SKRIPSI
Oleh:
DEVI ARINDAH
NIM. 04530003
JURUSAN KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN)
MAULANA MALIK IBRAHIM (MMI) MALANG
2010
SKRIPSI
Diajukan Kepada:
Universitas Islam Negeri (UIN)
Maulana Malik Ibrahim (MMI) Malang
Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan Dalam
Memperoleh Gelar Sarjana Sains (S. Si)
Oleh:
DEVI ARINDAH
NIM. 04530003
JURUSAN KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN)
MAULANA MALIK IBRAHIM (MMI) MALANG
2010
SURAT PERNYATAAN
ORISINALITAS PENELITIAN
: Devi Arindah
NIM
: 04530003
Fakultas/ Jurusan
: Kimia
Judul Penelitian
Devi Arindah
NIM. 04530003
SKRIPSI
Oleh:
DEVI ARINDAH
NIM. 04530003
Dosen Pembimbing I
Dosen Pembimbing II
Munirul Abidin M. Ag
NIP. 0921002 12110 070
Mengetahui,
Ketua Jurusan Kimia
SKRIPSI
Oleh:
DEVI ARINDAH
NIM. 04530003
Tanda Tangan
1. Penguji Utama
( ...................................)
2. Ketua
( ...................................)
3. Sekretraris
( ...................................)
4. Anggota
( ...................................)
MOTTO
PERSEMBAHAN
Barokallahufiik
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum Wr.Wb.
Puji syukur walhamdulillah ke hadirat Allah SWT atas segala rahmat,
hidayah dan inayah-Nya yang telah memberikan pertolongan dan kemudahan bagi
setiap hamba-Nya, sehingga Allah SWT memperkenankan penulis untuk
menyelesaikan skripsi ini dengan judul "Fraksinasi dan Identifikasi Golongan
Senyawa pada Daging Buah Pepino (Solanum muricatum Aiton) yang Berpotensi
sebagai Antioksidan" sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana
Sains (S.Si).
Sholawat dan salam semoga selalu tercurah kepada penghulu para Rasul,
Nabi Muhammad SAW, lentera hati yang tidak mudah padam, menerangi jalan
kehidupan menuju tempat kembali, diharibaan Allah SWT yang Maha suci,
beserta para sahabat, keluarga, dan seluruh kaum muslim yang mengikuti-Nya
hingga akhir zaman.
Penulis mengucapkan terima kasih yang tidak terhingga kepada semua
pihak yang telah membantu dalam menyelesaikan penulisan skripsi ini, terutama
kepada:
1. Bapak Prof. Dr. H. Imam Suprayogo selaku Rektor UIN Maulana Malik
Ibrahim (MMI) Malang
2. Bapak Prof. Drs. Sutiman Bambang Sumitro, SU., D.Sc selaku Dekan
Fakultas Sains dan Teknologi UIN MMI Malang.
3. Ibu Diana Candra Dewi, M.Si selaku Ketua Jurusan Kimia Fakultas Sains dan
Teknologi UIN MMI Malang.
4. Ibu Elok Kamilah Hayati, M.Si, bapak DR. Munirul Abidin, M.Ag dan ibu
Himmatul Barroroh, M.Si selaku dosen pembimbing yang telah banyak
memberikan bimbingan dan arahan dalam penyusunan skripsi ini.
5. Ibu Rini Nafsiati Astuti, M.Pd dan ibu Eny Yulianti, M.Si selaku penguji yang
banyak memberikan saran dan arahan demi sempurnanya isi skripsi ini.
6. Bapak dan Ibu Dosen serta Laboran Jurusan Kimia Fakultas Sains dan
Teknologi yang telah banyak memberikan ilmunya.
7. Kedua orang tuaku (Ibu dan Bapak) dan kakak serta adikku yang segenap jiwa
raga dan seluruh hidup dengan ikhlas selalu membimbing dan mendukung
secara materiil maupun spirituil dalam kehidupan
8. Semua teman kimia dan semua pihak UIN MMI Malang yang telah banyak
membantu penulis demi terselesainya skripsi ini.
Akhir kata dengan penyerahan diri kepada Allah SWT dan pengharapan
besar untuk mendapat ridhaNya berharap semoga skripsi ini dapat memberikan
manfaat bagi penulis pada khususnya dan pembaca pada umumnya serta semoga
penulisan skripsi ini mendapatkan ridha, rahmat dan manfaat dari Allah SWT.
Amiin Yaa Robbal Alamiin.
Wassalamualaikum Wr.Wb.
DAFTAR ISI
DAFTAR ISI ........................................................................................................... i
DAFTAR TABEL .................................................................................................. iii
DAFTAR GAMBAR .............................................................................................. iv
DAFTAR PERSAMAAN........................................................................................ v
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... vi
DAFTAR LAMBANG, SATUAN DAN SINGKATAN ...................................... vii
ABSTRAK .............................................................................................................. ix
BAB I PENDAHULUAN
1.1
Latar Belakang ............................................................................................. 1
1.2
Rumusan Masalah ........................................................................................ 7
1.3
Tujuan ........................................................................................................... 7
1.4
Batasan Masalah ........................................................................................... 8
1.5
Manfaat Penelitian......................................................................................... 8
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1
Buah pepino (Solanum muricatum Aiton) dalam Perspektif Islam ............... 9
2.2
Pepino (Solanum muricatum Aiton) ............................................................. 16
2.2.1 Morfologi Buah Pepino (Solanum muricatum Aiton) ................................... 16
2.2.2 Taksonomi Pepino ......................................................................................... 18
2.2.3 Jenis-jenis Buah Pepino ................................................................................ 19
2.2.4 Kandungan Buah Pepino ............................................................................... 21
2.3
Senyawa Antioksidan ................................................................................... 22
2.4
Golongan Senyawa-senyawa Antioksidan .................................................... 25
2.4.1 Alkaloid ......................................................................................................... 25
2.4.2 Vitamin C ...................................................................................................... 26
2.5
Metode Ekstraksi Maserasi ........................................................................... 27
2.6
Uji Aktivitas Antioksidan.............................................................................. 28
2.7
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ................................................................. 30
2.7.1 Pengertian KLT ............................................................................................ 30
2.7.2 Sistem Fase Diam Silika Gel pada KLT ...................................................... 32
2.7.3 Sistem Eluen (Fase Gerak) KLT .................................................................. 34
2.7.4 Jenis-jenis Pelarut ......................................................................................... 36
2.7.5 Jenis-jenis KLT ............................................................................................ 41
2.7.6 Teknik KLT ................................................................................................... 41
2.7.7 Identifikasi .................................................................................................... 42
2.8
Spektrofotometer Infra Merah Transformasi Fourier ( Fourier
Transform Infra Red (FT-IR)) ....................................................................... 44
TH
3.3
Rancangan Penelitian .................................................................................... 49
3.4
Pelaksanaan Penelitian .................................................................................. 50
3.4.1 Preparasi sampel buah pepino ....................................................................... 50
3.4.2 Ekstraksi sampel ........................................................................................... 50
3.4.3 Pemisahan Senyawa Hasil Isolasi dengan KLT ............................................ 51
3.4.3.1 Pemisahan dengan KLT Analitik .................................................................. 51
3.4.3.2 Pemisahan dengan KLT Preparatif ............................................................... 52
3.4.4 Uji Aktivitas Senyawa Antioksidan .............................................................. 53
3.4.5 Identifikasi IR Senyawa Isolat B ................................................................... 54
3.5
Analisa Data .................................................................................................. 54
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1
Preparasi Sampel Buah Pepino ..................................................................... 57
4.2
Ekstraksi Sampel .......................................................................................... 59
4.3
Fraksinasi Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ......................... 63
4.3.1 Pemisahan dengan KLT Analitik .................................................................. 63
4.3.2 Pemisahan dengan KLT Preparatif................................................................ 72
4.4
Uji Aktivitas Senyawa Antioksidan dengan Metode DPPH ......................... 74
4.5
Identifikasi IR Senyawa Isolat B ................................................................... 78
4.6
Pemanfaatan Buah Pepino Dalam Perspektif Islam ...................................... 84
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
5.1
Kesimpulan.................................................................................................... 88
5.2
Saran ............................................................................................................. 89
DAFTAR PUSTAKA .............................................................................................. 91
LAMPIRAN ............................................................................................................. 101
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1
Tabel 2.2
Tabel 2.3
Tabel 3.1
Tabel 4.1
Tabel 4.2
Tabel 4.3
Tabel 4.4
Tabel 4.5
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1
Gambar 2.2
Gambar 2.3
Gambar 2.4
Gambar 2.5
DAFTAR PERSAMAAN
Persamaan 2.1
Persamaan 3.1
Persamaan 3.2
Persamaan 3.1
Nilai Rf ........................................................................................... 42
Nilai Persen Rendemen Ekstrak ..................................................... 55
Nilai Rf ........................................................................................... 55
Nilai Persen Aktivitas Antioksidan................................................. 56
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1.
Lampiran 2.
Lampiran 3.
Lampiran 4.
Lampiran 5.
Lampiran 6.
Simbol
C
%
g
max
A
AH
BHA
BHT
BM
bj
b/v
CHCl3
CH3COOH
CH3COCH3
CH3OH
CH3(CH2)4CH3
C6H6
C6H5
CH2Cl2
cm
C2H5OH
C6H8O6
d
DPPH
DPPH-H
EC50
EtOH
FT-IR
G
Gal
GF254
P
Gluk
HOAc
HOO
H2O
H2SO4
K
KBr
Keterangan
Derajat Celsius
Persen
Tetapan dielektrikum
Mikro gram
Panjang gelombang maksimal
Kurang lebih
Radikal antioksidan
Antioksidan
Butil Hidroksianisol
Butil Hidroksi Toluena (2,6-Ditert-butil-p-kresol)
Berat molekul
Berat jenis
Berat per volume
Kloroform
Asam asetat
Aseton
Metanol
Heksana
Heksana
Toluena/ toluol
Metilena diklorida
Sentimeter
Etanol/ alkohol
Vitamin C/ asam askorbat
Densitas
1,1-difenil-2-pikrilhidrazil
1,1-difenil-2-pikrilhidrazin
End Concentration dalam 50 % absorbansi
Etanol
Fourier Trasform Infra Red
Gypsum (CaSO4.H2O)
-D-Galaktosa
Lapisan terbuat dari gypsum yang berfuoresensi
dengan panjang gelombang 254 nm
-D-Glukosa
Asam asetat
Radikal perhidroksil
Air
Asam sulfat
Tetapan Gaya Ikatan
Kalium Bromida
T
Simbol
KLT
KLTP
LASER
Keterangan
Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi Lapis Tipis Preparatif
Light Amplification by Stimulated Emmission of
Radiation
Mili
Molaritas
Metil
Metanol
Aseton
Miligram
Milimeter Hergenium
Milimeter
Normal (rantai lurus)
Nitrogen
nanometer
Ion amida
Ammoniak
Ion ammonium
Ammonium Hidroksida
Oksigen
Oksigen
Persen (%)
Petroleum eter
Part per milion
Gugus alkil
Radikal lipida
-D-Rhamnosa
Retordation factor
Lipida
Hidroperoksida
Radikal peroksil
Radikal alkoksil
Silikon
Silikat
Titik didih
Titik didih
Titik leleh
Tri nitro toluena
Ultaraviolet
Ultaraviolet-Visible
Volume
T
m
M
Me
MeOH
Me2CO
mg
mmHg
mm
nN2
nm
NH2NH3
NH4+
NH4OH
O
O2
P
pet. Eter
ppm
R
R
Ram
Rf
RH
ROOH
ROO
RO
Si
SiO2
t.d.
TD
TL
TNT
UV
UV-Vis
V
ABSTRAK
Arindah, D,. 2010. Fraksinasi dan Identifikasi Golongan Senyawa Pada
Daging Buah Pepino (Solanum muricatum Aiton) yang Berpotensi
Sebagai Antioksidan. Pembimbing: Elok Kamilah Hayati, M. Si.
Kata kunci : buah pepino, fraksinasi, antioksidan, DPPH, FT-IR, vitamin C.
