www.ccsenet.org / ijc International Journal of Chemistry Vol.

 3, No 1; 2011
Februari 
202 ISSN 1916-9698 E-ISSN 1916-9701 
Simultan Penentuan Efedrin dan Pseudoefedrin di Mencit 
Plasma oleh Elektroforesis Kapiler Zone 
Chunmei Zhang 
College of Pharmacy, University Hebei 
071002 Baoding, Hebei, Cina 
E-mail: zhangcm19850304@126.com 
Huaizhong Guo (penulis korespondensi) 
College of Pharmacy, University Hebei 
071002 Baoding, Hebei, Cina 
E-mail: ghuaizh@yahoo.com.cn 
Li Guan, Zhang Weiquan, Wen Qian & Chunying Chen 
College of Pharmacy, University Hebei 
Baoding, Hebei, 071002, China 
Para penulis mengucapkan terima kasih atas dukungan dana dari National
Science Foundation Alam China 
(No 20905019, 21011140338/B0511), Yayasan Ilmu Pengetahuan Alam
Provinsi Hebei (No B2010000209) dan 
Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Yayasan Hebei (No. 2007-111). 
Abstrak 
Sebuah biaya rendah, akurat, cepat dan elektroforesis zona sensitif kapiler
(CZE) metode kuantitatif, menggunakan tiamin 
hidroklorida sebagai standar internal (IS), dikembangkan untuk analisis
simultan efedrin dan 
pseudoefedrin dalam plasma tikus. Analit diekstraksi dari sampel plasma oleh 
n-hexane/dichloromethane/isopropanol (2:1:0.1, v / v / v) setelah alkalisasi,
dan dilucuti dengan 1,5% asam klorida 
solusi. Pemisahan dilakukan dengan CZE menggunakan treonin 50mM
boraks-20mm (pH 9,27) sebagai penyangga berjalan, dengan 
tegangan +10 kV diterapkan dan UV panjang gelombang deteksi 210
nm. Waktu berjalan total dalam waktu 10 menit. 
kurva kalibrasi untuk contoh plasma linier selama rentang konsentrasi ,075-
5,0 mg / mL untuk efedrin 
dan ,0375-2,5 / mL untuk pseudoephedrine mg. Metode ini memiliki batas
kuantisasi 17,80 ng / mL untuk efedrin 
dan 22.00 ng / mL untuk pseudoefedrin, masing-masing. Metode ini dapat
dipercaya dan layak untuk evaluasi 
profil farmakokinetik produk obat yang mengandung efedrin dan
pseudoefedrin. 
Kata kunci: Efedrin, Pseudoefedrin, Elektroforesis Kapiler Zone 
1. Pengantar 
Ephedrine (E) dan Pseudoefedrin (PE) adalah pasang amina simpatomimetik
diastereoisomeric yang telah manusia 
sifat merangsang sistem saraf pusat, dan mereka juga dapat mengurangi
spasme otot polos bronkus 
(Lou Hong-geng, 2010, PP.682-688, Kang Yong, 2001, PP.37-39). Beberapa
metode telah digunakan untuk 
deteksi komponen individu dalam plasma, termasuk HPLC (Aymard, G. 2000
P.25, Romawi MC. 2004, 
PP.15-24), LC-MS/MS (Beyer J. 2007, PP.150-160, Feng Yi, 2008, hal.572),
GC-MS (Gunn J. 2010, PP.37-43, 
Nakano M. 2000, PP.583-586) dan CE (Wei F. 2007, PP.38-44, Gang Liu,
2006, P.617). Baru-baru ini, sebuah GC-MS/SIM 
Metode dilaporkan untuk penentuan simultan E dan PE dalam plasma humn
melalui cair-cair 
ekstraksi dan derivatisasi oleh anhidrida trifluoroacetic (TFA) dengan batas
bawah kuantisasi (LOQ) dari 2 dan 
1ng/mL untuk E dan PE, masing-masing (Shen Qun, 2002).Meskipun metode
yang dicapai sensitivitas deteksi yang cukup 
dalam waktu jangka pendek, itu menderita dari biaya tinggi dan prosedur
ekstraksi memakan waktu. Oleh karena itu, sangat sensitif 
dan metode CZE sederhana dikembangkan dan divalidasi untuk penentuan
simultan E dan PE pada tikus 
plasma. Metode ini ditawarkan sampel yang lebih kecil kebutuhan volume dan
waktu berjalan lebih pendek, terutama yang lebih rendah 
biaya. Metode ini dapat secara fleksibel diterapkan pada studi bioekivalensi. 
