RESUME JURNAL

THE THERAPEUTIC EFFECT OF NANO-ENCAPSULATED AND

NANO-EMULSION FORMS OF CARVACROL ON EXPERIMENTAL
LIVER FIBROSIS
&
Disusun Untuk Memenuhi Tugas Mata Kuliah Gizi lanjut
Program Studi Magister Ilmu Gizi Fakultas Kedokteran
Universitas Diponegoro

Oleh :
ARIFATIN NASIHAH 22030110410008
DERA ELVA JUNITA 22030110410010

MAGISTER ILMU GIZI FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG
2019
A. Identitas jurnal
Nama : Elsevier
Kategori : Biomedicene and pharmacotherapy
Judul : Efek terapi dari nano-enkapsulasi dan nano-emulsi dari karfakrol
pada percobaan penyakit fibrosis hati
Tahun : 2017
B. Abstrak
Tujuan : Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan efisiensi terapi
nano-encapsulated dan pemberian nano-emulsi carvacrol pada tikus penyakit
fibrosis hati yang di obati thioacetamide (TAA).
Metode : menggunakan enam puluh tikus albino jantan yang diklasifikasikan
menjadi enam kelompok sebagai berikut: kontrol,nano-encapsulated
carvacrol, nano-emulsion carvacrol, thioacetamide, diperlakukan nano-
encapsulated carvacrol dan kelompok carvacrol nano-emulsi yang
diolah. Sampel darah dikumpulkan dari semua kelompok dan serum yang
dipisahkan digunakan untuk analisis parameter biokimia sebagai
berikut: aspartat aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT),
protein S100 B, alfa fetoprotein (AFP) dan caspase-3. Tingkat
malondialdehyde (MDA), reduksi glutathione (GSH), nitric oxide (NO),
monocyte konten chemoattractant protein-1 (MCP-1) dan hidroksiprolin
semuanya dievaluasi dalam jaringan hati homogenat. Pemeriksaan
histopatologis juga dilakukan untuk jaringan hati.
Hasil : Thioacetamide menginduksi kerusakan hati pada tikus terjadi
peningkatan yang signifikan pada kadar serum ALT, AST dan menghasilkan
stres oksidatif seperti yang ditunjukkan oleh peningkatan signifikan dalam
kadar
MDA hati dan NO bersamaan dengan penurunan signifikan dalam
GSH. Selain itu, thioacetamide secara signifikan meningkatkan serum protein
S100B, alfa fetoprotein dan caspase-3 bersama dengan MCP-1 dan
hidroksiprolin. Hasil ini dikonfirmasi oleh pemeriksaan
histopatologis. Sebaliknya, nano-encapsulated dan nano-emulsion carvacrol
mampu memperbaiki perubahan negatif ini pada tikus yang disuntikkan
 thioacetamide. Namun, efek dari bentuk carvacrol nano-encapsulated lebih
menonjol dari bentuk nano-emulsi
Kesimpulan : nano- enkapsul carvacrol dan nano-emulsi carvacrol dapat
memperbaiki kerusakan hati yang diinduksi thioacetamide. Hasil ini dapat
dikaitkan dengan potensi anti-inflamasi, antioksidan, dan anti-inflamasi
aktifitas apoptosis carvacrol selain efektivitas teknik enkapsulasi yang bisa
melindungi struktur carvacrol dan meningkatkan efisiensi dan
stabilitasnya. Apalagi nano-enkapsulasi carvacrol lebih efesien dari pada nano
emulsi

