Dinamika Awal Sel Darah Putih Setelah Cedera Otak Traumatik :

Efek pada Mikrosirkulasi Serebral

Ringkasan: Peningkatan bukti klinis dan eksperimental menunjukkan bahwa cedera otak
traumatis (TBI) menimbulkan respons inflamasi akut. Dalam penelitian ini kami
menyelidiki apakahsel darah putih (WBC) diaktifkan dalam mikrosirkulasi serebral
segera setelah TBI dan apakah akumulasi WBC mempengaruhi respon pembuluh darah
otak pasca trauma. Dua puluh empat kelinci dibius dan dibuat jendela kranial kronik
yang ditanamkan 3 minggu sebelum eksperimen. Hewan - hewan ini dibagi menjadi
empat kelompok eksperimen dan dipelajari selama 7 jam (kelompok I, IIa, dan III) atau 2
jam (kelompok lib). Videomikroskopi Fluoresensi Intravital digunakan untuk
memvisualisasikan WBC (rhodamine 6G, intravena), diameter pembuluh pial, integritas
sawar darah otak (BBB) (Na +-fluorescein) pada 6 jam (kelompok I, IIa, dan III) atau 1
jam (kelompok lib) setelah TBI. Kelompok I (n = 5) terdiri dari golongan hewan yang
dilakukan operasi buatan. Grup IIa (n =7) dan llb (n = 5) menerima cedera perkusicairan pada 1 jam. Kelompok III (n = 7) menerima cedera perkusi cairan dan 1 mg / kg
antibodi monoklonal anti adhesi (MoAb) "IB4" 5 menit sebelum cedera. WBC Venular
meningkat, tekanan intrakranial (ICP), dan diameter pembuluh arteri meningkat secara
signifikan 6 jam setelah trauma. IB4 menurunkan marginasi WBC dan mencegah
vasodilatasi. Tekanan intrakranial tidak diturunkani dengan pemberian IB4. Kerusakan
sawar darah otak terjadi pada 1 jam tetapi tidak pada 6 jam setelah TBI dan tidak
bergantung pada aktivasi WBC. Laporan pertama ini menggunakan videomikroscopi
intravital untuk mempelajari respon inflamasi setelah TBI menunjukkan interaksi
upregulated antara WBC dan endotelium serebral yang dapat dimanipulasi secara
farmakologis. Aktivasi sel darah putih berkaitan dengan vasodilatasi arteriolar pial. Sel
darah putih tidak menginduksi gangguan BBB kurang dari 6 jam setelah TBI dan tidak
memberikan kontribusi terhadap peningkatan ICP pasca trauma. Peran WBC lebih dari 6
jam setelah TBI harus diselidiki lebih lanjut. Kata Kunci: Darah - Sawar otak - Inflamasi
jendela kranial -Leukosit - Mikrosirkulasi - Cedera otak traumatik - Videomikroscopi.
Cedera otak traumatik (TBI) adalah penyebab utama kematian pada orang dewasa
muda di Amerika Serikat dan Eropa. Sepertiga dari mereka adalah pasien yang
meninggal di rumah sakit akibat kerusakan sekunder pada otak dengan hipertensi
intrakranial sebagai manifestasi klinis utama (Miller dkk, 1992).

Tanda-tanda

patofisiologi awal kerusakan otak sekunder seperti edema otak dan pembengkakan otak
1

kongestif mencerminkan disfungsi serebrovaskular dan menanggung kesamaan yang

mencolok dengan peradangan tradisional yang di observasi di organ lainnya. Mekanisme
yang tepat yang memediasi kerusakan otak sekunder belum dipahami dengan baik.
Studi klinis dan eksperimental selama tahun-tahun terakhir mendapati adanya
peningkatan kadar mediator proinflamasi dan inflamasi, seperti platelet-activating factor,
radikal bebas, dan komponen dari kaskade asam arakidonat kas, dalam serum, parenkim,
dan CSF segera setelah cedera kepala (McIntosh, 1994). Interleukin-6, faktor nekrosis
tumor, dan sitokin lain yang telah dijelaskan dalam CSF dari pasien cedera kepala berat
memuncak dalam hari-hari pertama setelah trauma (Goodman dkk, 1990; Kossmann dkk,
1996; McClain dkk, 1991; Ott dkk, 1994). Model eksperimental dari TBI telah
menunjukkan bahwa sitokin yang ditemukan dan diproduksi di otak sebagai respon
terhadap trauma (DeKosky dkk, 1996; Fan dkk, 1995; Shohami dkk, 1996; Taupin dkk,
1993; Woodroofe et ai, 1991; Yan dkk, 1992), dan bahwa penghambatan faktor-faktor ini
dapat memberikan pelindung saraf (Shohami dkk, 1996). Gambar stereotipik disfungsi
serebrovaskular pasca trauma mendukung pandangan bahwa TBI memulai kaskade
peristiwa neurokimia dimana mediator inflamasi mungkin berperan penting. Sel darah
putih (WBC) adalah sel sitotoksik yang mungkin memainkan peran kunci dalam skenario
ini, mereka menghasilkan banyak mediator inflamasi terlihat setelah TBI dan menjadi
aktif dalam menanggapi faktor ini. Hingga saat ini, akumulasi WBC di otak parenkim
telah dijelaskan dalam 4 sampai 48 jam pertama setelah eksperimen TEI (Biagas dkk,
1992; Carlos dkk, 1997; Clark dkk, 1996b; Clark dkk, 1994; Horner dkk, 1992;
Kaczorowski dkk, 1995; Schoettle dkk, 1990; Soares dkk, 1995; Uhl dkk, 1994; Wilson
dkk, 1995; Zhuang dkk, 1993). Hanya sedikit yang diketahui tentang kemungkinan peran
WBC setelah TBI, terutama apakah WBC adalah responder pasif terhadap cedera otak
atau sebenarnya memodulasi respon mikrosirkulasi pasca trauma.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menjelaskan perilaku WBC segera setelah
TEI dan untuk menguji hipotesis bahwa (1) TEI menyebabkan akumulasi WBC dalam
mikrosirkulasi serebral, dan (2) WBC di mikrosirkulasi serebral mempengaruhi respon
serebrovaskular untuk TBI.
BAHAN DAN METODE
Implantasi dari jendela kranial kronik
Dua puluh empat kelinci Selandia Baru dengan berat 2,5-3,5 kg digunakan dalam
penelitian ini, yang telah disetujui oleh Cornell Univershy Medical College Animal Use
Committee. Untuk menghindari artefak yang terkait dengan prosedur pembedahan (insisi
2

