STUDI TOKSISITAS ORAL AKUT (LD50) DENGAN EKSTRAK PELARUT YANG

BERBEDA DARI DAUN ABRUS PRECATORIUS LINN PADA TIKUS WISTAR

ABSTRAK
Daun Abrus precatorius telah digunakan dalam pengobatan tradisional untuk mengobati
berbagai penyakit termasuk batuk, malaria dan infertilitas pada wanita. Daun ini juga telah
terbukti memiliki berbagai efek farmakologis yang bermanfaat. Dalam penelitian ini diselidiki
toksisitas akut oral dari air, 70% metanol, petroleum eter dan ekstrak aseton. Metode grafis
dari Miller dan Tainter digunakan untuk memperkirakan LD50, yaitu menggunakan dosis
bertingkat 5000 mg/kg (dosis batas oral). Angka kematian, perubahan berat badan dan
perubahan berat organ juga diukur pada semua kelompok perlakuan. Ekstrak aseton yang
memiliki nilai LD50 terendah (187mg/kg) menunjukkan toksisitas yang lebih tinggi.
Penelitian ini juga mengungkapkan bahwa metanol adalah pelarut beracun (3942mg / kg)
yang digunakan dalam ekstraksi. Hasil histopatologi mengungkapkan adanya perubahan
patologis pada organ yang diperiksa, hal ini dapat mengungkapkan bahwa ada kemungkinan
hepatotoksisitas, kardiotoxicitas dan nefrotoksisitas dari ekstrak pada dosis batas oral.
Kata kunci: Abrus precatorius, pelarut, ekstraksi, polaritas, toksisitas.
PENDAHULUAN
Tanaman obat menjadi bagian integral dari masyarakat umum karena berkaitan dengan
penggunaan terapinya. Dengan demikian, saat ini penelitian fitotomedisin sedang
dipromosikan, mengalami resolusi dan telah direkomendasikan oleh WHO yang
menganjurkan penerapan kriteria ilmiah dan metode untuk membuktikan keamanan dan
kemanjuran tanaman obat. Khususnya resolusi Obat alami AFR / RC49 / R5 dan AFR /
RC50 / R5 di Kawasan Afrika WHO, negara-negara anggota yang mendesak untuk
mendorong penelitian tanaman obat dan untuk mempromosikan penggunaannya dalam sistem
pemberian perawatan kesehatan. Namun, data keamanan dan kemanjuran yang tersedia masih
hanya beberapa tanaman saja. Dalam menghadapi informasi langka tentang keamanan,
khasiat dan karakteristik fitokimia senyawa yang berbeda, sulit bagi perusahaan obat untuk
menilai kegunaan potensial atau nilai dari senyawa yang ditemukan pada sumber daya
tanaman kita yang sangat kaya ini.
Uji toksisitas akut adalah tes yang mana dosis tunggal obat ini diberikan pada setiap
hewan pada satu kesempatan untuk menentukan perilaku kotor dan LD50 (dosis yang telah