C. Pendahuluan
Fibrosis hati dianggap sebagai masalah kesehatan serius karena peran penting
hati sebagai organ dalam fisiologis yang berbeda pada proses metabolisme
dan detoksifikasi berbagai obat-obatan dan xenobiotic. Fibrosis adalah hasil
dari ketidakcukupan mekanisme perbaikan jaringan yang terjadi setelah
kerusakan hati kronis termasuk kerusakan akibat alkohol,virus kronis
hepatitis B atau C, penyakit parasit dan metabolik . Jika fibrosis tidak
terkontrol, akan dapat berkembang menjadi sirosis, yang akhirnya berakhir
dengan gagal hati .
Thioacetamida (TAA) adalah agen yang terdokumentasi dengan baik yang
membebaskan radikal bebas  dan dianggap sebagai agen toksik yang kuat
untuk penelitian mengenai patogenesis fibrosis hati . TAA bisa efektif
menginduksi nodul hati hiperplastik, adenoma sel yang bisa berkembang
menjadi hepatokarsinoma  . Oleh karena itu, TAA yang diinduksi pada
penyakit fibrosis hati adalah model percobaan yang berhasil digunakan untuk
mempelajari patogenesis fibrosis hati.
Carvacrol adalah fenol monoterpenoid yang ditemukan di beberapa tanaman
aromatik termasuk oregano ( Origanum vulgare ), pepperwort
( Lepidium fl avum ), thyme ( Thymus vulgaris ) dan bergamot liar. Beberapa
penelitian in vivo dan in vitro menggambarkan berbagai bioaktivitas dan sifat
toksikologis dari nutrisi carvacrol termasuk antibakteri, antiseptik,
antispasmodik, antioksidan, antijamur, dan sifat antivirus.
Nanoteknologi digunakan untuk memproduksi sistem pengiriman untuk
meningkatkan kualitas kebutuhan makanan nutrisi baru. Upaya terbaru telah
menyebabkan sistem pengiriman dalam skala mikro dan nano dari fungsi tertentu
yang telah diilustrasikan berdasarkan Sistem penyaluran gizi menggunakan
berbagai bahan alami dan sintetis. Nanoemulsi dapat disiapkan dengan bahan
yang berbeda tergantung pada struktur keinginan dan fungsionalitas dengan
menggunakan prosedur tinggi energi (homogenisasi tekanan tinggi, ultrasoni, dan
mikrofluidisasi) atau teknik energi rendah (pelarut difusi). Metode berenergi
tinggi menghasilkan kekuatan pengganggu yang kuat meminimalkan ukuran
tetesan untuk membentuk emulsi, sementara metode energi rendah dengan
spontan mengemulsifikasi dengan mencampur semua bahan emulsi. Di antara
nanoemulsi yang paling banyak digunakan:
a. minyak dalam air (O / W) di mana tetesan minyak berada didispersikan
dalam fase berair dan interfase distabilkan oleh pengemulsi
b. prosedur emulsi berganda minyak dalam air-air dalam minyak (O / W /
O) atau air dalam minyak- minyak dalamair (W / O / W) di mana
misalnya, menit tetesan air terbenam di dalam tetesan minyak terdispersi
dalam fase berair lain.
c. emulsi multilayer yang terbentuk sebagai tetesan minyak yang dikelilingi
dengan lapisan ukuran nanometrik dari berbagai polielektrolit
D. Bahan dan Metode
1. Bahan
 Bahan kimia
Senyawa bioaktif murni Carvacrol dan thioacetamide dibeli dari
Sigma Aldrich Chemicals Company (St Louis, Missouri, AS).
 Hewan Coba
Dalam penelitian ini digunakan enam puluh tikus albino jantan
dengan berat (180-200 g) yang diperoleh dari rumah hewan
Penelitian Nasional Pusat (Giza, Mesir), dan ditempatkan di
kandang stainless steel dalam kondisi lingkungan yang
dikendalikan. Suhu sekitar 25 ± 2°C dan siklus terang / gelap
adalah 12/12 jam. Hewan-hewan memiliki akses gratis ke air dan
 hewan pengerat standar diet. Semua hewan menerima perawatan
manusia sesuai dengan pedoman Komite Etis Pusat Penelitian
