Proses untuk fermentasi produksi etanol dari bahan lignoselulosa padat yang terdiri dari

langkah mengobati bahan lignoselulosa yang solid dengan larutan alkali untuk
menghilangkan lignin
US 8232082 B2
Abstrak
Penemuan ini berhubungan dengan suatu proses untuk memperoleh bahan bakar ethanol
dengan menggunakan bahan limbah pertanian dan agroindustri terdiri dari lignoselulosa, dan
terutama tebu gula tebu. Residu ini memiliki isi yang signifikan dari karbohidrat dalam
bentuk polisakarida (selulosa dan hemiselulosa), yang dapat dihidrolisis oleh proses
enzimatik kimia dan. Fraksi hemiselulosa disampaikan kepada hidrolisis ringan dengan asam
sulfat, dan bahan padat dari hidrolisis ini disampaikan kepada proses sakarifikasi (hidrolisis
enzimatik) dengan fermentasi alkohol simultan cepat di bawah kondisi yang memungkinkan
peningkatan yang signifikan dalam konversi ke alkohol dalam sangat dipersingkat waktu.
Deskripsi
Bidang Teknik Penemuan
Penemuan ini berhubungan dengan suatu proses untuk memperoleh bahan bakar ethanol
dengan menggunakan produk-produk limbah pertanian dan agroindustri lignoselulosa, dan
terutama tebu gula tebu. Residu ini memiliki isi yang signifikan dari karbohidrat dalam
bentuk polisakarida (selulosa dan hemiselulosa), yang dapat dihidrolisis oleh proses
enzimatik kimia dan. Fraksi hemiselulosa disampaikan kepada hidrolisis ringan dengan asam
sulfat, dan bahan padat dari hidrolisis ini disampaikan kepada proses sakarifikasi (hidrolisis
enzimatik) dengan fermentasi alkohol simultan cepat di bawah kondisi yang memungkinkan
peningkatan yang signifikan dalam konversi ke etanol dalam sangat dipersingkat waktu.
1. Dasar Penemuan
Limbah dengan komposisi lignoselulosa dari kegiatan pertanian dan agroindustri adalah
masalah lingkungan utama; Namun, mereka dapat menjadi sumber berharga untuk
penerbangan murah bahan awal terbarukan untuk memproduksi berbagai bahan kimia dan
bahan bakar, seperti etanol.
Dalam rangka untuk memanfaatkan pecahan polisakarida untuk produksi etanol, fraksi ini
harus efisien dihidrolisis.
Polisakarida ini difraksinasi dengan cara pretreatment yang terdiri dari reaksi yang dikenal
sebagai hidrolisis asam, dengan tujuan hidrolisis fraksi hemiselulosa. Produk padat dari
langkah ini, yang kaya akan selulosa, masih perlu dirawat untuk menghapus lignin larut
dalam suasana basa sehingga untuk menjamin akses enzim untuk serat selulosa.
Konversi selulosa menjadi etanol melibatkan dua langkah dasar: hidrolisis rantai panjang
molekul selulosa untuk memberikan gula (heksosa), dan fermentasi gula tersebut untuk
memberikan etanol. Di alam, proses ini dilakukan oleh jamur dan bakteri, yang mengeluarkan
enzim yang mampu menghidrolisa selulosa (selulase), dan terutama oleh ragi dalam kasus
fermentasi gula menjadi etanol. Konsep dari aplikasi ini adalah konsisten dengan proses
alami.

