UNIVERSITAS SRIWIJAYA

FAKULTAS KEDOKTERAN

PRINSIP PEMERIKSAAN
LABORATORIS
IMMUNOLOGIS DAN
INTERPRETRASINYA:
INFEKSI DAN ALERGI

Kemas Ya’kub Rahadiyanto

Bagian Patologi Klinik
2018
 Tujuan Instruksional
• Mahasiswa mengetahui dan memahami prinsip
pemeriksaan imunologi
• Mahasiswa mengetahui dan memahami aspek pre
analitik, analitik dan post analitik pemeriksaan
imunologi
• Mahasiswa mengetahui dan dapat menginterpretasi
hasil pemeriksaan imunologi infeksi
• Mahasiswa mengetahui dan dapat menginterpretasi
hasil pemeriksaan imunologi alergi
PRINSIP PEMERIKSAAN
IMUNOLOGI
 Pendahuluan
• Dasawarsa 1960
• Penentuan analit secara kuantitatif

pemeriksaan untuk mengukur derajat

imunitas/kadar Ab atau Ag dalam cairan
tubuh/serum seseorang

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 4

 Konsep dasar Imunoasai

• Konsep dasar imunoasai

• Komponen yang terpenting dalam imunoasai
– Spesifisitas dari antibodi
– Valensi dari antibodi
– Aviditas dari antibodi
– Ukuran kuantitas antibodi

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 5

 Konsep dasar Imunoasai
• Reaksi Ag dan Ab  ikatan kompleks (Ag:Ab)
– Ab + Ag  Ab:Ag
• Reaksi bolak balik  disosiasi
– Ab:Ag  Ab + Ag
• Equilibrium
– Ab + Ag Ab:Ag

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 6

• Afinitas Ab terhadap Ag  ukuran kekuatan ikatan
antara Ab:Ag dalam bentuk kompleks imun
• Makin besar afinitas  makin banyak Ab dan Ag
yang terikat dalam kompleks pada saat equilbirium
• Faktor yang mempengaruhi:
– Ikatan hidrogen
– Ikatan van der Waals
– Daya elektrostatik
– Ikatan hidrofobik

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 7

Komponen yang terpenting dalam
imunoasai

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 8

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 9
 Spesifisitas dari antibodi
• Spesifik  lock:key
• Reaksi silang dengan struktur molekul Ag yang
mirip

• Ab spesifik  binding site untuk struktur

molekul Ag yang unik
• Ab tidak spesifik  dapat mengikat macam Ag
~ struktur molekul beda
dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 10
 Valensi dari antibodi
• Jumlah binding site yang potensial dari Ab
terhadap Ag spesifik
• Bivalen, multivalen

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 11

 Aviditas dari antibodi
• Besarnya kemampuan Ab mengikat Ag
• Refleksi dari afinitas (besar daya ikat) dan
jumlah binding site (valensi)

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 12

 Ukuran kuantitas antibodi

• Untuk menentukan derajat imunitas  satuan

atau unit tertentu
– Kualitatif  ada/tidak ada Ab dalam serum, 
bahan yang diperiksa ~ VDRL
– Semikuantitatif  pengenceran serum secara
progresif = titer
– Kuantitatif  kurva baku serum kontrol

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 13

 ASPEK
PRE ANALITIK,
ANALITIK DAN
POST ANALITIK
PEMERIKSAAN
IMUNOLOGI
 Collection of Serum for
Immunologic Tests
• Specific antibodies can be detected in serum and other body fluids
(eg, synovial fluid, CSF).
– For diagnosis of infectious disease, a blood sample using a 7-mL
red-topped tube should be obtained at illness onset (acute
phase), and the other sample should be drawn 3 to 4 weeks
later (convalescent phase). In general, serologic test usefulness
depends on a titer increase in the time interval between the
acute and the convalescent phase.
– Perform the serologic test before doing skin testing. Skin testing
often induces antibody production and could interfere with
serologic test results.
– Label the sample properly and submit requested information.
Place specimen in biohazard bag. Send samples to the
laboratory promptly. Hemolyzed samples cannot yield accurate
results. Hemoglobin in the serum sample can interfere with
complement-fixing antibody values.
dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 15
 Berbagai Macam Immunoassay
Faktor yg mempengaruhi Imunoasai tak berlabel
• Sifat dari antigen
• Elektrolit dan pH
• Waktu dan suhu
• Perbandingan (ratio) antigen dan antibodi
• Mekanisme daya tahan tidak spesifik
– Flora normal
– Mikrobisidal normal ~ HCl lambung
– Mikrobisidal abnormal ~ lysozim
– Interferon
 Imunoasai tak berlabel

