UJI EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK KASAR DAUN TEH (Camellia sinensis L, v.

assamica) TUA HASIL EKSTRAKSI MENGGUNAKAN PELARUT AKUADES DAN ETANOL

SKRIPSI

Oleh :

NURUL HIDAYATI NIM. 03530020

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN) MALANG FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI JURUSAN KIMIA 2009

UJI EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK KASAR DAUN TEH (Camelilia sinensis L, v. assamica) TUA HASIL EKSTRAKSI MENGGUNAKAN PELARUT AKUADES DAN ETANOL

SKRIPSI

Diajukan Kepada: Universitas Islam Negeri (UIN) Malang Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan Dalam Memperoleh Gelar Sarjana Sains (S. Si)

Oleh: Nurul Hidayati NIM: 03530020

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN) MALANG FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI JURUSAN KIMIA 2009

UJI EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK KASAR DAUN TEH (Camellia sinensis L., v. assamica) TUA HASIL EKSTRAKSI MENGGUNAKAN PELARUT AKUADES DAN ETANOL

SKRIPSI

Oleh: Nurul Hidayati NIM: 03530020

Telah disetujui oleh:

Pembimbing I

Pembimbing II

Akyunul Jannah, S. Si., M. P. NIP: 150 368 798

Anton Prasetyo, M. Si. NIP: 150 377 252

Mengetahui, Ketua Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Malang

Diana Candra Dewi, M. Si. NIP: 150 327 251

UJI EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK KASAR DAUN TEH (Camellia sinensis L, v. assamia) TUA HASIL EKSTRAKSI MENGGUNAKAN PELARUT AKUADES DAN ETANOL SKRIPSI Oleh: Nurul Hidayati NIM: 03530020 Telah Dipertahankan di Depan Dewan Penguji Skripsi dan Dinyatakan Diterima Sebagai Salah Satu Persyaratan untuk Memperoleh Gelar Sarjana Sains (S. Si) Tanggal Susunan Dewan Penguji : 1. Penguji Utama 2009 Tanda Tangan

: Himmatul Barroroh, M. Si. )................................... ( NIP. 150 327 246 : Elok Kamilah Hayati, M. Si. )................................... ( NIP. 150 377 253

2. Ketua Penguji

3. Sekr. Penguji : Akyunul Jannah, S. Si., M. P. )................................... ( NIP. 150 368 798 4. Anggota Penguji : Anton Prasetyo, M. Si. )................................... ( NIP. 150 377 252

Mengetahui dan Mengesahkan Ketua Jurusan Kimia Fakultas Sains Dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Malang

Diana Candra Dewi, M. Si. NIP. 150 327 251

"PERSEMBAHAN"
Allah akan m e ninggikan orang-orang be im an dan be rilm u diantara kalian be be rapa de rajat (QS . Al-MUjadalah:11) S iapa be rjalan m e ncari ilm u pasti Allah akan m e m udahkan baginya jalan keS urga (HR. Muslim) Dunia adalah se kum pulan ke san yang diciptakan untuk menguji manusia (Harun Yahya) Karya ini kupersembahkan sebagai bukti puja dan puji syukurku kepada Allah SWT. Atas segala karunuaNya yang tiada tara Sebagai wujud rasa terimakasih Saya persembahkan karya ini Kepada kedua orang tua_q yang tercinta M. Badjuri & Choiriyah yang senantiasa mencurahkan kasih sayang,perhatian & doa disetiap waktu. Ke luarga Be sar_q (Ne ng Endah, Ne ng Anis, Ne ng Yayuk, Mas Rozak, Mas Roziq, Mas Faiz, Adinda Ela & Ahmad) yang selalu mendukung dalam meraih cita2. Buah Hati_q Nadia Farhatul Muthi ah yang se lalu Mendampingi_q dalam mengaruhi hidup. Moga jadi anak yang sholehah & cerdas. Ke ponakan_q yang m anis & im ut2 (Vi2n, Zaki, Nasywa & Fairuz) yang se lalu m e m be rikan keceriaan, moga jadi anak yang sholehah & cerdas. Seluruh Saudara N sahabat_q yang senantiasa mendoakan demi kelancaran dan kesuksesan dalam menggapai cita.

MOTTO

Katakanlah: pe rhatikanlah apa yang ada di langit dan di bum i. Tidak be rm anfaat tandatanda ke kuasaan Alloh dan Rasul-rasulnya yang m e m be ri pe ringatan bagi orang-orang yang tidak be rim an .

KATA PENGANTAR

Puji syukur Alhamdulillah ke hadirat Allah SWT atas segala rahmat, hidayah dan kemudahan yang selalu diberikan kepada hamba-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini dengan judul Uji Efektivitas

Antibakteri Ekstrak Kasar Daun Teh (Camellia sinensis L., v. assamica) Tua Hasil Ekstraksi Menggunakan Pelarut Akuades dan Etanol sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Sains. Sholawat dan salam penulis ucapkan kepada Nabi Muhammad SAW yang menjadi panutan bagi umat di dunia. Dialah Nabi akhir zaman, revolusioner dunia, yang mampu menguak dan merubah kejahilihan menuju sirathal mustaqim, yakni agama Islam. Penulis mengucapkan terima kasih yang tak terhingga kepada semua pihak yang telah membantu dalam menyelesaikan penulisan skripsi ini, terutama kepada: 1. Prof. Dr. H. Imam Suprayogo selaku Rektor UIN Malang beserta stafnya, terima kasih atas fasilitas yang diberikan selama kuliah di UIN Malang. 2. Prof. Drs. Sutiman Bambang Sumitro, S.U., D.Sc., selaku Dekan Fakultas Sains dan Teknologi UIN Malang. 3. Diana Candra Dewi, M.Si., selaku Ketua Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Malang.

4. Akyunul Jannah, S.Si, M.P., Anton Prasetyo, M.Si., dan A. Ghanaim Fasya, S.Si., selaku dosen pembimbing yang telah banyak memberikan bimbingan dan arahan dalam penyusunan skripsi ini. 5. Himmatul Barroroh, M.Si., dan Elok Kamilah Hayati, M.Si., selaku penguji yang banyak memberikan masukan demi sempurnanya isi skripsi ini. 6. Amalia Fitri Andriani, M.Si., selaku Dosen Mikrobiologi yang selalu memberikan bimbingan dan arahan dalam penelitian antibakteri. 7. Bapak dan Ibu Dosen Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi yang telah banyak mengamalkan ilmunya. 8. Mbak vi2, pak Haryono, dan pak Edwin yang selalu membantu dalam penelitian ini. 9. Moh. Taufik, S.Si., Moh. Kholid Al-Ayubi, S.Si., dan Zulkarnain, S.Si., selaku Laboran Kimia UIN Malang. 10. Ayah dan ibuku yang dengan penuh kasih sayang dan keikhlasan telah mengasuh, membesarkan dan membiayai baik materiil maupun spirituil serta mengalirkan doa-doanya untuk kebahagiaan putri tercintanya baik di dunia maupun di akhirat 11. Anakku tercinta Nadia Farhatul Muthi ah yang selalu menghibur dalam suka dan duka. 12. Neng Endah, neng Anis, neng Yayuk, Mas Rozak, Mas Rozik, Mas Faiz dan adikku Ela yang telah banyak membantu dan selalu memberikan dukungan, nasihat, semangat dan doanya.

13. Roni Nurdiansyah yang banyak memberikan bantuan, semangat, dan doa setiap waktu 14. The best friend Elly yang banyak membantu dan selalu memberikan

dukungan, nasihat, semangat dan doanya. 15. Keluarga besar kost Kertorejo No. 10 yang telah memberikan bantuan, semangat dan keceriaan setiap waktu. 16. Teman-temanku chemistry 03 selalu memberikan motivasi dalam

penyelesaian skripsi ini. 17. Adik-adik chemistry 04; 05; 06 yang telah memberikan semangat dan doanya. 18. Semua pihak yang telah banyak membantu penulis demi terselesainya skripsi ini. Akhir kata dengan jujur penulis mengakui bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna, oleh karena itu saran dan kritik yang bersifat membangun sangat penulis harapkan demi lebih sempurnanya skripsi ini. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi penulis pada khususnya dan pembaca pada umumnya dan semoga penulisan skripsi ini mendapatkan ridho dari Allah SWT. Amiin.

Malang, April 2009

Penulis

DAFTAR ISI

Halaman HALAMAN JUDUL HALAMAN PERSETUJUAN HALAMAN PENGESAHAN HALAMAN PERSEMBAHAN HALAMAN MOTTO KATA PENGANTAR ........................................................................................i DAFTAR ISI ......................................................................................................iv DAFTAR TABEL............................................................................................. vii DAFTAR GAMBAR ........................................................................................viii DAFTAR LAMPIRAN .....................................................................................ix ABSTRAK.......................................................................................................... x BAB I. PENDAHULUAN 1.1. Latar Belakang................................................................................ 1 1.2. Rumusan Masalah .......................................................................... 5 1.3. Tujuan Penelitian............................................................................ 5 1.4. Batasan Masalah............................................................................. 5 1.5. Manfaat Penelitian.......................................................................... 6 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Teh (Camellia sinensis, L. var Assamica) ..................................... 7 2.2 Pemanfaatan Tanaman Teh ........................................................... 8 2.3 Komponen Daun Teh.................................................................... 11 2.4 Senyawa Aktif dalam Daun Teh.................................................. 12 2.4.1 Alkaloid ............................................................................... 12 2.4.2 Flavonoid............................................................................. 13 2.4.2.1 Katekin .................................................................... 14 2.4.2.2 Tanin.........................................................................15 2.4.3 Saponin.................................................................................18 2.5 Ekstraksi Ekstrak Daun Teh Tua dengan Metode Maserasi......... 18 2.6 Uji Antibakteri ............................................................................. 21 2.6.1 Antibakteri ........................................................................... 21 2.6.2. Pertumbuhan dan Perkembangbiakan Bakteri ................... 21 2.6.3. Pengujian Efektivitas Antibakteri....................................... 23 2.6.4. Bakteri Uji .......................................................................... 25

2.6.4.1. Micrococcus luteus................................................ 25 2.6.4.2. Pseudomonas fluorescens ..................................... 26 BAB III. METODE PENELITIAN 3.1 Pelaksanaan Penelitian................................................................ 28 3.2 Bahan dan Alat Penelitian .......................................................... 28 3.2.1. Alat Penelitian .................................................................. 28 3.2.2. Bahan Penelitian ............................................................... 28 3.3 Tahapan Penelitian...................................................................... 29 3.4 Rancangan Penelitian.................................................................. 30 3.5 Cara Kerja .................................................................................. 31 3.5.1. Preparasi Sampel ............................................................. 31 3.5.2. Ekstraksi Daun Teh Tua dengan Metode Maserasi .......... 31 3.5.3. Identifikasi Golongan Senyawa Aktif .............................. 31 3.5.5.1 Alkaloid ............................................................... 31 3.5.5.2 Katekin ................................................................. 32 3.5.5.3 Tanin......................................................................32 3.5.5.4 Saponin................................................................. 33 3.5.3 Uji Efektivitas Antibakteri................................................. 33 3.5.3.1. Strerilisasi Alat dan Bahan.................................. 33 3.5.4.2. Pembuatan Media................................................ 33 3.5.4.3. Peremajaan Biakan Murni................................... 34 3.5.4.4. Pembuatan Kurva Pertumbuhan Bakteri ............. 34 3.5.4.5. Pembuatan Larutan Biakan Aktif........................ 35 3.5.4.6. Uji Efektivitas Antibakteri .................................. 35 3.6 Analisis Data............................................................................... 36 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Ekstraksi Daun Teh Tua dengan Metode Maserasi ................... 38 4.2 Hasil Identifikasi Golongan Senyawa Aktif .............................. 40 4.2.1 Alkaloid ............................................................................ 41 4.2.2 Flavonoid.......................................................................... 42 4.2.2.1 Katekin .......................................................................... 42 4.2.2.2 Tanin.............................................................................. 42 4.2.4 Saponin ............................................................................. 44 4.3 Kurva Pertumbuhan Bakteri dengan media Nutrient Borth (NB) .................................................................. 45 4.4 Uji Efektivitas Antibakteri dari Ekstrak Akuades dan Etanol ... 47 4.5 Uji Efektivitas Antibakteri dengan Variasi Konsentrasi ........... 49 4.6 Hasil Penelitian tentang Pemanfaatan Daun Teh Tua Sebagai Antibakteri dalam Perspektif Islam........................................... 54 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan................................................................................ 57 5.2 Saran .......................................................................................... 57

DAFTAR PUSTAKA......................................................................................... 58 LAMPIRAN ....................................................................................................... 63

DAFTAR TABEL

No 2.1 2.2 2.3 2.4 4.1 4.2

Judul

Halaman

Zat yang Terkandung dalam Daun Teh ................................................... 12 Konstanta Dielektrikum (D) Masing-masing Pelarut.............................. 21 Ketentuan Kekuatan Antibakteri ............................................................. 24 Perbedaan Relatif antara Gram Positif dan Gram Negatif ...................... 25 Warna Filtrat dari Pelarut Akuades dan Etanol....................................... 39 Warna, Tekstur dan Berat Ekstrak Pekat dari Pelarut Akuades dan Etanol................................................................................................ 40

4.3 4.4 4.6 4.7

Hasil Uji Golongan Senyawa Aktif Daun Teh Tua................................. 41 Hasil Uji Penentuan Jenis Senyawa Tanin .............................................. 43 Hasil Uji Efektivitas Antibakteri dari Ekstrak Akuades dan Etanol ....... 48 Hasil Uji Efektivitas Antibakteri dengan Variasi Konsentrasi................. 50

DAFTAR TABEL

No 2.1 2.2 2.3 2.4 4.1 4.2

Judul

Halaman

Zat yang Terkandung dalam Daun Teh ................................................... 12 Konstanta Dielektrikum (D) Masing-masing Pelarut.............................. 21 Ketentuan Kekuatan Antibakteri ............................................................. 24 Perbedaan Relatif antara Gram Positif dan Gram Negatif ...................... 25 Warna Filtrat dari Pelarut Akuades dan Etanol....................................... 39 Warna, Tekstur dan Berat Ekstrak Pekat dari Pelarut Akuades dan Etanol................................................................................................ 40

4.3 4.4 4.6 4.7

Hasil Uji Golongan Senyawa Aktif Daun Teh Tua................................. 41 Hasil Uji Penentuan Jenis Senyawa Tanin .............................................. 43 Hasil Uji Efektivitas Antibakteri dari Ekstrak Akuades dan Etanol ....... 48 Hasil Uji Efektivitas Antibakteri dengan Variasi Konsentrasi................. 50

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Lampiran 1. Lampiran 2.

Halaman

Diagram Alir Penelitian ............................................................. 63 Skema Kerja............................................................................... 64

Lampiran 3.1. Perhitungan Konsentrasi Ekstrak dan Kontrol Positif ............... 69 Lampiran 3.2. Perhitungan Kadar Ekstrak Kasar Daun Teh Tua dalam 1 Cakram Tiap-tiap Konsentrasi................................................ 70 Lampiran 3.3. Pembuatan Reagen..................................................................... 71 Lampiran 4 Data Kurva Pertumbuhan Bakteri dan Data Hasil Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Daun Teh Tua dan Muda............................................................................. 74 Lampiran 5. Ukuran Daerah dan Interpretasinya untuk Kemoterapeutik yang Sering Digunakan .......................................................... 78

Lampiran 6. 1 Hasil Pengamatan Uji Golongan Senyawa Aktif...................... 79 Lampiran 6. 2 Uji Statistik ............................................................................... 81 Lampiran 7 Dokumentasi Penelitian ............................................................ 84

ABSTRAK Hidayati, Nurul, 2009, Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Kasar Daun Teh (Camelilia sinensis L, v. assamica) Tua Hasil Ekstraksi Menggunakan Pelarut Akuades dan Etanol

Pembimbing I Pembimbing II

: Akyunul Jannah, S.Si, M.P : Anton Prasetyo, M. Si

Telah dilakukan penelitian tentang uji efektivitas antibakteri ekstrak kasar daun teh tua hasil ekstraksi menggunakan pelarut akuades dan etanol. Penelitian ini bertujuan untuk memanfaatkan bahan alam sebagai antibakteri alami. Allah telah menjelaskan dalam al-Qur an surat An-Nahl [26] ayat 11 bahwa segala apa yang ada di bumi untuk kemaslahatan manusia termasuk tumbuh-tumbuhan yang dapat dimanfaatkan sebagai pengobatan. Penelitian ini ingin mengetahui bahwa daun teh tua berpotensi sebagai antibakteri. Ekstraksi daun teh tua dilakukan menggunakan metode maserasi dengan pelarut akuades dan etanol. Masing-masing ekstrak dilakukan identifikasi golongan senyawa aktif dalam daun teh tua. Uji antibakteri pada penelitian ini dilakukan 2 tahap, yaitu tahap I uji antibakteri dari ekstrak akuades dan etanol pada konsentrasi 30 mg/mL untuk mendapatkan ekstrak terpilih. Tahap II uji antibakteri dengan variasi konsentrasi (30, 40, 50, 60, 70, dan 80 mg/mL) hasil dari pelarut terpilih untuk mencari konsentrasi terbaik. Hasil identifikasi ekstrak daun teh tua positif mengandung alkaloid, katekin dan tanin. Ekstrak yang lebih baik sebagai antibakteri adalah akuades, dengan nilai diameter zona hambat Micrococcus luteus sebesar 6,33 mm dan Pseuodomonas fluorescens 4,00 mm. Uji efektivitas antibakteri pada bakteri M. luteus dan bakteri P. fluorescens dengan variasi konsentrasi tidak berpengaruh pada aktivitas antibakteri.

