BAB 3.

METODE RISET

3.1 Waktu dan Tempat Riset

Penelitian ini dilaksanakan dengan waktu efektif kurang dari empat bulan.

Penelitian dilakukan di dua tempat yaitu:

1. Laboratorium Biokimia, Fakultas Sains & Matematika, Universitas

Diponegoro

2. Laboratoratorium Terpadu, Universitas Diponegoro

3.2. Variabel Riset

3.2.1. Variabel Tetap

1. Bahan Baku Material yaitu masker bekas dan kapang Aspergillus niger

3.2.2 Variabel berubah dalam riset

1. Lama proses hidrolisis masker bekas

3.2.3 Variabel kontrol dalam riset

1. Aktivitas enzim selulase pada kapang Aspergillus niger

2. Kadar etanol yang dihasilkan

3.3 Alat dan Bahan Riset

3.3.1 Alat Riset

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah peralatan gelas, autoklaf,microwave, gelas ukur 100 mL,
magnetic stirrer, blender, mesin sentrifugal, waterbath, mesin distilasi, pH Meter, gas chromatoghraphy

3.3.2 Bahan Riset

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah yeast extract, (NH4)2SO4, KH2PO4, FeSO4.7H2O,
Tween 80, CMC 1%, KCl,NaOH,aquadest, Aspergilus niger ,Etanol, dan Limbah masker bekas
 3.4. Alur Riset

Mulai

Studi Literatur

Pre treatment limbah masker

Dekomposisi limbah masker

Fermentasi selulosa

Destilasi

Uji Kromatografi Gas

Fabrikasi Bioetanol

Selesai
3.5. Prosedur Kerja

3.5.1. Pre-treatment limbah masker

Limbah masker yang dikumpulkan digunting terlebih dahulu hingga berukuran ± 1 cm dan dilarutkan
kedalam NaOH 2% Untuk memudahkan proses dekontaminasi. Proses dekontaminasi dilakukan dengan
media autoklaf pada suhu 70°C selama 60 menit untuk membunuh mikroorganisme pada masker.
Setelah Proses dekontaminasi selesai, campuran didinginkan dan dipanaskan pada suhu sedang
Menggunakan microwave selama 40 menit. Proses pemanasan dengan NaOH dan microwave dilakukan
untuk memutus gugus ester antara selulosa dengan hemiselulosa dan lignin. Kemudian masker dicuci
dengan air Hingga pH larutan netral lalu dikeringkan menggunakan oven pada suhu 100 ± 5°C dan
dihaluskan menggunakan blender.

3.5.2 Hidrolisis Kandungan Selulosa Limbah Masker

Setelah proses pre-treatment , kemudian campurkan 0,1 g yeast extract, 0.15 g bacteriological
peptone, 0.14 g (NH4)2SO4, 0.2 g KH2PO4, 0.005 g FeSO4.7H2O dan 0.5 mL larutan CMC 1%
dicampurkan kedalam 100 mL larutan buffer sitrat pH 6 lalu tambahkan 2 gram masker dan diaduk
hingga homogen. Sample kemudian didinginkan dan ditambahkan suspensi spora dari kulturAspergillus
niger serta Diinkubasi pada inkubator suhu 35°C selama 8 Hari. Enzim dipanen dengan menambahkan
100 mL larutan tween 80 1% dan disentrifugasi pada kecepatan 4000 rpm selama 30 menit. Supernatan
dipisahkan sebagai enzim selulase. Limbah masker yang sudah mengalami pre-treatment ditimbang
sebanyak 5 gram dan Ditambahkan enzim selulase dengan variasi 10, 20 dan 30 mL dan diencerkan
dengan larutan Buffer sitrat pH 5 hingga volume larutan 150 mL. Proses hidrolisis dilakukan pada
waterbath suhu 50°C selama 24, 48 dan 72 jam dimana Kandungan glukosa dari larutan diuji setiap 24
Jam menggunakan metode DNS.

3.5.3. Fermentasi Selulosa Limbah Masker

Setelah didapatkannya kandungan glukosa dari proses hidrolisis limbah masker yang, kemudian
tambahkan 12 mL larutan Saccharomyces Cerevisiae dan fermentasi dilakukan pada larutan Hasil
hidrolisis pH 4 dan 5 serta suhu fermentasi 30°C dan 35°C selama 3 hari. kandungan glukosa yang paling
optimum akan digunakan Sebagai dasar pada proses fermentasi Menggunakan Saccharomyces
cerevisiae yang diperoleh melalui analisa grafik hubungan antara nilai absorbansi terhadap konsentrasi
larutan glukosa 36, 72, 144 dan 216 ppm
Proses ini akan menghasilkan metabolit utama berupa etanol,CO2,dan air.

3.5.4. Proses Pemisahan Bioetanol

Setelah proses fermentasi selesai, etanol yang terdapat dalam larutan dipisahkan dari metabolit
sekunder menggunakan alat distilasi dengan suhu uap 68°C selama 2 jam. Kemudian, kadar etanol diuji
menggunakan GC-FID menggunakan larutan standar etanol sebagai pembanding untuk perhitungan.

3.6 Karakterisasi dan Pengujian

1. Uji Gas Chromatography (GC)

Menganalisa kadar etanol dari hasil destilasi

2. Uji DNS

Menguji aktivitas enzim selulase pada kapang Aspergillus niger