– Uji presipitasi
– Uji aglutinasi
– Uji hemaglutinasi
– Fiksasi komplemen
– Uji netralisasi

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 18

 Uji Presipitasi
• Suatu Ag larut berx dgn Ab  presipitat
• UP lempeng (slide) ~ VDRL mikro
• UP tabung (tube test) ~ VDRL makro
• UP tabung kapiler ~ CRP, Lancefield grouping
• UP cincin ~ Ab terhadap albumin telur
• Uji Difusi Agar (Gel Diffusion Tests) ~ jamur
• Imunoelektroforesis ~ MM
 Uji Aglutinasi
• Rx antara Ab dengan Ag seluler/permukaan sel
• UA Lempeng ~ Widal
• UA tabung ~ Widal, Weil Felix
• U Hambat Aglutinasi ~ RPHA HBsAg
• A tak langsung ~ tes kehamilan indirek (pasif),
Rose-Waaler (Rh incomplete Ab)
 Uji Hemaglutinasi
• Uji aglutinasi dari sel darah merah domba

• Darah domba
– Mudah diperoleh, uniform , dapat diukur
– Cukup stabil
– Lisis mudah dilihat
– Ab terhadap SDM domba mudah dibuat
 Fiksasi Komplemen
• Serum pdrt + susp Ag & Kompl ikatan Ab-
Ag- Kompl
• Di+ SDM sensitized  tidak lisis = positif
• Exc: Uji Wasserman, Ab mycoplasma
pneumoniae, Ab fungi, Ab parasit
 Uji Netralisasi
• Pengenceran serum di+ sejumlah toksin/susp
kuman  diuji reaktivitas toxin / viabilitas
kuman
• Antitoksin + Toksin  Netralisasi Toksin
• Exc: toksin antidifteri, ASO,
 Imunoasai berlabel
– Asai berlabel fluoresens
– Asai berlabel radioisotop
– Luminescent immunoasai
– Asai berlabel enzim (ENZYME-IMMUNOASSAY=EIA)
– Uji imunoperoksidase (IPO)
– Asai imunokromatografik (IMMUNOCHROMATOGRAPHIC
ASSAY)

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 24

 Asai berlabel Fluorescen
• Mol. Menghisap energi dr su radiasi, elektron
didistribusi kembali  tereksitasi
• Dipancarkan sbg cahaya
• Jenis:
– Fluorescen isthiocyanate
– Rhodamine isothyocyanate
– Umbelliferone
– Lanthanide chelate
Imunofluorescen
• Langsung
– Ag yg akan ditentukan difix, + Ab yg diket & label
fluorescen ~ Tb, Herpes virus, parasit
• Tak Langsung
– Ag yg diket + Ab pdrt  + AHG berlabel ~ ANA
 Asai berlabel radioisotop

www.infonuklir.com

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 27

 Luminescent Immunoassay
• Energi yg dibangkitkan oleh rx kimia
• Bioluminesens
• Chemiluminesecence

• Keuntungan peroksidase
– Mudah didapat
– Pengurangan aktivitas relatif kecil
– Rx oksidasi ditingkatkan dengan penambahan
luciferin sintetik
• Kelemahan
– Variasi pH dan suhu
– Ketidak murnian reagen
– Nukleotida dan enzim  konversi
– Kuvet atau aquadestilata
dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 30
 Asai berlabel enzim
(ENZYME-IMMUNOASSAY=EIA)

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 31

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 32
 Asai imunokromatografik
(IMMUNOCHROMATOGRAPHIC ASSAY)

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 33

 Interpreting Results of Immunologic Tests
The following factors affect test results:
1. History of previous infection by the same organism
2. Previous vaccination (determine time frame)
3. Anamnestic reactions caused by heterologous antigens: an anamnestic
reaction is the appearance of antibodies in the blood after
administration of an antigen to which the patient has previously
developed a primary immune response
4. Cross-reactivity: antibodies produced by one species of an organism
can react with an entirely different species (eg, Tularemia antibodies
may agglutinate Brucella and vice versa, rickettsial infections may
produce antibodies reactive with Proteus OX19)
5. Presence of other serious illness states (eg, lack of immunologic
response in agammaglobulinemia, cancer treatment with
immunosuppressant drugs)
6. Seroconversion: the detection of specific antibody in the serum of an
individual when this antibody was previously undetectable

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 34

 Serologic vs Microbiologic Methods
• Serologic testing for microbial immunology evaluates
the presence of antibodies produced by antigens of
bacteria, viruses, fungi, and parasites. The best
means of establishing infectious disease etiology is
by isolation and confirmation of the involved
pathogen. Serologic methods can assist or confirm
microbiologic analysis when the patient is tested late
in the disease course, antimicrobial therapy has
suppressed organism growth, or culture methods
cannot verify a causative agent.