Kata kunci: daun teh (C. sinensis L, v. assamica) tua, uji golongan senyawa aktif, uji antibakteri

ABSTRACT Hidayati, Nurul, 2009, Antibacterial Efectivity Test of Old Tea Leaves (Camellia sinensis L, v. assamica) Crude Extracts from Extraction Using Aquades and Ethanol Solvent Advisor I Advistor II : Akyunul Jannah, S. Si., M. P. : Anton Prasetyo, M. Si

Had been done the experiment about antibacterial efectivity test of old tea leaves crude extracts from extraction using aquades and ethanol solvent. The aim of this research to know potency of natural materials as natural antibacterial. Allah have explained in Holly al-Qur an of An-Nahl [26] sentence II that everything in the earth have benefit for human life, some plants are able to be exploited as medication. This research wish to know that old tea leaves to be potensial antibacterial. Old tea leaves was extracted using maseration method with solvent aquades and ethanol solvent. Each extracts identified the active coumpounds group. The antibacterial test on this research tested two steps. Step I the antibacterial test from aquades and ethanol extracts on 30 mg/mL consentration to get the best extracts. Step II the antibacterial test with consentration variety (30, 40, 50, 60, 70, dan 80 mg/mL) the result of the best solvent to find the best consentration. The result of the active coumpound group identification in old tea leaves extracts is alkaloid, catecin, and tannin. The good more extracts as antibacterial is aquades with zone blocked diameter number Micrococcus luteus 6,33 mm and Pseudomonas fluorescens 4,00 mm. The result of antibacterial test on M. luteus and P. fluorescens shown that consentration variety has not influence on efficacy antibacterial.

Key words: old tea leaf (C. sinensis L., v. assamica), screening of active coumpounds, the test antibacterial

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Indonesia termasuk salah satu negara yang kaya dengan berbagai spesies flora. Kekayaan tersebut merupakan suatu anugerah besar yang diberikan Allah. Semua kekayaan di bumi ini diciptakan Allah tidak sia-sia, seperti dijelaskan dalam surat Ibrahim ayat 32-33:

Allah-lah yang telah menciptakan langit dan bumi dan menurunkan air hujan dari langit, kemudian Dia mengeluarkan dengan air hujan itu berbagai buahbuahan menjadi rezeki untukmu; dan Dia telah menundukkan bahtera bagimu supaya bahtera itu berlayar di lautan dengan kehendak-Nya, dan Dia telah menundukkan (pula) bagimu matahari dan bulan yang terus-menerus beredar (dalam orbitnya); dan telah menundukkan bagimu malam dan siang. Ayat di atas menjelaskan bahwa kekayaan alam ini diperuntukkan bagi manusia, bukan tidak ada artinya. Allah menjadikan lautan yang terhampar luas yang memudahkan untuk dilayari dan dipenuhi berbagai jenis ikan yang indah dan segar untuk dinikmati dagingnya, termasuk berbagai kekayaan alam lain seperti halnya tanaman teh. Semua itu diperuntukkan bagi manusia bukan tak bermakna, tetapi penuh makna yaitu agar manusia menikmati dan memanfaatkan kekayaan bumi ini dengan sebaik-baiknya. Manusia mempunyai tanggung jawab dalam memelihara dan melestarikan kekayaan alam tersebut.

Allah memerintahkan kepada kita untuk selalu berpikir dan mencari sesuatu yang belum kita ketahui manfaatnya, baik itu benda mati maupun makhluk hidup seperti hewan dan tumbuhan yang ada di muka bumi ini. Orang yang berfikir adalah mereka yang mau memperhatikan dan menyelidiki ciptaan Allah. Firman Allah dalam surat An-Nahl ayat 11:

Dia menumbuhkan bagi kamu dengan air hujan itu tanam-tanaman; zaitun, korma, anggur dan segala macam buah-buahan. Sesungguhnya pada yang demikian itu benar-benar ada tanda (kekuasaan Allah) bagi kaum yang memikirkan . Al-Qur'an telah menyebutkan berbagai macam tanaman yang bermanfaat dan memiliki khasiat bagi kesehatan. Pemanfaatan tanaman sebagai obat merupakan salah satu sarana untuk mengambil pelajaran dan memikirkan tentang kekuasaan Allah SWT. Segala apa yang tercipta ada manfaatnya dan itu semua merupakan tanda-tanda kekuasaan Allah. Tanaman teh (Camellia sinensis (L)) banyak ditanam di berbagai negara, termasuk Indonesia. Tanaman teh memiliki dua jenis varietas, yaitu varietas assamica dan varietas sinensis. Teh merupakan salah satu tanaman yang banyak memiliki manfaat bagi kehidupan, diantaranya adalah sebagai obat untuk menyembuhkan penyakit, seperti kanker. Selain sebagai obat, teh juga digunakan sebagai bahan aditif atau berupa zat pengawet pada ikan. Kandungan senyawa dalam daun teh adalah alkaloid, flavonoid (katekin dan tanin), dan saponin. Menurut Handjani dan Samsundari (2005) menyatakan bahwa penyakit

merupakan suatu keadaan di mana suatu organisme tidak dapat mempertahankan keadaan normal karena gangguan fungsi fisiologis yang disebabkan oleh organisme patogen. Dengan demikian timbulnya penyakit pada ikan disebabkan oleh organisme lain, pakan maupun keadaan lingkungan. Organisme patogen penyebab timbulnya penyakit pada ikan adalah golongan bakteri, seperti bakteri Micrococcus luteus dan Pseudomonas fluorescens. Kedua jenis bakteri tersebut dapat menyebabkan kebusukan pada ikan, hal ini ditunjukkan dengan adanya noda berwarna merah untuk bakteri M. luteus (Thiagarajan, 2006) dan noda berwarna kuning untuk bakteri P. fluorecens (Hadiwiyoto, 1993). Pengawetan pada ikan umumnya dilakukan dengan menggunakan bahan sintetis, seperti formalin. Akan tetapi, penggunaan formalin dapat menimbulkan efek karsinogenik bagi kesehatan manusia. Penggunaan bahan alami seperti daun teh tua, dapat dijadikan sebagai antibakteri alami yang merupakan alternatif pengganti bahan sintesis dalam mencegah serangan bakteri. Menurut Fulder (2004) menjelaskan bahwa semakin tua daun teh semakin banyak mengandung tanin. Tanin adalah senyawa fenol yang memiliki sifat-sifat menyerupai alkohol, salah satunya adalah bersifat antiseptik (zat penghambat jasad renik) (Fardiaz, 1989), sehingga daun teh tua berpotensi sebagai antibakteri atau pengawet. Penelitian Zulaekah (2005), tentang pengaruh konsentrasi ekstrak daun teh pada pengawetan telur asin, menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun teh yang digunakan pada pembuatan telur asin rebus, maka akan menghasilkan telur asin rebus dengan jumlah total bakteri paling sedikit. Pada perlakuan penambahan konsentrasi ekstrak daun teh yang terdiri dari empat level

yaitu 0, 1, 2, 3 (% b/v), diperoleh hasil terbaik pada konsentrasi 3 % dengan jumlah bakteri paling sedikit dan mampu menghambat pertumbuhan bakteri golongan Pseudomonas sp. serta nilai keamanannya lebih baik. Proses ekstraksi senyawa antibakteri dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu aqueus phase dan organic phase. Ekstraksi aqueus phase dilakukan dengan pelarut air, sedangkan ekstraksi organic phase menggunakan pelarut organik. Prinsip kelarutan yaitu polar melarutkan senyawa polar, pelarut semi polar melarutkan senyawa semi polar, dan pelarut non polar melarutkan senyawa non polar (Harborne , 1987). Penggunaan pelarut akuades dan etanol pada penelitian ini, karena kedua pelarut tersebut bersifat sebagai antibakteri. Hal ini ditunjukkan dari hasil penelitian Hapsari (2007) bahwa ekstrak akuades dan etanol mampu menghambat bakteri Aeromonas hydrophila. Selain itu, terkait dengan bentuk aplikasi dari penelitian ini, yaitu sebagai alternatif bahan pengawet sintetis yang aman untuk produk makanan. Berdasarkan latar belakang di atas, peneliti berinisiatif untuk melakukan penelitian lebih lanjut tentang uji efektivitas antibakteri ekstrak kasar daun teh tua hasil ekstraksi menggunakan pelarut akuades dan etanol. Penelitian ini merupakan salah satu upaya untuk mengoptimalkan pemanfaatan bahan alam hayati Indonesia, dengan tujuan untuk mengetahui pelarut yang lebih baik antara akuades dan etanol yang berpotensi sebagai antibakteri dalam ekstrak kasar daun teh tua.

1.2 Rumusan Masalah Beberapa permasalahan yang dapat dirumuskan yaitu : 1. Pelarut apakah yang lebih baik antara akuades dan etanol untuk proses ekstraksi senyawa aktif anti bakteri terhadap bakteri M. luteus dan P. fluorescens dalam ekstrak daun teh (C. sinensis L. v. assamica) tua ? 2. Senyawa golongan apa saja yang terdapat dalam ekstrak daun teh tua? 3. Bagaimana efektivitas antibakteri ekstrak daun teh tua hasil ekstraksi dari pelarut yang lebih baik dengan berbagai konsentrasi? 1.3 Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini adalah : 1. Mengetahui pelarut yang lebih baik antara akuades dan etanol untuk proses ekstraksi senyawa aktif antibakteri dalam ekstrak daun teh (C. sinensis L. v. assamica) tua. 2. Mengetahui golongan senyawa apa saja yang terdapat dalam ekstrak daun teh tua. 3. Mengetahui efektivitas antibakteri ekstrak daun teh tua hasil ektraksi dari pelarut yang lebih baik dengan berbagai konsentrasi. 1.4 Batasan Masalah 1. Sampel yang digunakan adalah daun teh tua (selain pucuk daun ) yang segar varietas assamica yang diperoleh dari Perkebunan teh di Wonosari, Lawang Malang. 2. Pelarut yang digunakan pada penelitian ini adalah pelarut yang aman untuk bahan pangan, yaitu akuades dan etanol.

3. Identifikasi golongan senyawa aktif dalam ekstrak daun teh tua menggunakan uji fitokimia. 4. Uji efektivitas antibakteri dilakukan dengan menggunakan metode difusi cakram terhadap bakteri M. luteus (gram positif) dan P. fluorescens (gram negatif). 1.5 Manfaat Penelitian 1. Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada masyarakat mengenai kemampuan senyawa aktif dalam daun teh tua sebagai antibakteri. 2. Bentuk aplikasi dari daun teh tua sebagai antibakteri alami atau sebagai bahan pengawet alami makanan khususnya pada ikan yang lebih aman, sehingga daun teh tua dapat digunakan sebagai alternatif pengganti antibakteri sintetik.

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Teh Tanaman teh umumnya tumbuh pada ketinggian 200-2.300 meter di atas permukaan laut. Varietas teh yang terkenal ada dua jenis, yaitu varietas assamica yang berasal dari assam di India dan varietas sinensis yang berasal dari Cina (Alamsyah, 2006). Tanaman teh (Camellia sinensis L. var. assamica) diklasifikasikan sebagai berikut (Tuminah, 2004): Devisi Sub divisi Kelas Sub kelas : Spermatophyte (tumbuhan biji) : Angiospermae (tumbuhan biji terbuka) : Dicotylydoneae (tumbuhan biji belah) : Dialypetalae

Ordo (bangsa) : Guttiferales (Clusiales) Famili (suku) : Camelliaceae (Tehaceae) Genus (marga): Camellia Spesies (jenis) : Camellia sinensis Varietas : Assamica

Gambar 2.1 Tanaman Teh (Anonymous, 2008a)

Varietas assamica berbatang tunggal (jika tidak dipangkas) dengan ketinggian pohon antara 6-8 m. Varietas ini dapat dibedakan lima subvarietas, yaitu: teh assam berdaun cerah, teh assam berdaun kelam, Manipuri, Burma, dan Lushia. Ciri-ciri varietas secara umum adalah daun panjang (15-20 cm), lebar, berbentuk lonjong (oval), berkilat, berbobot, bergerigi banyak dengan ujung yang jelas, berwarna hijau tua, duduk daun pada cabang dan ranting agak tegak, kuantitas dan kualitas hasil teh tinggi (Setyamidjadja, 2000). 2.2 Pemanfaatan Tanaman Teh Tumbuhan merupakan salah satu dari ciptaan Allah yang banyak manfaatnya bagi manusia. Tumbuhan dapat dijadikan sebagai sumber pangan dan juga dapat dijadikan sebagai obat yang memiliki fungsi farmakologis untuk mempengaruhi fisiologis tubuh atau reseptor baik secara sistematik maupun lokal sehingga diperoleh efek yang dikehendaki. Berkembangnya ilmu pengetahuan dan teknologi menuntut manusia harus lebih selektif dalam memilih makanan. Berdasarkan fakta-fakta yang ada, penambahan antibakteri sintetik atau pengawetan secara kimia dapat

menimbulkan dampak negatif pada kesehatan manusia, salah satunya adalah penambahan formalin sebagai pengawet makanan, jika dikonsumsi secara terus menerus akan menyebabkan penyakit. Fenomena-fenomena di atas mendorong manusia untuk mencari solusi yang terbaik dan tidak memberi mudhorot bagi kesehatan. Solusi yang dilakukan adalah gerakan back to nature atau kembali ke alam untuk mencari alternatif pengganti antibakteri sintetis. Salah satu sumber antibakteri alami adalah tanaman teh.

Tanaman teh merupakan tanaman obat yang memiliki banyak manfaat. Manfaat teh diantaranya sebagai antikanker, antioksidan, antimikroba, antibakteri, pencegah aterosklerosis, untuk kesehatan jantung, antidiabetes, untuk

meningkatkan kekebalan tubuh, mencegah parkinson, menurunkan kolesterol, mencegah karies gigi, mencegah nafas tidak sedap, dan melancarkan air seni, tumor, kanker, stroke, tekanan darah tinggi, dan lain-lain (Alamsyah, 2006). Pemanfaatan tumbuhan merupakan suatu usaha lain yang dapat digunakan untuk pemeliharaan lingkungan. Sebagaimana disebutkan dalam Al-Qur an surat Qaaf ayat 7-8:

Dan Kami hamparkan bumi itu dan Kami letakkan padanya gunung-gunung yang kokoh dan Kami tumbuhkan padanya segala macam tanaman yang indah dipandang mata (7) Untuk menjadi pelajaran dan peringatan bagi tiap-tiap hamba yang kembali (mengingat Allah) (8) . Ayat di atas menjelaskan bahwa Allah menciptakan bumi (alam) ini sebagai media kehidupan bagi semua makhluk ciptaan-Nya. Segala ciptaan Allah di muka bumi ini, agar dijadikan renungan bagi setiap umat. Manusia sebagai makhluk Tuhan yang paling sempurna dibandingkan dengan makhluk yang lain, memiliki tanggung jawab dalam menjaga kelestarian lingkungan sekitar agar tetap aman dan nyaman. Pemeliharaan lingkungan merupakan masalah yang berkaitan dengan hubungan antara manusia dengan lingkungan hidup.