Strategi ini menghilangkan adanya racun, yang akan diproduksi oleh hidrolisis kimia
selulosa, dan meminimalkan penghambatan enzim kompleks selulosa oleh produk hidrolisis
sendiri (glukosa dan selobiosa). Teknik ini disebut proses SSF ("sakarifikasi dan fermentasi
simultan") dan melibatkan hidrolisis enzimatik dan fermentasi etanol simultan.
2. Penemuan
Kepedulian dengan melestarikan lingkungan meningkat setiap hari. Dalam konteks ini,
penggunaan produk limbah pertanian dan agroindustri dan mencari pengganti dan / atau
produk alternatif yang kurang berbahaya bagi alam adalah topik penting di seluruh dunia.
Dengan ide yang sama dalam pikiran, ada pencarian sumber energi alternatif, dan
penggunaan produk limbah pertanian dan agroindustri yang bisa menghasilkan produk
ekonomis dan / atau menghasilkan produk yang kurang polusi. Di bidang sumber-sumber
alternatif, banyak upaya telah dilakukan untuk menghasilkan bahan bakar bersih, seperti
etanol, misalnya.
Di Brazil, pertumbuhan industri etanol gula, dan produksi konsekuen dalam jumlah besar
kelebihan ampas tebu tebu, telah melahirkan skenario yang sangat menjanjikan, mengingat
kebutuhan untuk membuat penggunaan rasional bahan lignoselulosa ini.
Karena kepentingan lingkungan dan ekonomi, penggunaan etanol sebagai bahan bakar
ditambahkan ke bensin atau sebagai bahan untuk pembuatan biodiesel mulai tumbuh
vertiginously, dengan Brazil menjadi salah satu produsen terbesar di dunia. Akibatnya, Brasil
menghasilkan jumlah besar dari ampas tebu, dan juga gula tebu jerami, yang keduanya
memiliki potensi besar untuk produksi etanol bioteknologi.
Produksi etanol dari tebu gula tebu oleh enzimatik dan fermentasi rute akan memungkinkan
penggunaan bahan kurang dimanfaatkan untuk menghasilkan produk yang menarik industri
besar, dengan keuntungan ekonomi dan lingkungan.
The sakarifikasi simultan dan teknik fermentasi (proses SSF) diarahkan menggunakan fraksi
selulosa telah dijelaskan dalam literatur spesialis dan telah diterapkan untuk berbagai tujuan
untuk memproduksi bahan kimia dan bahan bakar. Namun, belum untuk diterapkan pada
skala komersial.
Kesulitan utama yang perlu diatasi berhubungan dengan mikroorganisme, yang perlu tahan
terhadap kondisi operasi, terutama dalam hal konsentrasi inhibitor yang dihasilkan dalam
media reaksi, seperti furfural, hidroksimetil-furfural, logam berat, senyawa terpen, tanin dan
senyawa fenol, dll, misalnya, dihasilkan dari pretreatment bahan lignoselulosa, yang
menghambat pertumbuhan ragi.
Kesulitan lain yang melekat ke agen biologis adalah keterbatasan mereka sebagai hal
pemanfaatan karbohidrat yang dihasilkan dari proses hidrolisis (pentosa dan heksosa).
Asosiasi dari kedua faktor ini menyebabkan proses fermentasi yang panjang, sehingga tingkat
volume produksi yang rendah, yang merupakan parameter penting mendasar transfer salam
untuk skala industri.
Sebagian besar laporan terbaru menggambarkan penggunaan mikroorganisme hasil rekayasa
genetika yang dikembangkan untuk aplikasi tertentu, yang dirancang untuk menghindari
masalah ini.