kulit, trephinasi, refleksi dura, dan paparan permukaan otak), jendela kranial ditanamkan
2

sampai

minggu

sebelum

percobaan

terakhir.

Kelinci dibius dengan xylazine (5 mg / kg) dan ketamin (35 mg / kg) subkutan
dan diletakkan telentang

di bingkai stereotaktik untuk menyangga kepala dan badan.

Digunakan versi modifikasi dari jendela kranial kronik dijelaskan sebelumnya oleh
Levasseur dkk. (1975). Sebuah trephinasi (diameter 8 mm) telah disiapkan pada hemisfer
kiri otak, duramater itu tercermin, dan disk kaca disterilkan dimasukkan ke dalam defek
kranial (Gambar 1). Jendela itu disegel dan ditahan menggunakan semen gigi dan sekrup
tulang. Jaringan kulit kepala kemudian direaproksimasikan dengan jahitan 3-0 silk.
Kelinci dipantau setiap hari untuk kondisi umum dan kondisi dari situs pembedahan.
Percobaan Akhir
Anestesi diinduksi dengan xylazine dan ketamine intramuskuler. Para hewan
diberi trakeotomi untuk ventilasi buatan (Harvard Apparatus, South Natick, MA,
U.S.A.). Anestesi dipertahankan oleh suntikan bolus intravena uretan 20%. Sebuah
kateter arteri femoralis memungkinkan pemantauan terus menerus dari tekanan darah
arteri rata-rata (MAP) dan pengambilan sampel darah. Akses intravena dicapai melalui
vena telinga, dan suhu tubuh dikontrol oleh bantal pemanas.
Kepala hewan tersebut kemudian diimobilisasi dalam posisi sphinx dengan
pemegang stereotaktik. Tekanan intrakranial (rCP) diukur menggunakan transduser ICP
mikrosensor (Codman, Johnson & Johnson, New Brunswick, NJ, USA). Sebuah lubang
bor (diameter 1,4 mm) disiapkan di atas hemisfer serebral kanan, berlawanan dengan
trauma dan jendela kranial, untuk penyisipan mikrosensor ke dalam ruang epidural
(Gambar 1). Tekanan intrakranial dan MAP (Tektronix 400 Recorder), Pco2 tidal-akhir
(ETc02, Novametrix 1260), dan tingkat pernapasan yang terus dipantau dan dicatat
dengan MacLab hardware data recording unit (instrumen AD) dan CHART sistem data
analisis (3,4) pada Macintosh IISi komputer. Suhu tubuh dikontrol menggunakan
termometer digital (VWR Scientific) dan bantal pemanas.
Cedera otak
Cedera otak eksperimental diproduksi menggunakan modifikasi dari model lateralis
(parasagital) cairan perkusi cedera yang awalnya dideskripsikan pada tikus oleh
McIntosh dkk. (1989). Perangkat ini terdiri dari suatu reservoir garam plexiglass silinder
yang ditutup pada salah satu ujungnya dengan gabus plexiglass. Ujung reservoir tersebut
berhubungan dengan suatu selang garam yang dilengkapi dengan perumahan transduser
logam dan sekrup cedera logam berongga (diameter bagian dalam, 3 mm dan diameter
3

luar, 4 mm). Sebidang steril dari karet (dari sarung tangan bedah) itu difiksasi di ujung
sekrup cedera untuk memungkinkan transmisi gelombang tekanan ke otak, ketika
mencegah hilangnya garam ke dalam rongga intrakranial. Sebuah lubang bor (diameter 4
mm) pada anterior hemisfer kiri

jendela tengkorak disiapkan dan dura tetap utuh

(Gambar 1). Untuk menghasilkan gangguan, piston dihantam logam seberat 3,4 kg yang
jatuh dari ketinggian tertentu. Hal ini mengakibatkan cedera 3,5-atm barotraumatik yang
disampaikan ke otak selama 20 sampai 25 milidetik. Sebuah tekanan yang dipicu elektrik
melepaskan katup menyebabkan deflasi cepat balon intrakranial. Setelah benturan sekrup
cedera dipindahkan dan defek kranial ditutup dengan bone wax.

Intravital videomikroskopi
Sebuah Leitz mikroskop yang dirancang khusus untuk videomikroskopi intravital
dilengkapi dengan sumber cahaya merkuri 50-W (OptiQuip 1200), blok penyaring
iluminator Ploem-Pak (Leitz, Wetzlar, FRG) untuk epi-iluminasi, 5x hingga 32x, dan
kamera VElOOO MTI SIT dengan papan kontrol eksternal yang digunakan untuk
pengukuran parameter mikrosirkulasi. Gambar direkam pada VCR Sony U-Matic, VO
9600, dan ditampilkan pada videomonitor Sony 20-inch untuk evaluasi off-line.
sebuahprogram perangkat lunak analisis citra (NIH Image, versi 1,55) pada komputer
4