Ayat di atas dipertegas dengan Firman Allah dalam al-Qur an surat Asysyuara ayat 7:

Dan adakah mereka tidak memperhatikan bumi, berapa banyak kami tumbuhkan di bumi itu berbagai macam tumbuh-tumbuhan yang baik ? Allah menyuruh kita memperhatikan segala ciptaan-Nya dengan cara melakukan studi eksperimen alam. Tujuannya untuk menunjukkan pentingnya penalaran dan perenungan serta mengajari kita untuk tidak puas hanya dengan mengamati apa yang ada di alam ( Pasya, 2004). Hal ini merupakan tanda-tanda kekuasaan Allah yang wajib kita syukuri. Beberapa ayat al-Qur an yang menyebutkan kekuasaan Allah yang telah menciptakan alam semesta dan manusia wajib untuk mensyukurinya. Salah satunya adalah surat Al-A raaf ayat 10:

Sesungguhnya Kami telah menempatkan kamu sekalian di muka bumi dan Kami adakan bagimu di muka bumi (sumber) penghidupan. Amat sedikitlah kamu bersyukur . Ayat di atas mengajak manusia untuk selalu mengingat segala rahmat Allah, memanfaatkan segala pemberian-Nya secara layak. Hal ini merupakan bentuk rasa syukur kita kepada Allah atas segala nikmat dan rezeki yang telah diberikan kepada kita dengan jumlah yang tidak dapat dihitung besarnya. Berdasarkan uraian di atas, manusia diharapkan mengerti akan urusan keduniaan dan memanfaatkan semua fakta ilmiah mengenai kejadian-kejadian di

alam, sehingga menghasilkan banyak kebaikan, menegakkan urusan agama, dan mewujudkan amanat kekhalifahan di muka bumi ini (Pasya, 2004). 2.3 Komponen Daun Teh Vakuola dalam sel daun teh mengandung zat-zat yang larut dalam air, seperti katekin, kafein, aneka asam amino, dan berbagai gula. Enzim pengoksida terdapat dalam sitoplasma yaitu polifenol oksidasi, klorofil, dan karoten (Alamsyah, 2006). Daun teh mengandung 30-40 % polifenol yang sebagian besar dikenal sebagai katekin. Komposisi daun teh terkenal sangat kompleks. Lebih dari 400 komponen kimiawi telah diidentifikasi terkandung dalam daun teh. Jumlah komponen kimiawi ini berbeda-beda tergantung pada tanah, iklim, dan usia daun teh ketika dipetik (Alamsyah, 2006). Komposisi aktif utama yang terkandung dalam daun teh adalah kafein, tanin, tehophylline, tehobromine, lemak, saponin, minyak esensial, katekin, karotin, vitamin C, A, B1, B2, B12 dan P, fluorite, zat besi, magnesium, kalsium, strontium, tembaga, nikel, seng, dan fosfor. Semakin tua daun teh semakin banyak mengandung tanin (Fulder, 2004).

Tabel 2.1 Zat yang terkandung dalam daun teh No Komponen Prosentase (%) 1. Air 9,51 2. Bahan nitrogen 24,50 3. Kafein 3,58 4. Minyak Eteris 0,68 5. Lemak, Klorofil, lilin 6,39 6. Dekstrin 6,44 7. Tanin 15,65 8. Pektin 16,02 9. Serat 11,58 10. Abu 5,65 Jumlah
Sumber: Setiawati, 1991

100,00

2.4 Senyawa Aktif dalam Daun Teh Tumbuhan umumnya mengandung senyawa aktif dalam bentuk metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, steroid, tanin, saponin, triterpenoid, dan lainlain. Senyawa metabolit sekunder merupakan senyawa kimia yang umumnya mempunyai kemampuan bioaktifitas dan berfungsi sebagai pelindung tumbuhan tersebut dari gangguan penyakit untuk tumbuhan itu sendiri atau lingkungannya (Lenny, 2006). 2.4.1 Alkaloid Alkaloid merupakan golongan senyawa aktif tumbuhan yang terbesar. Satu-satunya sifat alkaloid yang terpenting adalah kebasaanya. Alkaloid mengandung atom nitrogen yang sering kali terdapat dalam cincin heterosiklik. Kebanyakan alkaloid berupa padatan kristal dengan titik lebur tertentu, tidak berwarna, bersifat basa (Leny, 2006). Alkaloid lebih mudah larut dalam pelarut nonpolar dalam suasana basa (Robinson, 1995).

CH3 N

H3C

N H

N CH3

Gambar 2.2 Struktur alkaloid dan kafein (Robinson, 1995 dan Sastrohamidjojo, 1996)

Alamsyah (2006) menyatakan bahwa alkaloid dalam daun teh adalah kafein. Kafein tidak mengalami perubahan selama pengolahan teh, tetapi dipandang sebagai bahan yang menentukan kualitas teh. Kafein akan bereaksi dengan katekin atau hasil oksidasinya membentuk senyawa yang menentukan kesegaran (briskness) dari seduhan teh. Uji kualitatif untuk menunjukkan adanya alkaloid dilakukan dengan menggunakan beberapa pereaksi alkaloid, diantaranya adalah pereaksi mayer (kalium tetraiodomerkurat), wagner, dan dragendorff. Pereaksi mayer (merkurium (I) klorida dalam kalium iodida). Pereaksi ini paling sering digunakan karena dapat menghasilkan endapan dengan hampir semua alkaloid. Pereaksi wagner (iodium dalam kalium iodida), pereaksi dragendorff (bismutsubnitrat dalam kalium iodida ) (Robinson, 1995). Ketiga pereaksi tersebut memberikan warna berturut-turut coklat, putih dan jingga. 2.4.2 Flavonoid Flavonoid merupakan hasil metabolit sekunder tanaman yang secara luas terdistribusikan dalam tanaman. Pengelompokan flavonoid dibedakan berdasarkan

cincin heterosiklik-oksigen tambahan dan gugus hidroksil yang tersebar menurut pola yang berlainan pada rantai C3 (Robinson, 1995). Flavonoid dapat digolongkan menjadi enam kelas, yaitu flavon, flavanon, isoflavon, flavonol, flavanol, dan antosianin. Kelas utama flavonoid yang ditemukan di dalam teh adalah flavanol dan flavonol. Golongan flavonoid dapat digambarkan sebagai deretan senyawa C6-C3-C6. Artinya, kerangka karbonnya terdiri atas dua gugus C6 disambungkan oleh rantai alifatik tiga karbon.

Gambar 2.3 Kerangka dasar flavonoid (Robinson, 1995)

2.4.2.1 Katekin Teh Katekin merupakan kelompok terbesar dari komponen daun teh, terutama kelompok katekin flavanol. Katekin teh bersifat antimikroba (bakteri dan virus), antioksidan, antiradiasi, memperkuat pembuluh darah, melancarkan sekresi air seni, dan menghambat pertumbuhan sel kanker. Katekin merupakan senyawa tidak berwarna, larut dalam air, serta menyebabkan rasa pahit dan rasa yang tajam pada seduhan teh (Alamsyah, 2006).
OH OH O

OH

OH OH

Gambar 2.4 Struktur katekin (Anonymous, 2008b)

Identifikasi senyawa katekin dapat dilakukan dengan cara mendidihkan sampel dengan HCl 2 M. Perubahan warna coklat kuning menunjukkan sample tersebut positif mengandung katekin (Robinson, 1995). Uji kualitatif senyawa fenol dapat diidentifikasi dengan menggunakan FeCl3, tetapi tidak dapat digunakan untuk membedakan macam-macam golongan. Jika terjadi warna hitam-biru, ini merupakan bukti adanya 3,4,5-trihidroksi fenol (misalnya galokatekin) (Robinson, 1995). Uji fenolik dan flavonoid memberikan reaksi positif yang ditunjukkan dengan terjadinya perubahan warna. Senyawa fenolik jika direaksikan dengan larutan FeCl3 menghasilkan senyawa kompleks yang berwarna hijau-kecoklatan. Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut (Dewi, 2004):
OH
O

Fe
O

HO

O FeCl3 OH

HO

O O
Fe

Hijau-kecoklatan

2.4.2.2 Tanin Tanin adalah senyawa polifenol yang memiliki berat molekul antara 5003000 dalton yang diduga berperan sebagai antibakteri karena dapat membentuk kompleks dengan protein dan interaksi hidrofobik (Makkar,1991 dalam Jambang, 2004). Tanin adalah suatu senyawa fenol aktif pada penyamakan kulit dan penyebab rasa sepet, sebagai senyawa fenol maka tanin memiliki sifat-sifat

menyerupai alkohol yang salah satunya adalah bersifat antiseptik. Penyamakan merupakan suatu proses yang bertujuan untuk mengubah kulit mentah yang mudah rusak oleh aktivitas mikroorganisme, proses kimia maupun fisik menjadi kulit tersamak yang lebih tahan terhadap faktor-faktor perusak tersebut dengan menambahkan zat penyamak. Zat penyamak bisa berupa penyamak nabati, sintetis, mineral, dan penyamak minyak. Uji penyamakan dilakukan dengan cara merendam kulit dalam bahan penyamak dan ditambahkan larutan FeCl3 dengan waktu tertentu, untuk kulit tebal selama 2 minggu dan kulit tipis selama 2 hari. Perubahan warna dan kulit menunjukkan bahwa kulit tersebut sudah tersamak (Suharja, 2008).

OH OH O OH

OH

Gambar 2.5 Struktur dasar tanin (Harborne, 1987)

Tanin dapat larut dalam alkohol dan air. Tanin banyak ditemukan pada akar, daun, kulit, dan batang tanaman (Sigh, 2002 dalam Kurniawan 2006). Tanin dibagi menjadi dua golongan yaitu, tanin terkondensasi atau katekol dan tanin terhidrolisis atau tanin galat. Tanin terkondensasi adalah golongan tanin yang memiliki struktur kompleks, di mana tanin ini tidak dapat dihidrolisis dalam perlakuan dengan asam. Untuk pemanasan dengan asam akan menghasilkan senyawa yang tidak larut. Sedangkan tanin terhidrolisis adalah ester-ester yang

dapat dihidrolisis baik oleh asam, basa, ataupun enzim-enzim menjadi unit-unit yang lebih sederhana (Ohler, 1978 dalam Kurniawan 2006).

OH OH O OH OH OH HO O

OH OH OH

OH OH OH

OH HO

OH

Katekol

Gambar 2.6 Struktur tanin katekol dan tanin galat (Harborne, 1987 dan Baron, 2001)

Identifikasi senyawa tanin dapat menggunakan larutan FeCl3 1 % dan larutan gelatin. Larutan FeCl3 1 % ditunjukkan dengan timbulnya warna biru tua atau hijau kehitaman, sedangkan larutan gelatin ditunjukkan dengan adanya endapan putih. Hal tersebut menunjukkan adanya senyawa tanin (Harborne, 1987).

2.4.3 Saponin Saponin berasal dari bahasa latin sapo yang berarti sabun, karena sifatnya menyerupai sabun. Saponin adalah glikosida triterpenoid dan sterol (Robinson, 1995). Saponin merupakan senyawa yang berasa pahit, berbusa dalam air dan larut dalam air dan alkohol dan tidak larut dalam eter. Saponin paling cocok diekstraksi dengan menggunakan metanol dan etanol (Robinson, 1995).

Gambar 2.7 Kerangka dasar saponin (Robinson, 1995)

Identifikasi senyawa saponin dapat dilakukan dengan cara menambahkan air panas (1:1) pada sampel sambil dikocok selama 30 menit. Ditambahkan HCl 1 N jika menimbulkan busa dan busa stabil selama 10 menit dengan ketinggian 13 cm, menunjukkan positif senyawa saponin (Soebagio, 2007). 2.5 Ekstraksi Daun Teh Tua dengan Metode Maserasi Ekstraksi merupakan proses penarikan komponen aktif menggunakan pelarut tertentu. Pada umumnya ekstraksi akan bertambah baik bila permukaan serbuk sampel yang bersentuhan dengan pelarut makin luas. Semakin halus serbuk sampel, maka semakin baik hasil ekstraksinya, tetapi dalam pelaksanaannya tidak selalu demikian karena ekstraksi masih tergantung juga pada sifat fisik dan kimia sampel yang bersangkutan (Ahmad, 2006).

Salah satu metode ekstraksi bahan alam, yaitu metode maserasi. Maserasi adalah metode perendaman. Penekanan utama pada maserasi adalah tersedianya waktu kontak yang cukup antara pelarut dan jaringan yang diekstraksi (Guether, 1987 ). Maserasi merupakan cara ekstraksi yang sederhana. Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk sampel dalam pelarut. Pelarut akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif sehingga zat aktif akan larut, adanya perbedaan konsentrasi larutan zat aktif di dalam sel, menyebabkan larutan yang terpekat di desak keluar. Pelarut yang digunakan dapat berupa air, etanol, air-etanol, atau pelarut lain. Keuntungan cara ekstraksi ini, adalah cara pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana serta mudah diusahakan, sedangkan kerugiannya adalah waktu pengerjaannya lama dan ekstraksi kurang sempurna (Ahmad, 2006). Pemilihan metode maserasi dikarenakan senyawa polifenol rentan terhadap panas sehingga tidak bagus menggunakan metode soxhlet. Penggunaan ekstraksi dengan metode soxhlet dapat merusak senyawa polifenol dalam daun teh (Cheong, et.al, 2005 dalam Hukmah, 2007). Faktor yang paling menentukan berhasilnya proses ekstraksi adalah mutu dari pelarut yang digunakan. Pelarut yang ideal harus memiliki syarat sebagai berikut (Guether, 2006): 1. Dapat melarutkan senyawaan dengan cepat dan sempurna. 2. Memiliki titik didih yang cukup rendah agar pelarut dapat mudah diuapkan tanpa menggunakan suhu yang tinggi, namun titik pelarut tidak boleh teralu

rendah karena akan mengakibatkan hilangnya sebagian pelarut akibat penguapan. 3. Bersifat inert, sehingga tidak bereaksi dengan senyawa yang diekstrak. 4. Memiliki titik didih yang seragam dan jika diuapkan tidak akan tertinggal dalam residunya. 5. Harganya harus serendah mungkin dan tidak mudah terbakar. Sifat kelarutan zat didasarkan pada teori like disolve like, zat yang bersifat polar akan larut dalam pelarut polar dan zat yang bersifat nonpolar akan larut dalam pelarut nonpolar (Khopkar, 2003). Pemilihan pelarut untuk ekstraksi harus mempertimbangkan banyak faktor. Pelarut harus memenuhi syarat-syarat sebagai berikut: murah dan mudah diperoleh, stabil secara fisika dan kimia, bereaksi netral, tidak mudah menguap dan tidak mudah terbakar, selektif dan tidak mempengaruhi zat berkhasiat (Ahmad, 2006). Pelarut yang digunakan pada penelitian ini berdasarkan tingkat kepolarannya, yaitu akuades dan etanol. Sifat fisika masing-masing pelarut dilihat dari tingkat polaritas yang ditunjukkan dengan lebih pasti melalui pengukuran konstanta dielektrikum suatu bahan pelarut. Konstanta dielektrikum ini secara matematis ditunjukkan dalam rumus: D=
e e' f r2

Dimana D adalah konstanta dielektrikum, f gaya tolak menolak dua partikel bermuatan listrik e dan e , sedang r adalah jarak antara partikel e dan e . Semakin besar konstanta dielektrikum suatu bahan pelarut disebut semakin polar

(Sudarmdji, dkk, 2007). Tabel berikut ini menunjukkan konstanta dielektrikum pelarut dan titik didihnya. Tabel 2.2 Konstanta Dielektrikan dan Sifat Fisika Masing-masing Pelarut Bahan Pelarut Akuades Etanol Konstanta Dielektrikan 80,40 24,30 Tingkat Kelarutan dalam Air Misibel Misibel Titik Didih (C) 100 78

Sumber : Sudarmadji, dkk (2007).

2.6 Uji Antibakteri 2.6.1 Antibakteri Mikroorganisme dapat dihambat atau dibunuh dengan proses fisik atau bahan kimia. Bahan antimikroba diartikan sebagai bahan yang mengganggu pertumbuhan dan metabolisme mikroba, sehingga bahan tersebut dapat menghambat pertumbuhan atau bahkan membunuh mikroba, apabila

mikroorganisme yang dimaksud adalah bakteri, maka antimikroba lebih sering disebut dengan bahan antibakteri (Pelczar dan Chan, 1986). Cara kerja bahan antibakteri antara lain dengan merusak dinding sel, merubah permeabilitas sel, merubah molekul protein dan asam nukleat, menghambat kerja enzim, serta menghambat sintesis asam nukleat dan protein (Pelczar dan Chan, 1986). 2.6.2 Pertumbuhan dan Perkembangbiakkan Bakteri Istilah pertumbuhan umumnya digunakan untuk bakteri dan

mikroorganisme lain, biasanya pada pertambahan jumlah atau massa sel dan bukan perubahan individu organisme. Bakteri yang dikembangbiakkan ke dalam suatu medium yang sesuai dan pada keadaan yang optimum bagi

pertumbuhannya, maka terjadi kenaikan jumlah yang amat tinggi dalam waktu yang relatif pendek (Pelezar dan Chan, 1986). Bakteri berkembang biak dengan jalan membelah diri, 1 (satu) menjadi 2 (dua), 2 (dua) menjadi 4 (empat) dan seterusnya. Interval waktu yang dibutuhkan bakteri untuk membelah diri, berbeda antara yang satu dengan yang lainnya (Entjang, 2003). Penambahan dan pertumbuhan jumlah sel mikroba pada umumnya dapat digambarkan dalam bentuk kurva pertumbuhan. Kurva pertumbuhan merupakan penjabaran dari penambahan jumlah sel dalam waktu tertentu.

