JKK, Tahun 2014, Volume 3(4), halaman 46-51 ISSN 2303-1077

PENENTUAN KINETIKA HIDROLISIS ENZIMATIS

DALAM PEMBUATAN BIOETANOL DARI TANDAN KOSONG KELAPA SAWIT

Siti Fathimah1*, Nora Idiawati1, Adhitiyawarman1, Lucy Arianie1

1
Progam Studi Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tanjungpura, Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi,
*email: azzahra.chem09@gmail.com

ABSTRAK
Salah satu limbah yang dapat dimanfaatkan menjadi bioetanol adalah tandan kosong kelapa sawit
(TKKS). TKKS dihidrolisis secara enzimatis menggunakan ekstrak kasar enzim selulase dari
Trichoderma reesei, kemudian hidrolisat difermentasi menggunakan Sacharomyces cerevisiae sehingga
diperoleh bioetanol. Tahap praperlakuan sampel dengan perendaman menggunakan air dan delignifikasi
organosolv juga dilakukan untuk mengoptimalkan proses hidrolisis enzimatis. Kinetika hidrolisis
ditentukan berdasarkan persamaan Michaelis-menten dengan parameter Vmaks dan Km. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa proses praperlakuan sampel dapat mengoptimalkan proses hidrolisis
yang dapat dilihat berdasarkan konsentrasi glukosa yang dihasilkan. Sampel dengan perendaman
memiliki konsentrasi glukosa yaitu 445,80 ppm sedangkan kontrol (tanpa perendaman) memiliki
konsentrasi glukosa 438,58 ppm. Berdasarkan penelitian, enzim selulase dari Trichoderma reesei
memiliki kondisi optimum pH 4,5 ; waktu inkubasi 60 menit ; suhu 600C dengan menghasilkan Vmaks yaitu
0,25 (mg/ml)/menit dan nilai Km yaitu 123,9 mg/ml. Nilai Rt sampel hasil fermentasi pada kondisi
optimum adalah 16,03 dan menunjukkan bahwa sampel tersebut merupakan etanol. Nilai rendemen
etanol yang dihasilkan sebesar 40,3 % (w/w).

Kata kunci : Etanol, Trichoderma reesei, Kinetika Michaelis-Menten, TKKS

PENDAHULUAN

Bahan bakar minyak merupakan kebutuhan metode delignifikasi organosolv (menggunakan

yang sangat penting dalam kehidupan. Namun
bahan bakunya yang tidak dapat diperbarui
menyebabkan keberadaannya sangat terbatas.
Sebagai solusi banyak peneliti yang
mengembangkan penelitian untuk membuat
bahan bakar alternatif yang sifatnya dapat
diperbarui, salah satunya bioetanol.
Bioetanol adalah etanol yang diperoleh dari
proses fermentasi bahan-bahan berkarbohidrat
atau berlignoselulosa menggunakan bantuan
mikroorganisme. Salah satu sumber selulosa
yang sangat berpotensi untuk dikembangkan di
Kalimantan Barat adalah limbah tandan kosong
kelapa sawit (TKKS).
Limbah Tandan Kosong Kelapa Sawit
(TKKS) memiliki kandungan lignoselulosa
mencapai 55-60 % berat kering. Limbah TKKS
pada tahun 2010 mencapai 5.050.367,6 ton dan
pada tahun 2011 mencapai 5.176.842,53 ton
(Fauji, 2005). Limbah TKKS yang tidak
tertangani akan menyebabkan pencemaran
lingkungan dan timbulnya berbagai penyakit.
Proses pembuatan bioetanol dilakukan
melalui dua tahap utama yaitu proses hidrolisis
dan fermentasi. Beberapa peneliti melakukan
proses praperlakuan (pretreatment)
menggunakan metode kraft, metode pulp, dan
pelarut organik) untuk menghilangkan lignin
yang membungkus selulosa karena keberadaan
lignin dapat menghambat proses hidrolisis.
Menurut Heradewi (2007), delignifikasi
organosolv memiliki keunggulan dibandingkan
metode lain karena diproses tanpa
menggunukan sulfur, selain itu lebih ekonomis
karena pelarut yang digunakan dapat diperoleh
kembali.
Tahap selanjutnya yaitu hidrolisis. Beberapa
peneliti telah menerapkan pembuatan bioetanol
dari berbagai sumber bahan seperti kulit
singkong, kulit pisang, tongkol jagung dan
sebagainya dengan menggunakan katalis enzim
selulase. Penggunaan katalis enzim memiliki
keunggulan seperti ramah lingkungan dan tidak
memerlukan suhu tinggi. Enzim selulase dapat
diperoleh dari jamur Trichoderma dan
Aspergillus.
Menurut Wang et. al., (2004) Trichoderma
reesei adalah jamur penghasil enzim selulase
yang mampu mensekresikan selulase sekitar
80%. Enzim selulase yang dihasilkan oleh
mikroorganisme mempunyai karakteristik yang
berbeda-beda, hal ini dipengaruhi oleh faktor
lingkungan seperti, suhu, pH lingkungan tempat

