Spektrofotometri

apt. Fildza Huwaina F., S.Farm., M.Kes.

 Definisi
Spektrofotometri adalah metode pengukuran kuantitatif yang didasarkan pada
pengukuran absorbsi (penyerapan) radiasi gelombang elektromagnetik.

Spektrofotometer: instrumen yang digunakan untuk mengukur jumlah cahaya

yang diserap atau intensitas warna yang sesuai dengan panjang gelombang

Spektrometer: Alat yang menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang

gelombang tertentu

Fotometer: alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau

diabsorpsikan
 Hukum Lambert-Beer
“Jumlah radiasi cahaya tampak (ultraviolet, inframerah dan
sebagainya) yang diserap atau ditransmisikan oleh suatu larutan
merupakan suatu fungsi eksponen dari konsentrasi zat dan tebal
larutan”
 Hukum Lambert-Beer

Jumlah relatif panjang gelombang cahaya yang terabsopsi ketika

melewati sampel tergantung pada :

1. jarak yang ditempuh sinar ketika melewati sampel (ukuran kuvet

- b)
2. jumlah senyawa kimia dalam sampel yang mengabsopsi sinar
(konsentrasi analit – c)
3. Kemampuan sampel mengabsopsi sinar (molar absorptivity - e)
 Prinsip Kerja
Spektrum elektromagnetik dibagi dalam beberapa daerah cahaya. Suatu
daerah akan diabsorbsi oleh atom atau molekul dan panjang gelombang
cahaya yang diabsorbsi dapat menunjukan struktur senyawa yang diteliti
 Bagian Spektrofotometer
1. Sumber sinar polikromatis: sumber sinar
polikromatis dengan berbagai macam rentang
panjang gelombang.
2. Monokromator: penyeleksi panjang
gelombang yaitu mengubah cahaya yang
berasal dari sumber sinar polikromatis menjadi
cahaya monokromatis (pendispersi)
3. Sel sampel: tempat meletakan sampel
4. Detektor: menangkap cahaya yang diteruskan
dari sampel dan mengubahnya menjadi arus
listrik.
5. Read out: suatu sistem baca yang menangkap
besarnya isyarat listrik yang berasal dari
detector
Jenis Spektrofotometer

 UV/ Vis, UV-VIS

 Atomic absorb spectroscopy: AAS
 Mass spectroscopy: MS
 Nuclear magnetic resonance (NMR)
 Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy
UV-VIS

Alat dengan teknik spektrofotometer pada daerah ultra-violet dan sinar tampak,
digunakan mengukur serapan sinar ultra violet atau sinar tampak oleh suatu materi
dalam bentuk larutan.

Spektrum elektromagnetik dipisahkan dalam beberapa region berdasarkan panjang

gelombang.
 X-ray (0.01-10 nm)
 spektrofotometer UV/Vis mengukur pada pada panjang geombang UV (10-400 nm)
dan visible (380-760 nm) dekat daerah infra-red (750-2250 nm)
Spektrum elektromagnetik
 Warna Komplementer
Pada spektrofotometer UV-Vis, warna yang diserap oleh suatu senyawa atau
unsur adalah warna komplementer dari warna yang teramati. Hal tersebut dapat
diketahui dari larutan berwarna yang memiliki serapan maksimum pada warna
komplementernya.
 Langkah penggunaan
spektrofotometer
1. Kalibrasi alat: mencari panjang gelombang maksimum
sesuai dengan reagen yang digunakan
2. Membuat kurva standar
3. Mengukur sampel
Kalibrasi Alat

 Membuat larutan blangko (aquadest/pelarut murni yang digunakan

dalam sampel)
 Masukkan larutan blangko ke dalam kuvet yang bersih (jangan
sampai tersentuh oleh tangan)
 Memasang pada alat kemudian atur sehingga harga absorbasi = 0
dan transmitan = 100 pada panjang gelombang 590 nm (sesuai
rentang reagen)  panjang gelombang maksimum
 Membuat Kurva Standar
 Fungsinya: Untuk mengurangi atau
menghilangkan kesalahan akibat dari
galat alat (noise)
 Digunakan senyawa murni pada
beberapa konsentrasi
 Rentang konsentrasi melingkupi
konsentrasi sampel
 Berdasar pada persamaan Regresi
Linier
Mengukur sampel
 Kurva dapat menunjukkan hubungan antara absorbansi dan
konsentrasi.
 Siapkan larutan dengan konsentrasi tertentu dan analisa berdasarkan
panjang gelombang (λ) maksimum, kemudian plot kan absorbansi pada
fungsi konsentrasi.
 Hubungan antara absorbansi terhadap konsentrasi akan linear (A≈C)
apabila nilai absorbansi larutan antara 0,2-0,8 (0,2 ≤ A ≥ 0,8) atau
sering disebut sebagai daerah berlaku hukum Lambert-Beer. Jika
absorbansi yang diperoleh lebih besar maka hubungan absorbansi tidak
linear lagi.
Contoh Langkah-Langkah