Produksi etanol dengan teknik biologi telah berada di bawah studi untuk waktu yang lama;
Namun, ia telah memiliki dorongan yang cukup besar dalam beberapa tahun terakhir. Seperti
disebutkan sebelumnya, hambatan besar yang harus diatasi berkaitan dengan tingkat
produksi, yaitu, untuk mencapai proses ekonomis yang memberikan hasil yang baik
menggunakan bahan awal yang mudah diakses.
Grohmann dkk. (US Pat. No. 5125977) menggambarkan suatu proses dimana biomassa
(pertanian, kehutanan, tanaman dan limbah pengolahan makanan) diolah sebelumnya dalam
dua langkah untuk memulihkan xylose. Pada langkah pertama, hemiselulosa, pada dasarnya
mengandung xylanes, adalah pra-dihidrolisis dengan asam encer (asam sulfat 9% v / v), dan
residu diserahkan ke langkah kedua hidrolisis enzimatik, meninggalkan biomassa untuk
bereaksi untuk waktu yang cukup untuk selulosa yang akan perlahan-lahan dihidrolisis.
Tujuan dari proses ini adalah untuk memulihkan xylane sedemikian rupa sehingga ca. 90%
dapat dihidrolisis, menghindari keterbatasan proses konvensional untuk memproduksi xilosa.
Kelemahan dari metode ini adalah bahwa ketika kondisi suhu yang keras yang digunakan
(160 C sampai 220 C) banyak zat terbentuk yang menghambat metabolisme mayoritas
mikroorganisme yang digunakan dalam proses fermentasi.
Dokumen paten GB 2.253.633, yang sesuai dengan PI paten Brasil 9.200.100 dari 15 Januari
1992, menjelaskan proses untuk memproduksi etanol dari biomassa di mana substrat
termasuk hidrolisat selulosa, hemiselulosa dan pati, dengan tujuan menghasilkan difermentasi
gula enam-karbon . Fermentasi menggunakan strain ragi rekayasa genetika (Brettanomyces
custersii CBS 5512), yang menghasilkan enzim -glucosidade, memungkinkan ragi ini untuk
fermentasi glukosa dan selobiosa. Namun, masalah fermentasi pentosa tetap belum
terpecahkan.
US Pat. No 5.231.017 menggambarkan suatu proses untuk memproduksi etanol
menggunakan bahan awal dengan kandungan padatan tinggi, seperti jagung tongkol, bijibijian, sereal dan campurannya. Pati hadir dalam bahan awal ini dibawa ke dalam kontak
dengan -amilase komersial dari Bacillus lickenformis (TAKA-Therm II), untuk
memberikan media cair difermentasi, yang saccharified di hadapan glukoamilase komersial
berasal dari Aspergillus niger (DISTILLASE ) untuk mendapatkan pati dihidrolisis dan
gula, yang difermentasi oleh ragi Saccharomyces cerevisiae untuk mendapatkan etanol.
Meskipun menggunakan teknik sakarifikasi dan fermentasi simultan, metode ini tidak dapat
diterapkan untuk tebu gula tebu.
Torget et al, (Paten AS. No. 5705369) menggambarkan proses generik untuk pre-hidrolisis
bahan lignoselulosa, di mana kombinasi yang berbeda dari rentang suhu dan waktu reaksi
diselidiki dengan tujuan memperoleh pemisahan persentase yang lebih baik dari hemiselulosa
dan lignin dari selulosa. Temperatur yang berbeda (di kisaran 120 C sampai 240 C) dan
pH (dalam kisaran 1-7) diuji dalam suatu sistem di mana cairan (produk larut pra-hidrolisis)
bergerak melalui fase padat (" aliran-melalui "sistem) dan kuantitas xylane dan lignin yang
diekstrak dari bahan ditentukan. Kombinasi kondisi kurang parah memberi peningkatan 5%
dalam penghapusan lignin.
Brasil Aplikasi Paten PI 0600409-1 dari 8 Februari 2006 menjelaskan proses untuk
memproduksi enzim selulolitik dan hemicellulolytic dari bahan limbah (kayu keras dan sereal
jerami). Bahan limbah ini digunakan sebagai sumber karbon untuk menginduksi enzim ini,
dengan peningkatan genetik dan digabungkan strain Trichoderma reesei. Dengan adanya
substrat merangsang (misalnya selulosa) strain liar mikroorganisme ini bisa mengeluarkan