www.ccsenet.org / ijc International Journal of Chemistry Vol. 3, No 1; 2011
Februari 
Diterbitkan oleh Pusat Kanada Sains dan Pendidikan 203 
2. Eksperimental 
2.1 Bahan dan reagen 
E dibeli dari lembaga nasional untuk pengendalian produk farmasi dan
biologis (Beijing, Cina), 
dan PE diperoleh dari laboratorium narkotika nasional (Beijing, Cina). Tiamin
hidroklorida diproduksi 
oleh Medical Chemical Reagent (Tianjin, Cina) digunakan sebagai standar
internal (IS). HPLC grade metanol 
dibeli dari Kermel Kimia (Tianjin, Cina). Borax dan semua reagen lain yang
digunakan dalam percobaan 
semua kelas analitis dan diperoleh dari Huaxin Chemical Reagent (Baoding,
Cina). Blank tikus plasma 
diperoleh dari pusat hewan coba Hebei Medical University (Shijiazhuang,
Cina). Air ultra murni 
diperoleh dari sistem pengolahan air AK (Taiwan, Cina). 
2.2 Instrumentasi 
Kinerja Tinggi kapiler sistem Elektroforesis (Cailu Co Ltd, Beijing, Cina)
adalah dengan tegangan tinggi 0-30 kV 
catu daya, dan panjang gelombang detektor UV variabel dekat ujung
kolom. Data akuisisi dan prosesi itu 
dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak HW-2000 (Qianpu Co Ltd,
Shanghai, Cina). Kapiler dengan 50 pM I.D. dan 375 pM 
OD (Yongnian Ruifeng Pabrik Fiber fotokonduktif, Hebei, Cina).Buffer pH
diukur dengan pH-PHS 3C 
meter (Shanghai, Cina). Sebuah mixer vortex (QL-901, Haimen Instrumen
Kedokteran, Jiangsu, Cina) digunakan untuk mengekstrak 
yang analit dan sentrifus (L500, Xiangyi Centrifuge Instrumen Co Ltd,
Changsha, China) digunakan untuk 
mempercepat pemisahan fase organik dan anorganik. 
2.3 CZE kondisi 
Sebelum percobaan, kolom kapiler harus pretreated. Pertama, kolom kapiler
itu dibilas dengan 1,0 
M larutan NaOH selama 30 menit dan kemudian dengan air sampai nilai pH
larutan outlet mencapai 7,0. Kedua, 
kapiler adalah dibilas dengan larutan HCl 1,0 M selama 30 menit dan
kemudian dengan air sampai nilai pH larutan outlet 
mencapai 7,0. 
Kemudian, kondisi percobaan yang dioptimalkan dengan leburan silika-kapiler
dari 50 cm x 40 pM (40 cm 
panjang efektif) dalam buffer menjalankan 50 treonin boraks mM-20 mM (nilai
pH disesuaikan dengan 9,27 dengan 1 M 
larutan NaOH) dan tegangan terapan +10 kV pada suhu kamar.Sampel
diperkenalkan oleh hidrodinamika 
suntikan (15 cm x 30 s) dan panjang gelombang deteksi 210 nm. 
2.4 Persiapan saham campuran dan solusi kerja 
Solusi saham campuran E dan PE disusun bersama-sama dengan
melarutkan standar referensi akurat ditimbang 
dalam metanol untuk menghasilkan konsentrasi akhir 1mg/mL untuk E dan
0,5 mg / mL untuk PE. Standar kerja solusi 
telah disusun oleh menipiskan larutan stok dicampur dengan metanol untuk
mendapatkan enam konsentrasi yang berbeda dalam berbagai 
0,3-20 mg / mL untuk E dan 0,15-10 mg / mL untuk PE. IS solusi kerja ini
disusun dengan 1,5% asam klorida 
solusi untuk nominal konsentrasi 10 mg / mL. 