Gambar 2.8 Kurva pertumbuhan bakteri (Suriawiria, 1989)

Kurva di atas disebut sebagai kurva pertumbuhan bakteri. Ada empat fase pada pertumbuhan bakteri, sebagaimana tampak pada kurva, yaitu (Suriawiria, 1989): 1. Fase Lag Fase ini merupakan perubahan bentuk dan pertumbuhan jumlah individu tidak secara nyata terlihat. Fase ini dapat dinamakan sebagai fase adaptasi (penyesuaian) atau fase pengaturan jasad untuk suatu aktivitas di dalam lingkungan yang mungkin baru.

2. Fase Eksponensial Fase ini jasad mulai mengadakan perubahan bentuk dan meningkatkan jumlah sel sehingga kurva meningkat dengan tajam. Peningkatan ini dipengaruhi oleh dua faktor, yaitu faktor biologi (bentuk dan sifat jasad terhadap lingkungan yang ada) dan faktor non-biologi (kandungan sumber nutrient di dalam media, temperatur, cahaya dan lain-lain). 3. Fase Stasioner Fase yang menunjukkan puncak aktivitas pertumbuhan pada titik yang tidak dapat dilampaui lagi, sehingga pada fase ini gambaran grafik akan mendatar. 4. Fase Kematian Fase ini jumlah individu secara tajam akan menurun sehingga grafik tampaknya akan kembali ke titik awal. 2.6.3 Pengujian Efektivitas Antibakteri Pengujian aktivitas antibakteri adalah teknik untuk mengukur berapa besar potensi atau konsentrasi suatu senyawa dapat memberikan efek bagi mikrooganisme (Dart, 1996 dalam Ayu, 2004). Berdasarkan sifat toksisitas selektifnya, ada antibakteri yang bersifat menghambat pertumbuhan bakteri, dikenal sebagai aktivitas bakteriostatik, dan ada yang bersifat membunuh bakteri, dikenal sebagai aktivitas bakterisidal (Ganiswarna, 1995 dalam Ayu, 2004). Kepekaan bakteri terhadap senyawa yang berfungsi sebagai antibiotik bervariasi. Bakteri gram positif biasanya lebih peka dibandingkan bakteri gram negatif, meskipun beberapa antibiotik dapat bereaksi atau mempengaruhi hanya pada bakteri gram negatif, tetapi tidak menutup kemungkinan bakteri gram negatif

lebih peka dibanding dengan bakteri gram positif pada beberapa antibiotik tertentu. Zat antibiotik yang dapat bereaksi dengan bakteri gram positif dan gram negatif disebut dengan antibiotik Broad Spectrum atau antibiotik berspektrum luas (Brock and Madigan, 1991). Kontrol positif untuk bakteri gram positif menggunakan penisilin 25 mg/mL dengan volume 0,4 L, sedangkan Kontrol positif untuk bakteri gram negatif menggunakan streptomisin 6,25 mg/mL dengan volume 1,6 L (Soetan, et.al, 2006) dan pelarutnya (sebagai kontrol negatif). Uji antibakteri dapat dilakukan untuk mengetahui sejauh mana aktivitas suatu bakteri terhadap antibakteri. Menurut Brock and Madigan (1991) terdapat 3 metode yang umum digunakan dalam uji antibakteri, yaitu metode dilusi kaldu, metode dilusi agar, dan metode difusi cakram. Prinsip dari metode difusi cakram adalah senyawa antibakteri dijenuhkan ke dalam kertas saring (cakram kertas). Cakram kertas yang mengandung senyawa antibakteri tertentu ditanam pada media pembenihan agar padat yang telah dicampur dengan bakteri yang diuji, kemudian diinkubasi pada suhu dan waktu tertentu, selanjutnya diamati adanya area (zona) jernih di sekitar cakram kertas yang menunjukkan tidak adanya pertumbuhan bakteri. Tabel 2.3 Ketentuan Kekuatan Antibakteri No Daerah hambatan Ketentuan 1. > 20 mm Sangat kuat 2. 10-20 mm Kuat 3. 5-10 mm Sedang 4. < 5 mm Lemah
Sumber: Davis Stout dalam Ardiansyah (2005)

Beberapa faktor yang dapat mempengaruhi ukuran zona penghambatan dan harus dikontrol adalah (Greenwood, 1995 dalam Pratama, 2005): a. Konsentrasi mikroba pada permukaan medium. Semakin tinggi konsentrasi mikroba maka zona penghambatan akan semakin kecil. b. Kedalaman medium pada cawan petri. Semakin tebal medium pada cawan petri maka zona penghambatan akan semakin kecil. c. Nilai pH dari medium. Beberapa antibiotika bekerja dengan baik pada kondisi asam dan beberapa kondisi alkali/basa. d. Kondisi aerob/anaerob. Beberapa antibakterial kerja terbaiknya pada kondisi aerob dan yang lainnya pada kondisi aerob. Tabel 2.4 Perbedaan Relatif antara Gram Positif dan Gram Negatif Perbedaan Relatif Sifat Komposisi dinding sel Ketahanan terhadap penisilin Penghambatan oleh pewarna basa. Contoh violet, kristal Kebutuhan nutrien Ketahanan terhadap Perlakuan fisik
Sumber: Pelezar dan Chan, 1986

Bakteri Gram Positif Bakteri Gram Negatif Kandungan lipid Kandungan lipid rendah (1-4%) tinggi (11-22%) Lebih sensitif Lebih tahan Lebih dihambat Kurang dihambat Kebanyakan spesies Relatif kompleks Lebih tahan Kebanyakan spesies Relatif sederhana Kurang tahan

2.6.4

Bakteri Uji

2.6.4.1 Micrococcus luteus Micrococcus termasuk bakteri gram positif, bersifat aerob, non pathogen dan termasuk family micrococcaceae. Sel-sel Micrococcus berukuran 0.5 sampai 3.5 m dalam diameter, suhu optimum 25 C, menghasilkan pigmen, dan koloni

dalam broth dan pada nutrient agar (NA) menghasilkan warna merah atau kuning. Micrococcus dapat menimbulkan noda-noda berwarna merah pada ikan.

Gambar 2.9 Micrococcus luteus (Thiagarajan, 2006)

Micrococcus luteus mampu mendegradasi senyawa-senyawa yang mengeluarkan cairan dalam menghasilkan bau yang tidak menyenangkan (bau busuk). M. luteus biasanya menyebabkan kebusukan pada produk-produk ikan (Thiagarajan, 2006). 2.6.4.2 Pseudomonas fluorescens Mikroorganisme ini adalah bakteri gram negatif berbentuk batang kecil, dapat bergerak, umumnya berflagella polar tunggal dan mempunyai tipe metabolisme yang bersifat oksidatif. Bakteri ini merupakan penyebab berbagai jenis kerusakan bahan pangan yang sebagian besar berhubungan dengan kemampuan spesies ini dalam memproduksi enzim yang dapat memecah baik komponen lemak maupun protein dari bahan pangan (Buckle, dkk, 2007). Pseudomonas fluorescens merupakan bakteri berbentuk batang berukuran 0,3 - 0,5 dan 1,0 - 1,8 microns, berbentuk tunggal dan berpasangan, memiliki bentuk tunggal flagella polar pada saat tidak bergerak (Robert, et, al., 1957).

Klasifikasi P. fluorescens berdasarkan Muray dalam Kurrata (2007) adalah sebagai berikut: Kerajaan Divisi Klas Bangsa Marga Jenis : Prokariota : Gracilicutes : Proteobacteria : Pseudomonadaceae : Pseudomonas : Pseudomonas fluorescens

Gambar 2.10 Pseudomonas fluorescens (Jogjavet, 2008)

Bakteri golongan Pseudomonas dapat memecah rangkaian karbohidrat dengan enzim-enzim oksidase yang dihasilkan sehingga menimbulkan pewarnaan pada ikan. P. flourescens dapat menimbulkan noda-noda berwarna kuning atau kuning kehijauan sebelum ikan menjadi busuk (Hadiwiyoto, 1993). P. fluorescens dapat diisolasi dari ginjal atau luka-luka yang merusak ikan. P. fluorescens tumbuh baik pada media nutrient agar pada suhu 22-25 C dan menghasilkan pigmen kuning kehijauan yang berpendar di bawah lampu UV (Inglis, 2001).

BAB III METODE PENELITIAN

3.1 Pelaksanaan Penelitian Penelitian dilaksanakan pada bulan Maret sampai bulan April 2009 di Laboratorium Kimia UIN Malang dan Laboratorium Instalasi Pengolahan Air Limbah (IPAL) RSU. Dr. Saiful Anwar Malang. 3.2 Alat dan Bahan 3.2.1 Alat Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah pisau, neraca analitik (Mettler AE 25), seperangkat alat gelas, rotary evaporator, erlenmeyer, blender, pengaduk, gelas arloji, cawan petri, tabung reaksi, shaker, kertas, jarum ose, spektronik 20, inkubator, pinset, autoklaf, bunsen, pipet mikro, dan penggaris. 3.2.2 Bahan Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun teh segar yang sudah tua (selain pucuk daun) varietas assamica yang diambil dari Perkebunan teh Wonosari, Lawang Malang. Bahan-bahan kimia yang digunakan untuk proses ekstraksi mempunyai derajat kemurnian proanalis adalah akuades dan etanol. Uji fitokomia menggunakan bahan-bahan sebagai berikut: reagen Mayer, reagen Dragendorff, FeCl3: MERCK, HCl: MERCK, kulit kambing, larutan gelatin, formaldehid 3 %, Na-asetat: MERCK, NaCl 1 %.

Uji antibakteri menggunakan bahan-bahan sebagai berikut: kertas saring wathman 40, akuades steril, biakan murni bakteri M. luteus dan P. fluorescens, spiritus, alumunium foil, tissue steril, kapas, media nutrient agar (NA), media nutrient broth (NB), penisilin, dan streptomisin. 3.3 Tahapan Penelitian Penelitian ini dilakukan dengan tahapan-tahapan sebagai berikut : Tahap I Tahap II Tahap III : Preparasi sampel : Ekstraksi daun teh dengan pelarut akuades dan etanol. : Identifikasi golongan senyawa aktif dalam ekstrak kasar daun teh tua. Tahap IV : Uji antibakteri dilakukan dengan cara sebagai berikut: 1. Pembuatan media. 2. Peremajaan bakteri M. luteus dan P. fluorescens 3. Pembuatan kurva pertumbuhan bakteri M. luteus dan P. fluorescens. 4. Pembuatan larutan biakan murni bakteri M. luteus dan P. fluorescens. 5. Penentuan pelarut yang lebih baik dengan

melakukan uji efektivitas antibakteri pada masingmasing ekstrak daun teh tua (selain pucuk daun) dengan metode difusi cakram pada konsentrasi 30 mg/mL.

6. Penentuan konsentrasi terbaik yang berpotensi sebagai antibakteri pada ekstrak daun teh tua (selain pucuk daun) hasil pelarut yang lebih baik.

3.4 Rancangan Penelitian Penelitian ini dilaksanakan dengan rancang bangun penelitian

eksperimental laboratorik. Proses ekstraksi dilakukan dengan 2 pelarut (P) yaitu: P1 = Akuades P2 = Etanol 99 %

Masing-masing ekstrak dilakukan uji identifikasi golongan senyawa aktif dalam ekstrak daun teh tua yaitu: 1. Uji Alkaloid 3. Uji Saponin 2. Uji Flavonoid: a. Uji Katekin b. Uji Tanin

Kemudian dilakukan uji efektivitas antibakteri pada konsentrasi 30 mg/mL untuk memperoleh pelarut yang lebih baik (P optimum) dari hasil ekstraksi. Pelarut yang lebih baik dilihat dari tingkat efektivitas antibakteri tertinggi. Hasil uji efektivitas antibakteri terpilih (P optimum) ekstrak kasar daun teh tua terhadap bakteri M. luteus dan P. fluorescens dilakukan uji antibakteri dengan variasi konsentrasi (K) yaitu: K1 = 30 mg/mL K2 = 40 mg/mL K3 = 50 mg/mL K4 = 60 mg/mL K5 = 70 mg/mL K6 = 80 mg/mL

Konsentrasi terbaik (K optimum) dilihat dari nilai zona hambat yang terbesar.

3.5 Cara Kerja 3.5.1 Persiapan Sampel Daun teh tua segar varietas assamica dicuci terlebih dahulu. Daun teh yang sudah bersih dilakukan proses pelayuan pada suhu 30 oC, kemudian dipotong kecil-kecil dan dihaluskan. 3.5.2 Ekstraksi Daun Teh Tua (selain pucuk daun) dengan Metode Maserasi Sampel daun teh tua yang halus ditimbang sebanyak 50 gram, kemudian direndam dengan 200 mL akuades (Hukmah, 2007) dalam erlenmeyer dan diaduk dengan menggunakan shaker dengan kecepatan 120 rpm (rotation per minutes) selama 24 jam (Hartini, 2004). Larutan ekstrak daun teh disaring. Filtrat ekstrak daun teh dipekatkan dengan rotary evaporator vakum sehingga diperoleh ekstrak pekat. Proses di atas diulang dengan pelarut etanol menggunakan prosedur yang sama. Ekstrak pekat yang diperoleh digunakan untuk identifikasi golongan senyawa aktif dalam daun teh tua dan uji antibakteri. 3.5.3 Identifikasi Golongan Senyawa Aktif

3.5.3.1 Uji Alkaloid Ekstrak pekat sebesar 0,5 g ditambahkan 0,5 mL HCl 2 %. Larutan dibagi dalam 2 tabung. Tabung 1 ditambahkan 2-3 tetes reagen Dragendorff, tabung 2 ditambahkan 2-3 tetes reagen Mayer. Terbentuknya endapan jingga pada tabung 1 dan endapan putih pada tabung 2 menunjukkan adanya alkaloid.

3.5.3.2 Uji Katekin Ekstrak pekat sebesar 0,5 g dididihkan dengan 1-2 mL HCl 2 M. Jika ekstrak menunjukkan warna coklat kuning, maka positif mengandung katekin. 3.5.3.3 Uji Tanin 3.5.3.3.1 Uji FeCl3 Ekstrak pekat sebesar 0,5 g dimasukkan dalam tabung reaksi dilarutkan dengan 50 mL air panas, dididihka selama 15 menit. Kemudian disaring. 5 mL filtrat direaksikan dengan 2-3 tetes larutan FeCl3 1 %. Jika larutan menghasilkan warna hijau kehitaman atau biru tua maka bahan tersebut mengandung tanin. 3.5.3.3.2 Uji Gelatin 5 mL filtrat ditambahkan dengan 1 mL larutan gelatin. Jika terbentuk endapan putih maka bahan tersebut mangandung tanin. 3.5.3.3.3 Uji Tanin Katekol dan Tanin Galat 5 mL filtrat ditambahkan dengan larutan formaldehid 3 % : asam klorida (2 : 1) dan dipanaskan dalam air panas dengan suhu 90 oC. Jika terbentuk endapan merah muda menunjukkan adanya tanin katekol. 5 mL filtrat dijenuhkan dengan Na-asetat dan ditambahkan FeCl3 1 %. Terbentuknya warna biru tinta/hitam menunjukkan adanya tanin galat. 3.5.3.3.4 Uji Penyamakan Kulit kambing sebesar 0,5 g direndam dalam ekstrak pekat hasil dari penentuan pelarut dan konsentrasi terbaik, ditambahkan air sebanyak 5 mL dan 23 tetes larutan FeCl3 1 %. Proses perendaman dilakukan selama 2 hari, apabila

kulit berwarna coklat muda atau merah dan kulit menjadi lunak, maka kulit positif tersamak. 3.5.3.4 Uji Saponin Ekstrak pekat hasil dari penentuan pelarut dan konsentrasi terbaik sebesar 0,5 g ditambahkan air panas (1:1). Dikocok selama 1 menit, apabila menimbulkan busa ditambahkan HCl 1 N, busa yang terbentuk dapat bertahan selama 10 menit dengan ketinggian 1-3 cm, maka ekstrak positif mengandung saponin. 3.5.4 Uji Efektivitas Antibakteri 3.5.4.1 Sterilisasi Alat dan Bahan Sterilisasi alat dan bahan dengan cara menutup alat-alat yang akan disterilkan dengan alumunium foil atau kapas. Dimasukkan ke dalam autoklaf dan diatur pada suhu 121 oC dengan tekanan 15 psi (per square inchi). Sterilisasi dilakukan untuk alat selama 30 menit dan bahan selama 15 menit. 3.5.4.2 Pembuatan Media Media yang disiapkan adalah media padat agar (NA) miring untuk peremajaan biakan murni dan uji antibakteri senyawa hasil reaksi pada bakteri M. luteus dan P. fluorescens. Pembuatan media dilakukan dengan cara sebanyak 2 gram nutrien agar dilarutkan dalam 100 mL akuades dalam beaker glass dan dimasukkan dalam erlenmeyer. Suspensi dipanaskan hingga mendidih lalu dimasukkan ke dalam 7 tabung reaksi (masing-masing 10 mL untuk 5 tabung reaksi dan 5 mL untuk 2 tabung reaksi). Proses ini dilakukan secara aseptis dengan cara bagian ujung alat dipanaskan dan ditutup dengan kapas dan alumunium foil. Media NA yang dimasukkan dalam 7 tabung reaksi disterilkan