46
JKK, Tahun 2014, Volume 3(4), halaman 46-51
enzim bekerja, konsentrasi substrat tertentu dan
waktu inkubasi.
Salah satu karakteristik enzim yang perlu
dipelajari adalah kinetika enzim berupa
parameter Km dan Vmaks. Vmaks adalah
kecepatan maksimum enzim dalam
menghidrolisis substrat, sedangkan Km adalah
konsentrasi substrat yang separuh dari lokasi
aktifnya telah terisi, yaitu bila kecepatan reaksi
enzim telah mencapai ½ Vmaks. Menurut Fox
(1991), nilai Km dapat digunakan dalam
menentukan ukuran afinitas enzim-substrat
(E-S) yang merupakan suatu indikator kekuatan
ikatan kompleks E-S atau suatu tetapan
keseimbangan untuk disosiasi kompleks E-S
menjadi E dan S. Nilai Km kecil berarti kompleks
E-S mantap, afinitas enzim tinggi terhadap
substrat, sedangkan bila Km besar berlaku
kebalikannya. Oleh karena itu pada penelitian ini
kinetika hidrolisis secara enzimatis dipelajari
untuk mengetahui Vmaks dan Km dari enzim
selulase yang digunakan. Selain itu tahap
praperlakuan sampel juga dilakukan agar
hidrolisis lebih optimal.
METODOLOGI PENELITIAN
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan yaitu neraca
analitik, rotatory shaker, oven, pH-meter, FTIR,
spektrofotometer UV-Vis dan HPLC.
Bahan yang digunakan yaitu tandan kosong
kelapa sawit yang diperoleh dari PTPN XIII,
Ngabang, Kalimantan Barat, Trichoderma
reesei, Saccharomyces cerevisiae, Buffer sitrat,
PDA, NaOH, CH3OH, MgSO4.7 H2O, , Na2CO3
anhidrat, KNa-tartrat, NaHCO3, Na2SO4
anhidrat, CuSO4.5H2O, larutan tween80,
(NH4)2SO4, KH2PO4, CaCl2. H2O, FeSO4.7H2O,
MnSO4.H2O, ZnSO4.7H2O.
Praperlakual Sampel
Tandan kosong kelapa sawit dikering-
anginkan, dicacah dan digiling. Setelah digiling
dikeringkan menggunakan oven pada suhu
100oC selama 1 jam. Sampel dibagi menjadi
dua jenis yaitu sampe yang direndam dan
sampel yang tidak direndam (kontrol). Sampel
TKKS diambil sebanyak 60 g, kemudian
direndam dengan 1200 mL aquades dalam
gelas beker. Kemudian didiamkan selama 5x24.
Setelah itu, sampel disaring dan dikeringkan
dalam oven selama 1 jam dalam suhu 100oC.
Sampel dan kontrol masing-masing direfluks
selama 1 jam menggunakan pelarut metanol :
air ( 1 : 1 v/v) dengan NaOH 6%. Perbandingan
sampel dan pelarutnya adalah 1 : 10. Setelah
dingin disaring dan dicuci menggunakan
47
ISSN 2303-1077
metanol. Kemudian sampel dikeringkan di
dalam oven.
Ekstraksi Enzim Selulase
Sebanyak 5 g sampel ditambahkan sebanyak
25 mL larutan nutrisi pH 3. Kemudian disterilkan
di dalam autoclave pada suhu 121oC selama 20
menit, kemudian didinginkan. Selanjutnya
Trichoderma reesei diinokulasikan pada substrat
tersebut. Kemudian campuran diinkubasi
selama 7 hari pada suhu 60oC (Sanjaya dan
Adrianti, 2010).
Setelah 7 hari substrat fermentasi
ditambahkan 100 mL aquades yang
mengandung 0,1% tween-80 dan diaduk
dengan kecepatan 175 rpm selama 2 jam pada
suhu ruang. Campuran disentrifugasi pada 3000
rpm selama 15 menit. Supernatan yang
diperoleh digunakan sebagai ekstrak enzim
kasar yang kemudian disimpan dalam lemari es
pada suhu 4oC hingga siap digunakan.
Hidrolisis dan Penentuan Kinetika Enzimatis
Sampel dan kontrol yang telah melewati
tahap praperlakuan masing – masing diambil
sebanyak 5 g dan ditambahkan ekstrak enzim
selulase dari Trichoderma reesei sebanyak 15
mL. Kemudian ditambahkan aquades ke dalam
campuran hingga volume 60 mL. Setelah itu
kondisi pH dibuat seragam pada pH 5 dan
diaduk dengan kecepatan 175 rpm selama 1 x
24 jam. Masing-masing sampel diukur
konsentrasi glukosanya dengan metode DNS
(Adney dan Baker, 1996). Sampel dengan
konsentrasi glukosa lebih tinggi selanjutnya
digunakan untuk proses selanjutnya. Kemudian
ditentukan kondisi optimum pH pada 4;4,5;5;5,5,
waktu hidrolisis optimum pada 40;60;80;100
(menit) dan suhu optimum pada 40;50;60;70
(oC)
Penentuan kinetika enzim (Vmaks dan Km)
didasarkan atas plot grafik hubungan antara
1/[S] dan 1/(V) dimana [S} adalah konsentrasi
substrat dan V adalah aktivitas enzim. Dari
kurva akan diperoleh persamaan linear, y = ax +
b, dimana y = 1/V dan x = 1/[S]. Lalu ditentukan
nilai Vmaks dan Km yang didasarkan
persamaan kurva Lineweaver-Burk tersebut :
1/V = 1/Vmaks + Km/Vmaks(1/[S])
Intersep garis (b) yang didapat dari persamaan
linear adalah 1/Vmaks dan slope (a) merupakan
Km/Vmaks (Putra, 2009).
Fermentasi
Inokulum dibuat dengan mengambil 10 mL
hidrolisat (dengan kadar glukosa tertinggi) yang
JKK, Tahun 2014, Volume 3(4), halaman 46-51 ISSN 2303-1077

