Oleh :

Surya Dinda (1601053)

S1-IV B

Dosen pembimbing :
Denni Anggraini,M.

Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau

Sifat-sifat Fisikokimia dan Aktivitas Anti-
Propionibacterium acnes dan Larutan
Pembentuk Film Yang Mengandung
Ekstrak kaya Alpha-Mangostin
 untuk mempelajari pengaruh komposisi
formulasi dari sifat fisikokimia dan aktivitas
anti-Propionibacterium acnes dari larutan
pembentuk film yang mengandung ekstrak
alpha-mangostin (AM)
 mengevaluasi permukaan film, pelepasan
AM secara in vitro, aktivitas anti-P. acnes ,
dan kemampuan untuk mengiritasi kulit.
1. Persiapan Ekstrak Kulit Buah Manggis dan Pemurnian
Buah manggis di bersihkan sebanyak 3 kali, diambil kulit buah lalu dibersihkan dan di
keringkan dalam oven udara panas pada 60 ° C sampai berat konstan diperoleh. Itu
kulit kering digiling menjadi bubuk dan diekstraksi dengan diklorometana
selama tiga kali. kemudian dimurnikan dengan menggunakan kromatografi kolom
mengandung Silica gel 60, 0,063–0.200 mm mesh

2. Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum AM untuk P. acnes

Konsentrasi penghambatan minimum (MIC) dari AM untuk anti-P. acnes
ditentukan dalam rangkap tiga oleh pengujian mikrodilusi. P. acnes diinkubasi di
otak-jantung infus (BHI) kaldu dalam kondisi anaerobik selama 72 jam dan
disesuaikan dengan air steril untuk menghasilkan sekitar 1,0 × 108 CFU / ml.
Suspensi P. acnes kemudian diencerkan dengan kaldu BHI hingga konsentrasi 5%
v / v dan dimasukan ke piring 96-well dengan volume 100 μl. Piring 96-well
diinkubasi dalam kondisi anaerob pada 37 ° C selama 72 jam. Penghambatan
pertumbuhan mikroba diidentifikasi oleh larutan yang jelas diperoleh setelah
inkubasi. MIC dari AM untuk P. acnes adalah konsentrasi terendah yang akan
memberikan larutan yang jelas di dalam sumur. Dalam penelitian ini, baik kaldu
nutrisi maupun 2% DMSO tanpa AM digunakan sebagai kontrol negatif, dan
amoxicillin solusi (1 mg / ml) digunakan sebagai kontrol positif.
3. Persiapan Solusi Pembentukan Film
 Eudragit RL PO untuk formulasi yang hanya berisi Eudragit RL PO
sebagai polimer pembentuk film dilarutkan dalam etanol absolut. Klucel LF
untuk formulasi yang hanya mengandung Klucel LF atau campuran Eudragit
RL PO dan Klucel LF dilarutkan dalam 80% v / v etanol. Ini diaduk terus
menerus sampai larutan bersih diperoleh. Lalu tambah Triethyl citrate
digunakan sebagai plasticizer dan diaduk secara menyeluruh.
 Untuk kasus pembentukan film yang mengandung AM, AM ditambahkan ke
solusi untuk memberikan akhir konsentrasi setara dengan 1.000 kali MIC.
Nilai pH persiapan representatif ditentukan dalam rangkap tiga dengan
menggunakan pH meter.

4. Pengukuran Properti Rheological dari Pembentukan Film AM Solusi

 Pengukuran rheologis dilakukan dalam rangkap tiga dalam mode penyapuan
geser stabil menggunakan rheometer yang dikontrol-stres dilengkapi
dengan geometri kerucut dan plat. ). Tingkat geser awal dan akhir ditetapkan
pada 0,1 dan
100 s − 1, masing-masing. Suhu ditetapkan pada 25 ± 0,1 ° C.
5. Penentuan Sifat Mekanis Film
 Spesimennya disiapkan dengan memotong film menjadi bentuk persegi
panjang (1,5 × 10 cm) dan kemudian diselidiki karena sifat mekaniknya, yaitu,
kekuatan tarik dan persen perpanjangan putus menggunakan Mesin Uji
Universal. , alat uji dilengkapi dengan sensor beban 20 N. Film-film
ditempatkan di antara dua pegangan vertikal. Jarak awal antara genggaman
vertikal ini ditetapkan pada 40 mm. Itu pegangan bergerak kemudian
didorong ke atas dengan kecepatan 500 mm / menit sampai film-film tersebut
pecah. Daya tarik dan persen perpanjangan putus setiap film mewakili stres
dan elongasi maksimum yang bisa ditanggung film, saat ditarik sebelum
istirahat, ditentukan. Itu nilai yang dilaporkan adalah nilai rata-rata dan
standar deviasi (SD) dari data yang diambil dari tiga spesimen.

