Aparat HSCCC preparatif digunakan dalam penelitian ini adalah Model TBE-1000A HSCCC

(Tauto Biotechnique Perusahaan, Shanghai, Cina) dengan tiga kumparan umns col
multilayer dihubungkan secara seri dan 50 mL sampel lingkaran. Diameter ner di- dari
tabung PTFE 1.8 mm dan kapasitas total volume adalah 1000 mL. Nilai- dari kolom
preparatif bervariasi dari 0.42 pada lapisan internal untuk 0,63 pada lapisan eksternal.
Kecepatan rotasi alat itu diatur dengan pengontrol kecepatan dalam kisaran antara 0 dan
600 rpm. Sistem HSCCC dilengkapi dengan Model Hitachi L-6200 pompa cerdas (Hitach,
Tokyo, Jepang), Model TOPAZ dual monitor UV beroperasi pada 254 dan 360 nm, dan Model
ECOMAC-ECOM Akuisisi dan kontrol (Versi 0,97). Analisis HPLC dilakukan pada teknologi
Agilent
1100 sistem seri dengan degasser G1322A, G1311A qua- pompa terner, G1313A sampel
otomatis injector, sebuah G1315B fotodioda detektor array, dan menggunakan Chemstation
RA 10,02 software.
Reagen dan Bahan n-Hexane, etil asetat, nitrile aceto-, dan metanol yang dibeli dari Fisher
Ilmiah fi c (Pittsburg, PA, USA) untuk persiapan ekstrak kasar dan pemisahan HSCCC.
Hoechst 33342 dan propidium iodida (PI) adalah dari Molekuler Probe (Eugene, OR, USA).
Semua bahan kimia dan reagen lain dari Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA).
Penelitian hewan Animal dilakukan di zona hambatan gratis pathogen- di KIST Gangneung
Institute dan telah disetujui oleh Perawatan dan Penggunaan Komite Hewan KIST (Animal
studi sertifikat nomor fi ed: 2009-01-4909-003).
Laki-laki dewasa Sprague Dawley-tikus dengan berat antara 250
300 g (8 minggu usia) yang digunakan dalam penelitian ini, dan menyesuaikan diri untuk
setidaknya satu minggu, dikurung dalam kelompok lima atau kurang, dan diberi makan
dengan diet chow hewan dan iklan air libitum. Mereka ditempatkan di 23 0,5 C dan 10%
kelembaban dengan siklus gelap-terang 12 jam.
Persiapan Ekstrak mentah dari R. Vernici fl ua Kulit R. Vernici fl ua dibeli di pasar Kyungdong,
Korea dan spesimen voucher (DGR-1001) adalah de- mengemukakan di Herbarium dari KIST
Gangneung Institute, Korea. Kulit kering R. Vernici fl ua (1,5 kg) diekstraksi empat kali
dengan etanol panas selama 4 jam. Residu ini diuapkan dalam vakum untuk menghasilkan
total ekstrak (130,0 g).
Budaya RGCs Berubah (RGC-5 Sel) Transformed sel prekursor neuron dikenal untuk
menunjukkan sejumlah karakteristik biokimia terkait dengan RGC-5 sel yang ramah berbakat
tim peneliti Alcon Research, Ltd (Fort Worth, TX, USA). Sel-sel dipertahankan dalam Dulbecco
ini modi fi ed menengah Eagle (DMEM) yang mengandung
5 mM glukosa, 100 U / mL penisilin / streptomisin, 2 mM tambang gluta-, 5 mg / mL
geneticin aktif dan 10% (v / v) panas tidak aktif serum janin sapi (FBS) dalam suasana fi ed
humidi dari 95% dan 5% CO2 pada 37 C. Untuk tes kelayakan, yang RGC-5 sel unggulan
dengan kepadatan 5.0 103 sel per baik ke 96 piring dengan baik. Setelah inkubasi selama
24 jam, sel-sel kemudian diferensiasi diciptakan media pertumbuhan dengan 316 nM
Staurosporine. Setelah 24 jam diferensiasi, sel dicuci di DMEM yang mengandung
1% FBS. Setelah 1 jam sebelum pengobatan, kematian sel diinduksi baik oleh inkubasi
dengan 800-pM hidrogen peroksida (H2O2), yang kemudian dipertahankan selama 24 jam.