sudah disterilisasi kemudian ditambahkan 1 g

KH2PO4, 1 g (NH4)2 SO4, urea, pepton dan 1 ose
Saccharomyces cerevisiae yang dilakukan
dalam laminar. Selanjutnya diinkubasi sambil
diaduk dengan kecepatan 125 rpm pada suhu
kamar selama 24 jam (Samsuri dkk., 2007).
Setelah itu inokulum ditambahkan kembali pada
hidrolisat, diaduk dan difermentasi selama 5x24
jam. Setiap 24 jam sekali diamati perubahan Gambar 2. Endapan lignin yang telah kering
konsentrasi gula dengan DNS. Hasil fermentasi
didestilasi pada rentang suhu 75-80oC untuk Endapan yang dihasilkan dikeringkan dan di
mendapatkan etanol. analisis menggunakan FTIR untuk memastikan
bahwa endapan tersebut merupakan lignin.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Praperlakuan Sampel
Proses praperlakuan sampel dilakukan
melalui proses perendaman menggunakan air
dan delignifikasi organosolv menggunakan
metanol. Proses delignifikasi dilakukan dengan
katalis basa. Menurut Heradewi (2007),
penambahan katalis basa pada proses
delignifikasi organosolv akan menyebabkan
tingginya konsentrasi ion hidroksil dalam pelarut
sehingga mempercepat pemutusan pada ikatan
intra molekul lignin. Ion OH- dari katalis NaOH
akan memutus ikatan-ikatan dari struktur dasar
lignin sehingga lignin akan mudah larut. (a)

