2.2.

Metode Penelitian
2.2.1. Bahan
Dipilih anggur, dicuci dalam air, dikemas dalam kantong polietilen dan dibekukan pada
suhu 18°C sampai digunakan. Bahan enkapsulat adalah gum arab (GA), polidekstrosa (PD)
dan guar gum terhidrolisis sebagian (PHGG). DPPH (2,2-difenil-1-pikril-hidrazil), Trolox
(6-hidroksi-2,5,7,8-tetrametil kroman-2-asam karboksilat), neocuproine, dan asam galat.
2.2.2. Persiapan ekstrak
Anggur dicairkan dan direbus pada suhu 80°C selama 5 menit dan didinginkan
menggunakan es / waterbath selama 3 menit. Setelah memisahkan biji dari pulp, polifenol
diekstraksi dari kulit menggunakan air yang diasamkan dengan asam sitrat (2%, b / v).
Kulitnya dicampur dengan pelarut pada rasio 1:3 (b/v), campuran ditumbuk menggunakan
blender, dan disimpan dalam keadaan gelap selama 20 jam pada 22 ± 1°C. Lalu, ekstrak
disaring dengan kertas saring Whatman No. 1 untuk memisahkan padatan dan residu.
2.2.3. Persiapan bubuk mikroenkapsulasi
Empat dispersi disiapkan dari ekstrak, sebagai berikut: A (5% GA dan 5% PD), B (10%
GA), C (5% PHGG dan 5% PD), dan D (10% dari PHGG). Dispersi disiapkan pada 6500
rpm selama 5 menit menggunakan Ultra-Turrax (T25, IKA). Selanjutnya, dispersi
dienkapsulasi dengan spray-drying dan freeze-drying.
Enkapsulasi dengan metode spray-drying dilakukan menggunakan alat penyemprot
cairan ganda, tipe pneumatik (Mini Spray Dryer LM MSDI 1.0 LABMAQ, Brasil), dengan
diameter nozzle umpan 1,0 mm. Sampel dibawa keluar menggunakan pompa peristaltik
pada laju aliran 0,60 L / jam, suhu udara pengeringan 140°C, tekanan udara 3,5 kgf / cm 2,
dan laju aliran udara 40,5 L / jam.
Untuk freeze-drying, dispersi dibekukan dalam freezer ultra pada suhu 68°C selama 24
jam. Kemudian, sampel ditempatkan di freezer pada suhu 57°C, tekanan vakum kurang
dari 20 mHg selama 48 jam. Setelah freeze-drying, sampel dihancurkan menggunakan
lumpang dan alu.
Sampel spray-dried dan freeze-dried segera ditempatkan di kantong polietilen, disegel
dan ditempatkan di kantong aluminium. Sampel disimpan dalam desikator yang
mengandung silika untuk analisis lebih lanjut, yang dilakukan triplo/rangkap tiga.
2.2.4. Analisis spektrofotometri
Ekstrak dan bubuk mikroenkapsulat diencerkan dengan air suling dalam proporsi
berbeda sesuai dengan kebutuhan dari setiap analisis. Semua pembacaan dilakukan dalam
spektrofotometer Genesys S10, Thermo Scientific.
 2.2.4.1. Analisis Fenolik Total
Fenolik total ditentukan dengan menggunakan reagen Folin-Ciocalteu (Singleton &
Rossi, 1965). Pembacaan dilakukan dalam spektrofotometer pada 765 nm, dan hasilnya
dinyatakan sebagai mg asam galat (GAE) per g sampel secara kering.
2.2.4.2. Total Monomer Antosianin
Ekstrak dan bubuk diencerkan dicampur dengan larutan buffer pH 1.0 dan 4.5.
Absorbansi diukur dalam spektrofotometer pada 520 dan 700 nm. Hasilnya dinyatakan
sebagai mg malvidin-3,5-diglucoside per g sampel secara kering, menggunakan
absorptivitas molar 37.000 l / cm / mol, dan berat molekul 724,5 g /mol (Toaldo et al.,
2013).
2.2.4.3. Aktivitas Antioksidan
Absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer pada 515 nm setelah 3 jam reaksi.
Kurva standar Trolox sebelumnya disiapkandan hasilnya dinyatakan sebagai lmol setara
Trolox (TE) per g sampel secara kering.
2.2.4.4. Cupric-reducing antioxidant capacity (CUPRAC)
Absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer pada 450 nm setelah 60 menit
reaksi. Kurva standar Trolox dibuat dan hasilnya dinyatakan sebagai mol TE per g
sampel berdasarkan kering.