2.5 Persiapan cuplikan kontrol standar dan mutu 
100 uL dari masing-masing konsentrasi yang berbeda atas kerja solusi telah
ditambahkan ke dalam 400 plasma kosong uL tikus untuk 
mendapatkan konsentrasi plasma seri analit yang diinginkan.Konsentrasi
plasma standar kalibrasi 
0,075, 0,125, 0,25, 0,5, 1,25, 5,0 mg / mL untuk E 0,0375, 0,0625, 0,125,
0,25, 0,625, 2,5 mg / mL untuk PE dan, 
masing. Kontrol kualitas (QC) Sampel yang telah disiapkan dalam cara yang
sama seperti standar kalibrasi untuk mendapatkan 
plasma konsentrasi 0,125, 0,5, 5,0 mg / mL untuk E, dan 0,0625 0,25, 2,5
mg / mL untuk PE. Semua plasma ini 
sampel disimpan pada -20 oC sebelum digunakan. 
2.6 Preparasi sampel 
(1) Pembebasan dan ekstraksi pelarut organik 
Pada 15 tabung sentrifus mL, sampel standar (disebutkan aboved) dicampur
dengan 0,5 ml, 2 M NaOH, dan 
analit yang dibebaskan dari plasma oleh vortex-mixer 1 menit. 4 mL larutan
campuran organik 
n-hexane/dichloromethane/isopropanol (2:1:0.1, v / v / v) ditambahkan dan
vortex-diramu untuk 3 menit, maka analit 
dialihkan ke dalam fasa organik. Setelah sentrifugasi dengan 5000 rmp
selama 6 menit, fase organik dipindahkan ke 
lain tabung centrifuge. 
(2) Kembali ekstraksi 
100 uL IS kerja solusi ditambahkan dan campuran diekstraksi kembali oleh
vortex-mencampur selama 3 menit. Membuang 
fase organik atas setelah sentrifugasi dengan 5000 rmp selama 6 menit. Fase
air rendah dikeringkan pada 75 oC 
air mandi, dan kemudian residu yang bermoral dalam 10 uL air ultra murni
untuk mendapatkan analit diperkaya, yang 
dianalisis dengan CZE kemudian. 
www.ccsenet.org / ijc International Journal of Chemistry Vol. 3, No 1; 2011
Februari 
204 ISSN 1916-9698 E-ISSN 1916-9701 
3. Hasil dan diskusi 
3.1 Optimasi kondisi CZE 
Pengaruh dari tegangan pemisahan pada efisiensi pemisahan
dievaluasi. Tegangan pemisahan di +20, 
+15 Dan +10 kV diuji. The electropherograms dalam gambar. 1 jelas
menunjukkan bahwa pemisahan tegangan optimum 
adalah +10 kV. 
Dengan meningkatnya waktu injeksi, intensitas sinyal analit meningkat,
umumnya untuk mendapatkan 
sensitivitas tinggi. Campuran standar disuntikkan ke kapiler pada waktu yang
berbeda antara 10 s dan 40 s oleh 
injeksi hidrodinamika, menjaga ketinggian sampling konstan pada 15
cm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa daerah puncak yang 
proporsional dengan waktu injeksi sampai 40 s. Namun, ketika waktu injeksi
lebih panjang dari 30 s, begitu juga puncak 
memperluas dan resolusi lebih buruk disajikan. Dengan demikian, waktu
injeksi 30 s dipilih. 
3.2 Seleksi kondisi persiapan sampel 
Karena konsentrasi rendah dari E dan PE dalam plasma manusia, efisiensi
ekstraksi yang tinggi dan pengayaan sampel 
yang membutuhkan. Metode ekstraksi yang dikembangkan bisa menghindari
gangguan senyawa endogen dan mengatasi 
Kelemahan tingkat rendemen rendah melalui proses basification, ekstraksi
diikuti dengan pengasaman. 
Selain itu, investigasi untuk ekstraktan organik menunjukkan bahwa efisiensi
ekstraksi dengan campuran 
n-heksan-diklorometana-isopropanol sebagai ekstraktan jelas lebih tinggi
dibandingkan dengan 
sikloheksana-diklorometana ekstraktan. Secara bersamaan, karya ini
mempelajari efek yang berbeda 
konsentrasi klorida (0,3%, 0,5%, 1,0%, 1,5%, 2,0%) pada efisiensi ekstraksi
untuk analit. The 
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemulihan lebih tinggi dengan
meningkatnya konsentrasi klorida, tapi ketika 2,0% 
larutan klorida digunakan, efisiensi ekstraksi tidak memiliki perubahan nyata
dibandingkan dengan klorida 1,5% 
solusi, jadi 1,5% dipilih. 
