LAPORAN PRAKTIKUM

TEKNIK BIOPROSES

Produksi Enzim Xilanase

Disusun oleh :
Kelompok 1A
Tien Siti Halimah
Pipit Apriliyanti
Alfi Nurfauziah
Abdurrohman
Nopvalentina Sigalingging

240210130002
240210130003
240210130006
240210130008
240210130010

UNIVERSITAS PADJADJARAN
FAKULTAS TEKNOLOGI INDUSTRI PERTANIAN
DEPARTEMEN TEKNOLOGI INDUSTRI PANGAN
JATINANGOR
2016

III.

METODOLOGI

3.1

Alat

1. Autoklaf
2. Batang gelas pengaduk
3. Botol gelap
4. Botol Schott
5. Bunsen
6. Desikator
7. Furnace
8. Hemasitometer
9. Inkubator
10. Ose
11. Kuvet
12. Labu erlenmeyer
13. Labu ukur
14. Mikroskop
3.2

15. Neraca analitik

16. Penangas
17. Penyaring vakum
18. Saringan
19. Sentrifugasi
20. Shaker
21. Spektrofotometer UV-Fis
22. Stirrer
23. Stik gelas steril
24. Tabung Falcon
25. Tabung reaksi
26. Vortex
27. Waterbath

Bahan

1. Akuades
2. Asam dinitrosalisilat
3. Biakan mikroba lama
4. Buffer asetat dengan pH 5
5. CaCl2
6. CaCO3
7. H2SO4
8. Kertas saring Whatman
9. KH2PO4
10. MgSO4
11. MgSO4.7H2O
12. (NH4)2SO4
13. PDA
14. Urea

15. Xilan
16. Xilosa
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27. 3.3 Prosedur

28. 3.3.1
1.
2.
3.
4.

Peremajaan Sel Mikroorganisme pada Medium PDA

Pembuatan agar miring dengan menggunakan medium PDA

Biakan jamur lama dioleskan secara aseptis pada medium
Inkubasi selama 2 hari
Hitung jumlah sel biakan baru yang terbentuk

29.
3.3.2 Proses Produksi Enzim Xilanase
1. Sebanyak 6,8 gram pelepah kelapa sawit dicampurkan dengan larutan
2.
3.
4.
5.

prado 10 ml
Selanjutnya dilakukan pre-treatment
Dilakukan inokulasi dengan menggunakan biakan jamur baru
Inkubasi pada suhu 32,8 C
Hasil fermentasi berupa produksi enzim xilanase

30.
3.3.3 Proses Pemanenan
1. Produksi enzim xilanase dari hasil fermentasi dicampur dengan akuades
40 ml dan dilakukan pengadukan
2. Proses pengadukan dilakukan menggunakn shaker 100 rpm, pada suhu
25OC selama 1 jam
3. Dilakukan penyaringan vakum dan dihasilkan supernatan
4. Selanjutnya dilakukan sentrifugasi 3500 rpm, pada suhu 4OC selama 20
menit
5. Dari hasil sentrifugasi tersebut dihasilkan ekstrak kasar enzim xilanase
31.
3.3.4 Uji Aktivitas Enzim Xilanase
1. Ekstrak enzim kasar sebanyak 0,5 mL dicampurkan dengan 0,5 mL xilan
gandum 1%
2. Campuran dilarutkan ke dalam buffer asetat pH 5 dan diinkubasi dengan
waterbath pada suhu 40C selama 15 menit
3. Reaksi dihentikan dengan cara menambahkan 15 mL DNS setelah
dididihkan pada bath mendidih selama 5 menit, larutan diukur
absorbansinya dengan spektrofotometer pada = 540 nm.
4. Hasil analisis aktivitas enzim berupa absorbansi. Aktivitas enzim dihitung
berdasarkan konsentrasi enzim menggunakan rumus berikut:

U
32.
33.

( K sp K kt ).1000. f p
BM xilosa .t.V

34. IV. HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN

35.
36.

Enzim adalah molekul biopolimer yang tersusun dari serangkaian

asam amino dalam komposisi dan susunan rantai yang teratur dan tetap. Enzim
memegang peranan penting dalam berbagai reaksi di dalam sel. Sebagai protein,
enzim diproduksi dan digunakan oleh sel hidup untuk mengkatalisis reaksi antara
lain konversi energi dan metabolisme pertahanan sel.
37.

Xilanase merupakan kelompok enzim yang memiliki kemampuan

menghidrolisis hemiselulosa dalam hal ini ialah xilan atau polimer dari xilosa dan
xilo-oligosakarida. Xilanase dapat diklasifikasikan berdasarkan substrat yang
dihidrolisis, yaitu -xilosidase, eksoxilanase, dan endoxilanase.
38.