Indonesia sebagai negara yang dijuluki sebagai zamrud khatulistiwa
memiliki keanekaragaman flora (biodiversity) yang cukup melimpah berarti
kenekaragaman senyawa kimia (chemodiversity) juga melimpah. Sebagaimana
firman-firman Allah SWT pada QS. Al An'am: 99, QS. 'Abasa: 24-28, QS. Al
Lukman: 10, QS. An Nahl: 11, QS. Al Baqarah: 269. Hal ini memicu
dilakukannya penelitian senyawa kimia yang terkandung dalam tumbuhtumbuhan seiring dengan kemajuan ilmu pengetahuan dan teknologi seperti teknik
pemisahan, metode analisis, dan uji farmakologi yang akan digunakan sebagai
obat seperti pada buah pepino (Solanum muricatum Aiton) yang mengandung zat
antioksidan.
Pemisahan senyawa dari hasil isolasi menggunakan metode KLT yang
meliputi KLT Analitik dan KLT Preparatif. KLT Analitik dilakukan dengan
pencarian eluen terbaik dari berbagai eluen; perbandingan komposisi pelarut yang
terdiri: metanol: NH4OH pekat (10:0,03), asam asetat:etanol (1:3), aseton:air:
amoniak 25% (9:0,7:0,3), etanol:asam asetat 10% (9:1), petroleum eter: nheksana: metanol: kloroform: asam asetat (1:1:3:3:2), metanol: aseton:air
(2:4:0,3), toluol: etanol:asam asetat (5:4:1). Kemudian dilakukan pemisahan
KLTP, uji % aktivitas senyawa antioksidan dan diidentifikasi gugus fungsi jenis
senyawa dengan menggunakan spektrofotometer FT-IR ( Fourier Trasform Infra
Red).
Eluen terbaik dengan KLTA menggunakan fase diam silika gel GF254
adalah petroleum eter: n-heksana: metanol: kloroform: asam asetat (1:1:3:3:2).
Pemisahan KLTP
menghasilkan 2 fraksi yang berwarna biru gelap ketika
(Rf1=0,31 dan Rf2=0,75) disinari lampu UV max 254 nm sehingga
dimungkinkan senyawa yang terkandung dalam fraksi B pada ekstrak daging buah
pepino adalah vitamin C (L-asam askorbat) sedangkan fraksi A asam-asam lain..
Nilai % aktivitas senyawa antioksidan isolat B (77,73 % ) lebih tinggi
dibandingkan isolat A (76,56 %). Hasil identifikasi gusus fungsi spektrofotometer
T
yang
ABSTRACT
BAB I
PENDAHULUAN
sedikit manis dan sedikit asam seperti kombinasi rasa buah blewah dan buah
melon (Sutomo, 2007).
Beberapa penelitian yang telah dilakukan menunjukkan bahwa buah
pepino memiliki kandungan gizi antara lain: asam, beta karoten, lemak, protein,
serat, vitamin C, gula reduksi dan pati (Mitra Agro Melodi, 2006: 23). Namun
penelitian tentang analisa senyawa-senyawa yang terkandung di dalam buah
pepino masih sedikit sekali. Hal ini dikarenakan, buah pepino masih baru
dibudidayakan di Indonesia dan jarang diteliti oleh negara lain.
Sebagaimana penelitian Husnah (2009) telah melakukan proses ekstraksi
buah pepino (Solanum muricatum Aiton) dengan variasi pelarut etanol 70%, etil
asetat p.a, aquadest, kloroform p.a, petroleum eter p.a, heksana p.a. Ekstrak etanol
70% mempunyai aktivitas antioksidan tertinggi dan hasil identifikasi golongan
senyawa secara fitokimia didapatkan positif golongan senyawa alkaloid dan asam
askorbat (vitamin C), negatif untuk golongan senyawa karotenoid, steroid, dan
flavonoid. Dari penelitian tersebut, merupakan identifikasi ekstrak etanol 70%
dalam bentuk ekstrak kasar tanpa dilakukan pemurnian ekstrak. Ekstrak kasar
masih mengandung campuran jenis senyawa, oleh karena itu perlu dilakukan
pemurnian dengan fraksinasi ekstrak untuk mendapatkan jenis golongan senyawa
yang lebih baik tanpa mengandung campuran senyawa dari hasil fraksi ekstrak
kasar.
Salah satu metode pemurnian senyawa yang cukup baik dan sederhana
adalah Kromatografi Lapis Tipis. Metode KLT berdasarkan pada prinsip adsorbsi
antara fase diam dan fase gerak. Dalam metode KLT dengan fase diam tertentu,
proses pemisahan sangat bergantung pada jenis eluen (pelarut) yang digunakan
karena pemisahan terjadi bergantung pada (Gandjar dan Rohman, 2007: 329):
struktur kimia atau gugus aktif zat terlarut (solut) yang berinteraksi dengan fase
diam, ukuran partikel fase diam (adsorben) dan kelarutan solut dalam fase gerak.
Seperti penelitian Sulistijowati dan Gunawan (1997), hasil ekstraksi daun
kembang bulan (Tithonia diversifolia a. Gray) terhadap pertumbuhan Candida
albicans selanjutnya dilakukan pemeriksaan golongan kimia tanaman dengan
metode kromatografi lapis tipis menggunakan fase diam silika gel GF254 dengan
berbagai variasi komposisi pelarut (etil asetat, methanol, air, asam asetat, butanol,
heksana) dan uji fitokimia dengan pereaksi untuk dianalisis kandungan warna
golongan senyawa fraksi berdasarkan profil kromatografi (noda/spot yang
terbentuk) dari hasil KLT. Hasil pemeriksaan golongan senyawa kimia tanaman
menunjukkan bahwa daun kembang bulan mengandung sedikitnya 12 senyawa
terpenoid, 14 senyawa flavonoid dan gula. Eskam dan Sukamat (2006), telah
melakukan
ekstraksi
dengan
berbagai
cara
yang terdapat dalam daging buah pepino dengan metode awal yaitu ekstraksi buah
pepino yang bertujuan untuk menghasilkan ekstrak kasar. Pemisahan senyawa
dari hasil isolasi akan menggunakan metode KLT yang meliputi KLT Analitik
dan KLT Preparatif. KLT Analitik dilakukan dengan pencarian eluen terbaik dari
berbagai eluen; perbandingan komposisi pelarut (tujuh macam eluen yang terdiri:
metanol: NH4OH pekat (10:0,03), asam asetat:etanol (1:3), aseton:air: amoniak
25% (9:0,7:0,3), etanol:asam asetat 10% (9:1), petroleum eter: n-heksana:
metanol: kloroform: asam asetat (1:1:3:3:2), metanol: aseton:air (2:4:0,3), toluol:
etanol:asam asetat (5:4:1)) yang merajuk pada penelitian dan reverensi. Eluen
terbaik dipilih dan akan digunakan untuk pemisahan selanjutnya yaitu KLT
Preparatif. KLT Preparatif bertujuan untuk memisahkan campuran senyawa dari
ekstrak dalam jumlah besar berdasarkan fraksinya. Hasil dari KLT Preparatif akan
menghasilkan isolat yang akan digunakan untuk uji aktivitas antioksidan dengan
menggunakan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) dengan menganalisa
perubahan warna ungu berlatar kuning
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
"Dan Dialah yang menurunkan air hujan dari langit, lalu Kami
tumbuhkan dengan air itu segala macam tumbuh-tumbuhan Maka Kami
keluarkan dari tumbuh-tumbuhan itu tanaman yang menghijau. Kami keluarkan
dari tanaman yang menghijau itu butir yang banyak; dan dari mayang korma
mengurai tangkai-tangkai yang menjulai, dan kebun-kebun anggur, dan (kami
keluarkan pula) zaitun dan delima yang serupa dan yang tidak serupa.
Perhatikanlah buahnya di waktu pohonnya berbuah dan (perhatikan pulalah)
kematangannya. Sesungguhnya pada yang demikian itu ada tanda-tanda
(kekuasaan Allah) bagi orang-orang yang beriman" (QS. Al An'am: 99).
memelihara
kesehatan
manusia
serta
menjamin
perkembangan
kehidupannya yang ideal. Hingga kesehatan jasmani, psikologi, rohani, juga sosial
terwujud dalam tubuhnya.
Al Qur'an surat Al An'am ayat 99 juga menyuruh manusia untuk
mempelajari bagaimana buah diciptakan, berkembang dan tumbuh pada fase yang
berbeda-beda hingga sampai pada fase kematangannya secara sempurna dengan
segala unsur, baik sukrosa, minyak, protein, bahan karbohidrat dan zat-zat tepung.
Penelitian klinis menjelaskan bahwa ketika materi klorofil menembus tubuh
manusia, dia akan menggabungkan diri pada sel-selnya sehingga memperkuatnya,
membantu mengalahkan kuman-kuman berbahaya, lalu bersiap untuk merangkai
jaringan ditubuhnya sehingga berhasil membentuk kekebalan tubuh terhadap
berbagai penyakit (Mahran dan Mubasyir, 2006: 95-96).
Syaikh Asy Syanqithi dalam Tafsir Adhwa'ul Bayan (2007: 322), QS. Al
An'am ayat 99 merupakan bentuk wajib sesuai dengan ketetapan dalam kaidah
ushul yaitu "bentuk perintah menunjukkan sesuatu yang wajib kecuali ada dalil
yang mengalihkannya dari kewajiban tersebut". Allah SWT memerintahkan
$y)x uF{$# $u)s)x O ${7| u!$y9$# $u;t7| $r& $ys 4n<) |M}$# u=s
$Y7s%u $Y6uu ${7ym $p: $uKt7/r's
"Maka hendaklah manusia itu memperhatikan makanannya (24).
Sesungguhnya Kami benar-benar telah mencurahkan air (dari langit) (25),
kemudian Kami belah bumi dengan sebaik-baiknya (26), lalu Kami tumbuhkan
biji-bijian di bumi itu (27), anggur dan sayur-sayuran (28)" (QS. 'Abasa: 24-28).
memperhatikan
dari
Apakah
Dia
Ayat-ayat QS. Al An'am ayat 99, QS. 'Abasa ayat 24-28 dan QS. Ath
Thaariq ayat 5 jika dicermati secara seksama, niscaya ayat-ayat tersebut
mengandung informasi tentang aneka macam makanan. Sekaligus pencegahan
penyakit yang disebabkan oleh kecenderungan mengkonsumsi satu macam
makanan saja (As Sayid, 2006: 29-30). Secara zhahir ayat tersebut menunjukkan
bahwa memperhatikan ciptaanNya adalah wajib hukumnya. Sebagai contoh
unsur-unsur mineral, besi, kalsium, fosfor dan iodium, tubuh juga terdiri dari
unsur-unsur oksigen, karbon, hidrogen, nitrogen, potassium, sulfat, sodium,
magnesium, klorin, fluor dan silikon. Jika salah satu dari unsur-unsur di atas
mengalami kekurangan maka akan mengakibatkan kekacauan pada tubuh.
Sebagaimana firman Allah SWT dalam QS. Al Lukman ayat 10:
4 7/!#y e. $p: ]t/u 3/ ys? r& zuu F{$# 4s+9r&u ( $ptts? 7ux t/ Nuy9$# t,n=yz
Ax. 8ly e2 $p: $oGu;/r's [!$t !$y9$# z $u9tr&u
"Dia menciptakan langit tanpa tiang yang kamu melihatnya dan Dia
meletakkan gunung-gunung (di permukaan) bumi supaya bumi itu tidak
menggoyangkan kamu; dan memperkembang biakkan padanya segala macam
jenis binatang, dan Kami turunkan air hujan dari langit, lalu Kami tumbuhkan
padanya segala macam tumbuh-tumbuhan yang baik" (QS. Al Lukman: 10).