kompleks dianggap paling tepat untuk hidrolisis selulosa. Dengan demikian proses untuk
memproduksi enzim selulolitik dan / atau hemicellulolytic diproduksi oleh strain khusus.
Pertama, pretreatment, langkah terdiri ekspansi uap (150 C sampai 250 C) di bawah
kondisi asam selama beberapa menit, untuk mengkonversi hemiselulosa menjadi monomer,
dengan xilosa menjadi gula dominan. Gula diekstraksi dengan mencucinya dengan fase
berair, dan digunakan sebagai sumber karbon untuk produksi enzim; residu padat dari
ekstraksi, yang berisi selulosa dan lignin, dapat dihidrolisis oleh enzim selulolitik diproduksi.
Tujuan dari penemuan dalam aplikasi ini, yang akan dijelaskan secara rinci di bawah, juga
penggunaan limbah lignoselulosa, dan lebih khusus gula padat tebu yang telah pra-perawatan
oleh proses untuk hidrolisis asam dari hemiselulosa di Brasil Aplikasi Paten PI 0505299-8
dari 11 November 2005 oleh pemohon yang sama.
Ringkasan Penemuan
Penemuan ini berhubungan dengan suatu proses untuk memperoleh bahan bakar ethanol
dengan menggunakan bahan lignoselulosa dengan teknik sakarifikasi simultan cepat dan
fermentasi dalam kondisi tertentu yang memberikan lebih baik menggunakan fraksi selulosa
dan produksi etanol efisien.
Lebih khusus, proses penemuan terdiri pengobatan residu padat setelah hidrolisis asam gula
tebu. Dalam proses ini, hidrolisat dari fraksi hemiselulosa ampas tebu, kaya xylose, diperoleh
hidrolisis ringan dengan encer asam sulfat, dan fermentasi menggunakan strain dari Pichia
ragi stipitis sesuai menyesuaikan diri terhadap substrat utama dalam hidrolisat ( xylose).
Residu padat dari hidrolisis asam (cellulolignin) diperlakukan masih dalam reaktor untuk
menghilangkan lignin dengan cara serangkaian bilasan basa dalam rangka mempersiapkan
serat selulosa untuk menerima persiapan enzim komersial yang sesuai. Materi yang sebagian
didelignifikasi diserahkan kepada sakarifikasi cepat dan fermentasi, untuk menghasilkan
etanol, dengan adanya strain ragi alami dari spesies Saccharomyces cerevisiae.
Keuntungan besar dari proses ini adalah bahwa etanol dapat diperoleh dari tebu gula tebu,
mencapai tingkat produksi volume tinggi bervariasi dari 1 sampai 3 g / Lh, mewujudkan
semua potensi metabolisme ragi alami tanpa perlu modifikasi genetik.
Uraian Singkat Gambar
Gambar. 1 adalah diagram alir sederhana dari langkah-langkah utama dari proses penemuan.
Gambar. 2 adalah grafik yang menggambarkan hasil yang diperoleh dengan proses
penemuan.
Uraian Lengkap Penemuan
Tujuan dari penemuan ini adalah untuk memanfaatkan fraksi polisakarida gula tebu, yang
dapat digunakan untuk memproduksi etanol, sebagai aditif bahan bakar atau bensin, atau
sebagai bahan kimia bahan awal, tanpa menggunakan konsentrasi enzim yang tinggi, dan
beroperasi dengan periode singkat sakarifikasi dan fermentasi alkohol.
Dalam rangka untuk lebih menghargai penemuan, hal ini dijelaskan dengan mengacu pada
diagram alir di Gambar. 1 , Yang menunjukkan perwujudan yang disukai dari penemuan ini.

Seperti yang ditunjukkan di Gambar. 1 , Biomassa (1) mengandung bahan lignoselulosa