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 35

 Pemeriksaan Lain
• Hematologi  Darah Perifer lengkap
– Jumlah WBC,
– Hitung Jenis
• Urinalisis
– Lekosit Urine
– Nitrit
• Kimia Klinik

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 36

 PEMERIKSAAN IMUNOLOGI
INFEKSI DAN INTERPRETASINYA
 Typhus

• Antibodi
– Widal  antibodi
Salmonella terhadap
antigen O-somatik dan H-
flagellar di dalam darah.
– IgM & IgG  typhidot,
tubex tf

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 38

 Widal
• Georges-Fernand-Isidor
Widal; (born on
March 9, 1862 in Dellys,
Algeria and died in Paris
on January 14, 1929)
was a French physician.

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 39

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 40
 Dengue
• WHO
– Hematokrit ↗ 20% dari masa konvalesen
– Trombosit ↘ < 100.000/ug

• Antibodi  IgM & IgG

• Antigen  NS1

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 41

 DEMAM BERDARAH
• Gambaran Klinis
Demam yang akut, selama 2 hingga 7 hari, dengan 2 atau lebih gejala ? gejala
berikut : nyeri kepala, , nyeri otot, nyeri persendian, bintik-bintik pada kulit sebagai
manifestasi perdarahan dan leukopenia.

• Kriteria Untuk Diagnosa Laboratorium

Satu atau lebih dari hal-hal berikut :
Isolasi virus dengue dari serum, plasma, leukosit ataupun otopsi.
Ditemukannya anti bodi IgG ataupun IgM yang meningkatkan tinggi titernya
mencapai empat kali lipat terhadap satu atau lebih antigen dengue dalam
spesimen serta berpadangan.
Dibuktikan adanya virus dengue dari jaringan otopsi dengan cara immunokimiawi
atau dengan cara immuno-flouresens, ataupun didalam spesimen serum dengan
uji ELISA
Dibuktikan dengan keberadaan gambaran genomic sekuen virus dari jaringan
otopsi, sediaan serum atau cairan serebro spinal (CSS), dengan uji Polymerase
Chain Reaction ( PCR).

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 42

Pola Reaksi Imun terhadap Infeksi
Dengue

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 43

Pola reaksi imun infeksi Dengue
(lanj.)

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 44

Malaria

• Preparat
– Sediaan Apus
Tebal
– Sediaan Apus
Tipis

• Antigen
dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 45
 MALARIA
• Malaria adalah penyakit yang menyerang manusia, burung, kera
dan primata lainnya, hewan melata dan hewan pengerat, yang
disebabkan oleh infeksi protozoa dari genus Plasmodium dan
mudah dikenali dari gejala meriang (panas dingin menggigil) serta
demam berkepanjangan.
• 1950  dibasmi di Eropa, Amerika.
• Namun penyakit ini masih menjadi masalah besar di beberapa
bagian Benua Afrika dan Asia Tenggara. Sekitar 100 juta kasus
penyakit malaria terjadi setiap tahunnya dan sekitar 1 persen
diantaranya fatal  penyebab utama kematian di negara
berkembang.
Pertumbuhan penduduk yang cepat, migrasi, urbanisasi, sanitasi
yang buruk, serta daerah yang terlalu padat, membantu
memudahkan penyebaran penyakit tersebut.

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 46

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 47
 Sifilis
• penyakit kelamin menular yang disebabkan oleh bakteri spiroseta,
Treponema pallidum.
• Penularan biasanya melalui kontak seksual, tetapi ada beberapa
contoh lain seperti kontak langsung dan kongenital sifilis.
• Gejala dan tanda dari sifilis banyak dan berlainan; sebelum
perkembangan tes serologikal, diagnosis sulit dilakukan dan
penyakit ini sering disebut "Peniru Besar" karena sering dikira
penyakit lainnya.
• Di AS, dilaporkan sekitar 36.000 kasus sifilis tiap tahunnya, dan
angka sebenarnya diperkiran lebih tinggi. Sekitar 3/5 terjadi
kepada lelaki.
• Bila tidak terawat, sifilis dapat menyebabkan efek serius seperti
kerusakan sistem saraf, jantung, atau otak. Sifilis yang tak terawat
dapat berakibat fatal.

