Kinetika Bisubstrat

Glutathione S‑Transferase:
Eksperimen Kolorimetri
untuk Pengantar
Laboratorium Biokimia
 Kelompok 2
Grace Panjaitan Grasela Rumapea
31S18008 31S18009

Fenny Napitupulu Naomi Siringo

31S18025 31S18020
 Outline
TUJUAN

PERCOBAAN HASIL &

PEMBAHASAN

KESIMPULAN
 01
Tujuan
 Untuk mengembangkan keterampilan dalam desain eksperimen,
interpretasi data, analisa hasil Kinetika Bisubstrat Glutathione
S‑Transferase
 02
Percobaan
Percobaan berikut dibagi menjadi 3 pekan , diantaranya :

Minggu 1 :
Lisis sel dan ekstraksi protein
Pemuinian GST- gxHis dengan komatografi afinitas logam immobilisasi
Minggu 2 :
 Penentuan konsentrasi protein dengan uji Bradford
 Karakterisasi produk pemurnian oleh SDS-PAGE
Minggu 3 :
 Uji kinetik GST
 Interpretasi, penyajian, dan analisis data
 03
Hasil dan
Pembahasan
1. Pemurnian dan Karakterisasi GST

(A) Isolasi GST dari lisat sel bakteri

(B) Persyaratan bisubstrat untuk transfer

glutathione oleh GST
 2. Mekanisme Katalisis Bisubstrat dan Model Kinetiknya yang Sesuai.

(A) Reaksi perpindahan tunggal (C) Reaksi ping-pong (atau

berlangsung melalui (A) terurut perpindahan ganda) berlangsung
melalui pembentukan zat antara
enzim tersubstitusi dan dibedakan
oleh garis yang paling cocok tidak
berpotongan

(B) pengikatan acak kosubstrat, yang

dibedakan oleh posisi garis intersep
yang paling cocok dalam plot timbal
balik ganda yang sesuai
3. Analisis Kinetik Dari Mekanisme Katalitik Bisubstrat Dari S. Japonicum GST.

Lineweaver−Burk double-reciprocal plot digunakan untuk menentukan parameter kinetik dari S

4. Investigasi Urutan Pengikatan Substrat dengan Profil Inhibitor

S. japonicum GST
 04
Kesimpulan
 - Eksperimen memperkenalkan konsep kinetika enzim bisubstrat dalam konteks laboratorium ekstraksi, pemurnian,
dan karakterisasi protein prinsip pertama.
 - Teknik biokimia yang digunakan secara luas ditekankan, termasuk kromatografi afinitas protein, SDS- PAGE, Uji
Bradford, dan Uji kinetik enzim kolorimetri yang dapat digunakan dalam di laboratorium pengantar biokimia.
 - Enzim Bisubstrat mengkatalisis beberapa reaksi kimia dalam sistem kehidupan dan termasuk anggota kelas enzim
transferase, oksidoreduktase, dan ligase yang dapat digunakan dalam kerja model kinetik enzim bisubstrat yang
penting terkhusus untuk ahli biokimia .
 - Kelemahannya adalah karena model seperti itu jarang dieksplorasi di laboratorium biokimia sarjana, sehingga
diperlukan metode yang terdefinisi dengan baik, dapat dilacak, dan ekonomis untuk karakterisasi aktivitas enzim
Bisubstrat dengan mengunakan penerapan Uji kolorimetri untuk menyelidiki parameter kinetik transfer Glutathione
oleh Glutathione S- transferase, Dimana metode tersebut bergantung pada bahan yang tersedia secara komersial dan
menggunakan kondisi eksperimental yang cocok untuk aplikasi di laboratorium pengantar biokimia.
 - Karena penggunaannya yang luas dalam rekayasa molekuler dan aplikasi pemurnian protein, banyak ahli biokimia
telah memiliki pengalaman kerja dan akses siap pakai ke sumber GST. Dengan demikian, penggunaan enzim
merupakan pilihan yang menarik dan pragmatis untuk studi di laboratorium biokimia sarjana.
Thankyou…