dalam autoklaf dan diatur pada suhu 121 oC selama 15 menit, kemudian tabung yang berisi 5 mL larutan nutrien agar diletakkan dalam posisi miring dan didiamkan selama 24 jam pada suhu ruang. 3.5.4.3 Peremajaan Biakan Murni M. luteus dan P. fluorescens Biakan murni M. luteus dan P. fluorescens digoreskan secara aseptis dengan jarum ose pada media padat agar miring dan tabung media ditutup dengan kapas. Media tersebut diinkubasi selama 19 jam untuk M. luteus dan 20 jam untuk P. fluorescens pada suhu 25 oC di dalam inkubator. 3.5.4.4 Pembuatan Kurva Pertumbuhan 3.5.4.4.1 Micrococcus luteus Satu tabung subkultur bakteri hasil peremajaan diambil 1 ose dan ditanam dalam 100 mL media cair nutrien broth (NB). Peremajaan M. luteus diinkubasi pada suhu 25 oC, setiap selang waktu 2 jam diambil 1 mL dan diencerkan sampai volume 10 mL, kemudian dilakukan pengukuran densitas optik (kerapatan) pertumbuhan sel masing-masing bakteri pada panjang gelombang 620 nm menggunakan spektrofotometer. Hasil dari pengukuran tersebut, dibuat grafik hubungan waktu inkubasi dengan densitas optik dan diperoleh kurva pertumbuhan bakteri M. luteus. 3.5.4.4.2 Pseudomonas fluorescens Satu tabung subkultur bakteri hasil peremajaan diambil 1 ose dan ditanam dalam 100 mL media cair nutrien broth (NB). Peremajaan P. fluorescens diinkubasi pada suhu 25 oC, setiap selang waktu 2 jam diambil 1 mL dan diencerkan sampai volume 10 mL, kemudian dilakukan pengukuran densitas optik

pertumbuhan sel masing-masing bakteri pada panjang gelombang 620 nm menggunakan spektrofotometer. Hasil dari pengukuran tersebut, dibuat grafik hubungan waktu inkubasi dengan densitas optik dan diperoleh kurva pertumbuhan bakteri P. fluorescens. 3.5.4.5 Pembuatan Larutan Biakan Aktif Bakteri M. luteus dan P. fluorescens Hasil peremajaan biakan murni M. luteus dan P. fluorescens diambil 1 ose dan dilarutkan dalam 10 mL akuades steril. 3.5.4.6 Uji Efektivitas Antibakteri Media padat 10 mL (tahap 3.5.4.2) yang telah dipanaskan hingga mencair, didinginkan sampai suhu 40 oC, dan dituang dalam cawan petri steril. Ditambahkan 0,1 mL larutan biakan aktif bakteri M. luteus dan P. fluorescens dihomogenkan. Dibiarkan hingga memadat. Kertas cakram (diameter 5 mm) diresapkan dalam ekstrak kasar daun teh dan kontrol. Proses peresapan dilakukan dengan cara meneteskan 20 L kontrol positif (penisilin dan streptomisin), kontrol negatif (pelarut) dan ekstrak (Zakaria et al., 2007). Kertas cakram tersebut diletakkan di atas permukaan media bakteri menggunakan pinset dan ditekan sedikit. Media bakteri yang sudah diberi bahan antibakteri diinkubasi pada suhu 25 oC selama 34 jam untuk bakteri M. luteus dan 36 jam untuk bakteri P. fluorescens dalam inkubator. Diameter zona hambatan yang terbentuk diukur menggunakan penggaris untuk menentukan efektivitas antibakteri (Volk dan Wheeler, 1993). Diameter zona hambat adalah diameter yang tidak ditumbuhi bakteri di sekitar kertas cakram dikurangi diameter kertas cakram.

Uji antibakteri dilakukan dalam 2 tahap. Tahap 1 bertujuan untuk mengetahui pelarut yang lebih baik hasil ekstraksi (konsentrasi ekstrak 30 mg/mL). Tahap 2 bertujuan untuk mengetahui konsentrasi ekstrak terbaik dari pelarut yang lebih baik (K optimum) dengan cara memvariasi konsentrasi yaitu pada kosentrasi ekstrak sebesar 30, 40, 50, 60, 70, dan 80 mg/mL). 3.5.5 Analisis Data Data yang diperoleh berupa nilai diameter zona hambat hasil uji efektivitas antibakteri dilakukan dengan menggunakan uji anova (Yitnosumarto, 1993). Untuk mengetahui pengaruh konsentrasi terhadap aktivitas antibakteri M. luteus dan P. fluorescens, apabila: . Fhitung Ftabel maka perlakuan variasi konsentrasi ekstrak terdapat pengaruh

sehingga H0 ditolak berarti variasi konsentrasi berpengaruh pada aktivitas antibakteri terhadap bakteri M. luteus dan P. fluorescens dan dilanjutkan dengan uji BNT. Fhitung Ftebel maka variasi konsentrasi ekstrak tidak terdapat pengaruh

sehingga H0 diterima. Dimana: H0 (Hipotesa awal) adalah variasi konsentrasi ekstrak tidak ada pengaruh pada aktivitas antibakteri terhadap bakteri M. luteus dan P. fluorecens. H1 (Hipotesa alternatif) adalah variasi konsentrasi ekstrak terdapat pengaruh pada aktivitas antibakteri terhadap bakteri M. luteus dan P. fluorescens.

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini mengajak kepada manusia untuk memperhatikan segala sesuatu yang ada di alam semesta. Teknologi adalah ilmu tentang cara menerapkan sains untuk memanfaatkan alam bagi kesejahteraan dan kenyamanan manusia. Al-Qur an menyatakan bahwa alam raya diciptakan dan ditundukkan Allah untuk manusia. Sebagaimana firman Allah surat Al-Jatsiyah ayat 13:

Dan dia telah menundukkan untukmu apa yang di langit dan apa yang di bumi semuanya, (sebagai rahmat) daripada-Nya. Sesungguhnya pada yang demikian itu benar-benar terdapat tanda-tanda (kekuasaan Allah) bagi kaum yang berfikir . Ayat di atas menjelaskan bahwa penundukan tersebut secara potensial terlaksana melalui hukum-hukum alam yang ditetapkan Allah dan kemampuan yang dianugerahkan-Nya kepada manusia. Ini berarti manusia berpotensi mengetahui rahasia alam raya dan mengantarkan manusia untuk memanfaatkan alam yang telah ditundukkan oleh Allah (Shihab, 2002). Ajaran Islam mengajarkan bahwa alam dan isinya, seperti hewan dan tumbuh-tumbuhan diciptakan untuk manusia. Manusia diberikan kesempatan yang seluas-luasnya untuk mengambil manfaat daripadanya. Hal ini dinyatakan dalam al-Qur an surat As-Sajdah ayat 27:

Apakah mereka tidak memperhatikan bahawa kami telah turunkan air ke bumi yang tandus, lalu kami tumbuhkan dengan air hujan itu tanam-tanaman untuk makanan mereka dan ternakan mereka. Maka apakah mereka tidak memperhatikan. Ayat di atas menjelaskan hewan dan tumbuhan itu diciptakan Allah untuk kepentingan manusia, tetapi manusia tidak dibenarkan hanya menikmati apa yang diciptakan Allah kepada mereka begitu saja, tanpa mau berfikir dan berusaha untuk meningkatkan kualitas ciptaan-Nya dan mengembangkannya menjadi suatu ilmu pengetahuan (Anonymous, 2001). Pengembangan ilmu pengetahuan diantaranya memanfaatkan sesuatu yang tidak bermanfaat, misalnya daun teh tua. Fulder (2004) menyatakan semakin tua daun teh semakin banyak tanin. Tanin merupakan zat antibakteri, karena tanin memiliki sifat mirip dengan fenol, yaitu antiseptik. 4.1 Ekstraksi Daun Teh Tua (selain pucuk daun) dengan Metode Maserasi Ekstraksi merupakan proses penarikan komponen aktif menggunakan pelarut tertentu. Komponen aktif yang diambil adalah senyawa aktif dalam daun tah tua. Metode ekstraksi yang digunakan dalam penelitian ini adalah maserasi. Maserasi adalah metode perendaman. Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk sampel dalam pelarut. Pemilihan metode maserasi dikarenakan senyawa polifenol rentan terhadap panas sehingga tidak bagus menggunakan metode soxhlet. Penggunaan ekstraksi dengan metode soxhlet dapat merusak senyawa polifenol dalam daun teh (Cheong, et.al, 2005 dalam Hukmah, 2007).

Proses ekstraksi dilakukan dengan menggunakan pelarut akuades dan etanol. Akuades dan etanol sering digunakan untuk mengekstraksi senyawa polifenol, karena senyawa tersebut merupakan senyawa yang mengandung 2 cincin aromatik dengan gugus hidroksil lebih dari satu. Robinson (2005) menyatakan semakin banyak gugus hidroksil suatu senyawa fenol memiliki tingkat kelarutan dalam air bertambah atau bersifat polar sehingga dipilih pelarut polar. Maserasi dilakukan selama 24 jam dengan pengocokan menggunakan shaker pada kecepatan 120 rpm (rotation per minutes). Pengocokan ini bertujuan untuk mempercepat kontak antara sampel dengan pelarut. Larutan kemudian disaring dan diperoleh filtrat dari masing-masing pelarut dengan warna yang berbeda (Tabel 4.1). Tabel 4.1 Warna Filtrat dari Pelarut Akuades dan Etanol Pelarut Warna Filtrat Akuades Hijau muda Etanol Hijau pekat

Filtrat hasil penyaringan dipekatkan dengan rotary evaporator. Tujuannya untuk memekatkan ekstrak dan memisahkan antara pelarut dengan senyawa aktif dalam daun teh tua. Hasil dari pemekatan adalah ekstrak pekat yang berbau seperti jamu dari berbagai pelarut dengan warna dan tekstur yang berbeda dapat dilihat pada Tabel 4.2.

Tabel 4.2 Warna, Tekstur dan Berat Ekstrak Pekat Akuades dan Etanol Pelarut Warna Ekstrak Pekat Tekstur Ekstrak Pekat Berat Ekstrak Pekat (g) Akuades Coklat Gel 3,5921 Etanol Hijau kehitaman Gel 2,6971

Berdasarkan tabel di atas, dapat diketahui bahwa terdapat adanya perbedaan warna ekstrak antara pelarut akuades dan etanol. Pelarut akuades memberikan warna coklat dan pelarut etanol memberikan warna hijau kehitaman. Warna coklat pada pelarut akuades, dimungkinkan adanya senyawa tanin. Hal ini diperkuat oleh Robinson (1995) yang menyatakan bahwa tanin dapat larut dalam air dan menghasilkan warna coklat kuning. Sedangkan warna ekstrak pada pelarut etanol dimungkinkan mengandung sedikit tanin. Hal ini terbukti pada saat dilakukan uji dengan reagen FeCl3 untuk analisa senyawa tanin terjadi perubahan warna, tetapi tidak signifikan (+) dapat dilihat pada Tabel 4.3. dan Lampiran 6. 4.2 Hasil Identifikasi Golongan Senyawa Aktif Uji fitokimia adalah uji kualitatif kandungan senyawa aktif dalam suatu sampel. Uji fitokimia dalam penelitian ini menggunakan ekstrak kasar daun teh tua dan pereaksi pendeteksi suatu golongan senyawa aktif. Hasil masing-masing ekstrak antara akuades dan etanol mengandung golongan senyawa alkaloid dan flavonoid. Sedangkan uji jenis senyawa flavonoid pada pelarut akuades mengandung katekin dan tanin dan pelarut etanol mengandung tanin.

Tabel 4.3 Hasil Uji Golongan Senyawa Aktif Daun Teh Tua (Lampiran 6) Tanin Pelarut Alkaloid Katekin Saponin Larutan FeCl3 gelatin Akuades + + ++ + Etanol + + Keterangan : tanda ++ : terkandung senyawa lebih banyak/ warna pekat tanda + : terkandung senyawa/ warna muda tanda - : tidak terkandung senyawa/ tidak terbentuk warna 4.2.1 Alkaloid Uji kualitatif alkaloid dilakukan dengan menggunakan reagen Mayer memberikan hasil positif (Tabel 4.4). Ekstrak yang mengandung alkaloid menurut Robinson (1995) akan membentuk endapan jingga dengan reagen Dragendorff dan membentuk endapan putih dengan reagen Mayer. Endapan terbentuk karena adanya pembentukan kompleks antara ion logam dari reagen dengan senyawa alkaloid. Reaksi reagen Mayer dan Dragendorff dengan alkaloid adalah (Lutfillah, 2008): Reaksi reagen mayer HgCl2 + 2KI HgI2 + 2KI HgI2 + 2KCl

[HgI4]- + 2K+ (dengan KI berlebih)

2
N H

+ HgI4

2-

+K

Hg N

+ 2HI+ 2KI

Kompleks logam dengan alkaloid (endapan putih)

Bi(NO3)3.5H2O + 3KI BiI3 + KI

BiI3

+ 3KNO3 + 5H2O

BiI 4 + K+ (dengan KI berlebih)

Reaksi reagen dragendorff

3
N H

BiI4

+K

Bi
N N

+ 3HI+ KI

Kompleks logam dengan alkaloid (endapan jingga)

Gambar 4.1 Reaksi Alkaloid dengan Dragendorff dan Mayer 4.2.2 Flavonoid Uji kualitatif golongan senyawa flavonoid dilakukan dengan

menggunakan reagen atau pereaksi. Terjadinya perubahan warna berarti ekstrak tersebut positif mengandung senyawa yang termasuk dalam golongan flavonoid. Uji golongan flavonoid yang dilakukan dalam penelitian ini, yaitu katekin dan tanin. 4.2.2.1 Katekin Uji katekin dilakukan dengan cara mendidihkan sampel dengan HCl 2 M (Robinson, 1995) memberikan hasil positif pada pelarut akuades. Reaksi antara sampel dengan HCl 2 M menghasilkan warna coklat kuning. Terbentuknya warna pada sampel karena terjadi reaksi eliminasi antara HCl dengan gugus fungsi, sehingga menghasilkan ikatan rangkap terkonjugasi. 4.2.2.2 Tanin Uji kimia pada ekstrak daun teh tua dari ekstrak akuades dan etanol positif mengandung tanin. Hal ini ditunjukkan dengan terbentuknya warna hijau kehitaman atau biru tua ketika ditambahkan FeCl3 1 % (Lampiran 6). Berdasarkan

hasil penelitian Runadi (2007) menunjukkan bahwa hasil skrining fitokimia menggunakan larutan FeCl3 pada ekstrak etanol positif mengandung tanin karena terbentuk warna hijau. Pengujian lain senyawa tanin dalam ekstrak daun teh tua menggunakan larutan gelatin yang menunjukkan bahwa dalam ekstrak akuades membentuk endapan putih dan dalam ekstrak etanol tidak membentuk endapan putih. Sehingga dapat disimpulkan bahwa dalam ekstrak akuades dan etanol menunjukkan adanya tanin. Untuk mengetahui jenis senyawa tanin, yaitu tanin katekol dilakukan dengan penambahan formalin 3 % dan HCl pekat menghasilkan endapan merah muda, sedangkan tanin galat diuji dengan penambahan Na-asetat dan FeCl3 1 % menghasilkan warna biru tinta atau hitam. Hasil uji penentuan jenis senyawa tanin dapat dilihat pada tabel di bawah ini:

Tabel 4.4 Hasil Uji Penentuan Jenis Senyawa Tanin Pelarut Tanin Katekol Tanin Galat Akuades + (endapan merah muda) Etanol -

Senyawa tanin jika direaksikan dengan FeCl3 menghasilkan senyawa kompleks berwarna hijau kehitaman atau biru tua. Makkar (1991) dalam Safera (2005) menyatakan bahwa tanin berperan sebagai antibakteri, karena memiliki kemampuan membentuk senyawa kompleks dengan protein melalui ikatan hidrogen. Mekanisme penghambatan pertumbuhan bakteri oleh tanin yaitu: 1) bereaksi dengan membran sel, 2) inaktivasi enzim, 3) destruksi atau inaktivasi fungsi dari material genetik.