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 48

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 49
Perjalanan penyakit

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 50

 Ways to diagnose syphilis
• Serology
• Dark field microscopy
• PCR
• Clinical

• Treponemes cannot be cultured in vitro

 Indications for testing.
• Screening attendees at antenatal clinics
• Screening attendees at SH clinics
• Screening donated blood samples
• Confirmation of positive screening tests
• Diagnostic testing in those with suggestive
clinical features.
• Monitoring the therapeutic response
 How can we test for Syphilis?
• Non-Specific Treponemal Tests
VDRL (lecithins)/RPR(cardiolipin)
Good for monitoring Rx

• Specific Treponemal Tests.

FTA (“gold standard”, subjective)
TPPA/TPHA (very sensitive)
Immunoblot (Innolia) (good but still early days)
Treponemal IgM/IgG EIA (good commercial automated screening
test)
Treponemal IgM (detected very early)
Stay positive therefore useless for diagnosing re-infection or response to therapy.
 How can we test for Syphilis?
• Traditionally screening was done with a non-
treponemal test such as RPR or VDRL. Some smaller
labs with low volumes still do this.

• Now vast majority of labs screen with a treponemal

test and then confirm with a non-treponemal test.
What problems might this lead to?
 How can we test for Syphilis?
• A common result now is Treponemal IgM/IgG
positive by EIA and a negative VDRL.
• What scenarios can give rise to this result?
• Extra work and management dilemnas for
Sexual Health consultants.
Inno-Lia Immunoblot
 Timing of testing
• After appearance of lesion suggestive of primary
syphilis, only negative serology at three months will
exclude syphilis.
• However the majority of patients have positive
serology at time of symptoms.
• Some patients presenting with early chancre will
have both negative treponemal and non-treponemal
serological tests.
• Once infected, treponemal serological tests will
remain positive for life except occasionally in very
early treated syphilis.
 Effect of Treatment on Testing
• VDRL and Treponemal specific IgM fall with
treatment. However they may also become
negative in chronic disease.

Other Treponemal specific tests may decrease in

titre but stay positive for the rest of the
patients life. (except if disease treated really
early)
 Pitfalls
• Screening not recommended with a non-treponemal
test alone ie VDRL due to the potential for false
negatives (usually early disease or prozone effect).
• False positives: Can occur with both treponemal non
specific tests and treponemal specific tests.
• If positive test results, repeat on same sample and on
a repeat sample from the patient.
• HIV infection can play havoc with syphilis testing.
Prevalensi HIV
Gejala Klinis dan Virus HIV
• Bisa dilihat dari 2 gejala yaitu gejala Mayor dan gejala Minor :

Gejala Mayor:
- Berat badan menurun lebih dari 10% dalam 1 bulan
- Diare kronis yang berlangsung lebih dari 1 bulan
- Demam berkepanjangan lebih dari 1 bulan
- Penurunan kesadaran dan gangguan neurologis
- Demensia/ HIV ensefalopati

Gejala MInor:
- Batuk menetap lebih dari 1 bulan
- Dermatitis generalisata
- Adanya herpes zostermultisegmental dan herpes zoster berulang
- Kandidias orofaringeal
- Herpes simpleks kronis progresif
- Limfadenopati generalisata
- Infeksi jamur berulang pada alat kelamin wanita
- Retinitis virus sitomegalo
 PEMERIKSAAAN IMUNOLOGI
ALERGI DAN INTERPRETASINYA
Leaflet
Lab ABC
TERIMA KASIH
 Bacaan Lanjutan
• Handojo, I; Pengantar Imunoasai Dasar, Airlangga
University Press, 2003
• Burnett D, Crocker J: The Science of Laboratory
Diagnosis, 2nd eds, John Wiley & Son Ltd, Sussex,
2005
• Fischbach, FT: Manual of Laboratory & Diagnostic
Tests, 7th Ed, Lippincott Williams & Wilkins, 2004

dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 71

Infeksi
5 Infeksi sitomegalovirus 2
6 Meningitis 3B
7 Ensefalitis 3B
8 Malaria serebral 3B
9 Tetanus 4A
10 Tetanus neonatorum 3B
11 Toksoplasmosis serebral 2
12 Abses otak 2
13 HIV AIDS tanpa komplikasi 4A
14 AIDS dengan komplikasi 3A
15 Hidrosefalus 2
16 Poliomielitis 3B
17 Rabies 3B
18 Spondilitis TB 3A
dr. Kemas Yakub, SpPK, MKes 73