2.2.4.5. Hydroxyl radical-scavenging activity (HRSA)
Absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer pada 593 nm. Itu hasilnya
dinyatakan sebagai %scavenging, dan dihitung sesuai ke persamaan berikut:
Scavenging activity (%) = [1- (Asampel /Acontrol) ] x 100%
2.2.5. Analisis kolorimetri
Warna bubuk mikroenkapsulasi diukur menggunakan kolorimeter (CR400 /410, Minolta
Co. Ltd., Osaka, Jepang), menurut sistem CIELAB (L* a*, b*), di mana L* menunjukkan
cahaya (0 = hitam dan 100 = putih), a*dan b* adalah koordinat untuk hijau (a*) / merah
(+a*), dan biru (b*) / kuning (+b*). Instrumen telah dikalibrasi menggunakan piring
-1
keramik putih. Sudut rona (H* = tan b*/ a*) dihitung, yang menunjukkan warna sampel
(0 atau 360° = merah, 90° = kuning, 180° = hijau, dan 270° = biru), sementara Chroma (C*
= [a+2 + b+2] 1/2) menunjukkan kemurnian atau saturasi warna.
2.2.6. Penentuan sifat fisik bubuk mikroenkapsulat
Kadar air dari sampel dihitung dari penurunan massa sampel setelah dipanaskan pada
suhu 105°C menurut AOAC(1990). Aktivitas air (Aw) diukur dengan pembacaan langsung
pada elektronik meter.
 1 g sampel dan 100 mL suling air dicampur dalam gelas kimia dan diaduk dalam
pengaduk magnetik (Lab Disc, IKA) selama 5 menit. Kemudian, cairannya ditempatkan
dalam tabung dan disentrifugasi pada 3000 g (Thermo 16R, Thermo Scientific) untuk 15
menit. 25 mL alikuot supernatan dipindahkan ke gelas kimia 50 mL dan dikeringkan
dengan oven pada suhu 105°C sampai berat konstan. Kelarutan (%) dihitung berdasarkan
perbedaan berat.
Untuk penentuan higroskopisitas, 1 g sampel bubuk ditimbang dan ditempatkan dalam
wadah kaca kedap udara dengan jenuh NaCl (kelembaban relatif 75%), dan disimpan
dalam inkubator ruang (411 / FDP Teknologi Etik, Brasil) pada 25°C (Tonon, Brabet, &
Hubinger, 2008). Setelah 1 minggu, sampel ditimbang setiap 24 jam sampai tercapai
keseimbangan. Higroskopisitas dinyatakan sebagai persentase (%) atau 1 g kelembaban
teradsorpsi per 100 g padatan kering (g / 100 g) (Caparino et al., 2012).
Suhu transisi gelas (Tg) dari sampel ditentukan oleh diferensial pemindaian kalorimetri
(DSC) (DSCQ2000, Instrumen TA, New Castle, DE). Sekitar 8 mg sampel ditempatkan di
panci aluminium kedap udara (Tzero, Instrumen TA). Panci aluminium kosong digunakan
sebagai acuan. Gas pembersih yang digunakan yaitu nitrogen ultra-murni (aliran 50 mL /
menit). Suhu berkisar antara 80°C hingga 120°C pada tingkat pemanasan 40°C /min. Nilai
Tg dihitung menggunakan perangkat lunak TA Universal.
2.2.7. Morfologi dan ukuran distribusi partikel
Struktur partikel diuji mikroskopi elektron. Sampel dipotong menggunakan tape karbon
dua sisi, logam dengan karbon, dan selanjutnya diperiksa dalam mikroskop yang
beroperasi pada tegangan 8 kV dan 300 perbesaran untuk bubuk freeze-dried, dan 2000
untuk bubuk spray-dried.
Distribusi ukuran partikel ditentukan dalam analisa ukuran partikel dengan difraksi laser
(CILAS 1180, Compagnie Industrielle de Laser, Perancis). Sampel terdispersi dalam
isopropil alkohol pengadukan konstan dan disonikasi menggunakan peralatan USG selama
30 detik. Diameter rata-rata (D [4, 3]) dan diameter volume yang setara pada 10%, 50%,
dan 90% volume kumulatif ditentukan. Distribusi ukuran partikel dalam bubuk (rentang)
dihitung menggunakan persamaan berikut: Span = [(d90 - d10) / d50] (Fernandes, Borges, &
Botrel, 2014).
2.2.8. Analisis statistik
Data untuk uji ANOVA, dan untuk tes perbandingan Tukey's, menggunakan program
SAS 9.3.