Hasil uji kualitatif senyawa tanin daun teh tua didukung dengan proses penyamakan menggunakan larutan FeCl3 1 %. Sampel yang digunakan adalah kulit kambing. Proses penyamakannya dilakukan dengan cara merendam kulit kambing dalam ekstrak pekat daun teh tua dan larutan FeCl3 1 %. Waktu perendaman selama 2 hari. Lama perendaman disesuaikan dengan jenis kulit yang digunakan, yaitu kulit tipis. Hasil yang diperoleh dari proses penyamakan adalah kulit berwarna coklat dan agak lunak. Hal ini dikarenakan ekstrak daun teh tua mengandung tanin. Tanin memiliki sifat menyamak. Pada proses penyamakan kulit dengan bahan penyamak nabati, terjadi hubungan antara tanin dengan protein kulit yang akan berikatan dan membentuk kulit tersamak, sehingga kulit menjadi padat, kulit menjadi lebih kaku dan plastis, sehingga kekuatan tariknya rendah dibandingkan dengan kulit yang disamak mineral maupun sintetis, disamping itu kulit yang disamak dengan bahan penyamak nabati bersifat buffing eject yang baik, mempunyai daya serap air yang tinggi, warna coklat muda, kulit kaku, tetapi prosesnya sederhana (Untari, 2004). 4.2.3 Saponin Uji busa dilakukan dengan penambahan 5 mL air panas lalu dikocok kuatkuat selama 15 menit dan ditetesi dengan HCl 1 N. Hasil positif ditunjukkan dengan timbulnya busa stabil (dengan tinggi 1-3 cm), yang merupakan ciri khas senyawa saponin. Busa yang timbul disebabkan karena senyawa saponin mengandung senyawa yang sebagian larut dalam air (hidrofilik) dan adanya kombinasi struktur senyawa penyusunnya yaitu rantai sapogenin nonpolar dan rantai samping polar yang larut dalam air (Oleszek, 2002 dalam Faradisa, 2008).

4.3 Kurva Pertumbuhan Bakteri dengan Media Nutrient Borth Kurva pertumbuhan menggambarkan fase-fase yang ada dalam siklus hidup M. luteus dan P. fluorescens yang meliputi fase adaptasi, fase logaritmik, fase stasioner, dan fase kematian. Berdasarkan kurva pertumbuhan dapat ditentukan waktu panen yang ideal adalah pada saat pertumbuhan bakteri mendekati fase stasioner. Pembuatan kurva pertumbuhan diawali dengan penumbuhan biakan murni bakteri yang telah diremajakan pada medium cair dan diinkubasi pada inkubator dengan suhu 25 0C sambil digoyang-goyang. Hal ini dilakukan untuk mengatur aerasi dan agitasi yang menjaga kondisi fisika dan kimia media pertumbuhan serta memperlancar transfer nutrisi ke dalam sel. Pertumbuhan bakteri diamati dengan mengukur densitas optik (DO) media pertumbuhan pada panjang gelombang 620 nm setiap selang waktu 2 jam sampai nilai DO media konstan dan akhirnya mengalami penurunan. Nilai DO sebanding dengan massa sel yang terdapat dalam media, makin banyak massa sel makin besar DO-nya. Kurva pertumbuhan dibuat dari grafik hubungan antara waktu inkubasi dengan nilai DO media. Kurva pertumbuhan bakteri M. luteus pada penelitian ini adalah sebagai berikut:
0.3 0.25 Densitas Optik (A) 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 Waktu Inkubasi (Jam)

Gambar 4.2 Kurva Pertumbuhan M. luteus

Gambar 4.2 menunjukkan bahwa pertumbuhan M. luteus melewati beberapa fase, yaitu: fase adaptasi yang terjadi pada waktu inkubasi 0-6 jam, pada fase ini pertumbuhan M. luteus sangat lamban karena masih beradaptasi dengan media. Fase logaritmik pada waktu inkubasi 6-34 jam. Pada fase ini M. luteus mengalami pembelahan sel secara terus menerus yang ditandai meningkatnya jumlah sel sampai mencapai jumlah maksimum. Fase stasioner dicapai waktu inkubasi 34-46 jam. Pada fase ini pembelahan sel M. luteus sebanding dengan jumlah kematian sehingga tidak terjadi peningkatan jumlah sel. Fase kematian terjadi setelah diinkubasi selama 46 jam. Pada fase ini terjadi penurunan jumlah sel M. luteus karena kematian sel akibat habisnya nutrisi penting dalam media. Pembuatan inokulum dalam penelitian ini dilakukan selama waktu inkubasi 19 jam yang merupakan tengah-tengah fase logaritmik dan waktu panen bakteri M. luteus terjadi pada awal fase stasioner. Kurva pertumbuhan bakteri P. fluorescens pada penelitian ini adalah sebagai berikut:
0.3 0.25 Densitas Optik (A) 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 Waktu Inkubasi (Jam)

Gambar 4.3 Kurva Pertumbuhan P. fluorescens

Gambar 4.3 menunjukkan bahwa pertumbuhan P. fluorescens melewati beberapa fase, yaitu: fase adaptasi yang terjadi pada waktu inkubasi 0-6 jam, pada fase ini pertumbuhan P. fluorescens sangat lamban karena masih beradaptasi dengan media. Fase logaritmik pada waktu inkubasi 6-36 jam. Pada fase ini P. fluorescens mengalami pembelahan sel secara terus menerus yang ditandai meningkatnya jumlah sel sampai mencapai jumlah maksimum. Fase stasioner dicapai waktu inkubasi 36-48 jam. Pada fase ini pembelahan sel P. fluorescens sebanding dengan jumlah kematian sehingga tidak terjadi peningkatan jumlah sel. Fase kematian terjadi setelah diinkubasi selama 48 jam. Pada fase ini terjadi penurunan jumlah sel P. fluorescens karena kematian sel akibat habisnya nutrisi penting dalam media. Pembuatan inokulum dalam penelitian ini dilakukan selama waktu inkubasi 20 jam yang merupakan tengah-tengah fase logaritmik dan waktu panen bakteri P. fluorescens terjadi pada awal fase stasioner. 4.4 Uji Efektivitas Antibakteri dari Ekstrak Akuades dan Etanol Uji efektivitas antibakteri pada ekstrak kasar daun teh tua dilakukan terhadap bakteri M. luteus dan P. fluorescens dengan metode difusi cakram. Prinsip dari metode difusi cakram adalah senyawa antibakteri dijenuhkan ke dalam kertas saring (cakram kertas). Uji antibakteri bertujuan untuk mengukur berapa besar potensi atau konsentrasi suatu senyawa dapat memberikan efek bagi mikroorganisme. Hal ini ditunjukkan dengan adanya zona bening atau zona hambat di sekitar cakram. Ekstrak pekat hasil ekstraksi dari pelarut akuades dan etanol diuji efektivitas antibakterinya untuk memilih ekstrak yang memiliki efektivitas antibakteri tertinggi (P optimum). Merujuk pada penelitian (Zulaekah,

2007) konsentrasi ekstrak daun teh tua yang digunakan dalam uji antibakteri ini adalah 30 mg/mL. Hasil uji efektivitas antibakteri dari ekstrak akuades dan etanol dapat dilihat pada Tabel 4.5.

Tabel 4.5 Hasil Uji Efektivitas Antibakteri dari Ekstrak Akuades dan Etanol 1. Bakteri M. luteus No. 1. 2. 3. 4. 5. Cakram Ekstrak Akuades Ekstrak Etanol Akuades (-) Etanol (-) Penisilin (+) Diameter zona hambat (mm) 1 2 3 6,0 8,0 5,0 2,0 3,0 3,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 40,0 50,0 45,0 Diameter zona hambat (mm) 1 2 3 5,0 6,0 6,0 1,0 2,0 2,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 40,0 45,0 35,0 Rata-rata zona hambat (mm) 6,33 2,67 0,0 0,0 45,0 Rata-rata zona hambat (mm) 5,67 1,67 0,0 0,0 40,0

2. Bakteri P. fluorescens No. 1. 2. 3. 4. 5. Cakram Ekstrak Akuades Ekstrak Etanol Akuades (-) Etanol (-) Streptomisin(+)

Hasil uji efektivitas antibakteri dari ekstrak akuades dan etanol dinyatakan dalam diameter zona hambat. Dari Tabel 4.5 menunjukkan bahwa ekstrak akuades memberikan hasil yang lebih efektif sebagai antibakteri daripada ekstrak etanol. Hal ini dikarenakan kandungan senyawa aktif dalam daun teh tua cenderung bersifat polar sehingga lebih mudah terekstrak dalam pelarut akuades. Hasil ekstraksi menggunakan pelarut yang berbeda akan menghasilkan komponen senyawa aktif yang berbeda, sehingga sifat antibakteri yang dimiliki juga berbeda (Pambayun, 2007). Hal ini juga didukung dengan besarnya berat ekstrak pekat, warna dan tekstur dari masing-masing pelarut.

Hasil di atas, jika dikaitkan dengan ketentuan yang dikemukakan oleh David Stout (2005) mengenai kekuatan antibakteri, maka kekuatan antibakteri yang dihasilkan oleh ekstrak akuades masuk dalam kategori sedang (masuk dalam kisaran 5 mm). Hal ini berarti kandungan senyawa aktif dalam ekstrak daun teh

tua cukup efektif sebagai antibakteri (Tabel 2.3). Hasil uji efektivitas antibakteri dari ekstrak akuades dan etanol (Tabel 4.5), jika dibandingkan dengan kontrol penisilin dan streptomisin (Lampiran 5). Ekstrak daun teh tua bersifat sebagai antibakteri tetapi tidak seefektif kontrol dan memiliki potensi yang kurang bagus jika dibandingkan dengan daun teh muda (pucuk daun). Hal ini dapat dilihat pada Lampiran 4. Isolat merupakan sampel hasil dari isolasi daun teh muda. Ekstrak yang memiliki efektivitas antibakteri tertinggi dipilih untuk diuji efektivitas antibakteri tahap kedua dengan variasi konsentrasi ekstrak yaitu 30, 40, 50, 60, 70, dan 80 mg/mL. Berdasarkan Tabel 4.5 maka ekstrak yang dipilih untuk uji efektivitas antibakteri tahap kedua adalah ekstrak akuades. 4.5 Uji Efektivitas Antibakteri dengan Variasi Konsentrasi Sampel yang digunakan pada uji efektivitas ini adalah ekstrak terbaik dari uji antibakteri dengan variasi pelarut. Tujuannya adalah untuk mendapatkan konsentrasi optimum, di mana ekstrak daun teh tua mampu menghambat atau membunuh bakteri M. luteus dan P. fluorescens. Uji efektivitas ini dilakukan pada konsentrasi 30, 40, 50, 60, 70, dan 80 mg/mL. Hasil uji efektivitas antibakteri dengan variasi konsentrasi dapat dilihat pada Tabel 4.6.

Tabel 4.6 Hasil Uji Efektivitas Antibakteri dengan Variasi Konsentrasi Diameter zona hambat (mm) Konsentrasi Kekuatan cakram (mg/mL) 30 40 50 60 70 80 Streptomisin (+) Penisilin (+) Akuades (-) (g) 600 800 1000 1200 1400 1600 125 500 M. luteus 6,33 7,33 10,33 9,33 8,33 7,60 45,00 P. fluorescens 5,67 7,00 8,33 5,67 5,00 4,67 40,00 -

Tabel di atas menunjukkan bahwa hasil pengukuran diameter zona hambat terhadap bakteri M. luteus mengalami kenaikan diameter zona hambat pada konsentrasi 30-50 mg/mL., yaitu sebesar 6,33; 7,33; dan 10,33 mm. Diameter zona hambat mengalami penurunan pada konsentrasi 60-80 mg/mL, yaitu sebesar 9,33; 8,33; dan 7;60 mm. Hal ini ditunjukkan dengan kecilnya nilai diameter zona hambat bila dibandingkan dengan nilai zona hambat pada konsentrasi 50 mg/mL, yaitu sebesar 10,33 mm. Hasil pengukuran diameter zona hambat untuk bakteri P. fluorescens tiap-tiap konsentrasi adalah pada konsentrasi 30 mg/mL diperoleh 5,67 mm, konsentrasi 40 mg/mL diperoleh 7,00 mm. Diameter zona hambat mengalami kenaikan pada konsentrasi 50 mg/mL, yaitu 8,33 mm. Diameter zona hambat mengalami penurunan pada konsentrasi 60-80 mg/mL, yaitu sebesar 5,67; 5,00; dan 4,67 mm. Kenaikan diameter zona hambat berbanding lurus dengan konsentrasi. Semakin besar konsentrasi maka diameter zona hambat yang dihasilkan juga semakin besar. Penurunan diameter zona hambat ini disebabkan karena bakteri

mengalami resistensi terhadap ekstrak daun teh tua. Resistensi sel bakteri adalah suatu sifat tidak terganggunya kehidupan sel bakteri oleh antibakteri atau antibiotik. Mekanisme resistensi suatu bakteri terhadap antibakteri yaitu perubahan tempat kerja (target site) obat pada bakteri, bakteri menurunkan permeabilitas dinding selnya sehingga senyawa polifenol sulit masuk ke dalam sel, inaktivasi polifenol oleh bakteri, bakteri membentuk jalan pintas untuk menghindari tahap yang dihambat oleh polifenol, dan meningkatkan produksi enzim yang dihambat oleh polifenol (Ganiswarna, S.G., et.al, 1995 dalam Faradisa 2008). Terjadinya mekanisme resistensi bakteri terhadap antibakteri, menyebabkan terbentuknya beberapa populasi bakteri yang resisten, sehingga zona hambat di sekitar cakram kecil. Kenaikan dan penurunan zona hambat terhadap bakteri M. luteus dan P. fluorescens dapat dilihat pada grafik di bawah ini:
12 D i a m e te r z o n a h a m b a t 10 8 6 4 2 0 30 40 50 60 70 80 Konsentrasi M. luteus P. fluorescens

Gambar 4.4 Grafik Hasil Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Akuades

Gambar 4.4 menunjukkan variasi konsentrasi ekstrak tidak berpangaruh pada aktivitas antibakteri, meskipun grafik di atas menunjukkan pada konsentrasi 50 mg/mL terlihat sebagai titik optimum. Akan tetapi, melalui uji statistik perlakuan variasi konsentrasi pada penelitian ini tidak berbeda nyata. Konsentrasi

sampel yang semakin tinggi tidak selamanya memberikan penghambatan pertumbuhan pada bakteri, karena ada faktor lain yang dapat mempengaruhi penghambatan, yaitu kecepatan aktivitas antibakteri. Menurut Nirbita (2002) dalam Kurniawan (2006) menyatakan bahwa kecepatan aktivitas antibakteri dari sampel ke dalam medium lebih rendah daripada kecepatan pertumbuhan bakteri, maka peningkatan konsentrasi tidak akan meningkatkan penghambatan pada pertumbuhan. Hasil uji efektivitas antibakteri terhadap M. luteus dan P. fluorescens, menunjukkan bahwa daya hambat ekstrak kasar daun teh tua pada bakteri M. luteus (gram positif) lebih besar daripada bakteri P. fluorescens (gram negatif). Hal ini disebabkan dari sifat dinding sel bakteri gram positif dan gram negatif. Bakteri M. luteus (gram positif) memiliki dinding sel bakteri yang berlapis tunggal dan tersusun atas peptidoglikan (protein dan gula) serta lipid dengan kadar rendah (1-4 %), sehingga ekstrak akuades lebih mudah merusak dinding sel bakteri ini. Kepolaran senyawa aktif dalam daun teh tua yang mengakibatkan senyawa lebih mudah merusak dinding sel. Dinding sel bakteri P. fluorescens (gram negatif) lebih sulit dirusak oleh senyawa yang bersifat polar, karena struktur dinding sel bakteri ini berlapis tiga yang tersusun atas yaitu lapisan luar berupa lipoprotein, lapisan tengah berupa lipopolisakarida dan lapisan dalam berupa peptidoglikan. Kandungan lipid pada gram negatif memiliki kadar yang tinggi (11-22 %), sehingga ekstrak akuades lebih sulit merusak dinding sel bakteri ini. Terjadinya kerusakan, disebabkan adanya interaksi antara senyawa tanin dengan sel bakteri, sehingga dapat menggangu kestabilan dinding sel.