3.3 Metode validasi 
3.3.1 Pemisahan dan spesifisitas 
Metode CZE berbasis dalam makalah ini diselidiki dengan menganalisis
sampel plasma kosong, plasma berduri 
sampel dan sampel tikus plasma, dan electropherograms mereka ditunjukkan
pada Gambar. 2, Gambar. 3 dan Gambar. 4. Di bawah
kondisi CZE diuraikan di atas, waktu migrasi sekitar 7,210 menit untuk IS,
7,857 menit untuk E dan 9,292 menit untuk 
PE, masing-masing. Ada puncak ada gangguan yang ditemukan pada waktu
migrasi dari dua analit dan IS. 
3.3.2 Linearitas 
Kalibrasi kurva untuk plasma yang baik linier selama rentang konsentrasi
0,075-5,0 mg / mL untuk E dan 
,0375-2,5 Mg / mL untuk PE. persamaan kurva kalibrasi khas adalah sebagai
berikut: untuk E, C = 2.688A 0,1999 
(R = 0,9982), dan untuk PE, C = 3.322A 0,1418 (r = 0,9988), dimana A rasio
puncak-daerah = dan C = konsentrasi (mg / mL). 
3.3.3 LOQ dan LOD 
Alat tes saat ini memiliki LOQ dihitung berdasarkan suara-sinyal untuk-(S / N)
ratio 10:01 adalah 17,18 ng / mL untuk E, 
dan 22.00 ng / mL untuk PE. Para LODs adalah 5,34 ng / mL untuk E dan
6,60 ng / mL untuk PE (S / N = 3). Batasan ini merupakan 
cukup untuk studi farmakokinetik klinis setelah pemberian oral dosis terapi. 
3.3.4 Intra-hari dan antar-hari presisi 
Ketepatan metode ini dievaluasi dengan menganalisis lima ulangan sampel
QC pada rendah, sedang dan tinggi 
konsentrasi, masing-masing. presisi Intra-hari dinilai sebagai standar deviasi
relatif (RSD) yang dihasilkan 
dari hari yang sama. presisi assay Inter-hari itu diungkapkan oleh RSD dari
konsentrasi rata-rata pada tiga 
hari berturut-turut. Ringkasan presisi intra-hari dan antar-hari pada
konsentrasi QC ditunjukkan pada Tabel 1. 
Hasilnya kurang dari 5,30% dan 6,75% untuk dua analit, yang menunjukkan
presisi yang baik. 
3.3.5 Pemulihan 
Percobaan pemulihan dilakukan untuk mengevaluasi akurasi metode
ini. Dalam studi ini, pemulihan itu 
ditentukan dari sampel QC konsentrasi rendah, sedang dan tinggi, dan%
recovery konsentrasi = diukur / QC 
konsentrasi sampel × 100%. Tabel 2 merangkum hasil pemulihan dari dua
analit, yang berkisar 
sebesar 97,6-106,9% dan RSD berada dalam kisaran 2,46-8,29%. Dengan
demikian, pemulihan tersebut memenuhi kriteria yang dapat diterima. 
4. Kesimpulan 
Dalam penelitian kami, dengan biaya rendah dan metode CZE akurat dengan
sensitivitas yang tinggi dikembangkan. Hasil memuaskan 
validasi metode menunjukkan bahwa metode tersebut dapat diterapkan untuk
penentuan simultan E dan PE 
konsentrasi plasma dalam sampel klinis yang kompleks, misalnya, plasma
manusia dan jamu. 
www.ccsenet.org / ijc International Journal of Chemistry Vol. 3, No 1; 2011
Februari 
Diterbitkan oleh Pusat Kanada Sains dan Pendidikan 205 
Referensi 
Aymard G, B Labarthe & Warot D. (2000). Sensitif penentuan efedrin dan
norephedrine dalam plasma manusia 
sampel menggunakan derivatisasi dengan chloroformate 9-fluorenylmethyl
dan kromatografi cair. Chromatogr, B, 01, 
25. 
Beyer, J., Peters, FT., Kraemer, T. & Maurer, HH. (2007). Deteksi dan
kuantifikasi divalidasi dari sembilan herbal 
phenalkylamines dan methcathinone dalam plasma darah manusia dengan
LC-MS/MS dengan ionisasi elektrospray. Jurnal 
Mass Spectrometry, 02, 150-160. 
Gunn J S, Kriger & AR Terrell. (2010). Identifikasi dan kuantisasi dari
amfetamin, methamphetamine, MDMA, 
pseudoefedrin dan efedrin dalam darah, plasma dan serum menggunakan
gas kromatografi spektrometri massa (GC / MS). 
Metode Mol Biol, 607., 37-43. 