Epigallocatechin galakhir (EGCG) telah terbukti secara berarti mengurangi apoptosis di RGC-5 yang disebabkan
oleh H2O2. Dalam penelitian ini, EGCG digunakan sebagai kontrol positif.
Sel Viabilitas Sel kelayakan dinilai menggunakan
3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay pengurangan
dimodifikasi dari yang Mosmann.23) Brie fl y, sel-sel (dalam piring 96-baik) yang dikenakan
yang sepatutnya pengobatan dan kemudian MTT ditambahkan pada fi nal konsentrasi 0,5
mg / mL selama 1 jam pada 37 C. Setelah waktu ini, media telah dihapus dan mengurangi
MTT (produk formazan biru) yang dilarutkan dengan menambahkan 100 uL dimetil
sulfoksida (DMSO) untuk masing-masing dengan baik. Setelah gemetar piring selama 15

menit, kepadatan optik dari produk formazan terlarut dalam setiap sumur diukur
menggunakan spektrofotometer (Biotek Instrumen, VT, USA) dengan tes panjang gelombang
570 nm dan panjang gelombang 690 referensi nm.
Penilaian Reactive Oxygen Species (ROS) Untuk mengukur intraseluler ROS, kami
menggunakan 2, 7 -dichloro fl uorescin diasetat (DCFH-DA) sebagai probe.24 radikal) The
RGC-5 sel unggulan dengan kepadatan 5.0 103 sel per sumur menjadi 96-baik piring, dan
dibedakan dengan Staurosporine. Setelah 24 jam, medium kultur sel digantikan dengan
DMEM yang mengandung 1% FBS. Spesies radikal (H2O2, O2 - atau OH) secara efektif
mengoksidasi non fl uorescent dikloro fl uorescein (DCFH) ke fl uorescent di- chloro fl
uorescein (DCF). Sel-sel sarat dengan probe radikal DCFH-DA (10 M) melalui inkubasi selama
20 menit pada
37 C. Kemudian, media kultur sel digantikan untuk menghapus probe tambahan. Untuk
menghasilkan spesies radikal, kami menambahkan H2O2 pada 1 mM (H2O2 radikal), H2O2
pada 1 mM ditambah 100 pM besi (II) perklorat hexahydrate ( OH) atau KO2 pada 1 mM (O2
-) ke radikal penyelidikan pemuatan -medium. Fluoresensi kemudian diukur setelah
senyawa ROS generasi telah hadir
untuk berbagai waktu-waktu, menggunakan eksitasi / emisi yang disebabkan oleh
gelombang panjang 485/535 nm (luminescence Spektrometer LS50B, Perkin-Elmer Ltd,
Inggris).
Ekstraksi Protein dan Western Blot Analisis RGC-5 sel diperlakukan dengan konsentrasi yang
berbeda dari R. Vernici fl ua ekstrak selama 1 jam. Setelah pra-pengobatan, sel-sel
diinkubasi dengan 800 pM H2O2 selama 24 jam. Dua puluh empat jam
kemudian, media telah dihapus dari piring dan dicuci
sekali dengan fosfat buffered saline dingin Dulbecco dunia (D-PBS). Sel-sel tergores
menggunakan scraper sel dan disentrifugasi pada 14000 xg selama 10 menit. Pelet sel yang
disuspensi di lisis sel penyangga [1 M Tris pH 7,4, 2 M NaCl, 1 M etilen asam
diaminetetraacetic, 10% NP40, 1 inhibitor protease,
1 mM phenylmethylsulfonyl fl uoride] dan kemudian diinkubasi pada es selama 10 menit.
Para lisat dibersihkan dengan sentrifugasi pada
14000 g selama 30 menit pada 4 C. Supernatan disonikasi,
dan konsentrasi total protein ditentukan dengan menggunakan Bio-Rad Protein Assay kit
(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA).