$t $u/u F{$#u Nuu9$# ,=yz t6x"tGtu /_ 4n?tu #Y%u $Vu% !$# t.t
$9$# z>#xt $o)s y7oys6 Wt/ #xy |M)n=yz
Sesungguhnya dalam penciptaan langit dan bumi, dan silih
bergantinya malam dan siang terdapat tanda-tanda bagi orang-orang yang
berakal, (yaitu) orang-orang yang mengingat Allah sambil berdiri atau duduk
atau dalam keadan berbaring dan mereka memikirkan tentang penciptaan langit
dan bumi (seraya berkata): "Ya Tuhan kami, tiadalah Engkau menciptakan Ini
dengan sia-sia, Maha Suci Engkau, Maka peliharalah kami dari siksa neraka
(QS. Al Imron: 190-191).
empirik. Kedua metode berfikir seperti ini diperlukan manusia, dan islam
membimbing mereka melakukannya secara seimbang (Ahmad, 2003).
Allah SWT menciptakan beragam jenis buah, setiap jenis memiliki rasa
dan harum masing-masing meskipun semuanya tumbuh di tanah yang sama dan
diairi dengan air yang sama. Sebagaimana penciptaannya, kenyataan bahwa buahbuahan dan sayur-sayuran merupakan sumber-sumber vitamin dan nutrisi esensial
yang melimpah, juga menggugah manusia berakal untuk berpikir dengan
memadukan cara berpikir secara Ulul Albab.
Allah SWT berfirman dalam QS. Al Baqarah ayat 61:
. F{$# M6.? $ $us9 l /u $os9 $$s 7nu 5$ys 4n?t u9 s9 4yt F=% )u
( $y=|t/u $pDytu $yu $y!$V%u $y=)t/
"Dan (ingatlah), ketika kamu berkata: "Hai Musa, Kami tidak bisa
sabar (tahan) dengan satu macam makanan saja. sebab itu mohonkanlah untuk
Kami kepada Tuhanmu, agar Dia mengeluarkan bagi Kami dari apa yang
ditumbuhkan bumi, Yaitu sayur-mayurnya, ketimunnya, bawang putihnya, kacang
adasnya, dan bawang merahnya,... " ( QS. Al Baqarah: 61).
"Rosululloh SAW pernah makan mentimun dengan ruthab"(HR. At
Tirmidzi dan yang lain).
Gambar 2.1 Bentuk tanaman pepino A) pepino (Solanum muricatum); A1) bunga;
A2) dan A3) buah-buahan pepino; B) tanaman tomat, tamarillo
(Cyphomandra betacea); B1) bunga; B2) penampang melintang buah
tomat; C) pepaya gunung (Carica pubescens); C1) daun; C2) buah;
C3) penampang melintang buah pepaya (I. S nchez Vega (National
University of Cajamarca, Peru, 1008).
R
Kingdom
Sub Kingdom
Divisi
Kelas
Ordo (Bangsa)
Famili (Suku)
Sub Famili
Genus (Marga)
Sub Genus
Section (Golongan)
Spesies (Jenis)
Nama Binomial
H
: Plantae
: Spermatophyta (Tanaman Berbiji)
: Magnoliophyta (Angiopermae/ Tanaman Bunga)
: Magnoliopsida (Dicotyledonae)
: Solanales
: Solanaceae
: Solanoideae
: Solanum
: Solanum
: Basarthrum
: Solanum muricatum
: Solanum muricatum Aiton
H
putih kecil, berbentuk mirip dengan bunga tanaman yang lain termasuk
famili Solanaceae. Batang tanaman berwarna hijau ketika masih muda dan
berubah menjadi kecoklat-coklatan ketika sudah tua. Buah muda berwarna
hijau dengan seiring pertumbuhan tanaman, warna buah berangsur-angsur
akan berubah menjadi hijau keputih-putihan, dan kemudian menjadi
kuning ketika masak.
2) Pepino Ungu
Sesuai dengan namanya, buah pepino jenis ini berwarna ungu sejak
muda hingga buah masak. Tangkai, tulang daun, dan bunga tanaman pun
berwarna ungu. Buah berbentuk memanjang seperti terung. Daging buah
memiliki warna yang sama dengan Pepino kuning.
Buah pepino akan lebih banyak mengandung air ketika musim hujan.
Rasa buah pada musim kemarau lebih manis dibandingkan dengan saat musim
hujan. Kandungan gizi buah pepino ditunjukkan pada tabel berikut (Sarno dan
Purnama, 2005: 23):
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Sumber: Laboratorium Uji Teknologi dan Hasil Pertanian UGM dalam Mitra Agro Melodi (Sarno
dan Purnama) 2005.
pada reaksi tersebut relatif stabil dan tidak mempunyai cukup energi untuk dapat
bereaksi dengan molekul lipida lain membentuk radikal lipida baru (Gordon,
1990).
Inisiasi
AH
RH
Radikal lipida
ROO
Propagasi :
A
P
Lipida
+
AH
Radikal Peroksil
ROOH +
A
P
Hidroperoksida
AH +
O2
AH +
ROOH
A
P
RO +
HOO
H2O
Me
Me
N
Me
Me
Gluk
Solanina
Gal
O
Ram
(R F 52). Detekasi adanya alkaloid pada kertas dan pelat, pertama menggunakan
B
lembayung. Dapat pula menggunakan kromatografi lapis tipis silika gel G, dengan
pengembang asam asetatetanol (1:3) (R F 46) (Harborne, 1987: 239-244).
B
2.4.2 Vitamin C
Vitamin C atau asam askorbat mempunyai berat molekul 178 gr/mol
dengan rumus molekul C6H8O6 dalam bentuk kristal tidak berwarna
(bening/transparan), titik cair 190-192C. Bersifat larut dalam air sedikit larut
dalam aseton atau alkohol yang mempunyai berat molekul rendah dan sukar larut
dalam kloroform, eter, dan benzena (Sudarmadji, 2007: 165). Vitamin C dapat
dipisahkan baik dengan KLT pada silika gel G atau GF254 dengan pengembangan
air (R F 96) atau etanol (R F 22). Etanolasam asetat 10% (9:1) digunakan untuk
B
memisahkan askorbat (R F 50) dari turunan dehidronya (R F 73) dan dari asam
B
isoaskorbat (R F 54). Asam askorbat dapat dideteksi pada plat silika gel GF254
B
sebagai bercak biru gelap pada cahaya UV 254, batas deteksi 3 g (Harborne,
1987: 182-183).
Gambar 2.8 Struktur umum senyawa L- asam askorbat (Silalahi, 2006: 17).
cairan di sebelah luar selama difusi melintasi membran sampai terbentuknya suatu
keseimbangan konsentrasi antara larutan disebelah dalam dan disebelah luar sel
(Voight, 1995: 566).
Metode maserasi dipilih karena metode ini murah dan mudah dilakukan,
selain itu dikhawatirkan senyawa yang terkandung dalam buah pepino merupakan
senyawa yang tidak tahan terhadap panas. Maserasi biasanya dilakukan dengan
perbandingan 1:2, seperti 100 Kg sampel diekstrak dengan 200 L pelarut. Guna
mendapatkan ekstrak dalam waktu yang relatif cepat dapat dilakukan pengadukan
dengan menggunakan shaker berkekuatan 120 rpm selama 24 jam (Husnah, 2009:
39).
aktivitas antioksidan ekstrak kasar buah pepino masih lebih rendah. Ekstrak etanol
70% buah pepino mempunyai aktivitas antioksidan tertinggi, diketahui memiliki
senyawa aktif golongan senyawa antioksidan asam askorbat dan alkaloid. Uji
aktivitas antioksidan ini menggunakan metode DPPH (Husnah, 2009).
Hartati dan Ersam (2006) Antiradikal bebas (antioksidan) adalah bahan
yang dalam kadar rendah dapat mencegah terjadinya oksidasi dari substrat yang
mudah teroksidasi. Metode uji antioksidan dengan DPPH (1,1-difenil-2pikrilhidrazil) dipilih karena metode ini adalah metode sederhana untuk evaluasi
aktivitas antioksidan dari senyawa bahan alam. Senyawa yang aktif sebagai
antioksidan mereduksi radikal bebas DPPH menjadi 1,1-difenil-2-pikrilhidrazin
dan besarnya aktivitas penangkap radikal bebas dinyatakan dengan EC 50 yaitu
B
besarnya konsentrasi larutan uji yang mampu menurunkan 50% absorbansi DPPH
dibandingkan dengan larutan blangko.
DPPH yang bereaksi dengan antioksidan akan menghasilkan bentuk
tereduksi difenil pikril hidrazin dan radikal antioksidan (Prakash, 2001). Reaksi
antara antioksidan dengan molekul DPPH dapat dilihat pada gambar berikut:
larutan DPPH 0,2% dalam methanol dengan diamati selama 30 menit, senyawa
yang aktif sebagai antioksidan akan memberikan bercak kuning berlatar ungu.
Kemudian dilakukan uji lanjut terhadap senyawa yang aktif untuk menentukan
harga EC50(Hartati dan Ersam, 2006).
kesetimbangan.
Ada empat jenis mekanisme sorbsi, yaitu (Rohman dan Gandjar 2008:
329):
1)
Adsorbsi
Adsorbsi merupakan penyerapan pada permukaan yang melibatkan
interaksi-interaksi elektrostatik seperti pada gaya antarmolekuler pada fase
diam dengan fase gerak, misalnya: kromatografi kertas dan KLT.
2)
Partisi
Partisi merupakan proses sorbsi seperti pada proses ekstraksi pelarut
dengan cara solut akan terdistribusi diantara fase diam sesuai dengan
kelarutan relatif keduanya, misalnya: kromatografi cair-gas.
3)
Pertukaran ion
Pertukaran ion merupakan proses pertukaran solut-solut ion diantara
ion-ion yang terikat pada fase diam yang dinamakan resin berupa padatan
polimer oraganik yang bermuatan. Misalnya: kromatografi kolom.
4)
Eksklusi
Eksklusi berdasarkan pada ukuran molekul dari zat padat (fase diam)
yang berupa gel sedangkan fase gerak berupa cairan. Proses tersebut dikenal
sebagai eksklusi gel.
KLT mempunyai kelebihan dibandingkan dengan kromatografi kertas
karena membutuhkan waktu elusi yang lebih pendek dan diperoleh pemisahan
yang lebih baik untuk analisa kuantitatif. Hasil pemisahan yang baik dari KLT
mempunyai kapasitas lebih besar dibandingkan dengan kromatografi kertas. Serta
dapat digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa yang sifatnya hidrofobik
gel 60 (35-70 mesh, ASIM). Plat silika gel Merck 60 F254 ;0,25 mm ukuran 20 x
B
20 cm dengan alumunium sebagai penyangga fasa diam, dan larutan 1,5% serium
sulfat (Ce(SO4)2).
Silika gel banyak yang digunakan sebagai fase diam, mempunyai rumus
empiris SiO2. Permukaan pada partikel silika gel terdapat suatu bayangan atom
oksigen yang mengikat proton. Adanya golongan hidroksil membuat silika
bersifat polar. Gugus fungsi yang bersifat polar akan berinteraksi kuat dengan
analit organik pada permukaan silika gel dan gugus fungsi non polar berinteraksi
secara lemah. Molekul analit yang bersifat polar dapat berikatan dengan silika gel
melalui dua cara, yaitu melalui ikatan hidrogen dan melalui interaksi dipol-dipol
(Anonymousc, 2008).
OH
O
Si
OH
O
O
O
Si
Si
OH
O
O
O
Si
Si
OH
O
O
O
Si
Si
O
O
Si
Gambar 2.10 Struktur silika gel (Rohman dan Gandjar, 2009: 357).
golongan polar pelarut dapat bersaing dengan analit untuk menempatkan ikatan
pada permukaan silika gel. Oleh karena itu, jika pelarut yang digunakan terlalu
polar akan berinteraksi kuat dengan permukaan silika gel dan akan meninggalkan
tempat fase diam dengan membebaskan ikatan dengan analit tersebut. Kemudian
analit bergerak cepat pada fase diam. Dengan cara yang sama, kelompok polar
pelarut dapat mengikat kuat dengan fungsional polar pada analit dan menghalangi
interaksi analit dengan permukaan silika gel (Anonymousc, 2008).