Macintosh Quadra 700 digunakan untuk mengukur diameter wadah. Posisi hewan
tersebut di bawah mikroskop dapat dikendalikan di dua sumbu menggunakan
micromanipulators yang didorong manual yang melekat pada tahap mikroskop x-y yang
dibuat khusus.
Perilaku WBC dalam mikrosirkulasi serebral
Sel darah putih diambil secara acak enam sampai delapan kali pada venula pial
postcapillary per hewan divisualisasikan dengan injeksi intravena rhodamine 6G (0,3
ml / kg dari solusi R6G 0,05%, Sigma chenical, St Louis, MO, USA) untuk pelabelan in
vivo. Rhodamine 6G menandai WBC dan platelet, meninggalkan sel-sel endotel dan
eritrosit tidak ternoda (Dirnagl dkk, 1994). Observasi selektif WBC bernoda rhodamine
6G kemungkinan menggunakan epi-iluminasi dengan blok filter N2 Leitz (eksitasi, 530560 nm; emisi,> 580 nm). WBC yang melekat kuat didefinisikan sebagai sel yang tetap
diam selama minimal 30 detik dan diberi sebagai jumlah WBC per mm2 dari dinding
pembuluh darah. Tiga puluh detik tampaknya menjadi durasi minimal adhesi yang kuat
yang diperlukan sebagai awal untuk emigrasi selama respon inflamasi (Kubes dan
Granger, 1992).
Permukaan pembuluh (s) dihitung dari radius pembuluh dalam (r, maksimum 30 /
Lm) dan segmen panjang (I, 100 sampai 150 / Lm) menggunakan rumus:
s = 2 x x r x I.
Diameter pembuluh darah
Diameter rata-rata enam sampai delapan arteriol pial (diameter antara 40 dan
120 / Lm) per hewan ditentukan menggunakan perangkat lunak analisis citra NIH.
Integritas barrier darah-otak
Integritas barrier darah-otak dinilai secara kualitatif dengan infus intravena Na +fluorescein 30 menit sebelum berakhirnya percobaan, yaitu pada 5,5 jam pada kelompok
I, IIa, dan III dan pada 0,5 jam pada kelompok IIb. Kebocoran mikrovaskuler ini
ditunjukkan dengan ekstravasasi Na +-fluorescein (berat molekuler, 376), muncul segera
sebagai titik fluoresen individu dari venula pial postcapillary dan kemudian sebagai
akumulasi kotor dan difus pewarna di bawah jendela. Dosis awal Na +-fluorescein adalah
1 ml / kg berat badan dari solusi 2% diikuti dengan infus intravena kontinu pada tingkat
1 / kg berat badan mL untuk mempertahankan konsentrasi plasma yang stabil (Unterberg
dkk. ,1988). Dalam percobaan awal tes positif dari pembukaan barrier dilakukan dengan
menginduksi gangguan osmotik BBB dengan infus intraarterial NaCl 7,5%. Respon
5

mikrosirkulasi serebral sangat mirip dengan pembukaan kotor dan difus BBB dalam
waktu 10 menit setelah infus.
Histologi
Setelah penghentian percobaan otak dikeluarkan dan difiksasi dalam formalin
10%. Bagian koronal dari situs lesi (bagian koronal 1, Gb. 1) dan dari bawah jendela
(bagian koronal 2, Gambar.1) dari kedua hemisfer disusun dan diwarnai dengan
hematoksilin dan eosin. Sel darah putih dalam pembuluh cortex (permukaan dan
parenkim) dan WBC yang ekstravasasi ke dalam jaringan kortikal yang dihitung pakar
histologi terbatas untuk kelompok hewan yang serupa dalam tiga bidang anatomis
berdaya tinggi (400x) per hemisfer dan potongan di bawah mikroskop cahaya. Hasil
yang diberikan dalam Tabel 1 sebagai jumlah rata-rata WBC per bidang berdaya tinggi
per hemisfer.
Protokol eksperimental
Hewan dengan jendela kranial kronik dimasukkan pada salah satu dari empat
kelompok

percobaan

sebagai

berikut.

Kelompok I. Kelompok I bertugas sebagai kelompok kontrol yang dioperasi

secara palsu dan tidak mengalami TBI. Setelah periode awal 60 menit, hewan dipelajari
selama 6 jam dan dibunuh dengan suntikan larutan eutanasia intravena. Diameter
pembuluh arteriolar dan WBC yang menempel ditentukan pada selang waktu tertentu.
Otak

dengan

cepat

dipindahkan

untuk

pemeriksaan

histologi.

Grup IIa dan III. Setelah periode awal 1 jam, hewan pada kelompok IIa dan III
mengalami cedera otak perkusi cairan dan dipantau selama 6 jam. Lima menit sebelum
cedera hewan menerima baik 1,5 mL / kg berat badan larutan garam normal (kelompok
IIa) atau 1 mg / kg berat badan anti CD 18 MoAb IB4 (kelompok III) (hadiah dari
Samuel Wright, MD, Universitas Rockefeller , New York, NY, USA). Diameter
pembuluh arteriolar dan WBC yang menempel ditentukan pada selang waktu tertentu.
Fungsi barrier darah-otak diuji 5,5-6 jam setelah TBI dan hewan dibunuh dengan
suntikan larutan eutanasia intravena. Otak dengan cepat dipindahkan untuk pemeriksaan
histologi.
Grup IIb. Setelah periode awal dari 1 jam hewan mengalami cedera perkusi
cairan dan dipantau selama 1 jam. Fungsi barrier darah-otak diuji pada 0,5 sampai 1 jam
setelah TBI dan hewan dibunuh dengan suntikan larutan eutanasia intravena.
Analisis

data

Analisis varians Satu arah digunakan untuk membandingkan data dalam Tabel 1
6

dan 2. Untuk Tabel 3 dan Gambar. 2 dan 3 dua faktor analisis varians diukur ulang
dengan

uji

post-hoc

Fisher

untuk

beberapa

perbandingan

digunakan

untuk

membandingkan titik waktu tertentu dengan baseline. Dua faktor analisis varians secara
acak dengan uji post-hoc Fisher digunakan untuk menguji perbedaan sigifikan antara
kedua kelompok penelitian (P <0,05). Semua variabel digambarkan sebagai rata-rata
SD.

