DEVELOPMENT AND VALIDATION OF

AN HPLC ASSAY FOR DUAL

DETECTION OF GENTAMICIN SULFATE
AND LEUCINE FROM A NOVEL DRY
POWDER FOR INHALATION

Risa Seli (164111025)

GENTAMISIN
 Gentamisin merupakan antibiotik golongan
aminoglikosida yang digunakan pada infeksi berat
yang disebabkan oleh bakteri negatif aerob.
 Gentamisin sistemik (parenteral) diindikasikan
untuk infeksi oleh kuman gram- negative yang
sensitif; antara lain Proteus, Pseudomonas,
Klebsiella, Serratia, E. coli dan Enterobacter.
Kuman-kuman ini antara lain menyebabkan
bakteremia, meningitis, osteomielitis, pneumonia,
inleksi luka bakar, inleksi saluran kencing, inleksi
telinga, hidung, tenggorok dan tularemia.
 Efek samping oleh gentamisin dalam garis
besarnya dibagi dalam tiga kelompok yaitu alergi,
reaksi iritasi dan toksik, serta perubahan biologik.
BAHAN
 Bahan
 Standar referensi Gentamicin Sulfate
dan L-leusin dibeli dari USP.
 NanoGENTTM.

 LC-MS Grade water diterima dari EMD.

 Kalium hidroksida

 Asam borat,

 phthaldialdehyde,

 thiogylycolic asam,

 natrium 1-heptanesulfonat monohidrat,

 asam asetat glasial dibeli dari Sigma

Aldrich.
 Isopropanol (IPA) digunakan dari
Burdick & Jackson dan
 LC-MS grade Methanol (MeOH)
METODE
Metode Derivatisasi
 Semua sampel diderivatisasi sebelum analisis
menggunakan metode berikut:
 440 uL isopropanol dan 160 uL Reagen 2 (1,0 g
Phthaldialdehyde dalam 5 mL Methanol, 95 mL
Reagen 1 [0,4 M asam borat disesuaikan dengan pH
10.4 menggunakan 8 N Kalium hidroksida] dan 2 mL
Thioglycolic asam, larutan yang dihasilkan
disesuaikan dengan pH 10.4 menggunakan 8 N
Kalium hidroksida) ditambahkan ke setiap sampel
(0,4 mL sampel dalam 2 mL autosampler vial). Setiap
sampel kemudian diputar selama 10 detik ± 1 detik
dan dipanaskan dalam oven pada suhu 60 ° C ± 3 ° C
selama 15 menit ± 1 menit. Sampel diizinkan untuk
kembali ke suhu kamar sebelum analisis.
ANALISIS HPLC
 Analisis dilakukan dengan menggunakan HPLC dan
UV deteksi. Pemisahan dicapai dengan C 18, 5 μ, 4,6
× 150 mm kolom dan dengan pencocokan C 18
penjaga kolom (4 × 3 dengan C 18, 5 μ, 4,6 × 150
mm kolom dan dengan pencocokan C 18 penjaga
kolom (4 × 3 dengan C 18, 5 μ, 4,6 × 150 mm kolom
dan dengan pencocokan C 18 penjaga kolom (4 × 3
dengan C 18, 5 μ, 4,6 × 150 mm kolom dan dengan
pencocokan C 18 penjaga kolom (4 × 3 dengan C
18, 5 μ, 4,6 × 150 mm kolom dan dengan
pencocokan C 18 penjaga kolom (4 × 3 mm).
Temperatur kolom ditetapkan pada 20 ° C dengan
deteksi pada 330 nm. Metode isokratik digunakan
laju alir 2,0 ml / menit dengan rincian fase gerak
pada Tabel 1. Di bawah ini :
 Terdapat pengujian – pengujian lainnya untuk
mendukung ketepatan dalam analisis tersebut:
a. Kesesuaian sistem

b. Kesegaran

c. Spesifitas
d. Linearitas

e. Akurasi / pemulihan

f. Ketelitian
g. Ekstraksi filter aerosol

h. Batas kuantitatif

i. Batas deteksi
KESIMPULAN
 Pengujian HPLC dengan deteksi UV telah
dikembangkan dan divalidasi untuk deteksi
ganda L-leusin dan Gentamicin Sulfat dari
formulasi inhalasi serbuk kering
NanoGENTTM. Pengujian ini menyelesaikan L-
leusin dari keempat puncak Gentamicin
Sulfate dalam waktu 20 menit. Kesesuaian
sistem, ketahanan, kekhususan, linieritas,
akurasi / pemulihan, pengulangan, presisi
menengah, LOQ dan LOD telah ditetapkan
dan terbukti memenuhi atau melampaui
persyaratan untuk validasi pengujian sebagai
pengujian deteksi ganda.