METODE ANALISIS KUALITATIF KARBOHIDRAT

Oleh: I Putu Bandem Arista Putra P07134013045

POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR JURUSAN ANALIS KESEHATAN

Metode Analisis Kualitati Dan Kuantitati Ka!"ohid!at

#$ U%i Molis&h Uji ini untuk semua jenis karbohidrat. Monosakarida, disakarida, dan po isakarida akan memberikan hasi positi!. Uji positi! jika timbu "in"in merah un#u $an# merupakan kondensasi antara !ur!ura atau hidroksimeti !ur!ura den#an %&na!to da am pereaksi mo is"h. a$ P!insi' Prinsip reaksi ini ada ah dehidrasi sen$a'a karbohidrat o eh asam su !at pekat. (ehidrasi heksosa men#hasi kan sen$a'a hidroksi meti !ur!ura , sedan#kan dehidrasi pentosa men#hasi kan sen$a'a !u !ura . Uji positi! jika timbu "in"in merah un#u $an# merupakan kondensasi antara !ur!ura atau hidroksimeti !ur!ura den#an a&na!to da am pereaksi mo ish. "$ (a!a Ke!%a 1. Masukkan 15 tetes arutan uji karbohidrat keda am tabun# rekasi $an# masih kerin# dan bersih ). *ambahkan 3 tetes pereaksi Mo is"h. +ampurkan den#an baik. 3. Mirin#kan tabun# rekasi, a u a irkan den#an hati&hati 1 m, -)./4 pekat me a ui dindin# tabun# supa$a tidak ber"ampur. 4. Perhatikan terbentukn$a "in"in ber'arna un#u pada batas antara kedua apisan $an# menandakan reaksi positi! karbohidrat. 5. +atat hasi dan buat ah kesimpu ann$a. 0. ,akukan tes terhadap arutan # ukosa, #a aktosa, aktosa, sukrosa, ma tosa, arabinosa, arutan 11 ami um dan se u osa 2kapas3 $an# disuspensikan da am air.

)$ U%i Benedi&t Uji Benedi"t ada ah uji kimia untuk men#etahui kandun#an #u a 2karbohidrat3 pereduksi 2$an# memi iki #u#us a dehid atau keton bebas3 . 4u a pereduksi me iputi semua jenis monosakarida dan beberapa disakarida seperti aktosa, # ukosa dan ma tosa. Uji benedi"t berdasarkan reduksi +u)5 menjadi +u5 o eh #u#us a dehid atau keton bebas da am suasana a ka is, biasan$a ditambahkan 6at pen#omp eks seperti sitrat atau tatrat untuk men"e#ah terjadin$a pen#endapan +u+/3. Uji positi! ditandai den#an terbentukn$a endapan merah bata, kadan# disertai den#an arutan $an# ber'arna hijau, merah, atau oran#e. Pada uji Benedi"t, pereaksi ini akan bereaksi den#an #u#us a dehid, ke"ua i a dehid da am #u#us aromatik, dan a pha hidroksi keton. / eh karena itu, meskipun !ruktosa bukan ah #u a pereduksi, namun karena memi iki #u#us a pha hidroksi keton, maka !ruktosa akan berubah menjadi # ukosa dan mannosa da am suasana basa dan memberikan hasi positi! den#an pereaksi benedi"t.