(a) (b)
Gambar 1.(a). Filtrat delignifikasi sampel,
(b). Filtrat delginifikasi kontrol
Secara kualitatif, indikasi terlarutnya lignin
dapat dilihat melalui filtrat hasil delignifikasi yang
berwarna hitam pekat. Pada Gambar 1 dapat
dilihat perbandingan warna filtrat hasil
delignifikasi dari sampel dan kontrol.
Identifikasi secara kuantitatif kandungan
lignin dalam filtrat dilakukan dengan proses
pengendapan dengan menambahkan H2SO4
72% ke dalam filtrate hingga mencapai pH 2.
Pada kondisi pH rendah, lignin yang terlarut
dalam larutan mengalami repolimerisasi
sehingga banyak lignin mengendap dalam
larutan (Syahmani, 2000). Setelah ditambahkan
asam sulfat, filtrat yang berwarna hitam berubah
menjadi warna coklat. Partikel-partikel lignin
akan mengendap, kemudian disaring
menggunakan vakum untuk diambil endapannya
seperti ditunjukkan pada Gambar 2.
48
(b)
Gambar 3. Spektrum FTIR Lignin pada
(a). sampel (b). Kontrol*
Ket : *spektrum FTIR Lignin Standar (Pan dan Sano, 1999)
Perbandingan bilangan gelombang sampel
lignin pada gambar 3(a) merujuk kepada
spektrum FTIR standar lignin milik Pan dan
Sano (1999) yang pernah meneliti tentang
lignin. Dari kedua spektra dapat dilihat bahwa
spektra pada sampel tersebut identik
menggambarkan senyawa lignin. Pada sampel
yang melalui tahap perendaman, bilangan
gelombang yang muncul adalah 1594,37 cm-1
yang menandakan adanya vibrasi aromatik.
Keberadaan senyawa aromatik pada lignin
ditunjukkan pada cincin benzen yang berada
pada stuktur lignin itu sendiri. Bilangan
gelombang 1463,99 cm-1 menandakan adanya
deformasi CH, bilangan gelombang 1223,06 cm-
JKK, Tahun 2014, Volume 3(4), halaman 46-51 ISSN 2303-1077

1
menunjukkan terdapat gugus kromofor seperti Tabel 2. Nilai Aktivitas terhadap peningkatan
C-C, C-O, C=O. Bilangan gelombang 1125,27 konsentrasi substrat
cm-1 menandakan adanya alkohol sekunder dan Konsentrasi Aktivitas 1/[S] 1/V
C=O dan pada bilangan gelombang 854,58 cm-1 substrat[S] Enzim(V)
menandakan adanya C-H pada posisi 2,5,6 unit (mg/mL) (UI)
G. Tabel 1 menunjukkan perbandingan masa
33,33 0,078 0,003 12,8
TKKS sampel dengan perendaman dan TKKS
50 0,339 0,020 2,9
kontrol setelah tahap praperlakuan :
66,67 0,379 0,015 2,6
83,33 0,532 0,012 1,9
Tabel 1. Perbandingan Massa Sampel Setelah
Praperlakuan 100 0,536 0,01 1,9
116,67 0,537 0,0086 1,9
Jenis Massa Massa
sebelum (g) sesudah (g)
TKKS Sampel 60 53, 039 Hal tersebut sesuai dengan teori Michaelis-
TKKS Kontrol 60 54, 987 Menten yang menyatakan bahwa kecepatan
reaksi akan meningkat seiring dengan
meningkatnya konsentrasi substrat. Kecepatan
Hidrolisis dan Penentuan Kinetika Enzimatis reaksi akan terus meningkat dengan nilai yang
semakin kecil hingga mencapai titik batas
Berdasarkan perhitungan nilai konsentrasi dimana enzim jenuh dengan substrat. Titik batas
glukosa yang dihasilkan dari proses hidrolisis. ini disebut kecepatan maksimum (Vmaks)
Sampel dengan perendaman memiliki (Lehninger, 1997).
konsentrasi yang lebih besar dari kontrol
dengan nilai berturut-turut yaitu 445,805 ppm
15
dan 439,58 ppm. Hal tersebut menunjukkan
y=495,6x-3,946
bahwa proses perendaman TKKS selama 5x24
10 R² = 0,825
jam yang dilanjutkan dengan delignifikasi
1/V