Xilanase umumnya merupakan protein kecil dengan berat molekul

antara 15.000-30.000 Dalton, aktif pada suhu 550 C dengan pH 9. Pada suhu 600C
dan pH normal, xilanase lebih stabil (Richana, 2002).
39.

Xilan dapat di pecah menjadi gula sederhana berupa xilosa dengan

bantuan enzim xilanase (Richana, 2002). Enzim Xilanase merupakan enzim yang
mampu menghidrolisis ikatan 1,4- yang terdapat pada xilan atau polimer dari
xilosa dan xilooligosakarida (Richana, 2002). Pemanfaatan enzim xilanase dalam
bidang industri telah banyak dilakukan seperti dalam industri kertas dan proses
pemutihan pulp maupun industri pangan seperti dalam pembuatan permen, kopi,
serta pakan ternak.
40.

Kriteria sumber nutrisi untuk skala besar menurut Rachman (1989)

adalah
1

Dapat memproduksi biomassa dengan hasil maksimal untuk tiap gram

substrat yang digunakan.

Memungkinkan pembentukan produk fermentasi dengan laju
41.

maksimal

Dapat menekan pembentukan produk yang tidak diinginkan sampai

4
5

serendah mungkin.
Mutu konstan, murah, dan tersedia sepanjang tahun.
Tidak menimbulkan masalah terhadap aerasi, agitasi, ekstraksi, dan
pemurnian hasil serta perlakuan limbah.

42.

Substrat yang digunakan dalam proses fermentasi berpengaruh

terhadap aktivitas dan produktivitas enzim. Adanya substrat tertentu di dalam

medium produksi dapat memacu mikroorganisme untuk mensekresi metabolit
selnya. Zat makanan utama bagi pertumbuhan mikroorganisme adalah sumber
karbon, nitrogen, dan komponen mineral terutama fosfat. Formulasi media dalam
pertumbuhan dan produksi hasil fermentasi merupakan suatu tahap penting dalam
mendesain percobaan dalam skala kerja (Stanbury dan Whitaker, 1984). Beberapa
sumber karbon yang sering digunakan adalah molases, serealia, pati, glukosa,
sukrosa, dan laktosa.
43. Tabel 1. Beberapa Mikroorganisme Penghasil Xilanase
44.

45.

Produksi enzim xilanase pada praktikum ini dilakukan dengan

memanfaatkan biakan jamur. Adapun substrat yang digunakan adalah substrat
fase padat berupa tongkol jagung yang telah dihaluskan. Tongkol jagung ini
berfungsi sebagai supply selulosa untuk kelangsungan hidup biakan jamur
tersebut. Menurut Padil (2010), tongkol jagung mengandung Selulosa -
(34,89%), Hemiselulosa (27,14%), dan Lignin (19,87%).

46.

Produksi enzim xilanase pada praktikum ini dilakukan dengan

menggunakan 6,8 gram tongkol jagung yang dicampurkan dengan larutan
prodo sebanyak 10ml. Selanjutnya substrat pelepah kelapa sawit ini diberi dua
perlakuan pre-treatment, yaitu dengan perlakuan panas autoklaf (1210C selama
15 menit) dan tanpa autoklaf. Pre-treatment ini juga bertujuan untuk
menghidrolisis hemiselulosa yang ada pada tongkol jagung. Oleh sebab itu,
hemiselulosa yang nantinya dihasilkan dari sampel dengan pretreatment akan
cenderung lebih tinggi konsentrasinya.

47.

Substrat yang telah mendapatkan pretreatment selanjutnya diinokulasikan

dengan biakan jamur sebanyak 1,7 ml atau setara dengan 106 sel. Biakan
jamur ini sebelumnya ditumbuhkan pada agar miring media PDA selama 48
jam. Agar miring ini kemudian ditambahkan aquades dan dilakukan tapping
dengan tujuan untuk meluruhkan koloni jamur yang ada. Setelah setiap
substrat mendapatkan inokulasi biakan jamur, tongkol jagung terebut
diinkubasi pada suhu 32,8 0C. Waktu inkubasi pada substrat masing-masing
perlakuan, diberikan variasi yaitu inkubasi pada suhu 12 jam, 24 jam, 36 jam,
48 jam, dan 60 jam. Perbedaan waktu inkubasi ini bertujuan untuk melihat
adanya perbedaan konentrasi xilan yang dihasilkan.

48.

Proses pemanenan dilakukan dengan mengambil hasil fermentasinya.