Volume yang sama dari 4 sampel penyangga [200 mM Tris pH
6,8, 8% natrium dodesil sulfat, 0,4% bromofenol biru, 40% glisin, 400 mM dithiothreitol]
ditambahkan, dan sampel direbus selama 3-5 menit pada 100 C. Sampel protein
dipisahkan dengan SDS-gel elektroforesis pada 12% gel poliakrilamid dan dipindahkan ke
sebuah uoride poliviniliden di fl (PVDF) Membran (Hybond-P; Amersham Biosciences, GE
Healthcare, Inggris). Setelah memblokir dengan susu skim 5% di PBST buf- fer [8 g / L NaCl,
0,2 g / L KCl, 1,44 g / L Na2HPO4, 0,24 g / L
NaH2HPO4 dan 0,1% Tween-20] selama 30 menit, membran diinkubasi semalam pada suhu
4 C di antibodi primer diencerkan dalam PBST mengandung 1% susu skim. Antibodi primer
yang digunakan adalah anti-poli (ADP-ribosa) polimerase (PARP), anti-dibelah caspase-3,
anti-caspase-9, (1: 1000, Sel Signaling Teknologi, Beverly, MA, USA) dan anti- -actin (1:
1000, Santa Cruz Bioteknologi, CA, USA). Setelah itu, membran diinkubasi dengan antibodi
sekunder [lobak peroxidase- kambing terkonjugasi anti-kelinci atau kuda anti-tikus antibodi
sekunder (1: 3000, Santa Cruz Bioteknologi, CA, USA)]. Band immunoreactive
divisualisasikan menggunakan en- reagen hanced chemiluminescence (Amsersham
Bioscience, GE Healthcare, Inggris) dan kemudian diukur melalui densitometri menggunakan
pembaca image LAS-4000 dan Multi Gauge 3.1 software (Fuji Photo Film, Jepang).
Lipid Peroksidasi Assay Jumlah formasi untuk spesies reaktif asam thiobarbituric (TBARS)
digunakan sebagai tingkat peroksidasi lipid membran dan metode sebelumnya

dideskripsikan digunakan dengan sedikit modi fi cation.25) Sprague- Dawley otak tikus
dihomogenisasi dalam 10 volume dingin
0,9% saline (pH 7,0) menggunakan Polytetra motor-driven fl homogenizer uoroeth- ylenekaca. Homogenat itu disentrifugasi pada
1000 g selama 10 menit pada 4 C dan supernatan yang dihasilkan adalah
digunakan untuk tes peroksidasi lipid. Homogenat dari seekor hewan yang digunakan untuk
setiap set percobaan peroksidasi lipid. Aliquots dari supernatan (0,5 mL) yang pra diinkubasi
pada 37 C selama 5 menit dengan 0,3 mL 0,9% saline (pH
7.0) yang mengandung berbagai konsentrasi sampel atau kendaraan. The peroksidasi lipid
pada tikus homogenat dievaluasi dengan menggunakan metode TBARS seperti yang
dijelaskan previously.6) Absorbansi sampel diukur pada 532 nm, dan jumlah TBARS
ditentukan dengan menggunakan kurva standar dari dialdehyde malon- (MDA) turunan 1,
1,3,3-tetraethoxypropane (,63-100 M). Konsentrasi protein secara keseluruhan-otak
supernatan homogenisasi enate ditentukan dengan menggunakan protein Bio-Rad-asumsi
mengatakan kit (Bio-Rad, Richmond, CA, USA) menggunakan serum albumin sapi sebagai
standar.
Pengukuran Partisi koefisien dan Settling Waktu Beberapa sistem pelarut dua fase diuji
dengan mengubah volume pelarut untuk mendapatkan komposisi yang optimal yang dapat
memberikan cocok koefisien partisi fi sien (K) nilai-nilai. The koefisien partisi nilai fi sien
ditentukan menurut literature.26 dengan) Komposisi sistem pelarut dua fase terpilih sesuai
dengan K senyawa target R. Vernici fl ekstrak ua. Sekitar 10 mg ekstrak R. Vernici fl ua
ditimbang dalam tabung 10 mL tes yang 5 ml setiap fase dari sistem pelarut dua fase praequilibrated ditambahkan. Setelah tabung terguncang penuh semangat, solusi cepat
dipisahkan sejenak. Kemudian, atas dan fase yang lebih rendah dianalisis dengan HPLC
untuk mendapatkan koefisien partisi fi sien dari senyawa target. K nilai dinyatakan sebagai
Persiapan Dua Tahap Pelarut Sistem dan Solusi Contoh Sistem pelarut terdiri dari n-heksana
etil asetat-metanol-air (HEMW, 3.5: 5: 3,5: 5, v / v) digunakan untuk pemisahan R. Vernici fl
ekstrak ua untuk HSCCC yang dipisahkan ransum. Campuran pelarut terguncang keras
dalam corong pemisah dan diseimbangkan pada suhu kamar. Dua
fase digunakan dengan HSCCC setelah degassed oleh kation soni- selama 30 menit.
