FORMULASI DAN TEKNOLOGI

SEDIAAN STERIL

NAOMI YULIA FAHRANI (O1A1 18 131)

FIRMAN OKTIVENDRA (O1A1 18 139)
MUHAMMAD AMMAR (O1A1 18 167)
Tes LAL adalah metode dari tes endotoksin bakteri (BET), untuk mendeteksi kehadiran,
dan untuk beberapa cara untuk menentukan tingkat, bakteri Gram-negatif endotoksin
dalam sampel atau zat tertentu. Farmakope edisi terbaru membawa pernyataan yang
menyatakan bahwa di mana istilah apirogenik atau bebas pirogen digunakan itu harus
ditafsirkan sebagai makna bahwa sampel produk akan memenuhi batas untuk endotoksin
bakteri.
LAL adalah ekstrak air yang diperoleh setelah lisis sel darah(amoebosit).
 METODE LAL TEST
Metode LAL TEST terbagi atas 3, yaitu :

1. Gel-gumpalan
Gel-gumpalan adalah metode yang memanfaatkan kaskade pembekuan yang dimediasi endotoksin, yang
secara alami sering terjadi di dalam kepiting tapal kuda, untuk menghasilkan gumpalan agar-agar setelah
inkubasi di 37°C selama ±1 jam dengan endotoksin. Gumpalan gel meniru pembekuan darah Limulus in vivo.
Di sini protein pembekuan dipecah oleh enzim pembekuan yang diaktifkan, di mana titik produk pembelahan
yang tidak larut menyatu dan membentuk gel.
Uji bekuan gel
Pengujian dilakukan di cawan Petri, menyesuaikan volume dan menjaga konstan hubungan antara
mereka. Volume yang sama dari lisat dan larutan uji atau standar (biasanya 10 L) ditambahkan ke cawan Petri.
Campuran reaksi diinkubasi pada suhu 37ºC selama 1 jam. Sejumlah seri dua kali lipat pengenceran diuji dan
titik akhir gumpalan gel ditentukan dengan menambahkan 1 L larutan biru metilen baru 0,2%, mengamati
pencampuran (reaksi negatif) atau distribusi pada permukaan gel (reaksi positif). Konsentrasi endotoksin adalah
dihitung dengan mengalikan kebalikan dari pengenceran terbesar dari larutan uji yang memberikan titik akhir
positif dengan sensitivitas (terhadap endotoksin) dari sediaan lisat; hasil dinyatakan dalam EU/mL (Rosimar L.
Silveira,dkk,2004).
2. Turbidimetri
Uji turbidimetri, bersama dengan uji kromogenik, merupakan metode fotometrik. Dengan tes ini, selama
proses pembentukan gumpalan, campuran reaksi sampel lisat menjadi semakin keruh.Cara kerja :Instrumen
dapat mengukur perubahan kekeruhan diprakarsai oleh reaksi endotoksin LAL dan jangka waktu reaksi secara
otomatis untuk mendapatkan perubahan kekeruhan. Endotoksin bakteri gram negatif, melalui lipopolisakarida
dari dinding sel, mengkatalisis aktivasi proenzim di LAL. Laju aktivasi awal ditentukan oleh konsentrasi
endotoksin yang ada. Enzim yang diaktifkan (koagulase) terhidrolisis ikatan spesifik dalam protein pembekuan
(koagulogen) juga ada di LAL. Sekali terhidrolisis, koagulin yang dihasilkan berasosiasi sendiri dan membentuk
gumpalan agar-agar yang keruh ( Mottar,Jozef,dkk,1993).
3. Turbidimetri
Uji turbidimetri, bersama dengan uji kromogenik, merupakan metode fotometrik. Dengan tes ini, selama
proses pembentukan gumpalan, campuran reaksi sampel lisat menjadi semakin keruh.Cara kerja :Instrumen
dapat mengukur perubahan kekeruhan diprakarsai oleh reaksi endotoksin LAL dan jangka waktu reaksi secara
otomatis untuk mendapatkan perubahan kekeruhan. Endotoksin bakteri gram negatif, melalui lipopolisakarida
dari dinding sel, mengkatalisis aktivasi proenzim di LAL. Laju aktivasi awal ditentukan oleh konsentrasi
endotoksin yang ada. Enzim yang diaktifkan (koagulase) terhidrolisis ikatan spesifik dalam protein pembekuan
(koagulogen) juga ada di LAL. Sekali terhidrolisis, koagulin yang dihasilkan berasosiasi sendiri dan membentuk
gumpalan agar-agar yang keruh ( Mottar,Jozef,dkk,1993).
 Evaluasi Tes LAL
Evaluasi Tes LALKeuntungan dari tes LAL:● Sejumlah kecil sampel yang diuji
diperlukan untuk uji LAL.● Beberapa sampel dapat diuji setiap hari.● Hanya satu
pekerja terlatih yang dibutuhkan untuk melakukan pengujian.● Tes LAL lebih
ekonomis, meskipun biaya awal lebih tinggi.● Tingkat endotoksin yang lebih rendah
dapat dideteksi dibandingkan dengan uji pirogen kelinci.● Metode pengujian sangat
standar.● Data untuk evaluasi akhir tes dapat diperoleh dengan relatif
cepat.Kekurangan dari tes LAL:● Penekanan tinggi pada penerapan prosedur
pengujian yang tepat.● Sedikit gangguan dapat mempengaruhi hasil tes ( Blechova,R
dan D,Pivodova,2001 )
METODE PENGHILANGAN
PIROGEN
Metode penghilang pirogen yaitu :