HASIL
Implantasi jendela kranial kronik
Pemantauan harian dari hewan setelah implantasi dari jendela kronis tidak
menunjukkan adanya gelaja kegelisahan, nyeri, atau infeksi kronis. Salah satu hewan
dikeluarkan dari protokol karena infeksi yang disebabkan oleh suntikan intramuskular.
Suhu dan jumlah WBC dikendalikan pada awal dari akhir setiap percobaan dan selalu
dalam batas normal.
Trauma keparahan dan patologi
Keparahan trauma adalah serupa pada semua kelompok (3,52 0,6, 3,49 0,4,
dan 3,50 0,35 atm dalam kelompok IIa, III, dan IIb). Kelainan struktural teratur muncul
setelah trauma termasuk perdarahan kortikal dan subkortikal petekie dengan erupsi
berkala ke dalam ventrikel. terbuka Memar dengan tanda-tanda histologis edema terlihat
langsung di bawah lokasi tumbukan di korteks serebral. Untuk tingkat yang lebih rendah,
intraparenkimal perdarahan juga diamati kontralateral ke situs cedera primer. Perdarahan
subarachnoid diamati ipsilateral terhadap cedera, terhadap tingkat yang lebih rendah juga
di sisi kontralateral.

MAP, ICP, dan ETco2 rata-rata

Tekanan darah arteri ICP, dan nilai ETco2 diberikan pada Tabel 3. ETco2 rata-rata
adalah antara 32 dan 36 mm Hg selama percobaan. Setelah trauma MAP meningkat dari
73 9 ke 94 22 dan dari 69 8 ke 83 24 mm Hg pada 5 menit setelah cedera dalam
kelompok IIa dan III, dan turun mendekati nilai dasar setelahnya.
Tekanan intrakranial di palsu yang dioperasikan hewan tetap berada antara 2 dan
3 mm Hg selama percobaan. Cedera otak traumatik diikuti oleh peningkatan ICP dari 4
3 mmHg sampai 18 13 dan 13 9 mm Hg pada 5 menit dalam kelompok II dan ILI.
Tekanan intrakranial otak dalam kelompok IIa dan III secara signifikan meningkat
dibandingkan dengan kelompok I pada 330 dan 360 menit. Tidak ada perbedaan
signifikan yang diamati antara kelompok IIa dan III.
Dalam kelompok lIb, MAP setelah trauma meningkat dari 7 1 6 ke 88 18 mm
Hg pada 5 menit dan turun mendekati 80 5 mmHg pada 1 jam setelah cedera. Tekanan
darah arteri rata-rata dalam kelompok IIa tidak berbeda secara bermakna dari kelompok
IIb. Tekanan intrakranial meningkat dari 3 2 sampai 16 10 mmHg segera setelah
trauma dan 7 2 mm Hg 1 jam kemudian. ETco2 rata-rata adalah antara 33 dan 34 mm
Hg selama percobaan.

Diameter arteriolar pial

Persentase perubahan diameter arteriol (AD) selama eksperimen diberikan pada

Gambar. 2. Dalam waktu 10 menit setelah cedera, diameter pembuluh arteriolar secara
sementara melebar menjadi 119% 35% dan 110% 19% dari baseline di kelompok IIa
dan III, masing-masing. Fase kedua ditandai dengan vasokonstriksi pada kedua
kelompok menjadi 89% 8% dan 86% 18% pada 30 menit setelah TBI, masingmasing. Meskipun diameter dalam kelompok III tetap berada kurang dari 95% dari
baseline untuk sisa periode observasi, sebuah vasodilatasi sekunder menjadi 117% 21%
pada 6 jam terlihat pada kelompok II.
WBC yang melekat kuat
Jumlah WBC yang melekat kuat pada endotelium dari venula pial postcapillary
meningkat secara signifikan dari baseline 19 13-200 119 per mm2 endotelium pada 6
jam setelah cedera (Gambar 3-5). Dalam kontrol yang dioperasi palsu terjadi penurunan
dari 30 16 ke 0 dan Kelompok III hanya kecil, tidak signifikan, peningkatan yang
diamati dari 38 40-57 71 sel per mm2 pada 6 jam setelah TBI. Pada 6 jam ada
perbedaan yang sangat signifikan antara kelompok II dan III.
Jumlah WBC
Jumlah sel darah putih diperiksa sebelum cedera perkusi cairan dan pada 6 jam
setelah dan adalah 7,2 3,3 dan 8,1 2,9 (x 1.000/mm3), di hewan yang dioperasi
secara palsu, 7,1 4,1 dan 8,9 3,9, setelah trauma, dan 6,5 2,3 dan 8,2 3,8,
masing-masing, setelah trauma dan MoAb.
WBC Histologi
Analisis histologi dari irisan jaringan otak mengungkapkan akumulasi WBC pada
6 jam setelah TBI tidak hanya di bawah jendela dan di dekat lesi, tetapi juga di belahan
otak kontralateral. rata-rata Jumlah WBC per medan berdaya tinggi terdeteksi di dalam
pembuluh darah dan di otak parenkim dapat dilihat pada Tabel 1. Kadang-kadang, WBC
ditemukan dalam pembuluh dan jaringan hewan yang dioperasi palsu. Cedera otak
traumatis dalam kelompok IIa (untuk Histologi saja, n = 4) menyebabkan peningkatan
tajam dalam jumlah sel terdeteksi di jaringan otak ipsilateral (14 6 WBC per berdaya
tinggi medan di belahan otak yang cedera) dan dalam pembuluh (11 4 WBC). Di
belahan otak kontralateral hewan kelompok IIa jumlah WBC pada jaringan otak adalah 8
2 (0 WBC di pembuluh darah). Pada kelompok yang diobati IB4 (kelompok III, n = 5),
marginasi WBC dan ekstravasasi secara signifikan berkurang dibandingkan dengan
kelompok IIa, dengan sel-sel 1 1 dalam jaringan dan 3 1 sel dalam pembuluh darah
10