Kang Yong. (2001). Farmakologi cina. Beijing: Science Press, PP.37-39. 
Liu Gang Hui, Zhang & Zhang Xianzhou. (2006). Penentuan pseudoephedrine
dalam serum manusia dengan HPCE. 
Cina Apoteker, 07, 617. 
Lou Hong-geng, Yuan Hong, Zou-rong & Jiang, Bo Ruan. (2010).Simultan
penentuan parasetamol, 
pseudoefedrin, dextrophan dan chlorpheniramine dalam plasma manusia
dengan massa tandem kromatografi-cair 
spektrometri. Kromatografi B., 878, 682-688. 
Nakano M, Y Morimoto, Tajima S & Kosaka N. (2000). GC-MS penentuan l-
efedrin dan 
d-pseudoefedrin dalam plasma manusia. Yakugaku Zasshi, 06, 583-586. 
MC Romawi. (2004). Penentuan ephedra alkaloid dalam urin dan plasma
dengan HPLC-UV: Penelitian Kolaborasi. 
Jurnal AOAC International, 01, 15-24. 
Shen Qun. (2002). pengaruh kompatibilitas yang berbeda mahuangtang pada
efedrin dan pseudoefedrin 
farmakokinetik pada tikus. Pertama Universitas Kedokteran Militer. 
Wei F M, Zhang & YQ Feng. (2007). Menggabungkan poli (asam metakrilat-
co-etilena glikol dimetakrilat) 
monolit microextraction dan elektroforesis on-line pra-konsentrasi-kapiler
untuk analisa efedrin dan 
pseudoefedrin dalam plasma manusia dan air seni. Chromatogr J Sci Technol
analit Life B Biomed, 01-02, 38-44. 
Feng Yi, Yu Huang & Weiling Lai. (2008). Penentuan pseudoephedrine dalam
plasma kelinci oleh LC-MS/MS. 
Journal of Guangdong College of Pharmacy,, 06 572. 
Tabel 1. Intra-hari dan antar-hari presisi untuk E dari sampel plasma (n = 5) 
Concentratio 
ditambahkan 
(Mg / mL) 
Intra-hari (n = 5) Intra-hari (n = 5) 
Terukur konsentrasi 
(Mg / mL) 
Ketelitian 
(% RSD) 
Terukur konsentrasi 
(Mg / mL) 
Ketelitian 
(% RSD) 
E 
0,125 0,139 ± 0,003 2,33 0,120 6,04 ± 0,007 
0,5 ± 0,447 0,016 ± 0,021 3,50 0,478 4,30 
5,0 ± 4,966 0,073 ± 0,134 1,46 5,021 2,66 
PE 
0,067 ± 0,0625 5,30 0,004 6,75 0,062 ± 0,004 
0,25 0,232 ± 0,010 4,48 0,261 4,40 ± 0,011 
2,5 ± 2,516 0,064 ± 0,110 2,53 2,413 4,55 
Tabel 2. Penerimaan untuk E dan PE untuk E dari sampel plasma (n = 5) 
Konsentrasi 
Ditambahkan (mg / mL) 
Terukur 
Konsentrasi (mg / mL) 
Pemulihan 
± s (%) 
RSD 
(%) 
E 
0,125 0,134 0,009 ± 106,9 ± 6,94 6,50 
0,5 ± 0,489 0,018 ± 3,69 97,8 3,78 
5,0 ± 5,063 0,183 101.3 ± 3,66 3,61 
PE 
0,0625 ± 0,061 0,005 ± 8,08 97,6 8,29 
0,25 ± 0,246 0,006 ± 2,42 98,3 2,46 
2,5 ± 2,520 0,131 ± 5,24 5,20 100,8 
www.ccsenet.org / ijc International Journal of Chemistry Vol. 3, No 1; 2011
Februari 
206 ISSN 1916-9698 E-ISSN 1916-9701 
Gambar 1. The eletropherograms dari analit yang berbeda pada tegangan
pemisahan 
identifikasi Peak: (1) IS; (2) E, (3) PE 
Gambar 2. The eletropherogram dari plasma kosong 
Gambar 3. The eletropherogram sampel plasma kosong ditambahkan dengan
E, PE dan IS 
Peak identifikasi seperti pada Gambar. 1 
Gambar 4. The electropherograms sampel plasma dari mencit setelah 
2 jam dari ig rebusan Maxingshigan. Peak identifikasi seperti pada Gambar. 1