Ketidakstabilan pada dinding sel dan membran sitoplasma bakteri menyebabkan fungsi permeabilitas selektif, fungsi pengangkutan aktif, pengendalian susunan protein dari sel bakteri menjadi terganggu. Proses interaksi tersebut dapat digambarkan dalam bentuk reaksi di bawah ini:
O OH CH2OH O G NH O C CH3 glutamat aa3 alanin alanin aa3 glutamat CH3 O C NH O OH
G

CH2OH O O H H3C alanin C O

M
C O

OH O OH O OH OH HO O OH OH HO O OH OH OH OH OH OH OH

alanin H3C H C O O C O

CH2OH

O CH2OH

Peptidoglikan
CH2OH O OH G NH O C CH3 glutamat aa3 alanin alanin aa3 glutamat CH3 O C NH O OH
G

Katekol

CH2OH O O H H3C alanin OH HO C O

M
C O

O OH O OH O OH OH HO O

OH OH OH OH OH OH OH OH

alanin H3C H C O O C O

CH2OH

O CH2OH

Gambar 4.5 Reaksi Peptidoglikan dengan Katekol Peptidoglikan terdiri atas 2 jenis glikan (amino-gula), yaitu asam N-asetil muramat dan N-asetil glukosamin. Keduanya dihubungkan dengan ikatan glikosidik. Pembentukan peptidoglikan melalui sintesis 2 jenis amino-gula di sitoplasma, transfer amino-gula dari sitoplasma ke periplasma oleh pembawa lipid membran sel, polimerisasi peptidoglikan di sisi luar membran sel, dan transpeptida. Penelitian ini menggunakan kontrol negatif air. Hasilnya air tidak mampu menghambat bakteri. Hal ini berarti penghambatan pertumbuhan bakteri M. luteus dan P. fluorescens murni dari ekstrak daun teh tua. Kontrol positif yang

digunakan dalam penelitian ini ada 2 yaitu antibiotik penisilin sebagai kontrol untuk bakteri M. luteus (gram positif), karena bakteri tersebut peka terhadap penisilin dan antibiotik streptomisin digunakan sebagai kontrol untuk bakteri P. fluorescens karena bakteri tersebut bersifat resisten terhadap penisilin melainkan sangat peka terhadap streptomisin. Hasil diameter zona hambat pada Tabel 4.6 menunjukkan bahwa kontrol positif penisilin memberikan nilai hambatan yang lebih besar, yaitu sebesar 45 mm, dibandingkan dengan kontrol positif streptomisin, yaitu sebesar 40 mm. Hal ini dikarenakan penisilin bersifat bakterisidal (membunuh bakteri), sedangkan streptomisin bersifat bakteriostatik (menghambat bakteri). Hasil uji Anova Lampiran 6 menunujukkan bahwa F
hitung

<F

tabel..

Hal

ini berarti pemberian ekstrak dengan konsentrasi yang berbeda tidak berpengaruh yang nyata pada pertumbuhan bakteri M. luteus dan bakteri P. fluorescens. 4.6 Hasil Penelitian tentang Pemanfaatan Daun Teh Tua sebagai Antibakteri dalam Perspektif Islam Hasil penelitian tentang uji efektivitas antibakteri ekstrak kasar daun teh tua adalah ekstrak daun teh tua cukup efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri M. luteus dan P. fluorescens. Kemampuan ekstrak daun teh tua bersifat menghambat saja. Hal ini dikarenakan diameter zona hambat yang diperoleh kecil sebesar 10,33 dan 8,33 mm, masuk dalam kategori sedang. Bagian tanaman teh yang belum pernah dimanfaatkan oleh masyarakat adalah daun teh tua. Hal ini menunjukkan bahwa setiap bagian dari tanaman baik pucuk maupun selain pucuk daun memiliki manfaat, oleh sebab itu Allah

menciptakan sesuatu di muka bumi ini tidak sia-sia. Sebagaimana Firman Allah dalam surat Shaad ayat 27:

Dan kami tidak menciptakan langit dan bumi dan apa yang ada di antara keduanya dengan sia-sia (tanpa hikmah) . Ayat di atas dipertegas dengan ayat selanjutnya. Firman Allah dalam alQur an surat Al-Baqarah ayat 69:

Dialah (Allah), yang menjadikan segala yang ada di bumi untuk kamu. Al-Qur an memerintahkan kepada manusia untuk memanfaatkan kekayaan alam dengan cara tidak boleh melakukan pemborosan dan dilarang merusak sumber alam dan lingkungan hidup. Kekayaan alam ini sebagai sumber kehidupan bagi kesejahteraan manusia. Penjelasan lain dijelaskan dalam al-Qur an surat Asy-Syu ara ayat 7:

Dan apakah mereka tidak memperhatikan bumi, berapakah banyaknya kami tumbuhkan di bumi ini berbagai macam tumbuh-tumbuhn yang baik? Shihab (2002) menjelaskan bahwa Allah menumbuhkan dari berbagai macam tumbuhan yang baik, yaitu subur dan bermanfaat, seperti halnya tanaman teh, khususnya bagian daun yang tua (selain pucuk daun) yang di dalamnya banyak manfaatnya bagi manusia, yaitu sebagai obat-obatan. Penelitian ini

bertujuan untuk memanfaatkan daun teh tua sebagai antibakteri. Pemanfaatan

ekstrak daun teh tua sebagai bahan pengawet atau pengobatan pada ikan akibat bakteri. Hal ini merupakan bentuk aplikasi dari potensi daun teh tua sebagai antibakteri, sehingga dapat memberikan informasi kepada masyarakat tentang penggunaan bahan alami sebagai alternatif dari penggunaan bahan sintesis. Bahan alami memiliki kelebihan dan aman untuk dikonsumsi. Berdasarkan uraian di atas memberikan motivasi kepada manusia untuk mengembangkan ilmu pengetahuan. Manusia sebagai makhluk yang berakal mempunyai tugas, kewajiban dan tanggung jawab terhadap alam sekitarnya. Hal ini dijelaskan dalam Firman Allah surat Az-Zumar ayat 9:

Katakanlah: "Adakah sama orang-orang yang mengetahui dengan orang-orang yang tidak mengetahui?" Sesungguhnya orang yang berakallah yang dapat menerima pelajaran . Ayat di atas mengajak manusia untuk berpikir dengan beragam bentuk tentang segala hal, kecuali tentang zat Allah. Berpikir tidak hanya terbatas pada segi-segi materiil, namun menyentuh sisi-sisi maknawi (Qardhawi, 1998). Hasil uji kimia golongan seyawa aktif ekstrak daun teh tua pada penelitian ini adalah alkaloid, katekin dan tanin. Ketiga senyawa tersebut banyak ditemukan pada tanaman. Hal ini menunjukkan bahwa semua ciptaan Allah merupakan nikmat yang dianugerahkan kepada makhluk-Nya dan tanda-tanda kekuasaan Allah bagi orang-orang yang mau berpikir tentang kebesaran Allah.

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan 1) Pelarut yang lebih baik hasil uji efektivitas antibakteri pada konsentrasi 30 mg/mL adalah akuades. Ekstrak akuades dianggap cukup efektif sebagai antibakteri dengan nilai zona hambat sebesar 6,33 mm untuk M. luteus dan 5,67 mm untuk P. fluorescens. 2) Hasil identifikasi golongan senyawa aktif dalam ekstrak kasar daun teh tua adalah alkaloid , katekin dan tanin. 3) Hasil uji efektivitas antibakteri dengan berbagai konsentrasi terhadap bakteri M. luteus dan P. fluorescens menunjukkan bahwa tidak ada pengaruh konsentrasi terhadap aktivitas antibakteri. Hal ini ditunjukkan dari uji statistik bahwa F perlakuan.
hitung

Ftabel , jadi tidak terdapat pengaruh pada

5.2 Saran Perlu adanya penelitian lebih lanjut penentuan jenis senyawa aktif yang efektif sebagai antibakteri dalam daun teh tua terhadap bakteri M. luteus dan P. fluorescens dengan cara KLTA dan KLTP serta identifikasi dengan FTIR.

DAFTAR PUSTAKA

Ahmad, 2006, Anti Inflammatory Activities of Nigella sativa Linn (Kalongi, black seed), (Online), http://lailanurhayati.multiply.com/jour nal. Diakses 15 Maret 2008. Alamsyah, N. A., 2006, Taklukkan Penyakit dengan Teh Hijau, Penerbit Agrimedia Pustaka, Jakarta. Anonymous, 2008a, Teh (Camellia sinensis [L.] Kuntze), http://kongkow.info/index.php?topic=1784.240, Diakses Tanggal 24 Januari 2008. , 2008b, Polifenol, httpen.wikipedia.orgwikiPolyphenol.htm, Diakses tanggal 11 Maret 2008 . Ardiansyah, 2005, Daun Beluntas sebagai Bahan Antibakteri dan Antioksidan, (Online),http://www.beritaiptek.com/zberita-beritaiptek-2005-05-31Daun-Beluntas-Sebagai-Bahan-Antibakteri-dan-Antioksidan.shtml, Diakses tanggal 12 Maret 2008. Ayu, C. K., 2004, Study Aktivitas Antibakteri dan Antioksidan pada 10 Merk Teh Hijau yang Beredar di Pasaran Kota Malang, Skripsi Mahasiswa Jurusan Teknologi Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Brawijaya Malang. Barron, J., 2001, The Truth About Ellagic Acid, httpwww.jonbarron.orgbaselinehealth-program09-01-2001. Diakses Tanggal 7 April 2009 Brock, T.D., Madigan, M.T., Martinko, J.M., And Jack, P., 1994, Biology of Microorganisms Seven Edition, Prentice Hall, Englewood Cliffs, New Jersey, p. Dewi, A. S., 2004, Identifikasi dan Studi Aktivitas Antioksidatif Flavonoid dari Ekstrak Etanol 70 % Propolis Lebah (Apis mellifera), Skripsi Mahasiswa Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya Malang. Entjang, I., 2003, Mikrobiologi dan Parasitologi untuk Akademi Keperawatan dan Sekolah Tenaga Kesehatan yang Sederajat, Penerbit PT Citra Aditya Bakti, Bandung.

Faradisa, M., 2008, Uji Efektifitas Antimikroba Senyawa Saponin dari Batang Tanaman Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi Linn), Skripsi Mahsisiwi Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri (UIN) Malang, Malang. Fardiaz, S, 1987, Penuntun Praktek Mikrobiologi Pangan, IPB, Bogor. Fulder , S., 2004, Khasiat Teh Hijau, Prestasi Pustaka , Jakarta. Guether, E., 2006, Minyak Atsiri, Jilid I, (diterjemahkan oleh Ketaren. S.), Universitas Jakarta, Jakarta. Hadiwiyoto, S., 1993, Teknologi Hasil Perikanan, Penerbit Liberty, Yogyakarta. Handajani, H., dan Samsundari, S., 2005, Parasit dan Penyakit Ikan, Universitas Muhammadiyah Malang Press, Malang. Hapsari, R., 2007, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Jarak (Jatropha curcas L.), Daun Ketepeng (Cassia alata L.), dan Daun Pepaya (Carica papaya L.) terhadap Pertumbuhan Bakteri (Aeromonas hydrophila) secara in Vitro, (abstrak), Diakses tanggal 17 April 2009. Harborne J.B., 1987, Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro, Penerbit ITB, Bandung. Hartini, S., Y., 2004, Daya Antibakteri Campuran Ekstrak Etanol Buah Adas Etanol Buah Adas (Foeniculum vulgare Mill) dan Kulit Batang Pulasari (Alyxia reinwardtii BL), Jurnal Penelitian Fakultas Farmasi, Universitas Gadja Madah Yogyakarta. Hukmah, S., Aktivitas Antioksidan Katekin dari Teh Hijau (Camellia Sinensis O.K. Var. Assamica (mast)) Hasil Ekstraksi dengan Variasi Pelarut dan Suhu, Skripsi Mahasiswi Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri (UIN) Malang. Indrayani, L., dkk., 2006, Skrining Fitokimia dan Uji Toksisitas Ekstrak Daun Pecut Kuda (Strchytarpheta jamaicensis L. Vahl) terhadap Larva Udang Artemia salina Leach, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Kristen Satya Wacana Salatiga. Inglis, V., Robert, R., Bromage, N., 2001, Bacterial Diseases of Fish, Blackwell Science company, Australia.

Jambang, N., 2004, Study Aktivitas Antibakteri dan Antioksidan pada 10 Merk Teh Hitam yang Beredar di Pasaran Kota Malang, Skripsi Mahasiswa Jurusan Teknologi Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Brawijaya Malang. Jogjavet, 2008, Pseudomonad Septicemia,httpjogjavet.wordpress.com20080318 pseudomonad septicemia.htm.Diakses tanggal 17 Juli 2008. Kurniawan, A., 2006, Pengujian Aktivitas Antibakteri dan Antioksidan secara In Vitro pada Ekstrak Herba Pegagan (Centella asiatica) Segar, Ekstrak Bubuk Kering dan Effervescent Pegagan, Skripsi Mahasiswa Jurusan Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Brawijaya Malang. Kurrata, G., 2007, Pengaruh Isolat Bakteri Antagonis Pseudomonas fluorescens terhadap Sclerotium rolfsii Sacc. Penyebab Penyakit Rebah Semai pada Kedelai, Skripsi Mahasiswa Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan, Fakultas Pertanian, Universitas Brawijaya Malang. Khopkar, S. M., 2003, Konsep Dasar Kimia Analitik, diterjemahkan oleh A. Saptorahardjo, UI Press, Jakarta. Lenny, S., 2006, Senyawa Terpenoida dan Steroida, Karya Ilmiah Fakultas MIPA, Universitas Sumatera Utara, Medan. Lutfillah, M., 2008, Karakterisasi Senyawa Alkaloid Hasil Isolasi dari Kulit Batang Angsret (Spathoda campanulata Beauv) Serta Uji Aktivitasnya Sebagai Antibakteri Secara In Vitro, Skripsi Mahasiswa Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Brawijaya, Malang. Manan, M. H. A., 2008, Membuat Reagen Kimia di Laboratorium, Bumi Aksara, Jakarta. Naim, R., 2004, Senyawa Antimikroba dari Tanaman, IPB, Bogor, http64.203.71. 11kompas-cetak040915sorotan1265264.htm.htm. Diakses Tanggal 7 April 2008. Pambayun, R., dkk., 2007, Kandungan Fenol dan Sifat Antibakteri dari Berbgai Jenis Ekstrak Produk Gambir (Uncaria Gambir Roxb), Jurusan Teknologi Pertanian, Fakultas Paertanian, Universitas Sriwijaya Palembang. Diakses tanggal 5 Februari 2009. Pasya, A. F., 2004, Dimensi Sains dan Al-Qur'an Menggali Ilmu Pengetahuan dari Al-Qur'an, Penerbit Tiga Serangkai, Solo.

Pelczar, M. J. dan Chan, E.C.S., 1986, Dasar-Dasar Mikrobiologi, UI Press, Jakarta. Purwoko, T., 2007, Fisiologi Mikroba, PT Bumi Akasara, Jakarta. Pratama, 2005, Pengaruh Ekstrak Serbuk Kayu Siwak (Salvadora Persica) terhadap Pertumbuhan Bakteri Streptococcus Mutans dan Staphylococcus Aureus dengan Metode Difusi Agar, Skripsi Mahasiswa Biologi, ITS Surabaya. Qardhawi, Y., 1998, Al-Quran Berbicara tentang Akal dan Ilmu Pengetahuan, Gema Insani Press, Jakarta. Robinson, T., 1995, Kandungan Senyawa Organik Tumbuhan Tinggi, diterjemahkan oleh Prof. Dr. Kosasih Padmawinata, ITB, Bandung. Roberts, S., Breed, E. G. D., Muray, Nattan R., Smith, 1957, Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, Baltimore the Willians and Malkins Company. Runadi, D., 2007, Isolasi dan Identifikasi Alkaloid dariHerba Komfrey (Svmphytum officinale L.), Penelitian Mahasiswa Fakultas Farmasi, Universitas Padjajaran Jatinangor. Safera, Windy, 2005, Optimasi Waktu Ekstraksi Trthadap Kandungan Tanin pada Bubuk Ekstrak Daun Jambu Biji serta Analisis Finansialnya, Mahasiswi Jurusan Teknologi Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Unuversitas Brawijaya Malang. Sastrohamidjojo, H. 1995. Sintesis Bahan Alam. Gajah Mada University Press. Yogyakarta. Setiawati, I dan Nasikun, 1991, Teh Kajian Sosial Ekonomi, Aditya Media, Yogyakarta. Setyamidjaja, D., 2000, Teh Budidaya dan Pengolahan Pascapanen, Penerbit Kanisius, Yogyakarta. Soebagio, B., 2007, Pembuatan Gel Dengan Aqupec HV-505 dari Ekstrak Umbi Bawang Merah (Allium cepa, L.) sebagai Antioksidan, Jurnal Penelitian Dosen Fakultas Farmasi Universitas Padjajaran. Diakses tanggal 16 April 2009. Soetan, K., Oyekunle, M., Aiyelaagbe, O., and Fafunso, M., 2006, Evaluation of The Antimicrobial Activity of Saponins Extract of Sorgum Bicolor L. Moench, African Journal of Biotechnology, Vol 5 (23): 2405-2407.