dari belahan otak yang cedera dan 4 2 dan 1 1 sel dalam jaringan dan pembuluh dari
belahan kontralateral, masing-masing.
Barrier darah-otak
Barrier darah-otak sebagaimana dinilai secara kualitatif dengan infus Na +fluorescein ditemukan mengalami gangguan pada 1 jam setelah TBI di empat dari lima
hewan kelompok lIb (Tabel 2). Barrier darah-otak dipertahankan pada 6 jam di semua
hewan lain (kelompok I, Ila, dan III) dengan atau tanpa trauma dan terlepas dari tingkat
marginasi WBC.

11

DISKUSI
TBI dan respon inflamasi akut
Kontribusi WBC untuk pengembangan infark di iskemia serebral eksperimental,
iskemia serebral khususnya yang fokal dan reperfusi, sudah terbentuk dengan baik (Hartl
et ai, 1996;. Kochanek dan Hallenbeck 1992). Terdapat akumulasi bukti bahwa TEl juga
menginduksi respon inflamasi akut yang dapat mempromosikan dan mempercepat
perkembangan kerusakan otak sekunder. Studi klinis dan eksperimental selama tahun
terakhir telah menemukan peningkatan kadar platelet-activating factor, radikal bebas, dan
komponen dari kaskade asam arakidonat dalam serum, parenkim dan CSF awal pasca
cedera kepala (McIntosh, 1994). Interleukin-6, faktor nekrosis tumor dan sitokin telah
dideskripsikan di CSF dari pasien cedera kepala berat, memuncak dalam hari pertama
setelah trauma kepala terisolasi (Goodman et ai, 1990;. Kossmann dkk, 1996;. McClain
dkk, 1991;. Ott dkk 1994.). Kelompok kami menemukan hubungan antara peningkatan
interleukin-6 CSF pada 48 jam setelah trauma kepala berat yang terisolasi secara klinis
dan hasil akhir yang merugikan (Medary dkk, 1997). Orang lain melaporkan bahwa
sitokin ditemukan dan diproduksi di otak sebagai respon terhadap trauma eksperimental
(DeKosky dkk, 1996; Fan dkk, 1995; Shohami dkk, 1996; Taupin dkk, 1993; Woodroofe
dkk,

1991;

Yan

dkk,

1992).

Penghambatan

faktor nekrosis tumor terbukti menurunkan perkembangan edema pada 24 jam dan
12

meningkatkan hasil fungsional pada 4 hari setelah gangguan pada tikus yang menjalani
cedera kepala tertutup (Shohami dkk, 1996). Keunggulan dari kerusakan otak sekunder
setelah TBI termasuk fitur khas peradangan akut, seperti permeabilitas mikrovaskuler,
peningkatan vasodilatasi, dan perubahan aliran darah. Sel darah putih dapat berkontribusi
terhadap banyaknya pengamatan ini. Sel darah putih secara strategis terletak di dalam
kaskade inflamasi tidak hanya sebagai produsen mediator biokimia, tetapi juga sebagai
responden aktif terhadap rangsangan inflamasi (Weiss, 1989;. Welbourn dkk , 1991). Sel
darah putih adalah sel sitotoksik yang kuat pada dirinya sendiri dan bisa berfungsi
sebagai

target

yang

ideal

untuk

intervensi

terapeutik.

Studi

klinis

telah

mendokumentasikan hubungan antara peningkatan jumlah WBC perifer dan hasil yang
tidak diharapkan atau ICP sekunder meningkat setelah TBI (Keskil dkk, 1994;.
Unterberg
dkk, 1993.). Akumulasi WBC di otak dalam 4-48 jam setelah TBI eksperimental telah
dilaporkan (Biagas dkk, 1992; Carlos dkk, 1997; Clark dkk, 1996b; Clark dkk, 1994;
Horner dkk, 1992; Kaczorowski dkk, 1995; Schoettle dkk, 1990; Soares dkk, 1995; Uhl
dkk, 1994; Wilson dkk, 1995; Zhuang dkk, 1993). Sedikit yang diketahui tentang peran
WBC di TBI. Sebuah korelasi telah dilaporkan antara perkembangan edema otak dan
akumulasi WBC dalam waktu 24 jam setelah lesioning kriogenik pada babi dan cedera
perkusi pada tikus (Schoettle dkk, 1990;. Zhuang dkk, 1993.). Intervensi antileukosit
MoAbs diarahkan terhadap adhesi molekul WBC dan agen antineoplastik telah berhasil
digunakan untuk memblokir akumulasi WBC pasca trauma, tetapi penulis tidak
mengomentari efek pada variabel serebrovaskuler (Biagas dkk, 1992; Carlos dkk, 1997;
Clark dkk, 1996a). Deplesi WBC setelah penurunan berat cedera pada tikus yang
menggunakan vinblastin (Uhl et dkk, 1994) dan pemblokiran WBC setelah lesioning
kriogenik menggunakan serum antileukosit (Schiirer dkk, 1990.) tidak meredam
pembentukan edema atau nekrosis dalam waktu 24 jam setelah cedera.

Secara

keseluruhan, ini menunjukkan bahwa WBC bermigrasi ke jaringan otak segera setelah
TBI, tetapi tidak cukup menjawab pertanyaan tentang apakah WBC sebenarnya
berkontribusi pada disfungsi serebrovaskular akut pasca trauma. Dengan latar belakang
ini studi dirancang untuk menguji hipotesis bahwa (1) WBC terakumulasi dalam
mikrosirkulasi serebral dalam jam pertama setelah cedera cairan perkusi, dan (2) WBC
yang diaktifkan mempengaruhi respon otak untuk TBI.