Eluen pada kromatografi adsorbsi dapat dikelompokkan ke dalam deret
eluotropik berdasarkan efek elusinya. Seperti ditunjukkan pada tabel 2.4 berikut
Stahl (1985: 6):
Tabel 2.4 Deret eluotropi (efek elusi mulai dari atas ke bawah)
Titik didih
Tetapan
Viskositas C p
Pelarut
(TD)
dielektrikum ()
pada 20 C
(C/750 torr)
pada 20 C
n-Heksana
68,7
1,890
0,326
Toluena (toluol)
110,6
2,379
0,900
Kloroform
61,3
4,806
0,580
Eter (dietil eter)
34,6
4,34
0,233
Aseton
56.5
20,70 (T=25 C) 0,316 (T=25 C)
Etanol
78,5
24,30 (T=25 C)
1,200
Metanol
64,6
33,62
0,597
Air
100,0
80,37
1.005
Asam asetat
117,9
6,15
1,049
Ammoniak
30,9
0,59
B
Sumber: Stahl E., 1985, Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi, Hal: 7.
heksana nonpolar mempunyai efek elusi lemah, kloroform cukup kuat dan
metanol yang bersifat polar efek elusinya kuat. Laju rambat analit tergantung
kepada viskositas pelarut dan struktur lapisan.
Gambar 2.11 Ikatan hidrogen antarmolekul pada air (Effendy, 2006: 202).
2) Asam Asetat
Asam asetat atau asam etanoat merupakan asam karboksilat berwujud
cairan kental jernih dengan rumus molekul CH3COOH dengan aroma yang
khas. Densitas: 1,049
Senyawa asam asetat murni dinamakan "asam asetat glasial" dengan cara
mengoksidasi etanol atau butana dengan bantuan Mangan (II) atau Kobalt (II)
etanoat terlarut pada suhu 200C (Daintith, 1994: 177-178).
3) Aseton
Aseton mempunyai nama lain dimetil asetat, dimetil keton, metil
asetat, ketopropan, propanon, piroasetat eter dan piroasetis spirit. Rumus
molekul aseton adalah CH3COCH3. Umumnya digunakan sebagai pelarut
(2009),
untuk
mengekstrak
sampel
uji,
lebih
baik
63,5C; titik didih 61C. Senyawa ini dibuat melalui klorinasi metana (diikuti
oleh pemisahan produk campurannya) atau melalui reaksi haloform.
Kloroform digunakan sebagai pelarut dan bahan dasar untuk membuat
senyawa lainnya (Daintith, 1994: 443).
Kloroform (triklorometana) sukar terbakar (tetapi uapnya mudah
terbakar), tidak larut dalam air tetapi larut dalam alkohol dan eter; uapnya
bersifat membius dan bila terkena udara dan cahaya dapat membentuk gas
fosgen yang beracun. Kloroform digunakan untuk pembuatan senyawa fluorokarbon, sebagai pelarut (cat), dan sebagai anastetik. Kelarutan dalam air pada
suhu 25o C 7,43 x 10 3 mg/L, Tl. -63,5C, t.d. 61,7C, d 1,483 (HAM, 2006:
P
232).
7) Metanol
Metanol (Methyl Alkohol) adalah cairan tanpa warna dengan rumus
kimia CH3OH, densitas 0,79 gram/mL; titik leleh -98C, titik didih 64C.
Senyawa ini dibuat melalui oksidasi katalitik dari metana (gas alam)
menggunakan udara (atau dibuat dari karbon monoksida dan oksigen) dan
digunakan sebagai pelarut serta sebagai bahan baku untuk industri kimia
(Daintith, 1994: 282).
8) n-Heksana
n-Heksana merupakan hidrokarbon alifatik yang mudah menguap.
Sehingga dalam jurnal Fachriyah (2007) n-heksana digunakan sebagai pelarut
sokletasi yang bertujuan untuk menghilangkan lemak. Ikatan pada heksana
yang tunggal dan sifat yang kovalen menjadikan n-heksana tidak reaktif
sehingga sering digunakan pelarut inert pada reaksi organik.
Nama lain dari Heksana (Hexane) adalah kaproil hidrida, metil n-butil
metan dengan rumus molekul CH3(CH2) 4CH3. Heksana mempunyai
B
karakteristik sangat tidak polar, volatil, mempunyai bau khas yang dapat
menyebabkan pingsan. Berat molekul heksana adalah 86,2 gram/mol dengan
titik leleh -94,3 sampai -95,3C. Titik didih heksana pada tekanan 760 mmHg
adalah 66 sampai 71C (Daintith, 1994: 219).
9) Petroleum eter
Petroleum eter merupakan campuran hidrokarbon (bukan eter
sebenarnya), yang atsiri dan mudah terbakar, tidak berwarna, densitas 0.625
sampai 0,660 g/ml terutama terdiri dari pentana dan heksana. Bahan ini
mendidih dalam rentang 30-70oC dan digunakan sebagai pelarut (Daintith,
1994: 327). HAM (2006: 331), petroleum eter merupakan campuran
hidrokarbon berupa cairan jernih, mudah menguap, mudah terbakar. Diperoleh
dari pengolahan minyak bumi, dan digunakan sebagai pelarut di laboratorium.
10) Toluena
Toluena atau metilbenzena merupakan cairan tanpa warna dengan
rumus molekul CH3C6H5 dengan densitas 0,9 gram/mL; titik leleh -94C, titik
2.7.7 Identifikasi
Ada beberapa kemungkinan cara mendeteksi senyawa tidak berwarna
pada kromatogram. Deteksi paling sederhana adalah jika senyawa menunjukkan
penyerapan di daerah UV gelombang pendek (radiasi utama kira-kira 254 nm)
atau jika senyawa itu dapat dieksitasi ke fluoresensi radiasi UV gelombang
pendek dan gelombang panjang (365 nm). Pada senyawa yang mempuyai dua
ikatan rangkap atau lebih dan senyawa aromatik seperti turunan benzena,
mempunyai serapan kuat di daerah 230-300 nm (Stahl, 1985: 13).
Untuk identifikasi dari senyawa-senyawa yang terpisah dari lapisan tipis
menggunakan harga Rf. Harga Rf (Retordation Factor) didefinisikan sebagai
berikut (Sastrohamidjojo, 2005: 23):
Nilai Rf =
Y
Jarak yang ditempuh oleh senyawa
=
Jarak yang ditempuh oleh pelarut (fase gerak) X
(2.1)
golongan
alkaloid.
Pada
uji
dengan
pereaksi
DPPH
TH
1. Sumber radiasi
2. Sampel
3. Monokromator
4. Detektor
5. Penguat
6. Rekorder
diinterferensikan dengan radiasi infra merah agar sinyal radiasi infra merah yang
diterima oleh detektor secara utuh dan lebih baik (Giwangkara, 2006).
Secara keseluruhan, analisis menggunakan Spektrofotometer FTIR
memiliki dua kelebihan utama dibandingkan metoda konvensional lainnya, yaitu
(Giwangkara, 2006):
1. Dapat digunakan pada semua frekuensi dari sumber cahaya IR secara
simultan sehingga analisis dapat dilakukan lebih cepat daripada
menggunakan cara sekuensial atau scanning
2. Sensitifitas dari metode Spektrofotometri FTIR lebih besar daripada cara
dispersi, sebab radiasi yang masuk ke sistem detektor lebih banyak karena
tanpa harus melalui celah ( slitless ).
T
Bromida
diidentifikasikan
(Harborne,
dengan
1985:25).
menggunakan
Banyak
FTIR
gugus
fungsi
dapat
yang
mengakibatkan
Frekuensi
cm -1
m
Alkana C=C streching vibration
Isolat C=C
1680-1620
5.95-6.17
P
C=C konjugat
dengan aryl
C=C konjugat
dengan C=C
atau C=O
Konjugat
CH 2 =CHC CGolongan vinyl,
-CH=CH 2
Vinyl eter, -OCH=CH 2
Vinyl ketone,
-CO-CH=CH 2
Vinyl ester,
CH 2 =CHOCOR
Siklopropana
B
Keterangan
w-m
1640-1610
6.10-6.21
Kemungkinan adanya
senyawa simetrik
-
1660-1580
6.02-6.33
1620-1610
6.17-6.12
s-m
Konjugat dengan C C
1645-1640
6.08-6.10
w-m
Hidrokarbon
1640-1630
1620-1610
1620-1615
6.49-6.54
6.17-6.21
6.17-6.19
s
s
s
1700-1645
5.85-6.08
~1655
~6.04
w-m
~1565
~6.39
w-m
Intensitas
Senyawa Polyfluorinated
~1945 cm -1
Senyawa Polyfluorinated
~1800 cm -1
P
Siklobutana
Siklopentana
~1610
~6.21
w-m
~1645
~6.08
w-m
Senyawa vinyl
halogen
945-925
905-865
Senyawa Polyfluorinated
~1745 cm -1
P
Senyawa Polyfluorinated
~1770 cm -1
P
Sikloheksana
3.23-3.25
3.30-3.34
5.04-5.08
5.41-5.56
m
m
w
w
CH str of CH 2
CH str of CH
Overtone
Overtone
10.58-10.83
11.05-11.56
m
s
CH out-of-plane def.
(senyawa suibstitusi
nitril, 960cm -1 )
965-960
945-940
825-810
10.36-10.42
10.58-10.64
12.12-12.35
s
m
s
CH out-of-plane def.
CH out-of-plane def.
CH 2 out-of-plane def.
995-980
965-955
10.05-10.20
10.36-10.47
s
m
CH out-of-plane def.
CH out-of-plane def.
Sumber: Socrates G., 1994, Infrared Characteristic Group Frequencies, Second Edition, Table and
Charts. Hal: 77.
BAB III
METODE PENELITIAN
3.2.2 Bahan
Bahan sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah Buah Pepino
(Solanum muricatum Aiton) dari Jl. Veteran No. 02 (Hypermart Malang Town
Square)-Malang.
Bahan-bahan kimia yang digunakan adalah aquadest, petroleum eter p.a.,
aseton p.a., etanol 70 %, etanol 95 %, n-heksana p.a., kloroform p.a., pellet KBr,
plat silika gel GF254, asam asetat p.a., DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil), BHT,
kertas saring, metanol p.a., NH4OH p.a., pereaksi Marquis, amoniak p.a., reagen
Dragendorf, asam asetat 10%, toluena dan pereaksi Ninhidrin.
Senyawa Pada Daging Buah Pepino (Solanum muricatum Aiton) yang Berpotensi
Sebagai Antioksidan " ada lima tahapan yaitu:
1) Preparasi sampel
2) Ekstraksi sampel untuk menghasilkan ekstrak kasar
3) Pemisahan senyawa hasil isolasi meliputi ;
a. KLT Analitik untuk menentukan jumlah komponen dalam campuran
dan memperoleh komposisi eluen yang paling baik untuk keperluan
preparatif.
b. KLT Preparatif untuk memisahkan campuran senyawa dari sampel
dalam jumlah besar berdasarkan fraksinya dan digunakan untuk analisa
berikutnya.
( )
Eluen v
Referensi
Harborne,
1987: 182,
Rohman dan
Gandjar
(2008: 239),
Martelli and
Nano (1967:
22)
Auterhooff
and Kovar,
1987: 67
Harborne,
1987: 239
Harborne,
1987: 239
(v v )).
Elusi dihentikan
setelah eluen bergerak dengan jarak 9 cm. Noda dideteksi menggunakan lampu
UV dengan max 254 dan 366 nm. Noda dikerok dari plat KLTP dan dilarutkan
dengan 10 ml pelarut etanol 70% dan disentrifugasi dengan kecepatan 1600 rpm
selama 15 menit untuk memisahkan filtrat dengan endapan. Filtrat kemudian siap
digunakan untuk uji aktivitas dan analisa IR. Pemisahan KLTP ini dilakukan
sebanyak satu kali.