terbukti mematikan/menyebabkan kematian 50% dari kelompok diuji hewan). Ini merupakan
langkah awal dalam penilaian dan evaluasi karakteristik beracun suatu zat dan merupakan
penilaian awal manifestasi beracun yang memberikan informasi tentang bahaya kesehatan
yang mungkin timbul dari paparan jangka pendek dari suatu obat. LD50 untuk zat tertentu
adalah jumlah yang diharapkan untuk menyebabkan kematian setengahnya (yaitu 50%) dari
kelompok beberapa spesies hewan tertentu, biasanya tikus atau mencit bila diberikan melalui
rute tertentu. Hal ini biasanya dinyatakan sebagai jumlah bahan kimia yang diberikan
(misalnya mg) per 100 g (untuk hewan kecil) atau per kg (untuk subjek yang lebih besar) dari
berat badan hewan uji. LD50 diperoleh dari penelitian akhir yang dilaporkan berkaitan dengan
rute dari administrasi misalnya zat uji LD50 (oral), LD50 (kulit), dll. Studi yang paling sering
dilakukan adalah LD50 oral. Umumnya, semakin kecil nilai LD50, maka semakin beracunlah
zat tersebut (dan sebaliknya). Abrus precatorius adalah salah satu tanaman yang digunakan
sebagai obat tradisional secara luas di seluruh budaya yang berbeda secara global. Tanaman
ini adalah jenis kacang polong yang panjang, daun majemuk menyirip dari nama keluarga
Fabaceae. Bunganya tersusun dalam violet atau cluster merah muda. Buah biji kembali
mengikal ketika terbuka dan mengeluarkan benih. Benih berbentuk truncate dengan panjang
1,5-2 cm dengan warna merah menyala dan warna hitam. Memiliki cabang ramping dan
silinder keriput batang dengan halus bertekstur kulit coklat. Abrus precatorius berasal dari
kata Yunani yaitu Abrus yang berarti halus dan mengacu pada selebaran; precatorius mengacu
pada petisi dan terpilih karena penggunaan benih di Rosario.
Penelitian ini menyelidiki toksisitas oral (LD50) dari ekstrak pelarut yang berbeda dari daun
Abrus precatorius Linn pada tikus wistar.
BAHAN DAN METODE
1. Bahan tanaman
Daun Abrus precatorius dikumpulkan dari lahan pertanian di Urualla. Identifikasi
dan autentikasi tanaman

dilakukan oleh Dr G.E Omokhua, dari Kehutanan

danPengelolaan Margasatwa, Fakultas Pertanian, dan Dr N.L Edwin dari Departemen Ilmu
Tanaman danBioteknologi, Sekolah Tinggi Ilmu Alam dan Terapan, Universitas Port
Harcourt.
2. Peralatan dan Reagen
Alat :
a. Gambar Mikroskop (Olympus, Jepang)

b. Rotary Evaporator (Heildolph Instrumen, Jerman)

c. Neraca Digital (Type BD202, SNR 06.653)
d. Jarum suntik (1 mL, 5 mL), kapas, pipa kapiler, botol EDTA, slide mikroskopik
(Olympus, Cina), sarung tangan, Silica gel (200-400 mesh)
Reagen :
a. Giemsa stain, Methanol, Aseton,Petroleum Eter,asam Picric, larutan Tannic, Kalium
iodida

merkuri,

Ferriklorida,

asam

klorida,

Kloroform,

Sodium

hidroksida,

Tetraoxosulphate (V1) asam dan reagen Dragendorff

b. bahan kimia lainnya seperti natrium hidroksida, natriumnitrit, besi klorida, amonium
tiosianat, aluminium klorida, kalium dihidrogen fosfat, dipotassiumhidrogen fosfat yang
diproduksi oleh Merck, Jerman juga digunakan. Semua reagen lain yang digunakan
adalah dari analisisbermutu dan disusun berdasarkan sesuai dengan spesifikasi
menggunakan pelarut yang sesuai dan air suling.
3. pelarut
Efek toksik dari 4 pelarut biasa digunakan dalam proses ekstraksi tanaman obat yang
diuji padatikus wistar. Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini (dengan urutan
polaritas dari rendah ke tinggi) adalah petroleum eter, aseton,70% metanol dan air.
4. skrining fitokimia
Analisis kualitatif fitokimia dilakukan dengan menggunakan pelarut 70% metanol,
aseton dan petroleum eter,ekstrak daun precatorius yang dilakukan mengikuti prosedur
standar.
5. Keracunan Studi akut
Tikus dari kedua jenis kelamin ditempatkan pada kandang terpisah, diberi dosis
tunggal secara per dengan batas 5.000 mg / b.wt kg dengan pelarut yang berbeda. Hewan
kontrol diberi perlakukan dengan memberikan ekstrak daun precatorius dan air suling dan
diamati tanda-tanda toksisisitas akutnya terhadap setiap kelompok selama 24 jam.
Pengamatan awal dilakukan pada 2 jam pertama,4 jam dan 6 jam sekali.Hewan coba
diamati setiap hari selama 7 hari. Nilai mortalitas persentase adalah Persentase nilai
mortalitas dikonversi ke nilai probit dengan membaca unit probit yang sesuai dan diplot
terhadap dosis log. Dengan demikian, LD50diperkirakan secara grafik menggunakan nilai
probit yang sesuai dengan probit 5 atau 50%.
Berat badan tikus dicatat sebelum masa pengobatan, selama periode pengobatan dan
setelahmasa pengobatan. Rata-rata bobot tubuh tikus tiap kelompok juga dihitung. Semua