13

Videomikroskopi intravital
Intravital Videomikroskopi fluoresensi menyediakan alat untuk mengamati
respon mikrovaskuler, secara real time untuk cedera otak in vivo dan untuk merekam
karakter dinamis dari respon pasca trauma. Meskipun trafiking WBC di iskemia serebral
eksperimental (Gidday dkk, 1995; Villringer dkk, 1994) telah dipelajari, tidak ada data
intravital yang tersedia pada respon inflamasi dini untuk TBI. Berlawanan dengan studi
sebelumnya, kami menggunakan teknik jendela kranial kronik karena percobaan awal
menunjukkan bahwa implantasi jendela kaca yang dihasilkan suatu respon inflamasi akut
lokal dengan peningkatan interaksi sel WBC-endotel, yang mereda di minggu pertama
setelah implantasi.
MoAb
IB4
untuk

menghalangi

setiap

WBC-endotelial

interaksi

sel

CD 18 adalah suatu subunit dari reseptor adhesi integrin 132 yang dapat
ditemukan pada setiap WBC dan yang tegas adhesi yang memediasi sel-sel pada endotel
vaskuler (Springer, 1994). Anti-CDl8 MoAb 1B4 efektif menghambat adhesi setiap
WBC pada endotel venular tanpa mempengaruhi yang bergulir leukosit atau
menghasilkan vasokonstriksi serebral (Bednar dkk, 1996; Carden dkk, 1990; Rubin dkk,
1992). Kami tidak mengamati efek dari MoAb pada variabel hemodinamik. Lundberg
dan Wright (1990) melaporkan penurunan yang lebih besar dari 95% dari akumulasi
leukosit polimorfonuklear pada kulit kelinci setelah injeksi lokal sebuah kemoatraktan
dan waktu paruh 1B4 didapati menjadi 11,5 jam.
14

Akumulasi WBC dan patologi

Aktivasi sel darah putih telah dipelajari di otak dan pada jaringan perifer dalam
menanggapi reperfusi iskemia dan superfusi dengan berbagai agen kemotaktik (Corvin
dkk, 1990; Kurose dkk, 1994; Lindauer dkk, 1996; Menger dkk, 1992). Sejauh
pengetahuan kami, peningkatan perlekatan WBC ke endotelium vaskular yang
disebabkan oleh trauma deformasi-perkusi sendiri belum pernah dilaporkan sebelumnya.
Temuan utama dari makalah saat ini adalah bahwa TBI mengarah pada akumulasi dini
dan signifikan dari WBC dalam mikrosirkulasi serebral, bersama dengan vasodilatasi
arteri dan tanpa dampak negatif terhadap fungsi BBB. Respon inflamasi akut diamati
dalam percobaan kami tidak terbatas pada permukaan pembuluh darah tepat di bawah
jendela kranial. Pemeriksaan histologis otak mengkonfirmasi akumulasi WBC di
pembuluh parenkim di lapisan korteks yang lebih dalam dan migrasi yang signifikan dari
WBC ke dalam otak parenkim dari kedua hemisfer (Tabel 1). Akumulasi WBC selama
24

jam

pertama

setelah

cedera

TBI

pada

tikus

juga

telah

digambarkan oleh kelompok lain, tetapi biasanya terbatas pada hemisfer yang terkena
dampak (Clark dkk al, 1994; Schoettle dkk, 1990; Soares dkk, 1995; Zhuang dkk, 1993).
Kejadian WBC di hemisfer yang berlawanan dengan lesi mungkin berhubungan dengan
adanya perubahan patologis yang terjadi tidak hanya di belahan otak langsung yang
mengalami trauma, tetapi untuk tingkat yang lebih rendah juga kontralateral. Penjelasan
untuk

cedera

kontralateral

mungkin

merupakan

modifikasi dari model trauma : Model-model fluidpercussion konvensional memproduksi

cedera otak dengan cepat. dengan menyuntikkan garam ke dalam tempurung kepala
tertutup Hal ini menuntun pada difus beban mekanis dari permukaan otak dan hanya
sedikit pergerakan pada otak (Dixon dkk, 1988; Thibault dkk, 1992). Kami
menggunakan sepotong karet steril terfiksasi di ujung sekrup cedera untuk mencegah
hilangnya garam tidak steril yang berpotensi ke dalam rongga kranial. Hal ini
mengakibatkan kontusio lokal di bawah situs benturan dengan pergerakan otak dan
cedera kontralateral.
WBC aktivasi dan respon serebrovaskular cairan perkusi cedera
Hanya sedikit yang diketahui tentang perjalanan waktu aktivasi WBC setelah TBI
dan hubungannya dengan variabel lain dengan mikrosirkulasi serebral. Data kami
menunjukkan bahwa daya lekat WBC meningkat segera setelah TBI. Tingkatan WBC
mencuat dalam percobaan kami (200 WBC/mm2 endotelium pada 6 jam setelah TBI)
adalah sebanding dengan data oleh Gidday dkk. (1995) pada 2 jam setelah 90 menit
15