6. Morfologi Film Kering

Sebuah Film AM diamati pada permukaan berlapis emas mereka
menggunakan scanning electron microscope di 10 kV.
7. Penentuan Tack dari Films
 Tack film (2 × 2 cm) ditentukan oleh tes probe probe menggunakan
rheometer terkontrol-regangan . Dinyatakan sebagai kekuatan maksimum
untuk menarik probe tacking (diameter, 5 mm) dari permukaan sampel
dengan kecepatan 10 mm / dtk menekan sampel dengan 100 gf untuk 1 s.
Setiap sampel diuji dalam rangkap tiga dan data dilaporkan dalam arti ± SD.

8. Spektroskopi FT-IR untuk Studi Interaksi AM/Basis Film

Sampel uji digiling dan dicampur dengan KBr bedak dengan perbandingan
1: 100 dan ditekan menjadi pelet untuk penelitian ini. Rata-rata sinyal
diperoleh untuk 32 scan pada resolusi 4 cm − 1.
9. Studi Rilis In Vitro
 Rilis AM dari film AM yang representatif hingga membran dialisis selulosa
dilakukan dengan menggunakan modifikasi Sel difusi Franz dalam rangkap
tiga. Rilis AM dari film AM yang representatif hingga membran dialisis
selulosa dilakukan dengan menggunakan modifikasi Sel difusi Franz dalam
rangkap tiga. Film kering dipotong menjadi ukuran penutup 2 x 2 cm persegi
dari area difusi (1,78 cm2) dan kemudian ditempatkan pada dialisis selaput
selulosa. Membran dengan film AM di satu sisi adalah ditempatkan di antara
unit donor dan reseptor, yang diisi dengan 1% Tween 80 dalam pH 7,4 solusi
buffer fosfat untuk meningkatkan kelarutan AM dalam larutan buffer untuk
analisis yang tepat dari konten alpha-mangostin yang dirilis.
10. Uji Iritasi Kulit Secara In Vitro

 Tes iritasi kulit in vitro dilakukan untuk menyelidiki potensi solusi pembentuk film
AM dan film AM sebagai iritasi kulit. Sel NHFF dikultur dalam DMEM mengandung
10% v / v fetal bovine serum dan 2 mM L-glutamine pada 37 ° C dalam atmosfir
CO2 5% dan disubkultur setiap 3–4 hari menggunakan larutan trypsin-EDTA. Sel-
sel itu diunggulkan dalam 24-baik piring dengan kepadatan 5,0 × 104 sel / baik.
Setelah inkubasi untuk 5 hari, sel-sel mencapai pertemuan dan terpapar 200 μl
baik 5% w / v AM solusi pembentuk film normal saline atau 5% w / v AM film
yang terdispersi dalam salin normal untuk Masing-masing 10 menit dan 24 jam.
Setelah terpapar, sel-sel itu dicuci dua kali dengan buffer fosfat. Kemudian, 200 μl
0,5 mg / ml. Larutan MTT dalam medium ditambahkan dan diinkubasi selama 2
jam.
 Formazan MTT diekstraksi dengan 0,04 Normalitas HCl– isopropanol selama 30
menit dan absorbansi ekstrak diukur pada 570 nm dengan pembaca lempeng.
Dalam penelitian ini, sebuah pembentuk film basis solusi dan film dasar juga diuji.
Wells mengandung larutan medium dan MTT tanpa sel NHFF digunakan sebagai
kosong. Viabilitas sel 100% dihitung dari hasil sumur yang mengandung sel NHFF
dengan tidak adanya paparan larutan uji. Pengujian dilakukan di enam ulangan
dan dilaporkan sebagai rata-rata viabilitas sel persen ± SD.
11. Aktivitas Anti-P. acne dari AM Film
P. acnes diinkubasi dalam medium BHI dengan glukosa 1% selama 72 jam di
bawah kondisi anaerobik. Dulu disesuaikan dengan air steril untuk
menghasilkan sekitar 1,0 × 108 CFU / ml. Sebuah inokulum ditambahkan ke
BHI cair dengan glukosa agar dan dicampur secara menyeluruh. Kemudian,
dituangkan ke BHI dengan glukosa agar dasar diatur dalam cawan Petri steril
dan meninggalkan soliditas. Film dasar dan film AM disiapkan dan dipotong
menjadi bentuk lingkaran dengan diameter 7 mm dan ditempatkan pada
agar-agar. Pelat diinkubasi pada 37 ° C untuk 72 jam di bawah kondisi
anaerobik. Setiap film diuji tiga waktu. Anti-P mereka. Aktivitas jerawat
dilaporkan sebagai rata-rata diameter zona penghambatan (dalam milimeter)
± SD.
1. Persiapan AM dan Penentuan MIC of AM untuk P. acnes