Hasil fermentasi selanjutnya ditambahkan aquades sebanyak 40 ml dan
dilakukan pengadukan menggunakann shaker 100 ppm T = 25 0C, selama 1
jam. Pengadukan ini berfungsi untuk menghomogenkan aquades dengan
supernatan. Kemudian sdiambil supernatannya dan dimasukan ke dalam
tabung sentruvugasi. Sentrifugasi dilakukan untuk memisahkan dua fase, yaitu
protein terlarutnya dengan dinding sel atau dapat disebut sel ekstrak.
Sentrifugasi dilakukan menggunakan sentrifugasi dingin yaitu 4 0C, dengan
tujuan untuk menjaga kestabilan enzim yang tekah dihasilkan ( pada 3500
rpm, T = 40C Sselama 20 menit. Sebagian besar enzim merupakan molekul
yang mudah rusak bila tidak berada pada kondisi fisiologisnya. Karena itu,
untuk mempertahankan struktur dan fungsi protein, maka semua proses isolasi
harus dilakukan pada kondisi suhu rendah (Najafpour, 2015).

49.

Jumlah enzim yang dihasilkan setara dengan jumlah sel terhitung.

Penghitungan jumlah sel dilakukan dengan metode spektrofotometri.
Sebanyak 0.1 ml ekstrak sel dimasukan ke dalam tabung reaksi dan
ditambahkan 9.9 ml aquades dan pengenceran ini dibaca sebagai 10-2 .
Selanjutnya tappibg utuk menghomogenkan larutan. Sebanyak 0,5 ml diambil
dan ditambahkan Larutan buffer pH 5 sebanyak 0.5 ml dan xilan sebanuak 0.5
ml. Sampel diinkubasi pada 40 0C. Setelah diinkubasi, sampel diberikan
penambahan DNS (Dinitro Salicylic Acid). DNA ini ditambahkan ketika
sebeum spektrofotometri bertujuan untuk memberikan reaksi kompleks yang
membantu dalam pengukuran absorbansi larutan pada spektrofotometer dan
berfungsi menghentikan kerja enzim, sehingga enzim tidak memecah pati
(Najafpour, 2015). Selnajutnya dipanaskan selama 5 menit untuk
mempercepat reaksi DNS. Kemudian larutan t yang telah didinginkan tersebut
dimasukan ke dalam kuvet untuk diukur absorbansi sel nya. Spektrofotometri

50.

Hasil pembacaan panjang gelombang dengan spektrofotometer 560 nm,

dapat dilihat pada Tabel 1. Adapun dari hasil pembacaan absorbansi ini dapat
diketahui rumusan persamaan regresinya dan dapat dihitung konsentrasi
xilosanya. Selanjutnya dapat diketahui aktivitas enzim xilanasenya dalam
memecah hemiselulosa melalui perhitungan di bawah.

51. Tabel 1. Hasil Pengamatan Aktivitas Enzim Xilanase Tongkol jagung

52. Perlaku 53. Waktu 54. Absorba 55. Konsentrasi 56. Aktivitas
an
57. Autoklaf

82. Tanpa
autoklaf
107.
108.

(jam)
58. 12 jam
63. 24 jam
68. 36 jam
73. 48 jam
78. 60 jam
83. 12 jam
88. 24 jam
93. 36 jam
98. 48 jam
103. 60

nsi (y)
59. 0,135
64. 0,221
69. 0,323
74. 0,212
79. 0,241
84. 0,318
89. 0,212
94. 0,209
99. 0,160

xilosa (x)
60. 0,0819
65. 0,1563
70. 0,2440
75. 0,1485
80. 0,1735
85. 0,2401
90. 0,1485
95. 0,1459
100. 0,1306

104. 0,224 105.

jam
(Sumber: Dokumentasi Pribadi, 2016)
109.

0,1573

enzim
61. 7,275
66. 13,881
71. 21,7043
76. 13,886
81. 15,4088
86. 21,3259
91. 13,1886
96. 12,9665
101. 9,2
106.

3,4717

Hasil analisis aktivitas enzim berupa absorbansi. Nilai absorbansi

dikalibrasi menggunakan kurva standar. Nilai konsentrasi enzim inilah yang

digunakan untuk menghitung aktivitas enzim. Rumus untuk mencari aktivitas

enzim adalah:

( K sp K kt ).1000. f p
BM xilosa .t.V
110.
111.
112.
113.
114.
115.
116.
117.
118.
119.