Untuk men#etahui adan$a monosakarida dan disakarida pereduksi da am makanan, samp e makanan di arutkan da am air, dan ditambahkan sedikit pereaksi benedi"t. (ipanaskan da am 'aterbath se amaa 4&10 menit. .e ama proses ini arutan akan berubah 'arna menjadi biru 2tanpa adan$a # ukosa3, hijau, kunin#, oran#e, merah dan merah bata atau "ok at 2kandun#an # ukosa tin##i3. a$ P!insi' : 4u a $an# mempun$ai #u#us a dehid atau keton bebas akan mereduksi ion +u )5 da am suasana a ka is menjadi +u5 $an# men#endap seba#ai +u)/ ber'arna merah bata. "$ (a!a *e!%a 1. ). 3. 4. 5. 0. Masukkan 3 tetes arutan uji karbohidrat keda am tabun# rekasi $an# masih kerin# dan bersih *ambahkan ) m, pereaksi Benedi"t, kemudian diko"ok. Masukan keda am penan#as air se ama 5 menit. Amati perubahan 'arna endapann$a. Pembentukan 'arna endapan hijau, kunin#, atau merah menunjukan reaksi positi! karbohidrat. +atat hasi dan buat ah kesimpu ann$a. ,akukan per"obaan ini den#an men##unakan arutan # ukosa, #a aktosa, ma tosa, !ruktosa, aktosa, sukrosa dan arutan ami um.

+$ U%i Seli,ano Uji .e i'ano!! bertujuan untuk men#eahui adan$a ketosa 2karbohidrat $an# men#andun# #u#us keton3. Pada pereaksi se i'ano!!, terjadi perubahan o eh -+ panas menjadi asam e7u inat dan 4&hidroksi meti !ur!ura . 8ika dipanaskan karbohidrat $an# men#andun# #u#us keton akan men#hasikan 'arna merah pada arutann$a. (isakarida sukrosa $an# mudah dihidro isa menjadi # ukosa dan !ruktosa memberi reaksi positi! den#an uji .e i'ano!!. 4 ukosa dan karbohdrat ain da am jum ah ban$ak dapat ju#a memberi 'arna $an# sama. Pada pen#ujian di akukan pemanasan pada arutan, pemanasan akan membantu proses hidro isis disakarida $an# akan men#hasi kan monosakarida ketosa, dan kemudian memberi 'arna. 9eberadaan -+ da am rea#en pada saat !ruktosa $an# berada da am #o on#an ketosa bereaksi den#ann$a akan men#hasi kan 'arna merah "herr$ den#an struktur kimia $an# komp eks. .eba ikn$a #o on#an disakarida seperti ma tosa dan aktosa tidak bereaksi 2ne#ati!3 pada saat mereka dihidro isis menjadi monosakarida a dosa, den#an kata ain a dosa tidak bereaksi da am uji .e i'ano!! ini. a$ P!insi' : (ehidrasi !ruktosa o eh -+ pekat men#hasi kan hodroksimeti !ur!ura dan den#an penambahan resorsino akan men#a ami kondensasi membentuk sen$a'a komp eks ber'arna merah oran$e.

"$ (a!a *e!%a 1. ). 3. 4. 5. Masukkan beberapa tetes arutan uji karbohidrat keda am tabun# rekasi $an# te ah diisi ) m, pereaksi .e i'ano!!. Masukan keda am penan#as air se ama 1 menit. Perhatikan perubahan 'arna $an# terjadi. +atat hasi dan buat ah kesimpu ann$a ,akukan per"obaan ini den#an arutan !ruktosa, # ukosa, dan sukrosa. *erjadin$a perubahan 'arna merah dan endapan menunjukan reaksi positi! untuk ketosa, bi a endapan di arutkan da am a "oho terjadi arutan ber'arna merah.