Menunjukkan bahwa 0,5 μg / ml AM tidak bisa menghambat pertumbuhan P.

acnes. Anti-P. Aktivitas jerawat meningkat ketika konsentrasi ditingkatkan ke
tingkat lebih besar dari atau sama dengan 1,0 μg / ml.

2. Persiapan Pembentukan Film

 Formulasi mengandung kandungan polimer pada konsentrasi 5% b / b (5%

E-T1 dan 5% K-T1) bisa mengalir bebas seperti air. Ini tidak bisa
dipertahankan kapan diterapkan pada kulit, tetapi cenderung hilang, sebagai
gantinya. Di atas sisi lain, formulasi mengandung 8% (8% E-T1 dan 8% K-T1)
dan 11% (11% E-T1 dan 11% K-T1) dari polimer konten dapat dipegang di
kulit tanpa hilang setelahnya mereka diaplikasikan pada kulit dengan volume
10 μl / cm2. Ini hasil menyiratkan bahwa 5% b / b konten polimer tidak bisa
memberikan konsistensi yang cukup dari solusi untuk digunakan dalam
formulasi larutan pembentuk film.
3. Penentuan Sifat Fisik Film Kering Yang Didapat dari Larutan Pembentukan
Film
Tidak ada pemisahan macrophase yang terlihat ditemukan . Hasil ini
mengimplikasikan bahwa ada kompatibilitas yang baik antara bahan-bahan yang
terdiri dari formulasi. Hasil penentuan sifat mekanik dari film-film seperti yang
ditunjukkan pada Tabel I menunjukkan bahwa tensile mereka kekuatan dan
persen perpanjangan putus yang diwakili kekerasan dan elastisitas mereka
masing-masing bergantung pada komposisi formulasi.

4. Pengaruh konten polimer

 larutan pembentuk film yang terdiri dari lebih banyak konten polimer akan
menyediakan film yang lebih kuat dan lebih kuat daripada persiapan
mengandung lebih sedikit kandungan polimer. Hasil ini mengikuti dari
kandungan polimer yang lebih besar, intermolecular yang lebih besarn kekuatan
yang ada di antara rantai polimer.
 Eudragit Film-film RL PO lebih kuat dan lebih tangguh daripada Klucel LF film. Ini
menunjukkan bahwa gaya antarmolekul antara polimer rantai Eudragit RL PO
seperti ikatan hidrogen dan interaksi hidrofobik lebih kuat daripada interaksi
Klucel LF. Selain itu, rantai polimer Eudragit RL PO mungkin lebih fleksibel dan
lebih mudah dilipat dibandingkan dengan Klucel LF.
6. Pengaruh Triethyl Citrate sebagai Plasticizer