awalnya diserahkan kepada proses hidrolisis dengan asam encer (2), yang memberikan
hidrolisat hemiselulosa (3) kaya pentosa, yang difermentasi (4) untuk menghasilkan etanol,
yang kemudian disuling ( 5), dan residu padat (6) kaya selulosa dan lignin-cellulolignin.
Residu ini (6) disampaikan kepada pretreatment dengan mencuci (7) dengan larutan alkali,
dan kemudian untuk proses hidrolisis enzimatik (sakarifikasi) (8) untuk melepaskan glukosa,
dan sekaligus untuk proses fermentasi (9) dengan ragi, memfermentasi glukosa menjadi
etanol, yang dipisahkan dari media fermentasi dan destilasi (5).
Tahap pertama dari proses hidrolisis terdiri ringan dari tebu gula tebu dengan 1% asam sulfat
untuk memperoleh istimewa pentosa, dan terutama xilosa, konstituen utama dari fraksi
hemiselulosa gula tebu.
Tahap pertama ini dijelaskan secara rinci dalam Paten Brasil Aplikasi PI 0505299-8, yang
diajukan oleh pemohon yang sama. Bahan selulosa dihomogenisasi dan diserahkan kepada
hidrolisis asam ringan dalam reaktor pers khusus, di mana kapal utama adalah pada tekanan 1
atm (sesuai dengan suhu 121 C) untuk durasi yang memutuskan sesuai dengan padat : rasio
cair, dan biasanya dalam kisaran dari 30 sampai 50 menit. Fase cair (hidrolisat) dipisahkan
dari residu padat dengan menekan masih dalam reaktor, dan diserahkan kepada proses
fermentasi di hadapan Pichia stipitis ragi diaklimatisasi dan disesuaikan dengan medium
fermentasi, untuk mendapatkan etanol.
Namun, residu padat masih mengandung tingkat tinggi selulosa, yang perlu dihidrolisis
menjadi gula, yang difermentasi oleh strain Saccharomyces cerevisiae untuk menghasilkan
etanol. Proses yang merupakan objek dari penemuan ini, yang sesuai dengan tahap kedua dari
proses keseluruhan, akan dijelaskan dari titik ini dan seterusnya.
Tahap kedua dari proses ini pada dasarnya terdiri dari pengobatan residu padat, yaitu:

a) pretreatment dari cellulolignin dalam media basa, diikuti dengan mencuci dengan
air;
b) transfer residu ke bioreaktor untuk hidrolisis enzimatik (sakarifikasi) yang sama
pada suhu sedang, dengan adanya beban enzim komersial untuk jangka waktu lebih
dari 8-12 jam;

c) fermentasi simultan fraksi selulosa dari bahan dihidrolisis di langkah sebelumnya,

dengan menambahkan ragi cocok untuk produksi etanol, menjaga konsentrasi enzim,
untuk jangka waktu maksimal 32 jam;

d) pemisahan dan distilasi etanol yang dihasilkan.

Keuntungan utama dari proses penemuan ini adalah bahwa hal itu mencapai produksi etanol
pada tingkat volume produksi yang signifikan dalam waktu menurun, karena kondisi diuji
dan dioptimalkan, sehingga keuntungan ekonomi yang membuat implementasi komersial
daripadanya layak.
Proses yang dikenal dalam penemuan sebelumnya tidak mencapai konversi menjadi etanol di
masa yang singkat, meskipun menggunakan mikroorganisme hasil rekayasa genetika, dan
memerlukan ca. 3-5 hari. Dengan proses penemuan, produksi maksimum etanol sudah
ditemukan setelah hanya 8 jam sakarifikasi dan tambahan 32 jam fermentasi.