-$ U%i Ba! oed Uji ini untuk membedakan monosakarida dan disakarida den#an ja an men#ontro kondisi&kondisi per"obaan, seperti p- dan 'aktu pemanasan. Pada ana isa ini, karbohidrat direduksi pada suasana asam. (isakarida ju#a akan memberikan hasi positi! bi a didihkan "ukup ama hin##a terjadi hidro isis. Uji Bar!oed men##unakan rea#en Bar!oed $an# terdiri dari temba#a asetat dan asam asetat # a"ia seba#ai pereaksi. (iketahui bah'a disakarida merupakan a#en pereduksi $an# emah, mereka tidak membentuk ion kupri pada rea#en Bar!oed $an# ada da am keadaan asam, sedan#kan monosakarida merupakan a#en pereduksi $an# kuat dan mampu membentuk ion kupri da am rea#en Bar!oed da am keadaan asam karena itu uji Bar!oed ini di#unakan untuk membedakan disakarida pereduksi den#an monosakarida pereduksi da am suatu sampe . Pada proses pen#ujian, arutan dipanaskan, pemanasan terhadap sampe membantu asam asetat # a"ia men#hidro isis disakarida menjadi monosakarida $an# kemudian akan mereduksi rea#en, karena itu perbedaan 'aktu $an# ada menjadi indikasi perbedaan terhada monosakarida pereduksi dan disakarida pereduksi. . a$ P!insi' Ion +u)5 2dari pereaksi Bar!oed3 da am suasana asam akan direduksi ebih "epat o eh #u a reduksi monosakarida daripada disakarida dan men#hasi kan endapan +u )/ ber'arna merah bata. "$ (a!a *e!%a 1. ). 3. 4. Masukkan 1 m, arutan uji karbohidrat keda am tabun# rekasi $an# masih kerin# dan bersih. *ambahkan 1 m, pereaksi Bar!oed, kemudian diko"ok. Masukan keda am penan#as air se ama 3 menit. (in#inkan da am air men#a ir.

5. 0.

Bi a tidak terjadi reduksi se ama 5 menit, akukan pemanasan se ama 15 menit sampai ter ihat adan$a reduksi. +atat hasi .

.$ U%i Osa/on Pada uji /sa6on, $an# mendasarin$a ada ah pemanasan karbohidrat $an# memi iki #u#us a dehida atau keton bersama !eni hidra6in ber ebihan akan membentuk hidra6on atau osa6on. /sa6on $an# terbentuk mempun$ai bentuk krista dan titik ebur $an# spesi!ik. /sa6on dari disakarida arut da am air mendidih dan terbentuk kemba i bi a didin#inkan, namun sukrosa tidak membentuk osa6on karena #u#us a dehida dan keton $an# terikat pada monomern$a sudah tidak bebas, seba ikn$a osa6on monosakarida tidak arut da am air mendidih. Beberapa arutan uji menunjukkan reaksi positi! den#an membentuk krista ber'arna kunin# $an# disebut den#an osa6on $aitu arutan !ruktosa dan #a aktosa dan arutan ainn$a tidak membentuk krista osa6on. .ete ah diamati di ba'ah mikroskop, bentuk krista dari !ruktosa ada ah penta#ona sedan#kan pada #a aktosa se#i empat run"in#. a$ P!insi' .uatu a dosa atau ketosa den#an !eni hidra6in akan membentuk 9rista osa6on. 9rista osa6on $an# terbentuk khas sesuai den#an jenisn$a. "$ (a!a *e!%a 1. ). 3. 4. 5. ) m, arutan uji dimasukkan ke da am tabun# reaksi .eujun# spate !eni hidra6in&hidrok orida dan krista natrium asetat ditambahkan ke da am tabun#. *abun# dipanaskan da am penan#as air mendidih se ama beberapa menit. (idin#inkan per ahan diba'ah air keran. Perhatikan krista $an# terbentuk dan diidenti!ikasi diba'ah mikroskop.

0$ U%i Tollens Uji ini untuk positi! terhadap karbohidrat pentosa $an# membedakann$a den#an heksosa. A dehida dapat mereduksi pereaksi *o ens sehin##a membebaskan unsur perak 2A#3. Pereaksi to ens, pen#oksidasi rin#an $an# di#unakan da am uji ini, ada ah arutan basa dari perak nitrat. ,arutann$a jernih dan tidak ber'arna. Untuk men"e#ah pen#endapan ion perak seba#i oksida pada suhu tin##i, maka ditambahkan beberapa tetes arutan amonia. Amonia membentuk komp eks arut air den#an ion perak. Pereaksi *o ens serin# disebut seba#ai perak amoniaka . :ndapan perak pada uji ini akan menempe pada tabun# reaksi $an# akn menjadi "ermin perak. / eh karena itu Pereaksi *o ens serin# ju#a disebut pereaksi "ermin perak.