Reperfusi iskemia-serebral pada anak babi (sekitar 60 WBC/mm2). iskemia Reperfusi

dalam otot lurik tampaknya memicu respon WBC lebih awal dan lebih jelas dengan 4001500 endotelium kuat yang melekat WBC/mm2 setelah hanya 2 jam (Menger et ai,
1992;.. Nolte et ai, 1994). Timbul pertanyaan, apakah aktivasi WBC setelah TBI adalah
relevansi bagi perkembangan disfungsi serebrovaskuler pasca trauma, seperti gangguan
BBB dan hipertensi intrakranial.
Diameter arteriolar
Jalur pasca trauma dalam percobaan kami dikarakterisasi dengan perubahan
trifasik di AD pial dengan Vasodilatasi awal (0 sampai 10 menit), diikuti oleh
penyempitan (30 sampai 90 menit) dan pelebaran sekunder menjadi 117% 21% dari
awal pada 6 jam setelah TBI (Gambar 2). Vasodilatasi fase akhir dicegah dengan
memblokir WBC dengan menggunakan anti-CD 18 MoAb. Peningkatan diameter
pembuluh arteriolar juga telah dilaporkan oleh pihak lain pada hewan percobaan di jam
pertama setelah cedera perkusi cairan (De Witt dkk al, 1986; Wei dkk, 1980; Wei dkk,
1981). Peningkatan AD segera setelah cedera perkusi cairan mungkin mencerminkan
dilatasi pasif yang disebabkan oleh lonjakan tekanan darah pasca trauma biasanya
berhubungan dengan jenis cedera autoregulasi serebral overriding. Bahkan, beberapa
hewan menampilkan puncak tekanan darah dalam menit pertama setelah TBI setinggi
200 mm Hg. Vasokonstriksi diamati antara 30 dan 90 menit terjadi saat fungsi
autoregulatory dari arteriol serebral dipulihkan. Kami tidak bisa sepenuhnya menjelaskan
vasodilatasi yang tertunda setelah trauma, tapi hasil kami menunjukkan bahwa aktivasi
WBC terlibat dalam respon ini. Corvin dkk. (1990) mengamati pada tikus dilengkapi
dengan jendela kranial yang superfusi dari permukaan otak dengan leukotaxin nformylmethionyl-leucyl-fenilalanin tidak mendorong perlekatan WBC bersama dengan
dilatasi arteriol (Corvin dkk, 1990). Bersama dengan penelitian kami ini adalah laporan
yang baru diterbitkan pada hubungan temporal dan spasial antara WBC yang menempel
dan perilaku pembuluh dalam mikrosirkulasi otak utuh. Sel darah putih mengendap
dalam mikrosirkulasi hilir, serupa dengan yang diamati oleh kita, sangat dapat
meningkatkan daya tahan organ dalam otot rangka, mesenterium, dan organ parenkim
(Helmke dkk, 1996; House dan Lipowsky, 1987). Dilatasi arteriol kompensasi dalam
menanggapi ini resistensi serebrovaskuler yang meningkat muncul sebagai penjelasan
potensi temuan kami (Kontos dan Wei, 1985; Pfenninger dkk, 1989). Vasodilatasi arteriol
setelah cedera perkusi cairan pada hewan percobaan juga telah dikaitkan dengan
16

produksi radikal bebas (Kontos dan Wei, 1986; Wei dkk, 1981). Sel darah putih adalah
sumber utama oksigen radikal bebas dan sebuah studi terbaru oleh Matsuo dkk al. (1995)
menunjukkan bahwa deplesi dari neutrofil pada model iskemia serebral fokal pada tikus
secara signifikan melemahkan produksi radikal bebas postiskemik. Namun, akumulasi
WBC terjadi secara eksklusif dalam venula dan tidak jelas bagaimana produksi radikal
bebas dalam venula mempengaruhi AD. Dalam terisolasi segmen tengah arteri serebral
Akopov dkk (1994) menemukan gangguan akut dari relaksasi endotelium-dependen
setelah stimulasi WBC dengan intraarterial 4b-phorbol-12b-myristate-13aacetate,
menunjukkan bahwa WBC penyebab vasokonstriksi ketimbang dilatasi. Hasil
eksperimental tidak dapat diterapkan ke dalam situasi in vivo karena tersedia dalam
percobaan saat ini: dalam percobaan kami, kami tidak melihat interaksi antara WBC dan
endotelium arteriolar. Selain itu, Akopov dkk al (1994) menggunakanpembuluh darah
serebral besar yang terisolasi di setup eksperimental yang tidak memperhitungkan
pengaruh resistensi pembuluh darah dan perubahan tekanan sepanjang cabang vaskular
utuh.
Terlepas dari hipotesis ini, apakah vasodilatasi arteri seperti yang diamati dalam
percobaan kami adalah tanda disfungsi serebrovaskuler masih belum jelas.
Tekanan intrakranial
Sebuah penelitian stroke tromboemboli dikombinasikan dengan hipotensi
hemoragik pada kelinci New Zealand ditangani dengan 1 mg / kg IB4 tercatat secara
signifikan mengurangi ICP dibandingkan dengan kontrol rawat jalan dalam waktu 4 jam
setelah trauma (Bednar dkk, 1996). Temuan kami tidak mendukung efek yang sama
inhibisi WBC pada ICP segera setelah TBI. Cedera otak traumatis dalam kelompok IIa,
lIb, dan III menyebabkan kenaikan yang signifikan dalam ICP. Blokade sel darah putih
dan pengurangan diameter pembuluh Kelompok III tidak mengurangi ICP bila
dibandingkan dengan kelompok IIa.
Barrier darah-otak
Tanno dkk. (1992a l882b) melaporkan bahwa pada tikus yang menjalani
kerusakan BBB cedera perkusi cairan paling menonjol dalam satu jam pertama setelah
TBI dan BBB dibangun kembali oleh 6 jam setelah cedera. Selain itu juga dilaporkan
bahwa BBB disegel dalam beberapa jam setelah cairan perkusi cedera (Enters dkk, 1992;
van den Brink dkk al, 1994). Barzo dan rekan kerja (1996) baru-baru ini
mempresentasikan data dari tikus mengalami cedera dampak-percepatan menunjukkan
bahwa BBB membuka cepat dan secara sementara setelah trauma selama kurang lebih 30
17