tikus yang masih hidup dipuasakan selama 16-18 jam, dan dua tikus dari setiap kelompok
kemudian dikorbankan untuk pemeriksaan nekropsi. Organyang akan diamati dipotong dan
ditimbang. Pengamatan patologis terhadap jaringan dilakukan dengan pemeriksaan
histopatologi. Tikus dianestesi dan diinduksi dengan pemberian 1% chlorose di 25%
urethrane (w / v) (5 ml / kg). Darah dikumpulkandari hati untuk analisis hematologi dan
biokimia. organ yang dipotong, disiapkan dan ditimbangmenggunakan Mettler - toledo
GmbH neraca digital. Berat organ yang dipotong distandardisasi untuk 100g perberat
badan hewan dan organ-organ lainnya kemudian diawetkan dalam 10% formol saline
untuk pemeriksaan histo-patologis.
6. histopatologi
Hati, ginjal dan jantung dari semua hewan-hewan itu disimpan di 10% buffered
formalin dalam botol diberi label, dan diprosessecara rutin untuk pemeriksaan histologis.
Jaringan

yang

melekat

pada

lilin

parafin

dipotong

setebal5

pM,

diwarnai

denganhematoksilin dan eosin, dipasang pada slide kaca dan kemudian diperiksa di bawah
mikroskop cahaya standar.

HASIL
Pemberian obat pada hewan coba tikus dengan batas dosis akut oral 5000 mg / kgBB
dengan pelarut ekstrak daun A. precatorius yang berbeda menunjukkan perubahan aktivitas
fisik dan tanda-tanda gejala keracunan yang jelas (Kelelahan, menjilati kaki, tinja berair, air
liur, menggeliat dan kehilangan nafsu makan) dan kematian sampai 72 jam setelah pemberan
obat, menunjukkan bahwa LD50 ekstrak mentah pada tikus secara signifikan kurang dari
5000 mg / kg. Kemudian, dosis berikutnya dari masing-masing ekstrak diberikan (240, 480,
960, 1920mg / kg).
Nilai LD50 dihitung dengan analisis probit dengan persen keberhasilan 95%. Nilai
persentase kematian diplot terhadap log-dosis (Gambar 1-4) dan kemudian dosis sesuai
dengan probit 5, yaitu, 50% ditentukan dan Hasilnya ditunjukkan pada Tabel 3
Tabel 1: Persentase Hasil Ekstrak
Bagian Tumbuhan

Berat Tanaman

yang Digunakan

Sampel yang

Jenis pelarut

Extract yield (%)

Digunakan (g)
700
Petroleum Ether
13.7g w/w
681
Acetone
15.9 g w/w
527
70% Methanol
18.4 g w/w
300
Aqueous
16.1 g w/w
Tabel 2: konstituen fitokimia ekstrak daun A. Precatorius

Daun
Daun
Daun
Daun

Konstituen

Aqueous

70% Methanol

Acetone

Petroleum

fitokimia
Alkaloid
Glikosida
Tannin
Flavonoid
Saponin
Triterpen
Steroid
Gum dan

+
++
+
++
-

+
+++
+
++
+
+++
+
-

+
++
+++
+
+
+
-

Ether
++
+
+
+
+
++
-

+
++

++
++

+
+++

mucilage
Protein
Pati
+
Lemak dan fixed +
oils
Present = + Absent = -

Table 3: Results of LD 50 Dose Determination Following the Administration of A.

precatorius solvent extracts

Table 4: Results of median lethal dose determination of A. precatorius solvent extracts

Efek akut pemberian oral ekstrak A.precatorius terhadap berat badan dan berat organ
Tidak ada perbedaan yang signifikan pada bobot hewan uji dibandingkan dengan kontrol
setelah pemberian aqueous extract. Semua hewan dalam kelompok ini menunjukkan
perubahan berat yang normal tanpa peningkatan yang besar seperti yang ditunjukkan pada
Tabel 5. Pengobatan dengan 70% metanol dan Petroleum eter tidak menyebabkan kenaikan
berat badan atau penurunan berat badan, sedangkan ekstrak aseton menyebabkan penurunan
berat badan yang drastis pada hewan uji (p <0,01).