Ada kemungkinan bahwa trietil sitrat bertindak sebagai plasticizer bisa

mengurangi gaya antarmolekul antara polimer rantai dan mengurangi
kekuatan film. Lagipula, itu bisa meningkatkan fleksibilitas rantai polimer
yang dihasilkan menjadi lebih keras film. Karena itu, film-film tersebut
mengandung lebih banyak trietil sitrat lebih lemah dan lebih dapat
diperpanjang daripada film-film yang ada kurang trietil sitrat. Dari hasil
penelitian ini, 8% K5-E1-T1 masih menyediakan film-film yang memiliki
mekanisasi yang dioptimalka nsifat dan karena itu dipilih sebagai perwakilan
untuk percobaan selanjutnya.
7. Persiapan dan Penentuan Sifat Fisik larutan Pembentuk Film AM dan Film
AM
 Menunjukkan bahwa keduanya AM-8% K5-E1-T1 dan AM- 11% K5-E1-T1
memamerkan perilaku aliran Newton. Ini menunjukkan bahwa polimer yang
terkandung dalam formulasi ini bisa tidak menyiapkan jaringan tiga dimensi di
seluruh sistem benar karena mereka terdispersi dalam pelarut yang buruk.
 Dari profil viskositas,ditemukan bahwa AM-11% K5-E1-T1 memiliki lebih tinggi
viskositas dari AM-8% K5-E1-T1 karena polimer yang lebih besar konten.
Ditunjukkan bahwa AM-11% K5-E1-T1 kira-kira 2,6 kali lebih kental daripada AM-
8% K5-E1-T1.
 Ditemukan bahwa keduanya AM-8% K5-E1- T1 dan AM-11% K5-E1-T1 dapat
diterapkan pada kulit permukaan mudah dan bisa di situ membentuk film tipis
dalam 2,5 ± 0,1 dan 3,3 ± 0,1 mnt, masing-masing, pada suhu sekitar setelah
menerapkan pada kulit tangan belakang dengan volume 10 μl / cm2.
 AM-8% K5-E1-T1 menyediakan film yang hampir tidak terlihat dan tidak
meninggalkan bekas yang jelas pada kulit. Sebaliknya, film-film kering dari AM-
11% K5-E1-T1 jelas diamati pada diterapkan kulit dan menyebabkan sensasi
fiksasi kulit lebih dari bahwa dari AM-8% K5-E1-T1. Ini menunjukkan bahwa
persiapan yang mengandung lebih banyak konten polimer lebih kental dan akan
meninggalkan bekas yang jelas pada kulit. Akibatnya, AM-8% K5-E1-T1 diterima
sebagai perumusan yang cocok.
8. Studi Rilis In Vitro

langkah pembatas laju rilis AM adalah terutama ditentukan oleh proses difusi
AM dalam film matriks daripada permeasi melalui membran. Ini mungkin
polimer yang terkandung dalam matriks film berimplikasi gerakan dan
membentuk interaksi dengan AM, dan sehingga menghasilkan pelepasan AM
yang terkendali. Namun, karena studi rilis in vitro menunjukkan bagaimana
AM dilepaskan dari matriks film tetapi tidak menunjukkan bagaimana AM
menembus kulit, permeasi AM melalui kulit binatang dan in vivo
farmakodinamik dari larutan pembentuk film yang mengandung AM harus
diselidiki lebih lanjut.

9. Uji Iritasi Kulit Secara In Vitro

AM-8% K5-E1-T1 dan AM-8% K5-E1-T1 film tidak beracun bagi sel NHFF dan
tidak memiliki potensi untuk menjadi iritasi kulit. ditambahkan AM ke dalam
persiapan pada konsentrasi 1 mg / g tidak menyebabkan lebih banyak
toksisitas dari persiapan. Oleh karena itu, AM-8% K5-E1-T1 dan AM-8% K5-
E1-T1 film dapat dianggap aman untuk digunakan pada kulit.
10. Aktivitas Anti-P.acne dari film AM
AM-8% K5- Film E1-T1 (area a) dapat menghambat pertumbuhan P. acnes
dengan jelas zona memiliki diameter 23,5 ± 1,5 mm. Namun, 8% K5- Film E1-
T1, yang merupakan basis film AM-8% K5-E1-T1, melakukannya tidak
menunjukkan anti-P. aktivitas jerawat (area b). Ini menunjukkan bahwa AM
ditambahkan ke dalam larutan pembentuk film pada konsentrasi 1 mg /g
cukup untuk menghambat pertumbuhan P. acnes.