Nasional, Mesir.
2. Metode
a. Persiapan formulasi minyak carvacrol
Bentuk nano dari minyak carvacrol disiapkan sesuai dengan
metode Mahmoud et al. dengan beberapa modifikasi.
b. Nano-enkapsul dari carvacrol
Pada penyelidikan ini, nano-enkapsulasi carvacrol dilakukan
sesuai dengan metode yang dimodifikasi dari Mahmoud et al. dan
Terjung, et al. menggunakan model homogenisasi dalam sebuah
matriks terdiri dari maltodekstrin dan Tween 20 (T 20 ).
Maltodekstrin dilarutkan dalam air terdeionisasi (10 g / 100 ml)
dimana carvacrol dan pengemulsi Tween 20 ditambahkan hingga
konsentrasi terakhir150 ml. Optimalisasi ukuran dan proses
parameter ditetapkan melalui beberapa percobaan. takaran
carvacrol: maltodextrin: T 20 bervariasi selama uji coba
pendahuluan dan ditemukan bahwa rasio 3: 10 : 1 memberi hasil
bubuk optimal dengan atribut yang diinginkan. Tiga gram minyak
carvacrol ditambahkan ke 150 ml larutan yang mengandung 10 g
maltodekstrin dan 1% T 20 . Emulsi dibuat dengan hasil
mencampur dalam homogenizer bertekanan tinggi (Homogenizer
PRO 400 PC, Jerman) dengan kecepatan 18.000 rpm selama 30
menit. Disimpan pada Suhu saat itu 35° C. Larutan campuran yang
diperoleh dibilas dengan nitrogen dan disimpan dalam tabung kaca
tertutup pada suhu 4 °C sampai digunakan.
c. Nano-emulsi carvacrol
Nanoemulsi minyak carvacrol di air (O / W) disiapkan
menggunakan tekhnik tekanan tinggi homogenisasi (HPH) dengan
1% T20 ditambahkan ke formulasi untuk menstabilkan campuran.
Emulsi primer yang mengandung 3g minyak carvacrol dilarutkan
dalam 150 ml air dideionisasi yang mengandung 1% T20. Emulsi
 dibuat dengan mencampurkan hasil yang diperoleh dengan
Homogenisasi Shear Tinggi (HSH), menggunakan Ultra-Turrax
T25 (IKA Labortechnik, Jerman) pada 24000 rpm selama 10
menit. Emulsi primer dikenakan HPH di Nano DeBEE Electric
Bench-top Homogenizer laboratorium (BEE International, USA)
10 kali di 350 MPa. Ketika T20 digunakan sebagai fase encer,
carvacrol dilarutkan dalam air dan suhu selama pemrosesan dijaga
sekitar 5-10 ° di atas titik leleh minyak.
d. Penentuan enkapsulasi ef fi siensi (EE) dan pemuatan kapasitas
(LC)
Efisiensi Enkapsulasi (EE) ditentukan oleh pemisahan nanopartikel
dari media yang mengandung bebas air minyak carvcrol. Sekitar 1
ml maltodekstrin yang mengandung larutan carvacrol
disentrifugasi pada 9000 rpm selama 30 menit, kemudian 1 ml
larutan etanol (99%) ditambahkan ke pelet dalam tabung t
dan diinkubasi pada suhu 30°C dan 500 rpm selama 24 jam.
Sampel adalah disentrifugasi (9000 rpm, 25 °C dan selama 30
menit) dan hasilnya larutan disaring dengan ukuran pori 0,2 m m.
Jumlah minyak carvacrol dalam supernatan diukur dengan
spektrofotometri tometer pada 274 nm. Konsentrasi carvacrol
dihitung menggunakan kurva standar dengan memplot absorbansi
carvacrol konsentrasi pada 275 nm. Pemuatan kapasitas (LC)
nano-emulsi dan carvacrol nano-encapsulated dimuat dalam
maltodekstrin ditentukan melalui teknik thermogravimetric (TGA /
DTG).
e. Estimasi total aktivitas antioksidan
Total aktivitas antioksidan dari nano-encapsulated dan nano-emulsi
carvacrol dibandingkan dengan minyak carvacrol bebas ditentukan
sesuai dengan metode Mahmoud et al
f. Induksi fibrosis hati
 Fibrosis hati diinduksi pada tikus albino dengan intraperitoneal
injeksi thioacetamide (TAA) dalam dosis 150 mg / kg tubuh berat
badan dua kali seminggu selama 6 minggu.
g. Desain percobaan
Tikus albino jantan digunakan dalam penelitian ini dan dibagi