Gambar 1-4: Plot persentase kematian terhadap log dosis setelah pemberian oral dengan
peningkatan dosis ekstrak daun A. precatorius. (Gambar 1: aqueous ekstract, Gambar 2: 70%
ekstrak metanol, Gambar 3: Ekstrak Aseton dan Gambar 4: Petroleum ether extract)
Tabel 5: Berat badan hewan coba setelah pemberian akut oral ekstrak A. precatorius

Data merupakan Mean S.E.M untuk setiap kelompok tikus, n = 5 .

* P <0,05 = perbedaan yang signifikan
Tabel 6: Berat Organ hewan percobaan setelah pemberian oral akut ekstrak daun A.
Precatorius

Data merupakan Mean S.E.M untuk setiap kelompok tikus, n =5. * P <0,05=
perbedaan signifikan; ** P <0,01 = sangat signifikan
Umumnya, ada penurunan berat pada pemeriksaam organ vital (p> 0,05) (Tabel 6).
Ditandai dengan menyusutnya liver yang terlihat di ekstrak Aseton dan Petroleum Ether
hewan uji (p <0,01)
Pemeriksaan histopatologi: Pemeriksaan histopatologi hati, jantung dan ginjal tikus yang
diberi ekstrak A. precatorius menunjukkan perbedaan morfologi yang signifikan pada dosis
tinggi 5g / kg seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5 - 7 (H & E, 300). Pemberian aseton

dan ekstrak petroleum eter toxic terhadap

organ vital tikus terutama hati seperti yang

ditunjukkan pada gambar di bawah ini. Umumnya, kerusakan organ terlihat lebih ringan
dengan pemberian aqueous ekstract dan ekstrak metanol 70%. Di sisi lain, terssumbatnya
pembuluh darah, glomerulosklerosis, pembuluh darah glomeruli membesar dan edema yang
terlihat pada beberapa sel epitel tubular ginjal tikus .

Gbr 5a: Ginjal pada Tikus Kontrol

Gbr 5b: Ginjal tikus yang diberi perlakuan dengan aqueous ekstrak
Gbr 5c: Ginjal tikus yang dibeti perlkuan dengan ekstrak methanol 70%
Gbr 5d: Ginjal tikus yang diberi perlakuan dengan Ekstrak Aseton Tikus
Gbr 5e: Ginjal Tikus yang diberi perlakuan dengan Petroleum Eter

Gbr 6a: Jantung pada Tikus Kontrol

Gbr 6b: Jantung tikus yang diberi perlakuan dengan aqueous ekstrak
Gbr6c: Jantung tikus yang dibeti perlakuan dengan ekstrak methanol 70%
Gbr 6d: Jantung tikus yang diberi perlakuan Ekstrak Aseton Tikus
Gbr 6e: Jantung Tikus yang diberi perlakuan Petroleum Eter

Gbr 7a: Hati pada Tikus Kontrol

Gbr 7b: Hati tikus yang diberi perlakuan dengan aqueous ekstrak
Gbr7c: Hati tikus yang diberi perlakuan dengan ekstrak methanol 70%

Gbr 7d: Hati tikus yang diberi perlakuan Ekstrak Aseton Tikus
Gbr 7e: Hati Tikus yang diberi perlakuan Petroleum Eter