menit. Hal ini berkorelasi dengan pengamatan kami bahwa gangguan BBB lebih jelas
antara 30 menit dan 1 jam dibandingkan dengan 5,5 sampai 6 jam setelah trauma. Hasil
saat ini jelas menunjukkan bahwa WBC yang menempel di venula pial setelah cedera
perkusi cairan itu tidak berhubungan dengan peningkatan permeabilitas pembuluh(Tabel
2). Data tentang hubungan antara WBC yang menempel dan permeabilitas pembuluh
darah di otak masih bertentangan. Meskipun studi iskemia serebral melaporkan korelasi
positif antara edema otak dan akumulasi WBC dalam waktu 24 jam setelah oklusi arteri
serebral tengah dan reperfusi pada tikus (Matsuo dkk al, 1994; Shiga dkk, 1991), studi
TBI gagal untuk mendukung pandangan ini. Schiirer dan rekan kerja (1990)
menunjukkan bahwa penipisan WBC setelah lesi kriogenik sebenarnya terkait dengan
pembentukan edema lebih jelas. Dalam model penurunan berat badan tikus, Uhl dkk
(1994) gagal menunjukkan efek farmakologis neutropenia yang diinduksi pada
pengembangan edema otak 24 jam setelah cedera. Dalam studi pendahuluan Whalen dkk
(1997) menemukan pola pembukaan BBB sementara yang independen dari peradangan:
BBB bocor dalam 30 menit pertama sampai 4 jam setelah dampak kortikal terkontrol
pada tikus, sedangkan akumulasi WBC memuncak pada 24 jam. Dari dan studi kami,
tampaknya bahwa meskipun akumulasi WBC terjadi setelah kedua serangan TBI dan
iskemia, efek pada pembentukan edema kerusakan BBB mungkin berbeda. Dalam
sebuah penelitian yang sama dengan kami, Soares dkk (1995) menemukan bahwa
perkusi cairan lateral pada tikus menimbulkan suatu perekrutan leukocytic inflamasi
hanya di daerah yang mengalami kerusakan yang bersamaan dengan BBB. Namun,
penulis tidak menunjukkan hubungan sebab akibat antara ekstravasasi WBC kerusakan
barrier dan adalah mungkin bahwa migrasi WBC merupakan peristiwa sekunder.
Perbedaan potensial antara iskemia serebral dan TBI layak mendapat perhatian lebih di
masa depan.
Trauma mekanis menyebabkan aktivasi WBC pada jaringan perifer: peningkatan
infiltrasi neutrofil telah digambarkan dalam waktu 30 sampai 180 menit setelah syok
traumatik dalam usus tikus (Scalia dkk 1996), peningkatan WBC venular yang
menempel terlihat beberapa jam setelah amputasi-reimplantasi pada otot kaki belakang
tikus (Siemionow dkk 1995), dan marginasi WBC umumnya terjadi segera setelah
trauma bedah pada otot cremaster tikus (Kunkel dkk, 1996). Dalam organ perifer WBC
yang menempel terkait dengan peningkatan permeabilitas pembuluh darah (Kubes dkk,
1990). Tingkatan WBC yang menempel diamati dalam percobaan pada 6 jam setelah TBI
kurang dari yang telah dilaporkan setelah reperfusi iskemia dalam otot lurik (400 sampai
18

1.500 WBC yang menempel / mm2 endotelium setelah hanya 2 jam; Menger dkk, 1992;
Nolte dkk 1994). Ada kemungkinan tingkat aktivasi WBC dalam percobaan ini tidak
cukup untuk menginduksi peningkatan permeabilitas serebrovaskuler dan bahwa
gangguan BBB mungkin terjadi lebih dari 6 jam setelah TBI ketika WBC lebih
diaktifkan.
Secara keseluruhan, literatur dan temuan kami tidak memberikan bukti yang
meyakinkan untuk hubungan sebab akibat antara adhesi WBC dan kebocoran BBB
segera setelah TBI. Perbedaan struktural antara BBB dan endotelium perifer, seperti
adanya dari sambungan yang ketat di bekas, dapat memberikan beberapa derajat
perlindungan yang membuat lapisan pembuluh darah di otak kurang rentan terhadap
WBC

yang

disebabkan

perubahan

permeabilitas.

Namun,

hasil

kami

tidak

mengesampingkan kemungkinan bahwa WBC dapat menyebabkan kerusakan BBB yang

tertunda lebih dari 6 jam setelah TBI.
KESIMPULAN
Percobaan

ini

memberikan

deskripsi

pertama

dinamika

WBC

dalam

mikrosirkulasi serebral segera setelah trauma otak mekanik dan mengungkap respon
kompleks dari mikrosirkulasi otak untuk TBI sebagai berikut: (1) Peningkatan perlekatan
WBC pada endotel pembuluh darah dari venula pial pada kelinci mulai dalam waktu 30
menit

setelah

trauma

dan

berhubungan

dengan

inflamasi

ekstravasasi sel ke dalam otak ipsilateral dan kontralateral ke lesi dalam waktu 6 jam
setelah cedera. (2) sel darah putih yang menempel / mm2 menginduksi dilatasi dari
arteriol serebral yang dapat dihapus oleh blokade farmakologis dari interaksi WBCendotel. (3) Gangguan barrier darah-otak terjadi dalam 60 menit pertama setelah TBI dan
tidak berhubungan dengan aktivasi WBC. Aktivasi sel darah putih tidak memberikan
kontribusi terhadap ICP yang meningkat dalam waktu 6 jam setelah TBI.
Namun, WBC diaktifkan sangat awal setelah TBI. Kemungkinan peran mereka
sebagai mediator kerusakan otak sekunder pada suatu titik kemudian (lebih dari 6 jam
setelah TBI) dan efek dari serangan sekunder seperti hipoksia dan hipotensi arteri pada
perilaku WBC harus diselidiki lebih lanjut.

19