Penghilangan Pirogen Dalam Aplikasi Biomedis

Pirogen adalah fragmen dinding sel bakteri,

pirogen bukan bakteri tetapi karbohidrat kompleks.
Menjadi stabil secara kimia, pirogen tidak harus
dihancurkan oleh kondisi yang membunuh bakteri.
Pyrogenic berarti menyebabkan panas. Jika pirogen
disuntikkan ke manusia maka dapat menyebabkan
peningkatan suhu (demam).Pirogen dapat
menyebabkan demam saat disuntikkan, tetapi tidak
masalah jika tertelan oleh manusia.
 Pembersih Pirogen

Deterjen enzimatik proteolitik dengan kisaran pH antara

6.0 dan 8.0, surfaktan non-ionik.
Isopropanol (IPA), pelarut ini sering dipilih dalam
aplikasi medis. Pelarut Isopropanol memiliki banyak
kedudukan dalam penghilangan pirogen.
Kunci pemilihan pelarut di sini harus tegangan
permukaan. semakin rendah semakin baik. Nilai dari 22
dyne/cm (nM/mm) untuk IPA mungkin tidak rendah
cukup untuk membersihkan celah, retakan, dan celah.
 Penghapusan Pirogen dari Penghapusan pirogen dari
Air suku cadang
Ada dua pendekatan yang umumnya diikuti Pirogen sangat stabil secara termal di bawah
untuk mendapatkan pirogen dari air. titik didih air, dan cukup tidak peka sensitif
Ultrafiltrasi (UF) adalah cara terbaik untuk terhadap perubahan pH. Konsentrasi asam
menghilangkan kontaminasi pirogen dari air. yang tinggi atau basa diperlukan untuk
Ultrafilter (membran nilon 66 bermuatan menghancurkan karbohidrat kompleks ini.
hidrat dalam waktu yang cukup singkat.
positif) direkatkan dianjurkan untuk
penghilangan pirogen umumnya dilakukan
"pemolesan" air. Deionisasi (DI) atau reverse
dengan kekuatan mekanik ditambah dengan air
osmosis RO. Ultrafilters menghilangkan deterjen.
sebagian besar organik lebih dari 1.000 berat- Urutan dasarnya rendam, cuci dan bilas,
berat molekul rata-rata, seperti pirogen. periksa; kemudian disterilkan dan
pirogen secara istimewa menyerap ke divalidasi.Seperti kebanyakan situasi
alumina. pembersihan, baik berair atau pembersihan
pelarut dapat digunakan.
Langkah-Langkah Pembersih Pirogen

Penghapusan pirogen suhu

tinggi pada siklus: 270–275 Rendam bagian medis selama
°F (132–135 °C) dengan minimal 5 menit dan
waktu pemaparan minimal maksimal 10 menit secara
10 menit. enzimatik deterjen

Pembersihan 1 menit dengan Nitrogen dan pada

pengeringan vakum minimal 15 menit.Perhatikan Bilas secara menyeluruh dengan
sejauh mana suhu harus dinaikkan karena pirogen air hangat,dan
sangat termostabil pada suhu rendah.Sterilisasi memastikan untuk mengairi
dapat dilakukan setelah itu dalam satu tahap
antarmuka.
dengan bahan kimia tertentu. Etilen oksida (EO),
karsinogen dan mutagen, adalah pilihan
komersial. Siklus sterilisasi adalah: 100% EO
pada 131°F (55°C) selama 60–180 menit
 Daftar Pustaka
Blechova,R dan D,Pivodova,2001, LIMULUS AMOEBOCYTE LYSATE (LAL)
TESTAN ALTERNATIVE METHOD FOR DETECTION OF BACTERIAL
ENDOTOXINS,Journal ACTA VET. BRNO,Vol 70(1).

Hurley JC. Endotoxemia: methods of detection and clinical correlates. Clin.

Micobiol. Rev. 1995; 8: 268–292.

John,Durkee, 2006, Management of Industrial Cleaning Technology and

Processes,Elsevier Science : english

Mottar,Jozef, Jan De Block, Martine Merchieres, Kristen Vantomme,And Renaat

Moermans,1993, Routine Limulus amoebocyte lysate (LAL) test for endotoxin
determination in milk using a Toxinometer ET-201, Journal of Dairy Jiesearc,Vol
60(1).

Rosimar L. Silveira; Simone S. Andrade, Cleber A. Schmidt,Renata G. Casali,dan

Sérgio L. Dalmora,2004, COMPARATIVE EVALUATION OF PYROGENS
TESTS IN PHARMACEUTICAL PRODUCTS, Brazilian Journal of
Microbiology,Vol 35(1).