Efisiensi proses tersebut diberikan untuk kontrol ketat dari variabel-variabel penentu terlibat
dalam sama, dan penentuan kondisi operasi yang optimal.
Dalam rangka untuk lebih mengevaluasi proses penemuan, perwujudan proses akan
dijelaskan; Namun, contoh-contoh yang disajikan hanya dengan ilustrasi.
Disukai Mode untuk Membawa Out Penemuan
Seperti disebutkan sebelumnya, langkah pertama dari proses melibatkan hidrolisis asam dari
bahan lignoselulosa untuk mendapatkan hidrolisat hemiselulosa dan fraksi padat. Metode
yang diadopsi diringkas dalam Contoh 1 di bawah ini.
Contoh 1
Langkah pertama dari proses ini adalah hidrolisis dengan asam sulfat (1% v / v) untuk
mendapatkan hidrolisat hemiselulosa dan fraksi padat, dan hidrolisis asam dari fraksi
hemiselulosa selama sekitar 40 menit, menggunakan padat optimal: rasio cair. Bahan padat
dihapus dengan menekan dalam reaktor pers khusus dikembangkan untuk proses di PI
0502599-8. Hidrolisat dinetralkan dengan Ca (OH) 2 dan disaring, dengan hidrolisat cairan
yang dikeluarkan untuk disampaikan kepada fermentasi pentosa oleh biomassa diaklimatisasi
yang digunakan pada konsentrasi 10 g / L, di bioreaktor untuk 20-30 h, pada suhu sekitar 30
C biomassa tersebut diaklimatisasi oleh propagasi sel berurutan, dengan isi hidrolisat yang
meningkat secara bertahap. Pada akhir fermentasi etanol dipisahkan dan suling.
Tingkat volume produksi yang diperoleh adalah dari urutan 1,0 g / Lh
Contoh 2
Padatan dipisahkan dalam reaktor seperti yang dijelaskan dalam contoh sebelumnya
diperlakukan sesuai dengan proses penemuan. Padat dari langkah ini, yang kaya akan
selulosa, disampaikan kepada serangkaian mencuci basa sementara masih dalam reaktor pers,
dalam rangka untuk menghapus sebagian lignin larut, unsur aromatik yang menghambat
proses fermentasi. Langkah ini sangat penting mendasar dalam sebanyak itu meningkatkan
aksesibilitas dari serat selulosa untuk enzim.
Residu padat dipisahkan dengan menekan dalam reaktor dicuci dengan larutan alkali (NaOH
4% b / v) dan kemudian diserahkan kepada mencuci beruntun dengan sedikit diasamkan
(HCl) air hingga mencapai pH 6-7, dan diumpankan kembali ke bioreaktor untuk
pretreatment enzim. Dalam bioreaktor, residu padat dicampur dengan air yang mengandung
mikronutrien dalam rasio 1: 10-20, sambil mempertahankan suhu dalam kisaran 30 C
sampai 50 C, dan lebih disukai 47 C, dengan enzim selulosa komersial (GENENCOR
GC220) yang ditambahkan ke campuran ini pada konsentrasi 20-30 FPU / g, dan reaksi
diizinkan untuk melanjutkan selama 8 sampai 12 jam. Ini diikuti dengan fermentasi simultan
dari media fermentasi, dengan mikroorganisme yang ditambahkan yang memiliki aktivitas
cocok untuk etanol produksi-Saccharomyces cerevisiae, tanpa modifikasi genetik. Suhu di
reaktor dipertahankan pada kisaran 30 C sampai 39 C, dan sebaiknya dekat dengan 37 C,
dengan konsentrasi sel ragi yang dipelihara dalam kisaran 2 sampai 6 g / L, untuk maksimum
periode 30 sampai 32 jam.