DISKUSI DAN KESIMPULAN

Sifat pelarut ekstraksi secara signifikan berefek pada total kandungan fitokimia yang
terukur. Polaritas solvent merupakan parameter penting yang mempengaruhi hasil bahan
tanaman, sehingga semakin tinggi polaritas, semakin baik kelarutan senyawa seperti fenol.
Dalam penelitian kami 70% metanol memiliki persentase hasil yang lebih tinggi dibandingkan
pelarut lain yang digunakan. Air adalah pelarut universal, digunakan untuk mengekstrak
konstituen tanaman. Air banyak digunakan oleh praktisi pengobatan tradisional dalam
mengekstraksi; tetapi pelarut organik lainnya seperti alkohol telah ditemukan yang
menyediakan unsur lebih berlimpah. Methanol lebih polar dari etanol dan dengan demikian
dipilih untuk penelitian ini. Dengan menambahkan air pada metanol absolut hingga 30%,
kepolaran dari pelarut akan meningkat, selain kemungkinan efek dilusi. Eter umumnya
digunakan secara selektif untuk ekstraksi coumarin dan asam lemak, sementara ekstraksi
aseton lebih lipofilik dari zat hypophilic. Hal Ini mungkin mengapa penelitian jaman sekarang
lebih banyak phyto-konstituen yang diambil menggunakan 70% Methanol daripada dengan
Aseton dan Petroleum Ether.
Saganuwan et al melaporkan perkiraan dosis letal median (LD50) adalah 2559 mg / kg
untuk ekstrak air dari tanaman daun Abrus precatorius. Hal ini mirip dengan dosis 2345 mg /
kg LD 50 yang diperoleh dari studi toksisitas kami. Namun, Penelitian kami melangkah lebih
jauh untuk memberikan perkiraan nilai LD50 Methanol 70%, Petroleum Eter dan ekstrak
Acetone bertindak sebagai berikut; 3942, 407 dan 187mg / kg masing-masing. Demikian jelas
menunjukkan bahwa 70% metanol dan ekstrak air lebih aman daripada ekstrak aseton dan
petroleum eter .
Pengaruh pemberian oral akut ekstrak A. precatorius pada bobot tubuh dan bobot organ
juga dipelajari. Dari penelitian ini, ada sedikit peningkatan bobot tubuh yang dihitung dari
hewan uji yang diperlakukan dengan air dan Methanol 70% dalam masa uji . Namun,
perlakuan dengan Aseton dan Petroleum ether memberikan penurunan berat badan yang
signifikan pada hewan uji. Perubahan berat badan merupakan indikator dari efek
samping obat atau senyawa kimia dan ini merupakan hal signifikan karena berat badan
kehilangan lebih dari 10% dari berat awal dalam dosis yang lebih tinggi. Bobot organ juga

merupakan indeks penting dari Status physiological dan patologis pada hewan. Bobot organ
relatif adalah hal mendasar untuk mendiagnosa apakah organ terkena cedera atau tidak.
Penyusutan bermakna pada hati terlihat pada hewan dengan perlakuan ekstrak Aseton dan
Petroleum Ether, mungkin karena fakta bahwa hati memainkan peran sentral dalam
metabolisme dan ekskresi bahan kimia dan rentan terhadap toksisitas agen-agen ini. Tak heran
kemudian, bahwa hepatotoksisitas dan luka pada hati yang diinduksi obat menyumbang
sejumlah besar kegagalan kandidat obat dalam pengujian toksisitas.
Fotomikrograf dari jantung, hati dan ginjal bagian dari hewan uji (H & E x 300)
menunjukkan perubahan patologis yang jelas, sehingga mengacu pada level toksik dari
ekstrak. Ekstrak Aseton dan Petroleum ether terutama diamati menjadi hepatotoksik dan
nephrotoxic pada batas dosis oral 5000mg / kg. Namun, klaim ini akan dipastikan sepenuhnya
dengan penelitian lebih lanjut efek perlakuan pada parameter enzimatis.
Sebagai kesimpulan, penelitian ini telah menyajikan data estimati LD50 dari berbagai
pelarut ekstrak A. Precatorius pada tikus;sehingga membentuk dasar untuk penelitian lebih
lanjut pada efek toksisitas sub-acute dan kronis dari tanaman penting secara farmakologis ini.
Informasi yang terkandung dengan ini juga berfungsi sebagai panduan dalam pilihan
penggalian pelarut pada pengolahan tanaman obat.