ditambahkan, dengan CaCl 2 (Sigma Aldrich, 8 mg per sampel) menjadi aktifkan
enzim. Sampel kemudian diinkubasi selama> 2 jam pada 50 ° C, dikocok selama 20 menit pada suhu
kamar dan diinkubasi selama 20 menit lebih banyak lagi pada 60 ° C. Kemudian sampel diinkubasi
pada suhu kamar. dengan 30 mL H 2 O 2 (30%) semalam untuk menurunkan sisa chitin. Pagi
berikutnya sampel disaring vakum melalui filter Whatman GF / C (1,2 μm, ⌀ 47 mm) dan dibilas
dengan MilliQ® (> 100 mL) diikuti dengan penyaringan vakum sampai kering
2.4.3. Studi sedimen, air dan kerang
• Untuk sampel sedimen dikembangkan metode sesuai dengan prinsip pemisahan
kepadatan dilaporkan oleh Thompson dan rekannya ( Thompson et al., 2004) dengan
gelas khusus ( Gbr. 1 ). Endapan sampel dihomogenisasi dengan sendok logam dan 20 g
ww ditimbang dalam labu pemisahan kepadatan.
• Solusi NaCl jenuh (JOZO) / MilliQ® (kepadatan ρ = 1,2 g / mL) ditambahkan ke dalam
sedimen dan dicampur dengan magnet stirer selama 10 menit. Untuk meningkatkan
recovery, satu setetes minyak zaitun ditambahkan ke larutan garam dalam gelas kimia.
• Solusinya kemudian dibiarkan mengendap selama> 5 jam, setelah itu pompa peristaltik
digunakan untuk mendorong supernatan ke atas secara perlahan katup 2 ke dalam
tabung penyaringan yang terpisah (Gambar 1 ). Setelah menutup katup 2, tombol
tabung penyaringan terlepas dari labu dan dipasang terbalik.
• Supernatan kemudian disaring melalui vakum Whatman GF / F filter (ukuran pori 0,7
μm, ⌀ 25 mm). Untuk mengurangi jumlah organik bahan pada filter, 30 mL H 2 O 2 (30%)
ditambahkan ke tabung dan kiri untuk bereaksi selama> 20 menit.
• Setelah itu, satu tetes sabun pencuci piring dalam 30 mL MilliQ® ditambahkan untuk
membilas minyak dinding kaca dan di katup 2. Tabung itu kemudian dibilas dengan
cukup jumlah air MilliQ® (> 100 mL) dan vakum disaring sampai kering.
• Guci yang berisi sampel air diguncang untuk mencampur sampel. Untuk menghindari
penyumbatan, 50 mL subsampel diambil dan disaring melalui Whatman GF / F filter
(ukuran pori 0,7 μm, ⌀ 25 mm) dan selanjutnya diobati dengan 30 mL H 2 O 2 (30%)
selama> 20 menit, diikuti dengan pembilasan dengan> 100 mL MilliQ® dan penyaringan
vakum berikutnya sampai kering.
• Tiga sampel rangkap tiga 0,2 g dari sampel yang dikumpulkan dari 23 individu kerang
diambil. Bahan sampel telah dikeringkan dan dibekukan subsampel digiling dengan
mortar sebelum ekstraksi menggunakan metode enzimatik yang sama yang digunakan
untuk analisis gastro saluran usus Salmo trutta
2.5. Identifikasi
• Semua filter yang mengandung ekstrak dibersihkan dari biologis atau abiotik
• sampel dari tiga pengambilan sampel dianalisis dengan mikroskop cahaya (perbesaran 40 ×) untuk
keberadaan mikroplastik.
• Selain itu, ukuran dan luas permukaan partikel diukur menggunakan MicroCamLab untuk Microsoft
Windows. Partikel dan serat plastik dibedakan dari non-plastik dengan membandingkan secara
visual dengan plastik bahan ferensi serta gambar referensi dari berbagai jenis serat (Sarkar, 2012).
• Kadang-kadang tes jarum panas, di mana jarum panas berada mendorong terhadap partikel untuk
menguji apakah / bagaimana bahan meleleh
• Selain itu, partikel sebelum dan sesudah pengujian metode untuk protokol pencernaan yang
berbeda dianalisis dengan spektroskopi Raman untuk memeriksa tanda-tanda degradasi atau
peningkatan fluoresensi. Spectra dihasilkan dengan Renishaw Invia Raman spektrometer,
menggunakan laser dioda 785 nm atau frekuensi 532 nm
• Akumulasi spektral minimal 10 kali 1 detik digunakan; jika tinggi latar belakang dicatat akumulasi
meningkat menjadi a maksimum 100 kali 1 detik untuk meningkatkan rasio sinyal-ke-noise.
Subsamples dari microplastics ditemukan dalam sampel S . trutta adalah dianalisis oleh FTIR
(ThermoScientific Nicolet iN10, detektor DTGS KBr) dalam mode refleksi. 256 scan digunakan,
dikoreksi terhadap 256 background, dengan resolusi diatur ke 8 cm- 1 dan spasi data
3.86. Frekuensi laser adalah 15.798 cm – 1 dan puncak interferogram posisi 2048 cm
 Ressult and discussion
• Ekstraksi mikroplastik dari sedimen
dan air
Ekstraksi mikroplastik dari biota

Effect of the optimized enzyme digestion

on the Raman spectrum of a PET particle
Fig. 5. Examples of particles found
in samples of S. trutta (upper
three) and M. edulis (lower three).