Konversi selulosa menjadi etanol melibatkan dua langkah mendasar: hidrolisis rantai panjang
molekul selulosa menjadi gula (heksosa), dan fermentasi gula tersebut menjadi etanol.
Penghapusan zat beracun yang akan dihasilkan oleh hidrolisis kimia selulosa meminimalkan
penghambatan enzim kompleks selulase oleh produk mereka sendiri dari hidrolisis (glukosa
dan selobiosa). Proses penemuan ini juga menggunakan teknik sakarifikasi dan fermentasi
simultan, yang dikenal dalam seni sebagai proses SSF.
Konsentrasi etanol antara 50 dan 55 g / L diperoleh, dan tingkat produktivitas yang dicapai
berada di kisaran 1,5-2,0 g / Lh
Hasil disajikan dalam grafik konsentrasi terhadap waktu ditunjukkan pada Gambar. 2 .
Ketika kedua tahapan proses yang diterapkan, konversi ke etanol mencapai 182 L / ton ampas
tebu tebu, yang membuat proses secara keseluruhan cukup ekonomis, mengingat bahwa
adalah mungkin untuk mengurangi waktu untuk konversi di tahap kedua dari 4 hari -5 sampai
32 jam.
Perlu ditekankan, bagaimanapun, bahwa contoh-contoh yang disajikan di sini hanyalah
ilustrasi di alam dan tidak membatasi penemuan, dan itu akan menjadi jelas bagi orang yang
ahli dalam bidang ini bahwa persiapan lainnya enzim, komersial atau sebaliknya, dan ragi
yang berbeda, dapat dipekerjakan dalam lingkup penemuan.
Klaim (19)
1. Proses untuk memproduksi etanol dari bahan lignoselulosa enzymically, dimana proses
terdiri dari langkah-langkah:
a) mengirimkan materi padat yang terdiri selulosa dan lignin untuk satu atau lebih mencuci
dengan larutan alkali setidaknya sebagian untuk menghapus lignin dari kata bahan padat, cuci
dengan air, dan memisahkan bahan padat yang tersisa dari fase berair; kemudian
b) menghidrolisa bahan padat, terdiri mereaksikan bahan padat dengan larutan mikronutrien
dan enzim selulolitik, dimana padat: rasio cair 1:10-01:20, suhu dari 30 C sampai 50 C .,
konsentrasi enzim adalah 20-30 FPU / g, dan reaksi dibiarkan berlanjut untuk 8-32 jam; dan
c) fermentasi, media yang dihasilkan dari hidrolisis enzimatik, yang terdiri menambahkan
etanol yang memproduksi ragi, dimana ragi memiliki konsentrasi sel 2-6 g / L, dan
mempertahankan suhu dari 30 C sampai 39 C. , untuk jangka waktu tidak lebih dari 32
jam; kemudian
d) memisahkan etanol dengan distilasi.
2. Proses menurut klaim 1 , Dimana ragi adalah non Saccharomyces rekayasa genetik
cerevisae ragi.
3. Proses menurut klaim 1 , Dimana tingkat produksi dari proses ini adalah dalam kisaran 1,03,0 g / Lh
4. Proses menurut klaim 1 , Dimana periode total prosesnya tidak lebih dari 32 jam.
5. Proses menurut klaim 1 , Dimana hidrolisis dilakukan pada suhu dari 45 C sampai 49 C.
6. Proses menurut klaim 1 , Dimana fermentasi dilakukan pada suhu 35 C sampai 39 C.
7. Proses menurut klaim 1 , Dimana konsentrasi biomassa dari ragi langkah c) dipertahankan
dalam kisaran 2-6 g / L.
8. Proses menurut klaim 1 , Dimana enzim dimaksud pada langkah b) disediakan dengan
menambahkan persiapan enzim selulosa komersial.
9. Proses menurut klaim 1 , Dimana bahan lignoselulosa terdiri tebu gula tebu.
10. Proses menurut klaim 1 , Di mana sakarifikasi dan fermentasi simultan (SSF) dilakukan.

11. Sebuah proses untuk memproduksi etanol dari bahan lignoselulosa enzymically, dimana
proses terdiri dari langkah-langkah:
i) hydrolysing dan fermentasi bahan lignoselulosa, dan mempertahankan bahan padat; dan
ii) melakukan proses sesuai dengan klaim 1 pada kata bahan padat.
12. Proses menurut klaim 1 , Dimana cuci dengan air pada langkah a) dilakukan dengan air
diasamkan untuk menghasilkan PH 6-7.
13. Proses menurut klaim 1 , Dimana langkah memisahkan bahan padat yang tersisa dari fase
berair pada langkah a) dilakukan dengan cara filtrasi dalam reaktor pers khusus atau lainnya.
14. Proses menurut Klaim 13 , Dimana langkah b) dari menghidrolisa bahan padat dilakukan
saat masih dalam reaktor.
15. Proses menurut klaim 1 , Dimana langkah b), reaksi dibiarkan berlanjut untuk 8-30 jam.
16. Proses menurut Klaim 15 , Dimana reaksi dibiarkan berlanjut untuk 8-12 jam.
17. Proses menurut klaim 1 , Dimana fermentasi langkah c) dilakukan oleh fermentasi
simultan.
18. Proses menurut klaim 1 , Dimana langkah c) suhu dari 30 C sampai 39 C
dipertahankan untuk jangka waktu 30 sampai 32 jam.
19. Proses menurut Klaim 11 , Dimana bahan lignoselulosa adalah tebu gula tebu.