organosolv dapat mengoptimalkan proses

hidrolisis.
Proses penentuan kinetika hidrolisis
dilakukan dengan menghitung aktivitas enzim
pada proses hidrolisis. Hidrolisis tersebut
dilakukan pada kondisi optimum hidrolisis
dengan parameter pH, waktu dan suhu. Menurut
Putra (2009), Enzim dalam mengkatalisis
memiliki respon yang tingggi terhadap kondisi
lingkungan seperti suhu, pH, dan konsentrasi.
Hasil terhadap tiga perlakuan tersebut didapat
bahwa pH optimum enzim selulase berada pada
pH 4,5, waktu inkubasi selama 60 menit dan
suhu inkubasi 60oC.
Aktivitas enzim selulase dalam
menghidrolisis selulosa pada beberapa
konsentrasi substrat menunjukkan bahwa
aktivitas enzim selulase mula-mula meningkat
sejalan dengan meningkatnya konsentrasi
substrat, namun pada konsentrasi tertentu
peningkatan semakin kecil dan menjadi konstan
seiring bertambahnya konsentrasi substrat.
Berdasarkan Tabel 2 diketahui bahwa
aktivitas enzim pada konsentrasi 33,33 mg/mL
hingga 83,33 mg/mL meningkat namun pada
konsentrasi 100 mg/mL dan 116,67 mg/mL
aktivitas enzim mengalami peningkatan yang
sangat kecil.
5
0
0 0,01 0,02 0,03 0,04
1/[S]
Gambar 4. Grafik 1/V terhadap 1/[S]
Penentuan Vmaks dan Km didasarkan atas
persamaan Lineweaver-Burk yang menyatakan
hubungan antara 1/[S] dan 1/V seperti disajikan
pada Gambar 4. Persamaan Lineweaver-Burk
yaitu1/V=(Km/Vmaks)(1/[S])+1/Vmaks.
Selanjutnya berdasarkan gambar 4 diperoleh
plot grafik y = 495,6x – 3,946 sehingga
diperoleh Vmaks = 0,25 mg/ml/menit dan nilai
Km = 495,6 x 0,25 = 123,9 mg/ml.
Jika dibandingkan dengan penelitian
Saropah (2012), enzim selulase bakteri
selulolitik yang diisolasi dari bekatul memiliki
nilai Km yang lebih besar yaitu 169,4 mg/ml.
Dan nilai Vmaks yang diperoleh adalah 0,000086
mg/ml.
Nilai Km digunakan selain sebagai ukuran
afinitas Enzim (E) terhadap Substrat (S) juga
berhubungan dengan tetapan keseimbangan
disosiasi kompleks E-S menjasi E dan S. Fox
(1991), menambahkan bila nilai Km kecil berarti

49
JKK, Tahun 2014, Volume 3(4), halaman 46-51 ISSN 2303-1077

kompleks E-S mantap dan afinitas enzim Penurunan glukosa tertinggi pada hari ketiga
terhadap substrat tinggi, sedangkan bila nilai sesuai dengan hasil penelitian yang dilakukan
Km besar afinitasnya menjadi rendah. Harga oleh Fatimah (2013), bahwa penurunan kadar
Km enzim sangat bervariasi tergantung dari glukosa yang optimum adalah selama 72 jam.
jenis substrat, keadaan lingkungan dan Setelah proses fermentasi dilakukan destilasi.
kekuatan ion (Radzicka dan Wolfenden, 1995). Proses destilasi pada suhu 75-80oC
menghasilkan destilat sebesar 3,1 ml. Destilat
ini merupakan etanol yang dibuktikan dengan
Fermentasi
analisis HPLC.
Proses fermentasi dilakukan selama lima hari
dengan pengukuran konsentrasi glukosa setiap
1x24 jam. Menurut Ruso, dkk (2010), waktu 5
hari merupakan waktu yang optimum untuk
proses fermentasi. Hari pertama pada proses
fermentasi merupakan fase penyesuaian bagi
Saccharomyces terhadap lingkungannya
sehingga aktivitasnya belum optimum. Pada
fase pertama ini sel mengalami perbanyakan
namun masih dalam jumlah yang sedikit. Hari ke
dua hingga ke lima merupakan fase
(a)
eksponensial, dimana pada keadaan ini sel
mengalami perbanyakan dan mencapai laju 8.00

16.101
pertumbuhan yang maksimum. Sedangkan fase
6.00
terakhir yaitu fase kematian dimana sel tidak
lagi tumbuh dan tidak terjadi proses konversi
MV

4.00

glukosa menjadi etanol.