Senyawa yang berhubungan dengan ekstrak R. Vernici fl ua dilarutkan dalam fase atas dan
fase yang lebih rendah dari larutan campuran (1: 1, v / v) dari sistem pelarut untuk
pemisahan HSCCC.
HSCCC Pemisahan Kolom coil multilayer adalah pertama sepenuhnya fi diisi dengan fase
organik atas (fase diam) pada tingkat aliran fl 30,0 mL / menit. Tahap yang lebih rendah
kemudian dipompa ke ujung kepala kolom inlet pada tingkat aliran fl dari
6,0 mL / menit, sementara aparat dijalankan pada kecepatan revolusi 400 rpm. Setelah
kesetimbangan hidrodinamik didirikan, yang ditunjukkan dengan adanya fase gerak yang
jelas eluting di outlet ekor, larutan sampel (1,5 g dalam 20 mL setiap tahap) disuntikkan ke
dalam kolom pemisahan melalui katup injeksi. The ef fasih berbahasa dari ujung ekor kolom
itu terus dipantau oleh koneksi ke outlet ekor kolom melingkar dengan detektor UV pada 254
dan 360 nm. Setiap fraksi puncak dikumpulkan menjadi 20 tabung mL menurut elusi pro fi
le. Setelah pemisahan selesai, retensi fase diam diukur dengan mengumpulkan isi kolom; ini
dilakukan dengan memaksa isi dari kolom dengan gas nitrogen bertekanan.
Analisis HPLC dan Identi fi kasi ekstrak Terisolasi HSCCC Peaks The R. Vernici fl ua dan
masing-masing fraksi puncak dari prosedur HSCCC dianalisis dengan menggunakan HPLC.
Semua analisa dilakukan dengan menggunakan Waters Atlantis C18 (250 mm x 4,6 mm id, 5
m) ditambah dengan Agilent
daerah puncak senyawa target dalam fase atas dibagi dengan yang dari fase yang lebih
rendah. Waktu penyelesaian, yang sangat berkorelasi dengan retensi fase diam, dinyatakan

sebagai diperlukan waktu untuk membentuk lapisan yang jelas antara dua fase ketika setiap
fase (1: 1, v / v) dicampur.
Zorbax Memperpanjang C18 guard kolom (10 mm x 4,6 mm id, 5 m).
Fase gerak terdiri dari 0,1% fl tri asam uoroacetic di
air (A) dan asetonitril (B). Program gradien adalah sebagai berikut: 10-15% B di 0-5 menit,
15-30% B di 5-25 menit, 3050% B di 25-40 menit, 50-100% B di 40-45 menit, 100 B% di
45-55 menit. Tingkat ow fl adalah 1,0 mL / menit. Panjang deteksi wavelength yang
ditetapkan sebesar 254 dan 360 nm. Volume injeksi adalah
10 uL dan analisis dilakukan pada suhu kamar.
Semua senyawa terisolasi oleh HSCCC dianalisis oleh ionisasi electrospray MS, 1H- dan 13CNMR dan dibandingkan dengan data dalam literatur untuk identifikasi. Spektrum 1H- dan
13C-NMR dicatat dengan tetrametilsilan sebagai referensi internal pada 500 MHz Varian
NMR sistem (Varian, Palo Alto, CA, USA) yang dilengkapi dengan probe dingin. Pergeseran
kimia () dilaporkan dalam ppm dan kopling konstanta (J) di Hertz (Hz).
Analisis Statistik Data dinyatakan sebagai persentase rata-rata nilai kontrol ditambah
standard error dari mean (SEM). Perbandingan statistik dibuat menggunakan analisis satu
arah varians (ANOVA) dilanjutkan dengan tes Dunnett ini. Analisis statistik dilakukan dengan
menggunakan GraphPad Prism (versi 4.0) (GraphPad, San Diego, CA, USA). p <0,05
dianggap signifikan.