a$ P!insi' A dehid dioksidasi menjadi anion karboksi at, ion A#5 da am rea#ensia *o ens direduksi menjadi o#am A#. Uji posit! ditandai den#an terbentukn$a "ermin perak pada dindin# da am tabun# reaksi. "$ (a!a *e!%a 1. ). 3. Masukkan beberapa tetes arutan uji karbohidrat keda am tabun# rekasi $an# te ah diisi ) m, pereaksi *o ens. Masukan keda am penan#as air se ama 1 menit. Perhatikan perubahan 'arna $an# terjadi. -asi di"atat

1$ Hid!olisa Su*!osa .ukrosa ada ah karbohidrat #o on#an disakarida $an# terdiri dari dua unit monosakarida, $aitu # ukosa dan !ruktosa. (en#an asam kuat en"er sukrosa dapat dihidro isa menjadi unit&unit monosakaridan$a. -idro isis sukrosa ini untuk membuktikan apakah hasi hidro isis dari sukrosa ada ah # ukosa dan !ruktosa $aitu den#an "ara sete ah sukrosa dihidro isis, arutan $an# te ah dihidro isis itu dites den#an test benedi"t untuk membuktikan # ukosa dan test se i'ano!! untuk membuktikan ada !ruktosa. -a ini men$ebabkan uji Benedi"t dan uji .e i'ano!! $an# sebe um hidro isis memberikan hasi ne#ati! menjadi positi!. Uji Bar!oed menjadi positi! pu a dan menunjukkan bah'a hidro isis sukrosa men#hasi akn monosakarida a$ P!insi' .ukrosa da am -+ da am keadaan panas akan terhidro isis, a u men#hasi kan !ruktosa dan # ukosa. -a ini men$ebabkan uji Benedi"t dan .e i'ano!! $an# sebe umn$a hidro isis men#hasi kan hasi ne#ati7e menjadi positi!. Uji Bar!oed menjadi positi! pu a dan menunjukkan bah'a hidro isis sukrosa men#hasi kan monosakarida. "$ (a!a *e!%a 1. ). 3. 4. 5. Isi tabun# reaksi den#an 5 m, arutan uji sukrosa. *ambahkan 1 m, -+ 101. Masukan keda am penan#as air se ama 15 menit. (in#inkan per ahan& ahan, kemudian netra kan. *es hidro isa den#an pereaksi Benedi"t, .e i'ano!! dan Bar!oed.

0.

+atat hasi dan buat ah kesimpu ann$a

2$ U%i Bial Uji bia untuk men#uji adan$a #u a pentose. Pemanasan pentose den#an -+ pekat akan men#hasi kan !ur!ura $an# berkondensasi den#an or"ino dan ion !eri. -asi pemanasan akan men#hasi kan 'arna biru hijau $an# menunjukkan adan$a #u a pentosa. a$ P!insi' (ehidrasi pentosa o eh -+ pekat men#hasi kan !ur!ura den#an penambahan orsino 23.5& dihidroksi to uena3 akan berkondesasi membentuk sen$a'a komp eks ber'arna biru. "$ (a!a *e!%a 1. ). 3. 4. 5 tetes arutan uji dimasukkan ke da am tabun# reaksi. 10 tetes peraksi Bia dan ) tetes -+ pekat ditambahkan +ampur ah den#an baik, a u dipanaskan di atas api ke"i sampai timbu #e embun#& #e embun# #as dipermukaan arutan. Perhatikan 'arna atau endapan $an# terbentuk. *erbentukn$a 'arna biru menunjukan adan$a pentose.