menjadi enam kelompok (10 tikus / grup) sebagai berikut:
Kelompok I (kelompok control: tikus sehat menerima perlakuan
Kelompok II (kelompok nano-emulsi carvacrol) : tikus sehat
diterima nano-emulsi carvacrol (20 m l / kg berat badan / hari)
secara oral selama 7 hari
Kelompok III (kelompok carvacrol nano-encapsulated): tikus sehat
menerima carvacrol nano-encapsulated 20 m l / kg berat badan /
hari secara oral selama 7 hari
Kelompok IV (kelompok thioacetamide): tikus disuntik dengan
TAA untuk induksi fibrosis hati.
Grup V (perlakuan nano-emulsion carvacrol): tikus menerima
nano- emulsi carvacrol (20 m l / kg berat badan / hari) secara oral
selama 7 hari setelah induksi fibrosis hati.
Grup VI (diperlakukan carvacrol enkapsulasi nano): tikus diterima
nano-encapsulated carvacrol 20 m l / kg berat badan / hari secara
oral selama 7 hari setelah induksi fibrosis hati.
h. Sampel darah
Tikus dibiarkan berpuasa selama 12 jam sebelum pengambilan
sampel darah.Serum dipisahkan dengan sentrifugasi selama 15
menit pada 3000 rpm lalu dibagi menjadi alikuot dan disimpan
pada suhu À 20° C untuk pemeriksaan biokimia lebih lanjut
i. Pengambilan sampel jaringan
Hati tikus dipindahkan dengan hati-hati dan diperfusi dengan
larutan saline yang mengandung fosfat (PBS) [pH = 7,4] untuk
membersihkan darah. Hati tikus dibagi menjadi dua bagian yang
sama, bagian pertama digunakan untuk pemeriksaan histopatologis
dan bagian kedua diperlukan untuk estimasi parameter biokimia
 j. Studi histopatologis
hati segera diperbaiki dalam 10% formalin buffer netral selama
24 jam, spesimennya dicuci dalam air keran, didehidrasi dalam
kadar etanol yang tinggi, dibersihkan dalam xylene yang tertanam
dalam lilin parafin. Bagian ketebalan 6 mm disiapkan dan diwarnai
dengan Haematoxylin dan Eosin dan diperiksa menggunakan
mikroskop.
k. Homogenate jaringan
Bagian kedua dari jaringan hati dipotong dihomogenisasi dalam 5
ml buffer dingin (0,5 g Na 2 HPO 4 dan 0,7 g NaH 2 PO 4 per 500
ml air deionisasi (pH 7,4) per gram jaringan) kemudian
disentrifugasi pada 4000 rpm selama 15 menit pada suhu 4 °C
l. Analisis biokimia
Parameter biokimia yang diukur yaitu: ALT, AST, MDA, GSH,
NO, AFP, MCP-1.
m. Uji Hydroxyproline (Hyp)
Uji kolorimetri dilakukan dengan metode Patiyal dan Katoch untuk
estimasi hidroksiprolin. nilai untuk masing-masing sampel dihitung
dari kurva standar hidroksiprolin
n. Data statistik
Data direpresentasikan sebagai mean ± SE. Analisis statistik
dilakukan menggunakan SPSS 12.0. Uji ANOVA digunakan untuk
analisis varian satu arah yang diikuti oleh uji rentang bergandan
Duncan untuk post-hoc digunakan untuk perbandingan secara
kelompok . Perbedaan akan dianggap signifikan secara statistik
pada P <0,05.
E. Hasil
1. Enkapsulasi efsiensi (EE) dan kapasitas pemuatan (LC) dari carvacrol
EE dan LC partikel nano disiapkan melalui metode desolvasi / enkapsulasi
ditemukan masing-masing 76,4 dan 69,2%. Namun, partikel nano
disiapkan dengan metode desolvasi / emulsi memiliki EE% dan LC%
masing- masig sebesar 49,3 dan 48,7%. Meskipun, penambahan carvacrol
ke dalam surfaktan polimer dalam prosedur desolvasi / emulsi
menurunkan kinerja persentase EE, tetapi tidak ada perubahan yang
signifikan yang dilaporkan dalam hasil nanopartikel di kedua formulasi.
Enkapsulasi dari carvacrol meningkatkan efisiensi sebagai bahan bioaktif.
2. Pengaruh pH dan suhu pada stabilitas berbagai bentuk cavacrol