120.

dengan:
U
Ksp
Kkt
1000
fp
BMxilosa
t
V

= aktivitas enzim (U/mL atau mol/(menit.mL))

= kadar xilosa sampel (g)
= kadar xilosa kontrol (g)
= faktor konversi dalam mol
= faktor pengenceran
= berat molekul xilosa (150,13 g/mol)
= waktu inkubasi (menit)
= volume enzim digunakan dalam analisis (mL)

Uji penyimpanan enzim dilakukan untuk mengetahui seberapa

besar penurunan yang terjadi setelah enzim disimpan serta mengetahui

kestabilan enzim apabila disimpan pada suhu tertentu (Nareswari, 2007).
Penyimpanan enzim pada waktu dan suhu tertentu dapat mengakibatkan
perubahan struktur enzim sehingga enzim tidak dapat berikatan dengan
substrat (Sukmana, dkk, 2014). Suhu merupakan salah satu faktor lingkungan
yang penting dalam aktivitas enzim. Pada suhu optimum aktivitas akan terus
mengalami peningkatan. Namun, pada pemanasan yang semakin tinggi
aktivitas enzim akan mengalami penurunan atau hilang karena enzim
mengalami denaturasi (Sumardjo, 2009). Pengaruh suhu terhadap aktivitas
enzim dikarenakan, terjadinya perubahan konformasi substrat yang
menyebabkan perubahan sisi aktif substrat sehingga menghambat sisi aktif
substrat memasuki sisi aktif enzim dan terjadi penurunan aktivitas enzim.
Struktur protein enzim akan mengalami kerusakan ketika suhu yang terlalu
tinggi yang diakibatkan dari putusnya ikatan non kovalen (ikatan hidrogen,
ikatan van der walls, dan ikatan hidrofobik) yang terdapat pada struktur 3
dimensi enzim (Hames dan Hooper, 2000).
121.

Berdasarkan hasil pengamatan, dengan autoklaf, pada waktu 12

jam aktivitas enzim sebesar 7,275 U/mL dan selama penyimpanan aktivitasnya
meningkat hingga waktu 36 jam yaitu sebesar 21,7043 U/mL. Namun, aktivitas
enzim menurun pada saat jam ke 48 13,886 U/ml dan meningkat kembali pada
jam ke 60 sampai 15,4088 U/mL. Apabila dibandingkan dengan tanpa autoklaf,

pada jam ke 12 aktivitas enzim sebesar 21,3259 U/mL dan terus menurun seiring
waktu pada waktu 60 jam 3,4717 U/ml. Kenaikan dan penurunan aktivitas enzim
tersebut dapat dilihat dari grafik dibawah.
122.

Aktivitas Enzim
25
20
Aktivitas Enzim

15
10
5
0
12 jam 24 jam 36 jam 48 jam 50 jam

123.
124. Grafik 4.1 Jumlah Aktivitas Enzim Terhadap Waktu Dengan Autoklaf
125. (sumber : data hasil pengamatan, 2016)
126.

Aktivitas Enzim
25
20
Aktivitas Enzim

15
10
5
0
12 jam 24 jam 36 jam 48 jam 50 jam

127.
128. Grafik 4.2 Jumlah Aktivitas Enzim Terhadap Waktu Tanpa Autoklaf
129. (sumber : data hasil pengamatan, 2016)
130.
131.

Kestabilan enzim dapat diketahui dengan mengukur aktivitas

enzim, apabila aktivitas enzim sisa terdapat lebih dari 50% dari aktivitas awal
enzim menandakan enzim tersebut dalam keadaan stabil (Muawanah, 2006).
Berdasarkan hasil pengamatan, kedua perlakuan (dengan atau tanpa autoklaf)

menunjukkan bahwa enzim tersebut stabil karena enzim sisa terdapat lebih dari
50% dari aktivitas enzim awal.
132.

133.

V.

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1

Kesimpulan

134.
135.

Nilai aktivitas xilanase optimal pada 36 jam yaitu sebesar 21,7043

U/ml dengan adanya perlakuan autoclave

Nilai aktivitas xilanase optimal pada 12 jam sebesar 21,32 U/ml

tanpa perlakuan autoclave.

Semakin lama waktu inkubasi, semakin banyak xilanase yang
mengalami kerusakan yang kemungkinan diakibatkan kerja dari
protease yang dihasilkan bersama xilanase oleh jamur.

136.
1 Saran
1

Praktikkan dan Asisten dosen harus bisa berkoordinasi dengan baik

mengenail informasi pemakaian bahan-bahan praktikum maupun
pelaksaan praktikum

137.

138.

DAFTAR PUSTAKA

139.
140.