3$ Hid!olisa Pati Pati 2star"h3 atau ami um merupakan po isakarida $an# terdapat pada seba#ian besar tanaman, terba#i menjadi dua !raksi $aitu ami osa dan ami opektin. Ami osa 2; )013 memi ki strusktur inier dan den#an iodium memberikan 'arna biru serta arut da am air. <raksi $an# tidak arut disebut ami opektin 2; =013 den#an struktur ber"aban#. (en#an penambahan iodium !raksi memberikan 'arna un#u sampai merah. Pati da am suasana asam bi a dipanaskan akan terhidro isis menjadi sen$a'a&sen$a'a $an# ebih sedrhana. -asi hidro isis dapat den#an iodium dan men#hais kan 'arna biru sampai tidak ber'arna. Pada per"obaan ini akan ter ihat bah'a pada hidro isis pati ini # ukosa akan terbentuk seba#ai 6at akhir. Penambahan -+ pekat a u pemanasan dimaksudkan a#ar hidro isis terjadi karena hidro isis pati han$a terjadi da am pemanasan den#an asam. a$ P!insi' Pati da am suasana asam bi a dipanaskan akan terhidro isis menjadi sen$a'a&sen$a'a $an# ebih sederhana. -asi hidro isis dapat diuji den#an iodium dan men#hasi kan 'arna biru sampai tidak ber'arna. -asi akhir hidro isis dite#askan den#an uji Benedi"t. "$ (a!a *e!%a 1. 5 m, ami um 11 dimasukkan ke da am tabun# reaksi, kemudian ditambahkan ),5 m, -+ ) >

). 3. 4. 5. 0. 7. =.

+ampur ah den#an baik, a u dimasukkan ke da am penan#as air mendidih. .ete ah 3 menit, uji ah den#an iodium den#an men#ambi ) tetes arutan ditambah ) tetes iodium da am porse in tetes. +atat ah perubahan 'arna $an# terjadi. ,akukan uji iodium setiap 3 menit sampai hasi ber'arna kunin# pu"at. ,anjutkan hidro isis se ama 5 menit a#i. .ete ah didin#inkan, diambi ) m, arutan hasi hidro isis, a u netra kan den#an >a/)1. Uji den#an kertas akmus. 9emudian uji ah den#an Benedi"t. .impu kan apa $an# dihasi kan hidro isis pati.

#4$ U%i Iodiu5 Uji iod bertujuan untuk men#identi!ikasi po isakarida. Uji iod ju#a dapat membedakan ami um den#an nitro#en. ?eaksi antara po isakarida den#an iodin membentuk rantai po iiodida. Po isakarida umumn$a membentuk rantai he iks 2me in#kar3, sehin##a dapat berikatan den#an iodin, sedan#kan karbohidrat berantai pendek seperti disakarida dan monosakaraida tidak membentuk struktur he iks sehin##a tidak dapat berikatan den#an iodin. a$ P!insi' Po isakarida den#an penambahan iodium akan membentuk komp eks adsorpsi ber'arna $an# spesi!ik. Ami um atau pati den#an iodium men#hasi kan 'arna biru , dekstrin men#hasi kan 'arna merah an##ur, sedan#kan # iko#en dan seba#ian pati $an# terhidro isis bereaksi den#an iodium membentuk 'arna "oke at. "$ (a!a *e!%a 1. ). 3. 3 tetes arutan uji dimasukkan ke da am tabun# reaksi (itambahkan ) tetes arutan iodium (iamati perubahan 'arna $an# terjadi

##$ U%i Asa5 Musat (i akukan untuk membedakan antara # ukosa dan #a aktosa. a$ P!insi' ,arutan uji di"ampurkan den#an ->/3 pekat kemudian dipanaskan. 9arbohidrat den#an asam nitrat pekat akan men#hasi kan asam $an# dapat arut. >amun, aktosa dan #a aktosa men#hasi kan asam musat $an# dapat arut.