( v)
% Rendemen Ekstrak =
(3.1)
Nilai Rf =
(3.2)
mendapatkan hasil spot pada plat yang memenuhi kriteria: warna yang
jelas (sesuai Tabel 3.1), jarak yang teratur (tidak overleap/ tumpang
tindih), dan nilai Rf pada spot berada diantara 0,2-0,8 untuk
memaksimalkan pemisahan (Rohman dan Gandjar, 2008: 359).
3) Data KLT Preparatif
Data KLT Preparatif
pada sinar lampu UV max 254 dan 366 nm. Kemudian noda dikerok
untuk dilarutkan dalam etanol 70% dengan menghasilkan filtrat
(supernatan) yang disebut isolat.
4) Data Uji Aktivitas Antioksidan
Data uji aktivitas antioksidan dilakukan dengan melihat data
absorbansi yang diperoleh untuk mengetahui potensi senyawa tersebut
sebagai antioksidan tertinggi berdasarkan nilai % aktivitas antioksidan.
Untuk menentukan % Aktivitas antioksidan dengan rumus (Molyneux,
2003):
%Aktivitas antioksidan =
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Proses penelitian adalah salah satu contoh proses dari membaca dan
memahami sesuatu (objek) yang belum diketahui. Seperti halnya penelitian ini
yang berjudul Fraksinasi dan Identifikasi Golongan Senyawa pada Daging Buah
Pepino (solanum muricatum aiton) yang Berpotensi sebagai Antioksidan.
Mempelajari dan melakukan penelitian tentang objek yang belum tertulis menjadi
objek tertulis selanjutnya dapat dipelajari berupa memberikan rezeki akan manfaat
bagi manusia karena senyawa yang terkandung pada buah pepino mempunyai
manfaat sebagai antioksidan.
daging
dipotong
kecil-kecil
untuk
mempercepat
proses
campuran pelarut, seperti: etanol-air karena etanol 70% merupakan pelarut yang
sangat efektif untuk mengekstraksi jumlah bahan aktif yang optimal dan penyebab
pembengkakan membran sel serta memperbaiki stabilitas bahan terlarut (sampel).
Proses maserasi (macerare= mengairi, melunakkan) merupakan metode
ekstraksi yang paling sederhana dan mudah dilakukan serta baik untuk isolasi
senyawa bahan alam buah pepino yang mengandung senyawa tidak tahan
terhadap panas. Pada proses perendaman (pelunakan sampel) pelarut etanol 70%
melarutkan komponen dalam sel ekstrak daging buah pepino dengan cara
pemecahan dinding sel dan membran sel. Akibat perbedaan tekanan antara di
dalam dan di luar sel ekstrak maka metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma
akan terlarut dalam pelarut etanol 70%. Proses mengalirnya bahan pelarut etanol
70% ke dalam sel ektrak daging buah pepino dapat menyebabkan protoplasma
membengkak dan bahan kandungan (komponen senyawa) sel akan terlarut sesuai
dengan kelarutannya.
Komponen senyawa dalam sel ekstrak daging buah pepino berpindah
dengan cara terlarut dalam molekuler pelarut etanol 70% yang berdifusi melalui
rongga antar sel. Gaya yang bekerja adalah perbedaan konsentrasi antara larutan
di dalam sel ekstrak daging buah pepino dengan pelarut etanol 70%. Komponen
senyawa sel ekstrak mencapai ke dalam cairan di sebelah luar sel. Hal ini
berlangsung selama proses difusi melintasi membran sampai terbentuknya suatu
keseimbangan konsentrasi antara larutan (pelarut etanol dan bahan terlarut yaitu
komponen senyawa dala ekstrak) disebelah dalam dan disebelah luar sel.
Gambar 4.1 Interaksi analit dengan silika gel (Rohman dan Gandjar, 2008: 329)
Sebelum
dilakukan
pengembangan,
pemisahan
KLTA
dilakukan
penotolan ekstrak. Ekstrak daging buah pepino dilarutkan sebesar 1 gram dalam 3
ml etanol 70%, kemudian dilakukan penotolan sebanyak 1 tetes dengan
menggunakan pipa kapiler yang telah diruncingkan guna menghasilkan bercak
sekecil mungkin, sehingga mencegah pelebaran dan penggabungan spot yang
terbentuk pada plat setelah dilakukan pengembangan.
Eluen (komposisi pelarut) untuk proses pengembangan sebelumnya
dilakukan penjenuhan terlebih dahulu dalam suatu wadah/bejana tertutup
(chamber) agar menyimpan uap larutan pengembang/eluen sehingga akan terjadi
keseimbangan antara larutan dengan uap yang dinamakan proses penjenuhan
eluen. Mengetahui kejenuhan suatu eluen maka dimasukkan kertas saring halus
dengan ukuran 2x10 cm ke dalam chamber. Ketika eluen bergerak melalui lapisan
kertas saring dengan pengembangan menaik (ascending) akibat gaya kapilaritas
(gaya yang disebabkan oleh resapan melalui pori-pori lapisan) yang bergerak
( v )}.
E1-E2-E3-E4
E5-E6-E7
Gambar 4.2 Dokumentasi dan ilustrasi noda KLTA sesudah diUV max 254 nm
Tabel 4.1 Nilai Rf dan warna noda pada KLTA setelah di UV max 254 nm.
Eluen (E)
Jumlah Spot
Nilai Rf
Warna Noda
E1
1
0,25
Biru kehitaman
E2
1
0,50
Biru kehitaman
E3
1
0
Biru kehitaman
E4
1
0,30
Biru kehitaman
E5
1
0,75
Biru kehitaman
2
0,31
Biru kehitaman
E6
1
0,60
Biru kehitaman
E7
1
0
Biru kehitaman
Sumber: Hasil penelitian (2010).
Gambar 4.2 dan Tabel 4.1 menunjukkan bahwa eluen yang dapat
memisahkan ekstrak pekat daging buah pepino dengan baik adalah E5 {petroleum
eter:
n-heksana:
metanol:
kloroform:
asam
asetat
(1:1:3:3:2)}
karena
menghasilkan noda yang paling banyak (2 spot) dari pada noda pada eluen yang
lain (1 spot) dengan pemisahan yang jelas dan spot yang terbentuk tidak terjadi
tumpang tindih dengan menghasilkan dua (2) spot yang kedua-duanya berwarna
biru kehitaman dengan Rf1= 0,31 dan Rf2=0,75 serta nilai Rf pada spot berada
diantara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan (Rohman dan Gandjar, 2008:
359).
yang berbeda serta struktur lapisan dari silika gel mampu mempengaruhi laju
rambat analit.
Pemisahan yang menggunakan fase diam polar seperti silika gel, polaritas
fase gerak akan menentukan kecepatan/ laju rambat/ migrasi solut (analit) pada
ekstrak daging buah pepino yang berarti akan menentukan nilai Rf. Semakin kuat
gaya antarmolekuler analit ekstrak daging buah pepino dalam eluan E5 dengan
fase diam silika gel GF254 maka eluen akan sulit membawa analit mengalir akibat
viskositas tinggi yang ditunjukkan dengan waktu laju rambat eluen selama 35
menit. Karena dengan penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar ke dalam
pelarut non polar akan meningkatkan harga Rf seperti pada nilai Rf= 0,75 pada
eluen E5.
Pemisahan analit pada fase diam berpindah bersama pelarut, jika molekul
analit tidak berikatan dengan permukaan silika gel. Golongan pelarut polar pada
etanol dapat bersaing dengan analit ekstrak daging buah pepino untuk membentuk
ikatan hidrogen dari gaya antarmolekuler pada permukaan silika gel. Oleh karena
itu, jika pelarut yang digunakan terlalu polar akan berinteraksi kuat dengan
permukaan silika gel dan akan meninggalkan tempat fase diam dengan
membebaskan ikatan hidrogen dengan analit tersebut. Analit akan bersaing
dengan fase gerak untuk saling berikatan akibat gaya antarmolekuler keduaya
dengan sisi-sisi polar pada permukaan adsorben (gugus OH). Dengan cara yang
sama, kelompok polar pelarut etanol dapat mengikat kuat dengan fungsional polar
pada analit dan menghalangi interaksi analit dengan permukaan silika gel.
Penampakan noda yang berwarna biru gelap pada E5 yang terdapat pada
plat ketika di sinari lampu UV max 254 nm disebabkan karena adanya daya
interaksi antara sinar UV dengan indikator fluoresensi yang terdapat pada plat
silika gel GF (Gypsum Fluoresensi). Fluoresensi cahaya yang tampak merupakan
emisi cahaya yang dipancarkan oleh komponen pada plat yang mengandung
fuoresensi ketika elektron yang tereksitasi dari tingkat energi dasar ke tingkat
energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke keadaan semula dengan
melepaskan energi sehingga spot tampak berwarna gelap.
Ketika divisualisasi dengan sinar lampu max 366 nm, ekstrak pada plat
KLTA tidak menunjukkan adanya noda sama sekali pada eluen ke-1 sampai eluen
ke-7 (E1 s/d E7), sehingga perlu dilakukan visualisasi dengan reagen (pereaksi)
semprot untuk penampak noda seperti Marquis, Dragendorf dan Ninhidrin untuk
mengetahui adanya senyawa-senyawa alkaloid maupun senyawa-senyawa organik
seperti vitamin C. Pemilihan pereaksi ini didasarkan karena pada ekstrak kasar
pepino dengan pelarut etanol 70% dimungkinkan adanya senyawa alkaloid dan
vitamin C pada uji fitokimia (Husnah, 2009).
Hasil identifikasi noda dengan pereaksi Marquis dari ekstrak daging buah
pepino dengan variasi eluen dapat ditunjukkan pada Gambar 4.3 dan Tabel 4.2:
E1
E2
E3
E4
E5 E6
E7
Gambar 4.3 Dokumentasi dan ilustrasi noda pada plat setelah disemprot dengan
pereaksi Marquis
Tabel 4.2 Nilai Rf dan warna noda pada KLTA setelah disemprot dengan Marquis.
Eluen (E)
Jumlah Spot
Nilai Rf
Warna Noda
Keterangan
E1
1
0,25
Coklat muda
E2
1
0,50
Coklat muda
E3
1
0
Coklat muda
Akhir elusi
nampak bercak
merah
lembayung
E4
1
0,30
Coklat muda
E5
1
0,31
Coklat muda
2
0,75
Coklat tua
kemerahan
E6
1
0,60
Coklat muda
Akhir elusi
nampak bercak
merah
lembayung
E7
1
0
Coklat muda
Akhir elusi
nampak bercak
coklat tua
Sumber: Hasil penelitian (2010).
Gambar 4.3 dan Tabel 4.2 menunjukkan adanya bercak berwarna merah
lembayung pada E3-E6-E7 yang diduga adanya golongan senyawa alkaloid,
namun pemisahannya tidak berlangsung dengan baik dan maksimal karena
kenampakan warna bercak noda terlihat pada akhir elusi. Spot yang berwarna
Gambar 4.4 Reaksi pencoklatan vitamin C (L-asam askorbat) (Winarno, 2002: 43).
Gambar 4.4 merupakan reaksi pencoklatan yang dialami vitamin C (Lasam askorbat) ketika dalam suasana asam. L-asam askorbat ketika disemprot
dengan asam pada pereaski Marquis membentuk asam L-Dehidroaskorbat,
kemudian cincin lakton asam L-Dehidroaskorbat terurai dengan membentuk suatu
senyawa asam L-diketoglutonat yang menghasilkan warna coklat pada ekstrak
yang terdapat di plat. Sehingga dapat dipastikan senyawa yang terdapat pada
ekstrak daging buah pepino mengandung senyawa vitamin C (L-Asam askorbat).
Fraksi B
Fraksi A
(a)
(c)
(b)
(d)
Gambar 4.5 (a) Ilustrasi penotolonan isolat pada plat KLTP, (b) Ilustrasi isolat
yang akan dikerok setelah di elusi dan di sinari lampu UV max 254
nm, (c) KLTP isolat ketika di UV max 254 nm dan (d) Noda pada
KLTP setelah dikerok.