2.00

0.00

2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00
Minutes

Gambar 5. Kurva penurunan glukosa terhadap
waktu fermentasi
Penurunan konsentrasi glukosa menunjukkan
adanya aktivitas fermentasi oleh
Saccharomyces cerevisae. Ketersediaan
glukosa yang besar pada fermentasi hari ke-0
merupakan sumber nutrisi dan energi bagi
Saccharomyces cerevisae.
Gambar 5 menunjukkan penurunan kadar
glukosa selama proses fermentasi berlangsung.
Berdasarkan grafik dapat diketahui bahwa
penurunan glukosa selama fermentasi dari hari
ke satu hingga hari ke 5 berturut-turut adalah
598,33 ppm ; 573,43 ppm ; 402,22 ppm ; 378,88
ppm ; 366,43 ppm. Berdasarkan hasil tersebut
diketahui bahwa penurunan kadar glukosa
cukup tinggi sampai hari ke – 3, sedangkan
pada hari ke 4 dan ke 5 terlihat konstan.
(b)
Gambar 6. (a). Kromatogram standar (b).
Kromatogram sampel pada HPLC
Gambar 6 menujukkan kromatogram HPLC
standar etanol dengan sampel hasil destilasi.
Waktu retensi sampel (16,101) yang diperoleh
sama dengan waktu retensi standar (16,103).
Adapun nilai rendemen yang diperoleh
sebanyak 40,3 % dari 6 gram tandan kosong
kelapa sawit.
SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah
dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa Nilai
Vmaks yang diperoleh yaitu 0,25 (mg/ml)/menit
dan nilai Km yaitu 127,3 mg/ml. Pada kondisi
optimum pH 4,5 ; suhu 60oC ; waktu inkubasi
selama 60 menit. Hasil analisis menggunakan
HPLC menunjukkan bahwa 3,1 mL destilat yang
dihasilkan merupakan etanol dengan rendemen
40,3 %.

50
JKK, Tahun 2014, Volume 3(4), halaman 46-51
UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan terimakasih disampaikan kepada
Kemenristek Tahun 2013 yang telah membantu
pendanaan dalam penelitian ini.
DAFTAR PUSTAKA
Adney B dan Baker J, 1996, Meassurement and
Cellulose Activities, (Technical Report)
Fauji, Y., 2005. Kelapa Sawit, Budidaya
pemanfaatan Hasil dan Limbah, Analisis
usahadan Pemasaran, Penerbit Swadaya,
Jakarta.
Fox, P.F. (1991). Food Enzymology, Elsevier
Applied Science, vol 2, London.
Heradewi, 2007, Isolasi Lignin Dari Lindi Hitam
Proses Pemasakan Organosolv Serat
Tandan Kosong Kelapa Sawit (Tkks), Instititut
Pertanian Bogor, Fakultas Teknologi
Pertanian Bogor (skripsi).
Lehninger, A.L. 1997. Dasar-dasar Biokimia
(Jilid 1, diterjemahkan oleh M. Thenawidjaja),
Erlangga, Jakarta.
Pan, X-J., Sano, Y., 1999, AtmosphericAcetic
Acid Pulping of Rice Straw IV :Physico-
Chemichal Characterization of Acetic Acid
Lignins from Rice Straw and Woods,
Holzforschung, 53(5): 511-518.
Putra G.P., Ganda, 2009, Penentuan Kinetika
Enzim Poligalakturonase (PG) Endogenous
dari Pulp Biji Kakao, Jurnal Biologi 13(1):21 -
24.
51
ISSN 2303-1077
Radzicka A, Wolfenden R., 1995, "A Proficient
Enzyme". Science 6(267):90–931.
Ruso S., Ahmad A., dan Nafie N.L., 2010,
Pembuatan Bioetanol dari Batang Rumput
Gajah (Pennisetum purpureum Schumach)
dengan Sistem Fermentasi Simultan
Menggunakan Bakteri Clostridium
acetobutylicum, J. Teknologi, 13(2):1-7.
Sanjaya W. dan Adrianti S., 2010, Optimasi
Hidrolisis Jerami Padi Menjadi Glukosa untuk
Bahan Baku Biofuel Menggunakan selulase
dari Trichoderma reesei dan Aspergillus
niger, Institut Teknologi Sepuluh November,
Jurusan Teknik Kimia, Surabaya (Skripsi).
Saropah Dyah Ayu, Akyunul Jannah, Anik
Maunatin, 2012, Kinetika Reaksi Enzimatis
Ekstrak Kasar Enzim Selulase Bakteri
Selulolitik Hasil Isolasi Dari Bekatul, Alchemy
2(1):34-45.
Syahmani, 2000, Isolasi, Sulfonasi dan Asetilasi
Lignin dari Tandan Kosong Sawit dan Studi
Pengaruhnya terhadap Proses Pelarutan
Urea, Falkultas MIPA, Institut Teknologi
Bandung, Bandung (tesis).
Wang, J.Sh, Wang, J, dan Gulfraz, J.M,
“Efficient Cellulase Production from Corn
Straw by Trichoderma Reesei LW1 through
Solid State Fermentation Process”, Journal of
ethnobotanical research Ethnobotanical
Leaflets: Vol. 2005: Iss. 1, Article 7.Southern
Illinois University Carbondale.