Beg, Q.K., M. Kapoor, L. Mahajan, and G.S. Hoondal. 2001. Microbial

xylanases and their industrial appli- cations; a review. J. Appl. Micribiol.
Biotechnol. 56:326-338.

141.
142.

Hames, P. D. dan Hooper, N. M., 2000. Biochemistry : The Instant Notes,

Ed. Ke- 2. Springer-Verlag. Hongkong.

143.
144.

Jaelani, A. dkk. 2015. Pengaruh Lama Penyimpanan Hasil Fermentasi

Tongkol jagung oleh Trichoderma sp Terhadap Kandungan Selulosa dan
Hemiselulosa. Jurnal. Volume 40 No. 2, Hal 165 174.

145.
146. Kulkarni, N., Abhay Shendye, Mala Rao. 1999. Molecular and
biotechnological aspects Jurnal Riset Industri Vol. V, No. 1, 2011. FEMS
Microbiological Reviews.
147.
148.

Maat, J., M. Roza, J. Verbakel, H. Stam, M.J. Santos da Silva, M. Bosse,

M.R. Egmond, M.L.D. Hagemans, R.F.M. van Gorcom, J.G.M. Hessing,
C.A.M.J.J. van Der Hondel, and C. van Rotter- dam. 1992. Xylanases and
their application in bakery. In Visser et al. (Eds.). Xylans and Xylanases.
Elsevier, Amsterdam. p. 349-360.

149.
150.
151.
152.
153.
154.
155.

Marks, Dawn B. dkk. 1996. Biokimia Kedokteran Dasar. Buku

Kedokteran EGC. Jakarta.
Muawanah, A. 2006. Produksi Enzim Xilanase Termostabil Thermomyces
lanuginosus IFO 150 pada Bagasse Tebu. Tesis Institut Pertanian Bogor.
Bogor.
Najafpour. G. D., 2015. Biochemical Enginering. Elsevier pub.USA.

156. Nakamura, S., R. Nakai, K. Wakabayashi, Y. Ishigoro, R. Aono, and K.

Horikoshi. 1994. Thermophilic alkaline xylanase from newly isolated
alkalophilic and thermophilic Bacillus sp. strain TAR-1. Biosci. Biotech.
Biochem. 58(1):78-81.
157.
158. Nareswari. 2007. Enzim Xilanase Bacillus licheniformis AQ1: Pemekatan,
Studi Termostabilitas, dan Zimogram. Skripsi. Institut Pertanian Bogor.
Bogor.
159.
160. Padil. 2010. Proses Pembuatan Nitroselulosa Biomassa Sawit. ISBN 978602-602-96729-0-9- 2A03. Univsersitas Riau. Indonesia
161.
162. Richana, N., 2002, Produksi dan Prospek Enzim Xilanase dalam
Pengembangan Bioindustri di Indonesia, Buletin AgroBio Vol. 5.
163.
164. Richana, Rahman. 2002. Produksi dan Prospek Enzim Xilanase dalam
Pengembangan Bioindustri di Indonesia. Jurnal. Buletin AgroBio 5 (1):2936.
165.
166.

Rimbani, Majid. 2013. Optimasi Bio-Pretreatment Jerami PAdi Secara

Fermentasi Fase Padat Oleh Isolat Actinomycetes AcP-1 dan AcP-7.
Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas
Lampung. Bandar Lampung.

167.
168.

Septriningrum, K. dan C. Apriani. 2011. Produksi Xilanse dari Tongkol

Jagung Dengan Sistem Menggunakan Bacillus circulans untuk Prapemutihan. Jurnal Riset Industri Vol. V, No. 1, 2011, Hal 87-97.

169.
170.
171.
172.

Sukmana, E. M. Sutrisno. Roosdiana, A. 2014. Pengaruh Suhu dan Lama

Penyimpanan terhadap Kestabilan Enzim Xilanase dari Trichoderma
viride. Kimia.StudentJournal, 2(1): 340 - 344.
Sumardjo, Damin. 2009. Pengantar Kimia : Buku Panduan Kuliah
Mahasiswa Kedokteran Strata I Fakultas Bioeksakta. Buku Kedokteran
EGC. Jakarta.

173.
174. Sunna, A. and G. Antraniklan. 1997. Xylanolytic enzyme from fungi and
bacteria. Crit. Rev. in Biotechnol. 17(1):39-67.

175.
176.

Wong, K.K.Y. and J.N. Saddler. 1993. pplications of hemicellulases in the

food and pulp and paper industries. In Coughlan and Hazlewwod (Eds.).
Hemicelluloses and Hemicellulases. Portland Press, London. p. 127-143.

177.
178.