Noda dikerok dari plat KLTP dan dilarutkan dengan 10 ml pelarut etanol
70% untuk melarutkan isolat dan disentrifugasi dengan kecepatan 1600 rpm
selama 15 menit untuk memisahkan filtrat dengan endapan. Filtrat isolat A dan
Filtrat isolat B kemudian di lakukan penimbangan untuk mengetahui berat
masing-masing isolat yang didapatkan dari plat KLTP. Berat isolat A adalah
0,0209 gram atau 20,9 mg dan berat isolat B adalah 0,0576 gram atau 57,6 mg.
Kemudian filtrat isolat daging buah pepino dilakukan uji aktivitas antioksidan
senyawa dan identifikasi FT-IR senyawa.
No.
1.
2.
3.
4.
Rerata
0,2756
0,0646
0,2770
0,0617
0,2715
0,0077
% Akttivitas
Antioksidan
76,56
77,73
97,16
Nilai persen (%) aktivitas antioksidan penangkap radikal DPPH masingmasing isolat menunjukkan bahwa isolat B mempunyai aktivitas antioksidan
penangkap radikal yang relatif lebih tinggi dibandingkan isolat A dengan nilai %
akttivitas antioksidan isolat A sebesar 76,56 % dan isolat B 77,73 %. Dari %
aktivitas antioksidan tiap-tiap isolat, isolat B merupakan isolat yang mempunyai
potensi % aktivitas antioksidan teringgi dari pada isolat A. Senyawa yang
dimungkinkan terdapat pada isolat B adalah vitamin C, sesuai hasil data KLTA
adalah termasuk senyawa antioksidan dengan menyumbangkan atom hidrogennya
pada radikal DPPH sehingga radikal DPPH menjadi DPPH-H diamagnetik, karena
adanya elektron yang berpasangan maka DPPH-H tidak bersifat radikal bebas.
Mekanisme reaksi vitamin C ketika bereaksi dengan molekul DPPH adalah
sebagai berikut:
HO
O2N
HO
NO2
N N
HO
O2N
HO
DPPH
OH
L-AsamAskorbat
O2N
NO2
HO
O2N
NO2
HO
O2N
H
N N
O
NO2
O2N
HO
N N
NO2
HO
O2N
O
DPPH
Radikal L-Askorbil
Radikal L-Askorbil
DPPH-H
O2N
H
N N
HO
DPPH
Radikal L-AsamAskorbat
HO
O2N
O2N
HO
HO
DPPH-H
HO
N N
O2N
H
N N
HO
O
NO2
HO
O2N
Dehidro-L-AsamAskorbat
DPPH-H
Gambar 4.6 Reaksi DPPH dengan vitamin C (L-Asam Askorbat) (Nishizawa, 2005)
OH
O2N
NN
(H3C)3C
C(CH3)3
NO2
O2N
CH3
DPPH
BHT
O2N
H
NN
O
(H3C)3C
NO2
C(CH3)3
O2N
DPPH-H
CH3
RadikalPhenoxy
120
%T
100
649.00
1047.27
2975.96
3382.91
1087.78
20
879.48
2897.85
40
1645.17
60
1451.33
1422.40
1382.87
1327.90
1273.90
80
-20
4000
3500
3000
ISOLAT PEPINO
2500
2000
1750
1500
1250
1000
750
500
1/cm
Hasil interpretasi spektra FT-IR isolat B dari ekstrak daging buah pepino
dapat dilihat pada Tabel 4.4 berikut:
Tabel 4.4 Interpretasi spektra FTIR dari isolat B ekstrak daging buah pepino
No.
Bilangan Gelombang (cm-1)
Intensitas
Keterangan
Isolat B Vitamin C
Range
Korelasi
1. 3382,91
3434
3600-3300
Melebar
Vibrasi uluran
2.
2975,96
2985-2965*
Kuat
3.
2897,85
2820-2900
Kuat
4.
1645,17
1715
1640-1820
Sedang
5.
1451,33
1480-1440*
Sedang
Vibrasi uluran
dari
alifatik
Vibrasi uluran dari
konjugat C=O
Vibrasi tekukan
6.
1422,40
1452-1375
Sedang
Vibrasi tekukan
7.
1382,87
1413
1410-1350*
Lemah
8.
1327,90
1410-1350*
Lemah
9.
1273,90
1290-1030*
Lemah
Vibrasi uluran
10.
1087,78
1110
1150-1060*
Sedang
Vibrasi uluran
asimetri dari
11.
1047,27
1085-1030*
Sedang
12.
879,48
1000-850
Kuat
Vibrasi keluar
bidang dari
13.
649
700-600*
Melebar
Vibrasi tekukan
keluar bidang
dari
ikatan rangkap tiga = 12-18 105 dyne/cm. Semakin besar tetapan gaya (K) pada
suatu ikatan menyebabkan frekuensi vibrasi semakin besar.
Daerah 1451,33 cm-1 memberikan puncak yang sedang dengan kisaran
1480-1440 cm-1 terdapat vibrasi tekukan dari gugus
merupakan vibrasi tekukan
yang ikut terserap (etanol 70%). Puncak yang lemah pada daerah 1382,87 cm-1
dan 1327,90 cm-1 adalah vibrasi tekukan dari gugus
atau alkohol
yang terletak dalam daerah sidik jari (1085-1030 cm-1 dan 1050-1260 cm-1).
Oksigen bersifat elektronegatif sehingga uluran akan menyebabkan perubahan
besar dalam momen ikatan yang menyebabkan resapan C-O kuat.
Pita yang kuat pada 879,48 cm-1 disebabkan oleh deformasi keluar bidang
dari gugus tak jenuh (alkena) dengan overtone yang lemah pada 1800 cm-1 akibat
dari gerakan keluar bidang atom-atom hidrogen pada ikatan rangkap. Pita-pita
yang paling kuat dalam spektrum terletak diantara 1200-1000 cm-1 yang
disebabkan oleh eter C-O-C. Pada daerah 879,48 cm-1 dengan kisaran daerah
1000-850 cm-1 terdapat vibrasi keluar bidang dari ikatan rangkap
. Ikatan
C=C merupakan ikatan rangkap dan tidak polar, uluran ini hanya mengakibatkan
perubahan kecil dalam momen ikatan sehingga absorbsi yang terjadi sangat
lemah.
Berdasarkan hasil pengamatan spektra FT-IR dapat diketahui bahwa
karakteristik gugus fungsi yang terdapat pada isolat B identik dengan gugus
fungsi yang terdapat pada vitamin
gugus
, C=O,
terlihat pada daerah sebelah kanan 1400 cm-1 (900-1400 cm-1) antara spektra isolat
B dengan vitamin C (standart).
Gambar 4.10 Struktur senyawa L-asam askorbat (vitamin C) (Silalahi, 2006: 17).
"Rosululloh SAW pernah makan mentimun dengan ruthab"(HR. At
Tirmidzi dan yang lain).
Sebagaimana firman Allah SWT dalam QS. Al Imron ayat 190-191 dan
QS. Al Baqarah ayat 269 memberikan hidayahNya bagi manusia yang berusaha
untuk berfikir dan memahami akan keindahan alam semesta sebagai manfaat bagi
kehidupan:
t%!$#
$t $u/u F{$#u Nuu9$# ,=yz t6x"tGtu /_ 4n?tu #Y%u $Vu% !$# t.t
$9$# z>#xt $o)s y7oys6 Wt/ #xy |M)n=yz
Sesungguhnya dalam penciptaan langit dan bumi, dan silih
bergantinya malam dan siang terdapat tanda-tanda bagi orang-orang yang
berakal, (yaitu) orang-orang yang mengingat Allah sambil berdiri atau duduk
atau dalam keadan berbaring dan mereka memikirkan tentang penciptaan langit
dan bumi (seraya berkata): "Ya Tuhan kami, tiadalah Engkau menciptakan Ini
dengan sia-sia, Maha Suci Engkau, Maka peliharalah kami dari siksa neraka
(QS. Al Imron: 190-191).
(#9'& H) 2t $tu 3 #ZW2 #Zyz uA& s)s sy6s9$# |N tu 4 !$to t sy6s9$# A
=t69F{$#
Allah menganugerahkan Al Hikmah (kefahaman yang dalam tentang Al
Quran dan As Sunnah) kepada siapa yang dikehendaki-Nya. dan Barangsiapa
yang dianugerahi hikmah, ia benar-benar telah dianugerahi karunia yang
banyak. dan hanya orang-orang yang berakallah yang dapat mengambil
pelajaran (dari firman Allah) (QS. Al Baqarah: 269).
Vitamin
dapat
berbentuk
L-asam
askorbat
dan
asam
L-
Senyawa vitamin C dalam buah pepino dapat berfungsi sebagai obat yaitu
sebagai zat antioksidan apabila masih dalam batas konsentrasi tertentu yaitu
minimal 60 mg/hari. Apabila melebihi batas konsentrasi tersebut maka aktivitas
sebagai antioksidan dapat berubah menjadi prooksidan sehingga dapat
mendatangkan efek negatif, seperti munculnya penyakit kanker, terutama untuk
penggunaan di atas ambang batas. Oleh karena itu Allah SWT melarang
hambanya untuk berlebih-lebihan.
Allah SWT berfirman dalam QS. Ibrahim ayat 7:
ts9 1#xt ) nx"2 s9u ( 3yV{ ?x6x s9 3/u r's? )u
Dan (ingatlah juga), tatkala Tuhanmu memaklumkan; "Sesungguhnya
jika kamu bersyukur, pasti Kami akan menambah (nikmat) kepadamu, dan jika
kamu mengingkari (nikmat-Ku), Maka Sesungguhnya azab-Ku sangat pedih"( QS.
Ibrahim: 7).
Manfaat buah pepino dalam segi kesehatan mempunyai nilai positif bagi
kehidupan dari penelitian yang telah dilakukan. Dengan memanfaatkan buah
pepino sebagai makanan dan obat bagi kehidupan, maka kesehatan akan terjaga
dan mencegah adanya penyakit. Agama islam memerintahkan umat muslim untuk
menggunakan obat dan upaya-upaya penyembuhan yang tidak bertentangan
dengan kodrat ketergantungan manusia (tawakal) kepada Allah SWT. Dari usahausaha manusia memperhatikan dengan seksama segala ciptaan Allah SWT bahwa
menganalisis buah pepino dan memanfaatkannya dengan bijaksana maka akan
menambah rasa kagum akan kesempurnaan kekuasaanNya dan rasa syukur
kepadaNya sehingga Allah SWT akan menambah nikmatNya.
Berdasarkan QS. An Nahl ayat 114 maka buah pepino merupakan buah
halal dan baik untuk dikonsumsi secara aman yang artinya tidak menyebabkan
penyakit dan aman untuk digunakan sebagai sumber makanan secara duniawi dan
ukhrawi. Karena buah pepino memberikan manfaat sebagai sumber makanan yang
mengandung zat antioksidan selama konsumen tidak melebihi batas (tabdzir).
Allah SWT memerintahkan untuk makan makanan halal lagi baik yang
ada di alam untuk manusia. Sepertti buah pepino yang mempunyai manfaat
sebagai antioksidan yang dapat mencegah penyakit degenerativ merupakan suatu
makanan yang dapat dikonsumsi dan digunakan sebagai sumber obat bagi
manusia. Manusia memanfaatkan buah pepino dan seluruh alam dengan baik
maka kewajiban manusia kepada Allah SWT adalah bersyukur atas segala nikmat
dan karuniaNya, sebagai tanda manusia yang bertaqwa dengan salah satu bentuk
ibadah
kepada
TuhanNya.
Karena
bersyukur
merupakan
cara
untuk
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
1. Eluen terbaik dalam pemisahan senyawa antioksidan hasil ekstrak etanol
70% pada daging buah pepino (Solanum muricatum Aiton) dengan
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Analitik menggunakan fase diam silika
gel GF254 adalah petroleum eter: n-heksana: metanol: kloroform: asam
asetat (1:1:3:3:2).