Eksperimen nano emulsi dan nano encapsul carvacrol dilakukan secara

terpisah dalam larutan buffer dengan pH berbeda (4, 7 dan 10) selama
2 jam secara terpisah dan untuk stabilitas dengan suhu yang berbeda
(37, 50 dan 70 C). Hasil penelitian menunjukkan bahwa perubahan pH
baik dari asam menjadi alkali dan peningkatan suhu meningkatkan
hilangnya aktivitas antioksidan dari minyak carvacrol, yang tidak
terjadi dengan nano-emulsi dan nano-encapsulated carvacrol
3. Analisis Biokimia
Dalam penelitian ini ditemukan bahwa, tingkat AST dan ALT tidak
berubah signifikan pada kelompok normal yang diberikan dengan
nano-emulsi atau nano-encapsulated carvacrol dibandingkan dengan
kelompok kontrol menunjukkan keamanan nanopartikel yang
ditambahkan. Sebaliknya, nilai rata-rata level AST dan ALT
meningkat secara signifikan pada tikus yang di berikan thioacetamide
(TAA grup) dibandingkan dengan kelompok kontrol.
MDA hati dan NO meningkat secara signifikan, sedangkan GSH
menurun secara signifikan pada kelompok thioacetamide dibandingkan
dengan kontrol, hal menunjukkan peningkatan stres oksidatif. Di sisi
lain, MDA dan NO menurun secara signifikan, sedangkan GSH
meningkat secara signifikan dalam nano emulsi dan nano encapsul
carvacrol diperlakukan kelompok dibandingkan dengan kelompok
TAA , menunjukkan potensi antioksidan dari agen suplemen ini.
Selain itu, terjadi peningkatan kadar MCP-1 dan hidroksilprolin pada
kelompok TAA ditemukan penurunan secara signifikan dalam
kelompok yang diobati dengan TAA dan kemudian ditambah nano-
emulsi atau nano-encapsulated carvacrol.
 4. Hasil hispatologis
Pemeriksaan histologis menunjukkan patologi normal pada kelompok
control, lobulus hati tempat hepatosit berkumpul sebagai piring yang
memancar dari vena sentral, dengan pembuluh darah sempit sinusoid
dan nukleus yang menonjol. pemeriksaan mikroskopis hati tikus
normal yang menerima nano-emulsi atau nano- carvacrol yang
terkapsul juga menunjukkan struktur histologis yang normal parenkim
hati, di mana vena sentral dan hepatosit menunjukkan bentuk normal.
Namun, pemeriksaan histopatologis pada kelompok thioacetamide
menunjukkan penataan sel hati yang terkait dengan arsitektur abnormal
parenkim hati, deposisi kolagen di saluran portal, dan pembentukan
lobus pseudo dikelilingi oleh jaringan berserat.
Pada kelompok nano-emulsi carvacrol yang dirawat, pemeriksaan
patologis jaringan hati menunjukkan sitoplasma yang mengalami
vakuola dan sinusoid hepatik tersumbat

5. Pembahasan
Nanoencapsulation carvacrol oleh maltodextrin (seperti dalam kasus penelitian)
belum menekan aktivitas antimikroba. Minimum konsentrasi bakterisida (MBC)
identic ditemukan untuk carvacrol enkapsulasi dan non-enkapsulasi saat diuji
medium kultur dan dalam model gastrointestinal yang disimulasikan. Fibrosis hati
yang diinduksi TAA pada tikus adalah model yang didokumentasikan dengan
perubahan morfologis, fisiologis dan biokimia yang serupa dengan fibrosis
manusia dan kadang-kadang menginduksi sirosis Dalam penelitian ini, injeksi
TAA secara signifikan meningkatkan Enzim (ALT dan AST) dalam aliran darah
yang mungkin terkait kebocoran enzim dari sitosol hati sebagai akibat perubahan
permeabilitas membran dan fungsi transportasi.

Sesuai dengan hasil,menunjukkan bahwa MCP-1 mRNA di TAA diinduksi pada

tikus dengan cedera hati, menunjukkan bahwa peningkatan MCP-1 pada tahap
awal bisa mendorong infiltrasi makrofag daerah yang terluka. Selain efek
kemotaksis, MCP-1 juga
memainkan peran penting dalam fibrogenesis. Hal lain yang penting karakteristik
fibrosis hati dan sirosis adalah akumulasi protein matriks ekstraseluler, khususnya
kolagen, dan ini dapat menjelaskan peningkatan yang signifikan di kadar
hidroksiprolin, asam amino untuk semua kolagen, . Ini juga dikaitkan dengan
ketinggian alpha fetoprotein (AFP), peradangan hati yang terkenal dan penanda
fibrosis dan juga penanda tumor karsinoma hepatoseluler (HCC). Perawatan
dengan nano-emulsion atau nano-encapsulated carvacrol dalam penelitian ini juga
mampu memperbaiki yang terdeteksi peningkatan enzim hati dan hepatotoksisitas,
menunjukkan efek potensial dari fenol monoterpenik ini terhadap kerusakan hati
yang disebabkan oleh TAA. Redaman stres oksidatif

parameter (MDA dan NO) dan ketinggian anti-oksidan parameter GSH dengan
nano-emulsi atau nano-encapsulated carvacrol mendukung hipotesis bahwa 2
bentuk carvacrol ini nanopartikel berpotensi memperbaiki cedera hati melalui sifat
antioksidan. sebagian besar parameter biokimia yang diukur menunjukkan bahwa
efisiensi carvacrol yang dienkapsulasi dengan nano melebihi dari emulsi. Oleh
karena itu, penelitian kami menunjukkan bahwa nano-encapsulated carvacrol
dapat digunakan sebagai agen yang menjanjikan untuk melindungi fibrosis hati.