Optimalisasi Kondisi HSCCC Dalam rangka untuk mengisolasi senyawa aktif dari R. Vernici fl
ekstrak ua, metode HSCCC untuk pemisahan yang cepat dan persiapan didirikan. Ito
sebelumnya dijelaskan beberapa aturan untuk pemilihan sistem pelarut dua fase dalam
HSCCC, termasuk (i) saat meninabobokkan dari sistem pelarut idealnya harus lebih pendek
dari
30 s untuk memastikan retensi yang memuaskan dari fase diam, (ii) koefisien partisi cocok fi
sien (K) nilai untuk HSCCC adalah
0.5K2.0 untuk ef pemisahan fi sien, dan (iii) rasio dua nilai K atau faktor pemisahan ( =
K2 / K1, K2> K1) seharusnya lebih besar dari 1,5 di semipreparative multilayer kolom
ransum yang dipisahkan dari a HSCCC unit.26) K nilai komersial adalah faktor yang paling
penting untuk dipertimbangkan saat memilih
sistem pelarut untuk pemisahan HSCCC; jika nilai K lebih besar dari 2.0, waktu pemisahan
akan terlalu panjang dan puncak HSCCC akan sangat extended.26,37) Pilihan yang benar
dari sistem ventilasi sol adalah penting untuk keberhasilan pemisahan HSCCC.
Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 4, empat puncak dengan waktu retensi di puncak
1, 13,021 menit; puncak 2, 22,157 menit; puncak 3, 25,483 menit dan puncak
4, 30,329 menit menjadi sasaran untuk pemisahan HSCCC.
Serangkaian percobaan dilakukan untuk menentukan

Sistem pelarut optimal dua-tahap untuk HSCCC pemisahan ekstrak R. Vernici fl ua. K nilai
diuji oleh daerah puncak HPLC antara fase atas dan bawah dan nilai-nilai K diukur dari
masing-masing senyawa diringkas dalam Tabel 2.
Dalam rangka untuk memilih nilai K yang cocok untuk e fi sien yang dipisahkan jatah
senyawa target kami, sistem pelarut dua fase
terdiri dari HEMW pada rasio 3: 5: 3: 5 digunakan. Namun, sistem pelarut ini menghasilkan
nilai K yang sangat tinggi untuk puncak 4, menunjukkan bahwa puncak ini akan dipartisi ke
tingkat yang lebih besar dalam fase atas, dan bahwa pemisahan panjang kali oleh HSCCC
akan diperlukan. Meskipun n-heksana dan metanol ditambahkan ke sistem pelarut untuk

mengurangi nilai K senyawa target kami, rasio 4: 5: 4: 5 kembali, dihasilkan insufisiensi nilai
K sien besar untuk puncak 1-3.
Sebuah sistem pelarut HEMW pada rasio volume 3,5: 5: 3,5: 5 (v / v) karena digunakan
untuk HSCCC pemisahan senyawa 4 sasaran (Gambar 5.).
The pengaruh retensi fase diam (Sr) pada pemisahan HSCCC juga diselidiki menggunakan
HEMW (3,5: 5: 3,5: 5, v / v) sistem pelarut, sebagai Sr adalah salah satu parameter yang
paling penting menentukan kolom efisiensi, resolusi puncak, dan hasil retensi zat terlarut
dalam pemisahan berhasil HSCCC. Tingkat aliran fl fase dan rotasi ponsel kecepatan pada Sr
memiliki besar
di memengaruhi pada pemisahan, yang diselidiki oleh HEMW (3,5: 5: 3,5: 5, v / v) sebagai
tingkat system.Flow pelarut 5-6 mL / menit pada kecepatan rotasi yang tetap dari 400 rpm
mengakibatkan penurunan Sr 65-63%
Senyawa dipisahkan dari 1,5 g saluran R. Vernici fl ua mantan menggunakan HSCCC dalam
kondisi optimal kami. Empat fl avo- noids diperoleh dalam satu puri fi kasi: fustin (senyawa
1; 252,1 mg; dikumpulkan 85-95 menit), fi setin (senyawa 2; 51,2 mg; dikumpulkan 110-125
menit), sulfuretin (compound3; 39,7 mg; dikumpulkan 130-155 menit), dan butein (com- pon
4; 10,7 mg; dikumpulkan 270-325 menit) (Gbr. 7).