2. Jenis golongan senyawa fraksi dari kadar aktivitas antioksidan tertinggi
pada ekstrak daging buah pepino (Solanum muricatum Aiton) adalah isolat
B (77,73 %) dari pada isolat A (76,56 %), sehingga isolat B dilakukan uji
identifikasi karakteristik gugus fungsi senyawa. Golongan senyawa yang
terdapat di dalam isolat B adalah vitamin C (L-asam askorbat). Hal ini
berdasarkan hasil pemisahan KLTA dan KLTP pada eluen terbaik
didapatkan spot berwarna biru kehitaman pada Rf=0,75 ketika
divisualisasi dengan sinar UV 254 nm dan hasil identifikasi gusus fungsi
spektrofotometer FTIR pada isolat A adalah gugus
, C=O,
5.2 Saran
Adapun saran dari penelitian ini sebagai berikut:
1. Perlu adanya penelitian tentang identifikasi golongan senyawa yang
terdapat pada isolat A dari ekstrak daging buah pepino (Solanum
muricatum Aiton)
2. Perlu adanya penelitian lebih lanjut untuk uji aktivitas antioksidan pada
beberapa jenis buah pepino selain buah pepino ungu.
DAFTAR PUSTAKA
Arsyad, N. 2001. Kamus Kimia Arti dan Penjelasan Ilmiah. Jakarta: Gramedia
Pustaka Utama.
B.P p.i.c. 2003. Ethyl Acetate CAS No. 141-78-6 IUPAC Name: Ethyl Ethanoate.
USA: Technical Service and Development.
Dewi, CD. 2005. Kimia Analitik Teori Dasar dan Penerapannya. Malang:
Universitas Islam Negeri.
Effendi.
Ervina, M. dkk. 2008. Isolasi Senyawa Antioksidan dari Rimpang Temu Ireng
(Curcuma aeruginosa Roxb.). http://www.lppm.wima.ac.idmarta_1.
pdf. Tanggal akses 11 Maret 2008.
Fachriyah, E., Kerniawan A., Gnardi dan Meiny. 2006. Senyawa Kimia Fraksi
Metanol
Rimpang
Bingle
(Zibgiber
Cassumunar
Roxb.),
http://mediamedika.net/modulus/php?name=jurnal&file. Tanggal Akses
11 Maret 2008.
Fessenden, R.J., Fessenden, J.S., 1982, Kimia Organik Jilid 1, Jakarta: Erlangga
Giwangkara, S, EG. 2006. Aplikasi Logika Syaraf Fuzzy Pada Analisis Sidik Jari
Minyak Bumi Menggunakan Spetrofotometer Infra Merah -Transformasi
Fourier (FT-IR). Sekolah Tinggi Energi dan Mineral, Cepu - Jawa
Tengah, http://www.wikipedia.com. Tanggal Akses 25 Oktober 2007.
Hartati, S. dan Ersam, T. 2006. Dua Senyawa 4-fenilkumarin pada Fraksi Non
Polar dari Ekstrak Etil Asetat Batang Garcinia balica miq. (Mundu
Alas). Kelompok Penelitian Kimiawi Tumbuhan ITS, Jurusan Kimia,
Surabaya: FMIPA ITS. http://www. beckers@chem.its.ac.id. Tanggal
akses 19 Februari 2008.
Lenny, S.. 2006. Senyawa Terpenoide dan Steroida. Sumut: USU Repository.
http://library.usu.ac.id/download/fmipa/06003488.pdf-senyawa. Tanggal
akses 06 Desember 2007.
Mahran, J., dan Mubasyir, A.A.H. 2006. Al-Qur'an Bertutur Tentang Makanan
Dan Obat-Obatan. Penerjemah: Irwan Raihan. Yogyakarta: Mitra
Pustaka.
Martelli, A., and Nano, GM. 1967. Farmaco dalam Text Book Chapter III
Aplication of Analytical Techniques to the Identification and Assay of
Ascorbic Acid Related Compounds. http://prr.hec.gov.pk/Chapters/6653.pdf. Tanggal Akses 01 Desember 2008.
Sarno dan Purnama D.A. 2005. Pepino Buah Mewah Berkhasiat Obat.
Yogyakarta: Penerbit Kanisius.
Prakash
A.
2001,
Medhalin
Laboratories
Analytical
Progress,
http://medlab.com/file.aspx?field=56. Tanggal akses 25 Januari 2006.
Pratt, D.E. dan B.J.F. Hudson. 1990. Natural Antioxidants not Exploited
Comercially. Di dalam: B.J.F. Hudson, editor, Food Antioxidants.
Elsevier Applied Science. London. Dalam Term Paper Trilaksani W.,
2003. Antioksidan: Jenis, Sumber, Mekanisme Kerja dan Peran
Terhadap Kesehatan. http://fa.lib.itb.ac.id/go.php?id =jbptitbfa-gdl-s21992-marlina-63, Institut Pertanian Bogor, Tanggal akses 20 Februari
2008
Pratt, D.E. 1992. Natural Antioxidants From Plant Material. Di dalam: M.T.
Huang, C.T. Ho, dan C.Y. Lee, editor. Phenolic Compounds in Food and
Their Effects on Health H. American Society, Washington DC. Dalam
Term Paper Trilaksani W. 2003. Antioksidan: Jenis, Sumber,
Mekanisme
Kerja
dan
Peran
Terhadap
Kesehatan.
http://fa.lib.itb.ac.id/go.php?id
=jbptitbfa-gdl-s2-1992-marlina-63,
Institut Pertanian Bogor. Tanggal akses 20 Februari 2008.
Ratmo. 2007. Potensi Ekstrak Daun Sirih Merah (Piper Crocatum) Sebagai
Antioksidan. Skripsi Jurusan Kimia. Fakultas MIPA. Universitas
Brawijaya. Malang. www..brawijaya.ac.id /bss-ub /proceeding
/PDF%20FILES /BSS_ 205_ 1 p. Tanggal akses 27 Desember 2009.
Rohman, A., dan Gandjar, IG. 2008. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta::
Pustaka Belajar.
Shihab, M.Q. 2002. Tafsir Al-Mishbah (Pesan Kesan dan Keserasian Al-Quran)
Volume 7. Jakarta: Lentera Hati..
Sudarmadji, S., Haryono, B. dan Suhardi. 2007. Analisa Bahan Makanan dan
Pertanian,. Yogyakarta: Penerbit Liberty.
Sukadana, IM., Santi, SR. dan Juliarti, NK. 2008. Aktivitas Antibakteri Senyawa
Golongan Triterpenoid dari Biji Papaya (Carica papaya L.). Jurnal
Kimia 2 (1) Januari 2008: 15-18. Bukit Jimbaran: Jurusan Kimia FMIPA
Universitas Udayana.
Sukamat dan Ersam. 2006. Dua Senyawa Santon Dari Kayu Batang Mundu
Garcinia Dulcis (Roxb.) Kurz. Sebagai Antioksidan. Kelompok
Penelitian Kimiawi Tumbuhan ITS. Kimia FMIPA Jurusan Kimia,
Surabaya: Institut Teknologi Sepuluh Nopember. Http://chem.its.ac.id.
Tanggal akses 13 February 2008.
Sutomo, B. 2007. Buah Pepino Pendatang Baru yang Kaya Manfaat. Jakarta.
www.asiablogging.com. Tanggal Akses 22 Januari 2008.
Tirtawinata. 2006. Makanan dalam Perspektif Islam Al-Quran dan Ilmu Gizi.
Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Voight, R., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Penerjemah Soendari, N.S.,
Yogyakarta: Gajahmada University Press.
Winarno, FG. 2002. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
DAFTAR PUSTAKA
Arsyad, N. 2001. Kamus Kimia Arti dan Penjelasan Ilmiah. Jakarta: Gramedia
Pustaka Utama.
B.P p.i.c. 2003. Ethyl Acetate CAS No. 141-78-6 IUPAC Name: Ethyl Ethanoate.
USA: Technical Service and Development.
Dewi, CD. 2005. Kimia Analitik Teori Dasar dan Penerapannya. Malang:
Universitas Islam Negeri.
Effendi.
Ervina, M. dkk. 2008. Isolasi Senyawa Antioksidan dari Rimpang Temu Ireng
(Curcuma aeruginosa Roxb.). http://www.lppm.wima.ac.idmarta_1.
pdf. Tanggal akses 11 Maret 2008.
Fachriyah, E., Kerniawan A., Gnardi dan Meiny. 2006. Senyawa Kimia Fraksi
Metanol
Rimpang
Bingle
(Zibgiber
Cassumunar
Roxb.),
http://mediamedika.net/modulus/php?name=jurnal&file. Tanggal Akses
11 Maret 2008.
Fessenden, R.J., Fessenden, J.S., 1982, Kimia Organik Jilid 1, Jakarta: Erlangga
Giwangkara, S, EG. 2006. Aplikasi Logika Syaraf Fuzzy Pada Analisis Sidik Jari
Minyak Bumi Menggunakan Spetrofotometer Infra Merah -Transformasi
Fourier (FT-IR). Sekolah Tinggi Energi dan Mineral, Cepu - Jawa
Tengah, http://www.wikipedia.com. Tanggal Akses 25 Oktober 2007.
Hartati, S. dan Ersam, T. 2006. Dua Senyawa 4-fenilkumarin pada Fraksi Non
Polar dari Ekstrak Etil Asetat Batang Garcinia balica miq. (Mundu
Alas). Kelompok Penelitian Kimiawi Tumbuhan ITS, Jurusan Kimia,
Surabaya: FMIPA ITS. http://www. beckers@chem.its.ac.id. Tanggal
akses 19 Februari 2008.
Lenny, S.. 2006. Senyawa Terpenoide dan Steroida. Sumut: USU Repository.
http://library.usu.ac.id/download/fmipa/06003488.pdf-senyawa. Tanggal
akses 06 Desember 2007.
Mahran, J., dan Mubasyir, A.A.H. 2006. Al-Qur'an Bertutur Tentang Makanan
Dan Obat-Obatan. Penerjemah: Irwan Raihan. Yogyakarta: Mitra
Pustaka.
Martelli, A., and Nano, GM. 1967. Farmaco dalam Text Book Chapter III
Aplication of Analytical Techniques to the Identification and Assay of
Ascorbic Acid Related Compounds. http://prr.hec.gov.pk/Chapters/6653.pdf. Tanggal Akses 01 Desember 2008.
Sarno dan Purnama D.A. 2005. Pepino Buah Mewah Berkhasiat Obat.
Yogyakarta: Penerbit Kanisius.
Prakash
A.
2001,
Medhalin
Laboratories
Analytical
Progress,
http://medlab.com/file.aspx?field=56. Tanggal akses 25 Januari 2006.
Pratt, D.E. dan B.J.F. Hudson. 1990. Natural Antioxidants not Exploited
Comercially. Di dalam: B.J.F. Hudson, editor, Food Antioxidants.
Elsevier Applied Science. London. Dalam Term Paper Trilaksani W.,
2003. Antioksidan: Jenis, Sumber, Mekanisme Kerja dan Peran
Terhadap Kesehatan. http://fa.lib.itb.ac.id/go.php?id =jbptitbfa-gdl-s21992-marlina-63, Institut Pertanian Bogor, Tanggal akses 20 Februari
2008
Pratt, D.E. 1992. Natural Antioxidants From Plant Material. Di dalam: M.T.
Huang, C.T. Ho, dan C.Y. Lee, editor. Phenolic Compounds in Food and
Their Effects on Health H. American Society, Washington DC. Dalam
Term Paper Trilaksani W. 2003. Antioksidan: Jenis, Sumber,
Mekanisme
Kerja
dan
Peran
Terhadap
Kesehatan.
http://fa.lib.itb.ac.id/go.php?id
=jbptitbfa-gdl-s2-1992-marlina-63,
Institut Pertanian Bogor. Tanggal akses 20 Februari 2008.
Ratmo. 2007. Potensi Ekstrak Daun Sirih Merah (Piper Crocatum) Sebagai
Antioksidan. Skripsi Jurusan Kimia. Fakultas MIPA. Universitas
Brawijaya. Malang. www..brawijaya.ac.id /bss-ub /proceeding
/PDF%20FILES /BSS_ 205_ 1 p. Tanggal akses 27 Desember 2009.