"$ (a!a *e!%a 1. 10 tetes arutan uji dan ) tetes ->/3 pekat dimasukkan di da am tabun# reaksi. ). .e anjutn$a dipanaskan da am penan#as air mendidih sampai 7o umen$a kira&kira tin##a )&3 tetes. 3. ,a u didin#inkan per ahan& ahan, dan perhatikan terbentukn$a krista &krista keras seperti pasir. 4. .e anjutn$a diamati di ba'ah mikroskop. #)$ U%i Fehlin6 (i#unakan untuk menunjukkan adan$a karbohidrat reduksi.Uji positi! ditandai den#an 'arna merah bata. a$ P!insi' Prinsip reaksi ini $aitu men##unakan #u#us a dehid pada #u a untuk mereduksi sen$a'a +u)./4 menjadi +u)/ 2enpadan ber'arna merah bata3 sete ah dipanaskan pada suasana basa 2Benedi"t dan <eh in#3 atau asam 2Bar!oed3 den#an ditambahkan a#en pen#ikat 2"he atin# a#ent3 seperti >a&sitrat dan 9&>a&tatrat. "$ (a!a *e!%a 1. ). 3. 4. Masukkan ) m, pereaksi <eh in# ke da am tabun# reaksi. *ambahkan 1 m, arutan # ukosa )1 ke da am tabun# reaksi tersebut. Panaskan "ampuran tersebut pada pembakar spiritus. U an#i an#kah a @ " untuk, sukrosa, ami um dan se u osa.

Pemanasan da am reaksi ini bertujuan a#ar #u#us a dehida pada sampe terbon#kar ikatann$a dan dapatbereaksi den#an ion /-& membentuk asam karboksi at. +u)/ 2endapan merah bata3 $an# terbentuk merupakan hasi sampin#an dari reaksi pembentukan asam karboksi at. #+$ U%i Moo!e *est Moore merupakan sa ah satu test untuk ana isa kua itati! karbohidrat. Pada test moore, reaksi positi! ditunjukkan den#an adan$a 'arna "ok at. Aarna "o kat ini dihasi kan o eh #u a den#an adan$a basa kuat 2>a/- 1013 karena proses Bkarame isasiC atau proses bro'nin# non en6imatik. a$ P!insi' Uji Moore men##unakan >a/- 2a ka i3 $an# ber!un#si seba#ai sumber ion /-D $an# akan berikatan den#an rantai a dehid dan membentuk a do a dehid 2a dehida den#an "aban#

#u#us a kano 3 $an# ber'arna kekunin#an. Pemanasan bertujuan untuk membuka ikatan karbon den#an hidro#en dan men##antikann$a den#an #u#us @/-.

"$ (a!a *e!%a 1. ). 3. 4. 5. Pipet 1 m, >a/- 101 ke da am masin#&masin# tabun# reaksi. *ambahkan 5 m, sampe pada masin#&masin# tabun# reaksi. Panaskan pada air mendidih se ama 5 menit. Amati perubahan $an# terjadi. +atat hasi pen#amatan.

Da ta! Pusta*a
Man#depe, 9urin# .)011. Analisa Kualitatif Dan Kuantitatif Karbohidrat id.s"ribd."omEdo"E404F=473EAna isa&9ua itati!&(an&9uantitati!&9arbohidrat tan##a )3 maret )014 diakses pada

>o! e, *heres a. )01). UJI FEHLING id.s"ribd."omEdo"E=0730551EU8I&<:-,I>4 diakses pada tan##a )4 maret )014 Pasaribu, (onni. )01). Analisis Kualitatif Dan Kuantitatif Karbohidrat id.s"ribd."omEdo"E=071F0=)E531=045)&Ana isis&9ua itati!&(an&9uantitati!&9arbohidrat diakses pada tan##a )3 maret )014

Aidh$a, +ok. (e'i dkk. )014. Pedoman Praktikum Biokimia emester II. (enpasar. Po iteknik 9esehatan (enpasar