Itu
kemurnian dari fustin, fi setin, sulfuretin, dan butein sebagaimana ditentukan oleh HPLC
yang, 93,09, 95,45, 95,17, dan 95,01% masing-masing (Gambar. 6). Semua senyawa yang
diidentifikasi melalui mereka 1H- dan 13C-NMR spektrum dan perbandingan langsung
dengan compounds.17 otentik)
Pengaruh Senyawa Terisolasi dari R. Vernici fl ua Extract oleh HSCCC pada Viabilitas
Differentiated RGC-5 Sel Dikenakan ke Penghinaan H2O2 Untuk mengevaluasi efek
perlindungan dari avonoids fl terisolasi kami pada kemampuan sel vi- dari dibedakan RGC-5
sel berikut H2O2 stres oksidatif -diinduksi, sel-sel pra-diobati dengan berbagai konsentrasi
dari masing-masing senyawa dan sel mati yang dinilai (Gambar. 8). Ditemukan bahwa
sementara paparan dibedakan RGC-5 sel untuk 800 pM H2O2 menyebabkan penurunan
signifikan dalam kelangsungan hidup sel (Gambar. 8), pra-perlakuan dengan masing-masing
senyawa
terisolasi dari R. Vernici fl ua mengekstrak secara signifikan mengurangi pengaruh-pengaruh
negatif dari H2O2 dalam konsentrasi dengan cara bergantung (Gbr. 8).
Dalam penelitian sebelumnya, 4 avonoids fl seperti fustin, fi setin, sulfuretin dan butein
telah diisolasi dari R. Vernici fl ua menggunakan kromatografi cair-padat tradisional, seperti
kromatografi kolom terbuka-dan selanjutnya puri fi kasi oleh HPLC.17) Namun, 4 avonoids fl
yang berhasil dipisahkan dari R. Vernici fl ua dengan kemurnian tinggi dan jumlah besar
dalam waktu
350 menit dengan HSCCC untuk pertama kalinya.
Selain itu, ekstrak R. Vernici fl ua memiliki efek protektif terhadap stres oksidatif yang
disebabkan RGC degenerasi, dengan senyawa avonoid fl dinyatakan dalam tanaman ini
menjadi senyawa aktif potensi cukup.
Kesimpulannya, HSCCC adalah e fi sien dan cepat untuk pemisahan senyawa aktif dari R.
Vernici fl ua, dan
sifat anti-oksidatif dan anti-apoptosis R. Vernici fl ua ekstrak membuat tanaman ini calon
untuk pengobatan atau pencegahan yang penyakit neurodegenerative seperti glaukoma.
Ucapan RGC-5 sel ramah berbakat oleh Alcon Research, Ltd Karya ini adalah secara finansial
dukungan porting oleh Departemen Pendidikan, Teknologi Sains (MEST), Provinsi Gangwon,

Gangneung City, Gangneung Industri Science Foundation (GSIF) sebagai R & D Proyek
Gangneung Science Park Mempromosikan Program.

Kromatografi TCountercurrent ( CCC ) adalah teknik kromatografi cair yang menggunakan

dua fasa cair bercampur dan tidak ada dukungan yang solid . [ 1 ] [ 2 ] Salah satu tindakan
cair sebagai fase diam dan yang lainnya sebagai fase gerak . Fase diam cair diadakan di
tempat oleh gravitasi atau gaya sentrifugal .
Dikombinasikan dengan kromatografi cair menengah-tekanan (MPLC) dan kromatografi cair
tekanan tinggi preparatif (Prep-HPLC), kecepatan tinggi kromatografi berlawanan (HSCCC)
telah berhasil diterapkan untuk pemisahan dan pemurnian isoflavonoid dari ekstrak
belamcanda. Pemisahan HSCCC dilakukan pada sistem dua fase pelarut yang terdiri dari
metil ters-butil eter -ethyl asetat - n-butil alkohol - asetonitril -0.1% asam trifluoroasetat
berair pada radio volume 1: 2: 1: 1: 5. Fraksi puncak Semi-dimurnikan dari pemisahan
HSCCC yang selanjutnya dimurnikan dengan Prep-HPLC. Sembilan fraksi terpisah baik
dianalisis dengan spektrometri serapan HPLC-UV untuk menentukan kemurnian mereka dan
ditandai dengan ESI-MSn. Kecuali untuk peaksland VII (tidak diketahui) tujuh senyawa
diidentifikasi sebagai apocynin (peak II), Mangiferin (peak III), 7-O-methylmangiferin (peak
IV), hispidulin (peak V), 3'-hydroxyltectoridin (peak VI), iristectorin B (puncak VII), isoiridin
(peak IX).
Kata kunci: kecepatan tinggi kromatografi lawan, kromatografi cair tekanan tinggi preparatif,
kromatografi cair menengah-tekanan, Belamcanda, isoflavonoid