Rohman, A., dan Gandjar, IG. 2008. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta::
Pustaka Belajar.
Shihab, M.Q. 2002. Tafsir Al-Mishbah (Pesan Kesan dan Keserasian Al-Quran)
Volume 7. Jakarta: Lentera Hati..
Sudarmadji, S., Haryono, B. dan Suhardi. 2007. Analisa Bahan Makanan dan
Pertanian,. Yogyakarta: Penerbit Liberty.
Sukadana, IM., Santi, SR. dan Juliarti, NK. 2008. Aktivitas Antibakteri Senyawa
Golongan Triterpenoid dari Biji Papaya (Carica papaya L.). Jurnal
Kimia 2 (1) Januari 2008: 15-18. Bukit Jimbaran: Jurusan Kimia FMIPA
Universitas Udayana.
Sukamat dan Ersam. 2006. Dua Senyawa Santon Dari Kayu Batang Mundu
Garcinia Dulcis (Roxb.) Kurz. Sebagai Antioksidan. Kelompok
Penelitian Kimiawi Tumbuhan ITS. Kimia FMIPA Jurusan Kimia,
Surabaya: Institut Teknologi Sepuluh Nopember. Http://chem.its.ac.id.
Tanggal akses 13 February 2008.
Sutomo, B. 2007. Buah Pepino Pendatang Baru yang Kaya Manfaat. Jakarta.
www.asiablogging.com. Tanggal Akses 22 Januari 2008.
Tirtawinata. 2006. Makanan dalam Perspektif Islam Al-Quran dan Ilmu Gizi.
Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Voight, R., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Penerjemah Soendari, N.S.,
Yogyakarta: Gajahmada University Press.
Winarno, FG. 2002. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Lampiran
Residu
Filtrat
- dipekatkan dengan rotary evaporator vacum
Ekstrak kasar
- ditimbang
- dihitung % rendemen ekstrak kasar
% Rendemen ekstrak kasar
Lanjutan lampiran 1.
Lanjutan lampiran 1
Keterangan:
Prosedur di atas dilakukan kembali dengan mengganti eluennya yairu: asam
asetat p.a.,:etanol p.a., (1:3), aseton p.a.,:air: amoniak 25% (9:0,7:0,3), etanol
p.a.,:asam asetat 10% (9:1), petroleum eter p.a.,: n-heksana p.a.,: metanol p.a.,:
kloroform p.a.,: asam asetat p.a., (1:1:3:3:2), metanol p.a.,: aseton p.a.,:air
(2:4:0,3), toluol p.a.,: etanol p.a.,:asam asetat p.a., (5:4:1). Masing-masing eluen
menggunakan 5 plat KLT dengan spot yang sesuai dengan reagen penyemprotan
(1 plat=1reagen semprot).
Cara menghitung nilai Rf:
Nilai Rf =
Lanjutan lampiran 1.
Noda
- divisualisasi dengan pereaksi ninhidrin
- diamati warna spot yang terbentuk
Spot berwarna merah muda
ungu biru gelap
2) Alkaloid
Noda
- divisualisasi dengan pereaksi dragendorf
- diamati warna spot yang terbentuk
Spot berwarna jingga
berlatar kuning
Alkaloid
Lanjutan lampiran 1.
Noda
- divisualisasi dengan pereaksi marquis
- diamati warna spot yang terbentuk
Spot berwarna kuning
berlatar merah lembayung
Alkaloid
Serbuk silika
dan Isolat B
Lanjutan lampiran 1.
Serbuk silika
dan Isolat A
- ditimbang
- dilarutkan dengan 10 mL pelarut etanol 70 %
- dituang dalam tabung reaksi
- disentrifugasi dengn kecepatan 1600 rpm selama 15 menit
Filtrat isolat A
Perlakuan Kontrol
DPPH 0,2 mM
- dimasukkan tabung reaksi
- diinkubasi pada 37 oC selama 30 menit
- diukur absorbansinya pada 517 nm
Hasil
Lanjutan lampiran 1.
Perlakuan Isolat
Larutan Isolat A
- diambil 2,25 mL
- ditambahkan 0,75 ml larutan 0,2 mM DPPH dalam tabung reaksi
- dinkubasi 30 menit pada suhu 37C
- diamati perubahan warna ungu menjadi kuning
- dimasukkan kuvet
- diukur absorbansinya pada maks 517 nm dengan spektrofotometer
UV-Vis
- ditentukan % Aktivitas antioksidan
% Aktivitas Isolat A
Larutan Isolat B
- diambil 2,25 mL
- ditambahkan 0,75 ml larutan 0,2 mM DPPH dalam tabung reaksi
- dinkubasi 30 menit pada suhu 37C
- diamati perubahan warna ungu menjadi kuning
- dimasukkan kuvet
- diukur absorbansinya pada maks 517 nm dengan
spektrofotometer UV-Vis
- ditentukan % Aktivitas antioksidan
% Aktivitas Isolat A
Lanjutan lampiran 1.
Keterangan :
Untuk menghitung % Aktivitas antioksidan menggunakan rumus :
(Absorbansi kontrol - Absorbansi sampel) x 100%
% Aktivitas antioksidan =
Absorbansi kontrol
V1
V1
= 10 ml
Jadi, volume asam asetat 10% yang diperlukan untuk membuat larutan asam
asetat 1% dengan volume 100 ml pelarut aquades adalah: 10 ml.
Pereaksi Marquis
= 10 mL
0,2
mM
1000
= 0,002 mmol
Gram DPPH
= mol Mr DPPH
= 0,002 mmol 394,33 gram/mol
= 0,78866 mg
Jadi, jumlah massa DPPH yang diperlukan untuk membuat larutan DPPH 0,2
mM dalam 10 ml pelarut etanol 99,9% adalah: 0,78866 mg.
mg
L
12,23 ppm =
mg BHT
mg BHT
0,050 L
mg BHT = 0,1223 mg
Jadi, jumlah massa BHT yang diperlukan untuk membuat larutan BHT 12,23
ppm dalam 10 ml = 0,010 L adalah: 0,1223 mg.
Perlakuan Ektrak
setelah di Rotary
Evaporator
sebelum didesikator
vakum
sesudah didesikator
vakum
Tekstur
Warna
Berat
(gram)
Encer
Coklat muda
26,5047
Pekat
Coklat tua
8,8201
26,5047 gram
100%
250 gram
= 0,1061088 100%
= 10,611 %
8,8201 gram
100%
250 gram
= 0,03528 100%
= 3,528 %
=
Hasil pengamatan noda pada plat setelah di elusi dengan variasi eluen
pada KLTA
Warna noda dan nilai Rf
Sebelum diUV max 254
Sesudah diUV max
Sesudah diUV
dan 366nm
254 nm
max
Variasi
366 nm
eluen
Krg N
M
D
Krg
N M D Krg N M D
E1
E2
E3
E4
E5
E6
E7
Coklat
Rf: 0,25
Coklat
Rf: 0,50
Coklat
0
Coklat
Rf: 0,34
Coklat dan
coklat
kemerahan
Rf: 0,31 dan
0,75
Coklat
Rf: 0,60
Coklat
Biru
gelap
Rf: 0,25
Biru
gelap
Rf: 0,50
Biru
gelap
Rf: 0,30
Biru
gelap
Rf: 0,31
dan 0,75
Biru
gelap
Rf: 0,60
-
Lanjutan lampiran 6.
Keterangan: E1
E2
( v)
= asam asetat p.a. :e tanol p.a (1:3) (v )
v
= metanol p.a : amoniak p.a (10:0,03) v
( v)
E3
E4
E5
E6
E7
Krg
N
M
D
( v)
( )
( )
( )
Rf E2
Rf E3
Rf E4
Rf1 E5
Rf E6
Rf E7
2 cm
8 cm
= 0,25
4 cm
8 cm
= 0,50
=0
=
2,7 cm
8 cm
= 0,34
2,5 cm
8 cm
= 0,31
4,8 cm
8 cm
= 0,60
=0
dan
Rf2 E5
6 cm
= 0,75
8 cm
Lanjutan lampiran 6.
1) Isolat A
Isolat A+serbuk silika
= 0,2060 gram
Kertas saring A
= 0,6780 gram
Kertas saring A+serbuk silika = 0,8264 gram
Maka,
Berat Serbuk Silika A = berat (kertas saring+serbuk silika) berat kertas saring
= 0,8264 gram - 0,6780 gram
= 0,1484 gram
Isolat A
2) Isolat B
Isolat B+serbuk silika
= 0,0772 gram
Kertas saring B
= 0,6895 gram
Kertas saring B+serbuk silika = 0,7458 gram
Maka,
Berat Serbuk Silika B = berat (kertas saring+serbuk silika) berat kertas saring
= 0,7458 gram - 0,6895 gram
= 0,0563 gram
Isolat B
Sampel
2.
3.
Isolat B
4.
Pembanding BHT
12,23 ppm
Sebelum
diinkubasi
Ungu
Ungu
Ungu
Sedikit
kekuningan
Setelah
diinkubasi
Setelah
pengukuran
absorbansi
Ungu
kemerahan
Sedikit
kekuningan
Sedikit
kekuningan
Sedikit
kekuningan
Kuning
Kuning
Ungu pekat
Kuning
% Akttivitas
Antioksidan
1)
2)
3)
76,56
77,73
97,16
120
%T
100
649.00
1047.27
2975.96
3382.91
1087.78
20
879.48
2897.85
40
1645.17
60
1451.33
1422.40
1382.87
1327.90
1273.90
80
-20
4000
3500
3000
ISOLAT PEPINO
2500
2000
1750
1500
1250
1000
750
500
1/cm
Buah pepino
Potongan daging
buah pepino
Bubur daging
buah pepino
Maserasi Sampel
Perendaman sampel
Filtrasi Maserat
Filtrat maserat
Residu maserat
Lanjutan lampiran 9.
Pemekatan Filtrat Maserat
Eluen 1
Metanol:
Ammoniak
(10:0,3)
Eluen 2
Asam
Asetat:
EtanoL
(1:3)
Eluen 3
Aseton:
Aquadest:
Ammoniak
(10:0,3)
Eluen 4
Etanol:
Asam
Asetat 10%
(9:1)
Eluen 5
Petroleum
Eter: nHeksana:
Methanol:
Kloroform:
Asam Asetat
(1:1:3:3:2)
Eluen 6
Metanol:
Aseton:
Aquadest
(2:4:0,3)
Eluen 7
Toluene:
Etanol:
Asam Asetat
(5:4:1)
Noda E1 (MarquisNinhidrin-Dragendorf)
Noda E1 M-N-D
UV max 254 nm
Noda E1 M-N-D
UV max 366 nm
Noda E2 (MarquisNinhidrin-Dragendorf)
Noda E3 (MarquisNinhidrin-Dragendorf)
Noda E 4 (MarquisNinhidrin-Dragendorf)
Noda E2 M-N-D
UV max 254 nm
Noda E2 M-N-D
UV max 366 nm
Noda E3 M-N-D
UV max 254 nm
Noda E3 M-N-D
UV max 366 nm
Noda E4 M-N-D
UV max 254 nm
Noda E4 M-N-D
UV max 366 nm
Noda E 5 (MarquisNinhidrin-Dragendorf)
Noda E5 M-N-D
UV max 254 nm
Noda E5 M-N-D
UV max 366 nm
Noda E 6 (MarquisNinhidrin-Dragendorf)
Noda E6 M-N-D
UV max 254 nm
Noda E6 M-N-D
UV max 366 nm
Noda E 7 (MarquisNinhidrin-Dragendorf)
Noda E7 M-N-D
UV max 254 nm
Noda E7 M-N-D
UV max 366 nm
Chamber KLTP
Lemari asam
untuk ruang elusi
Lampiran 12:
Filtrat
Endapan
Isolat A dan Isolat B
dalam serbuk silika
Spektrofotometer FTIR-8400S
Shimadzhu