Sudarmadji, dkk., 2007, Analisis Bahan Makanan dan Pertanian, Liberty, Yogyakarta. Suharja, 2008, Industri Kulit Kekurangan Bahan Baku, http://www.tripod.com/industri_kulit_01.html. Diakses tanggal 1 November 2008. Suriawiria, U., 1989, Pengantar Mikrobiologi Umum, Penerbit Angkasa, Bandung. Shihab, Q., 2002, Wawasan Al-Qur'an, http://www.media.isnet.orgislamQuraish WawasanIptek2.html. Diakses tanggal 13 Januari 2009. Thiagarajan, S., 2006, Micrococcus, http://www.emlab.comssamplingenv-report 12-2006.html.mht. Diakses tanggal 18 Juli 2008. Tuminah, S., 2004, Teh (Camellia Sinensis O.K. v. Assamica (mast)) sebagai Salah Satu Sumber Antioksidan, pusat penelitian dan pengembangan pemberantasan penyakit, balai penelitian dan pengembangan kesehatan, departemen kesehatan RI, Jakarta, cermin dunia kedokteran No. 144, 2004. Untari, S., 2004, Penyamakan Kulit Kelinci dengan Teknologi Tepat guna sebagai Bahan Kerajinan Kulit dan Sepatu dalam Menunjang Agribisnis Ternak Kelinci, Balai Besar Kulit, Karet dan Plastik, Jl. Sokonandi No. 9, Yogyakarta. Volk.W.A dan M.F Wheeler, 1993, Mikrobiologi Dasar, Alih Bahasa: Markham PT. Gelora Aksara Pratama, Jakarta. Yitnosumarto, S., 1993, Percobaan Perancangan, Analisis, dan Intrpretasinya, PT Gramedia Pustaka Utama, Jakarta. Zakaria, Z.A., Zaiton, H., Henie, E.F.P., Jais, A. M.M., and Zainuddin, E.N.H., 2007, In Vitro Antibacterial Activity of Averrhoa bilimbi L. Leaves and Fruits Extracts, International Journal of Tropical Medicine, (Online), 2(3):96-100,http://www.medwelljournals.com/fulltext/ijtm/2007/96100 .pdf, diakses 1 Desember 2008. Zulaekah, S., dan Nur. W, Endang, 2005, Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Daun Teh pada Pembuatan Telur Asin Rebus terhadap Jumlah Bakteri dan Daya Terimanya, Jurnal Penelitian Sains Dan Teknologi, vol. 6, no. 1, Program Study Gizi Fakultas Ilmu Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta.

LAMPIRAN

Lampiran 1. Diagram Alir Penelitian Daun Teh Tua - preparasi sampel Sampel - ekstraksi dengan cara maserasi dengan pelarut akuades dan etanol. Ekstrak akuades Ekstrak etanol - identifikasi golongan senyawa aktif - uji antibakteri I Hasil terbaik - uji antibakteri II (diulang 3 kali) Hasil terbaik

Keterangan:
-

Uji antibakteri I dengan konsentrasi ekstrak 30 mg/mL Uji antibakteri II dengan variasi konsentrasi ekstrak

Lampiran 2. Skema Kerja L. 2.1. Preparasi Sampel Daun Teh Tua Segar - dicuci bersih - dilakukan proses pelayuan pada suhu 30 oC - dipotong kecil-kecil dan dihaluskan Sampel

L. 2. 2. Ekstraksi Daun Teh dengan Metode Maserasi 50 g sampel - direndam dalam 200 mL pelarut - diaduk dengan shaker berkekuatan 120 rpm selama 24 jam - larutan disaring

Residu

Filtrat - dipekatkan dengan rotary evaporator

Ekstrak pekat Keterangan: Pelarut yang digunakan adalah akuades dan etanol.

L 2.3 Identifikasi Golongan Senyawa Aktif L. 2.3.1 Uji Alkaloid 0,5 g ekstrak sampel - ditambahkan 0,5 mL HCl 2 % - ditambahkan 2-3 tetes reagen dragendorf dan 2-3 tetes Mayer Hasil

L. 2.3.2 Uji Katekin 0,5 g ekstrak sampel - dididihkan dengan 1-2 mL HCl 2 M Hasil L. 2.3.3 Uji Tanin 0,5 g ekstrak sampel Filtrat dimasukkan dalam tabung reaksi ditambahkan dengan 50 mL air panas dididihkan selama 15 menit disaring

Filtrat diambil 5 mL ditambahkan 2-3 tetes FeCl 1 %

Filtrat diambil 5 mL ditambahkan larutan gelatin

Hijau Kehitaman

Endapan Putih

L.2.3.3.1 Uji Penentuan Jenis Senyawa Tanin 5 mL Filtrat - dimasukkan dalam gelas beker - ditambahkan 2 mL formalin 3 % dan 1 mL HCl pekat - dipanaskan dalam air panas Endapan Merah Muda (Katekol) 5 mL Filtrat - dimasukkan dalam gelas beker - ditambahkan 2 mL formalin 3 % dan 1 mL HCl pekat - dipanaskan dalam air panas Biru Tinta atau Hitam (Tanin Galat)

L.2.3.3.2 Uji Penyamakan 0,5 g kulit kambing - direndam dalam 0,5 gram ekstrak - ditambahkan air 1-2 mL dan 2 tetes FeCl3 1 % - ditunggu selama 2 hari Hasil L. 2.3.4 Uji Saponin 0,5 g ekstrak sampel Hasil ditambahkan 0,5 mL air panas dikocok selama 1 menit diamati busa yang terjadi ditambahkan HCl 1 N

L 2.4 Uji Antibakteri L. 2.4.1 Penyediaan Media 2 g nutrient agar - dilarutkan dalam 100 mL akuades - dipanaskan sampai mendidih - dimasukkan dalam 7 tabung reaksi (5 tabung berisi 10 mL untuk uji antibakteri dan 2 tabung berisi 5 mL untuk peremajaan) dan ditutup dengan kapas - disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 oC selama 15 menit - diletakkan dalam posisi miring selama 24 jam pada suhu ruang Media agar padat miring L.2.4.2 Peremajaan Biakan Murni M. luteus dan P. fluorescens Biakan murni bakteri - digoreskan pada media padat agar miring secara aseptis - tabung reaksi ditutup dengan kapas - diinkubasi selama 19 jam (M. luteus) dan 20 jam (P. fluorescens) pada suhu 25 oC di dalam inkubator - diambil satu ose kemudian dilarutkan dalam 10 mL akuades steril Larutan biakan murni L.2.4.3 Pembuatan Kurva Pertumbuhan Bakteri Satu tabung subkultur biakan murni - diambil 1 ose dan ditanam dalam 100 ml media pertumbuhan (NB) - diinkubasi pada inkubator pada suhu 25 0C - diambil 1 mL setiap 2 jam - diukur densitas optiknya pada 620 nm terhadap M. luteus dan P. fluorescens. Data hasil pengukuran

L.2.4.4 Pembuatan dan Peresapan pada kertas cakram Kertas wathman (diameter 5 mm) - dimasukkan cawan petri - disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 oC dan tekanan 15 psi selama 15 menit - didinginkan Kertas cakram - ditetesi dengan 20 L kontrol positif, kontrol negatif dan ekstrak kasar Hasil L.2.4.5 Uji Efektivitas Antibakteri 10 mL media agar padat - dipanaskan hingga mencair - didinginkan sampai suhu 40 oC - ditambahkan 0,1 mL masing-masing larutan biakan aktif dan dihomogenkan - dibiarkan hingga memadat Media bakteri - dipasangi kertas cakram yang telah diresapkan dalam kontrol dan ekstrak - diinkubasi pada suhu 25 oC selama 34 jam (Micrococcus luteus) dan 36 jam (P. fluorescens) - diamati pertumbuhan bakteri dan diukur diameter zona hambatannya Hasil

Keterangan : - Penetesan kontrol positif : 0,4 L penisilin G dan 1,6 L streptomisin - Penetesan kontrol negatif : 20 L pelarut akuades dan etanol - Penetesan ekstrak : 20 L ekstrak dengan konsentrasi 30, 40, 50, 60, 70, dan 80 mg/mL

Lampiran 3. 3.1 Perhitungan Konsentrasi Ekstrak dan Kontrol Positif 1. Konsentrasi Ekstrak (mg/mL) 80 = 800 mg/10 mL jadi 800 mg ekstrak dilarutkan sampai volume 10 mL 70 = 700 mg/10 mL jadi 8,75 mL dalam ekstrak 80 mg/mL dilarutkan sampai volume 10 mL 60 = 600mg/10 mL jadi 8,57 mL dalam ekstrak 70 mg/mL dilarutkan sampai volume 10 mL 50 = 500 mg/10mL jadi 8,33 mL dalam ekstrak 60 mg/mL dilarutkan sampai volume 10 mL 40 = 400 mg/10mL jadi 8 mL dalam ekstrak 50 mg/mL dilarutkan sampai volume 10 mL 30 = 300 mg/10mL jadi 7,5 mL dalam ekstrak 40 mg/mL dilarutkan sampai volume 10 mL

Keterangan: Dilakukan pengenceran pada tiap-tiap konsentarsi yaitu 30, 40, 50, 60 dan 70 mg/mL. Dihitung dengan rumus di bawah ini: M 1 V1 = M 2 V 2 Misalnya untuk konsentarsi 70 mg/mL. Diketahui: M1 = 80 mg/mL M2 = 70 mg/mL Ditanya: V2......? Jawab: M1 V1 = M2 V2 80 V1 = 70 x 10 V1 = 700/80 V1 = 8,75 mL V2 = 10 mL

3.2 Perhitungan Kadar Ekstrak Kasar Daun Teh Tua dalam 1 Cakram Tiap-tiap Konsentrasi Pada penelitian ini 1 cakram ditetesi dengan 20 L ekstrak dan kontrol (Zakaria et al., 2007), maka kekuatan cakramnya adalah: 1. Ekstrak Kasar Daun Teh Tua (Selain Pucuk Daun) 30 mg/mL = 30 g/L Jadi 30 g/L x 20 L = 600 g 40 mg/mL = 40 g/L Jadi 40 g/L x 20 L = 800 g 50 mg/mL = 50 g/L Jadi 50 g/L x 20 L = 1000 g 60 mg/mL = 60 g/L Jadi 60 g/L x 20 L = 1200 g 70 mg/mL = 70 g/L Jadi 70 g/L x 20 L = 1400 g 80 mg/mL = 80 g/L Jadi 80 g/L x 20 L = 1600 g 2. Kontrol Positif (Soetan et al., 2006) Penisilin 25 mg/mL = 25 g/L Jadi 25 g/L x 20 L = 500 g Streptomisin 6,25 mg/mL = 6,25 g/L Jadi 6,25 g/L x 20 L = 125 g

3.3 Pembuatan Reagen 1. Pembuatan larutan HCl 1 N BJ HCl pekat Konsentrasi BM HCl n Normalitas HCl = 1,19 g/mL = 1190 g/L = 37 % = 36, 42 g/mol = 1 (jumlah atom H) = n x Molaritas HCl =1x

37 % BJ HCl BM HCl pekat

37 % 1190 g / L 36,42 g / mol

= 12,08 N N1 x V1 = N2 x V2 12,08 N x V1= 1 N x 100 mL V1= 8,27 mL = 8,3 mL Jadi, untuk membuat larutan HCl 1 N diambil sebanyak 8,3 mL larutan HCl pekat 37 %, dilarutkan dalam labu ukur 100 mL. 2. Pembuatan HCl 2 % M 1 x V1 37 % x V1 V1 = M 2 x V2 = 2 % x 10 mL = 0,5 mL

Jadi, untuk membuat larutan HCl 2 % diambil sebanyak 0,5 mL larutan HCl pekat 37 %, dilarutkan dalam labu ukur 10 mL.

3. Pembuatan Reagen Dragendorff I. 0,6 g bismutsubnitrat dalam 2 mL HCl pekat dan 10 mL H2O. II. 6 g KI dalam 10 mL H2O. Kedua larutan tersebut dicampur dengan 7 mL HCl pekat dan 15 mL H2O (Harborne, 1987). 4. Pembuatan Reagen Mayer HgCl2 Akuades 1,358 g 60 mL KI Akuades 5g 10 mL

Cara membuatnya adalah: tuangkan larutan HgCl2 ke dalam larutan KI, encerkan dengan akuades sampai volume larutan menjadi 100 mL (Manan, 2006). 5. Pembuatan FeCl3 1 %

gram , Jadi 1 gram FeCl3 dilarutkan dalam 100 mL air. 100 mL

6. Pembuatan Na-asetat 1 %

gram , Jadi 1 gram Na-asetat dilarutkan dalam 100 mL air. 100 mL

7. Pembuatan larutan gelatin 25 gram gelatin dicampur dengan 500 mL larutan NaCl. Campuran tersebut dipanaskan sampai gelatin larut semua, kemudian didinginkan. Setelah itu ditambahkan larutan NaCl jenuh sampai volume 1 liter.

8. Pembuatan HCl 2 M BJ HCl pekat Konsentrasi BM HCl Molaritas = 1,19 g/mL = 1190 g/L = 37 % = 36, 42 g/mol =

37 % x Bj HCl pekat BM HCl pekat 37 % 1190 g / L 36,42 g / mol

= 12,08 M M1 x V1 = M1 x V1

12,08 M x V1 = 2 M x 100 mL V1 = 20 M x 100 mL 12,08M

= 16,5 mL Jadi, diambil sebanyak 16,5 mL larutan HCl pekat 37 %, dilarutkan dalam labu ukur 100 mL.

Lampiran 4. Data Kurva Pertumbuhan Bakteri dan Hasil Uji Efektivitas Antibakteri Daun Teh Tua dan Muda A. Data Absorbansi Pertumbuhan Bakteri Micrococcus luteus No. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. Waktu inkubasi (jam) 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 Absorbansi (A) 0,00 0.01 0.02 0,03 0,05 0,08 0,09 0,10 0,10 0,11 0,11 0,12 0,13 0,15 0,17 0,18 0,18 0,22 0,22 0,22 0,24 0,25 0,23 0,23 0,15 0,15 0,14 0,13

B. Data Absorbansi Pertumbuhan Bakteri Pseudomonas fluorescens No. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. Waktu inkubasi (jam) 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 Absorbansi (A) 0,00 0.01 0.01 0,02 0,04 0,05 0,06 0,07 0,07 0,08 0,09 0,10 0,11 0,12 0,16 0,18 0,19 0,19 0,26 0,25 0,25 0,24 0,24 0,24 0,24 0,21 0,21 0,20

C. Hasil Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Daun Teh Tua (Selain Pucuk Daun) 1. Bakteri M. luteus Konsentrasi Diameter zona hambat (mm) (mg/mL) Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 30 40 50 60 70 80 6 8 5 10 5 12 8 4 12 8 15 6 5 10 14 10 5 5

Rata-rata zona Hambat (mm) 6,33 7,33 10,33 9,33 8,33 7,6

2. Bakteri P. fluorescens Diameter zona hambat (mm) Konsentrasi (mg/mL) Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 30 5 6 6 40 4 7 10 50 5 10 10 60 5 5 7 70 5 6 4 80 4 9 1

Rata-rata zona Hambat (mm) 5,67 7,00 8,33 5,67 5,00 4,67

D. Hasil Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Daun Teh Muda (Pucuk Daun) 1. Data zona hambat senyawa katekin ekstrak daun teh hasil KLT sebagai antibakteri M. luteus Diameter zona hambat (mm) Rata-rata zona No. Cakram hambat (mm) 1 2 3 1. Isolat 1 13,0 12,0 10,0 11,7 2. Isolat 2 14,0 13,0 15,0 14,0 3. Isolat 3 20,0 20,0 18,0 19,3 4. Isolat 4 10,0 10,0 8,00 9,30 5. Isolat 5 22,0 21,0 21,0 21,3 6. Isolat 6 15,0 13,0 15,0 14,3 7. Kontrol (+) 40,0 37,5 35,0 37,5 8. Kontrol (-) 0,00 0,00 0,00 0,00

2. Data zona hambat senyawa katekin ekstrak daun teh hasil KLT sebagai antibakteri P. fluorescens Diameter zona hambat (mm) Rata-rata zona No. Cakram hambat (mm) 1 2 3 1. Isolat 1 18,0 15,0 13,0 15,3 2. Isolat 2 25,0 22,0 21,0 22,6 3. Isolat 3 17,0 18,0 18,0 17,7 4. Isolat 4 2,00 2,00 1,00 1,70 5. Isolat 5 2,00 2,00 1,80 1,93 6. Isolat 6 2,00 2,00 2,00 2,00 7. Kontrol (+) 45,0 40,0 35,0 40,0 8. Kontrol (-) 0,00 0,00 0,00 0,00

Lampiran 5. Ukuran Daerah dan Interpretasinya untuk Kemoterapeutik yang Sering Digunakan
Diameter daerah penghambatan sampai milimeter terdekat Resisten Pertengahan Peka

Antibiotik atau agen kemoterapeutik

Potensi lempengan

Ampisilin S. aureus 10 g 20 atau kurang 21-28 29 atau lebih Semua organisme lain 10 g 11 atau kurang 12-13 14 atau lebih Basitrasin 10 units 8 atau kurang 9-12 13 atau lebih Sefalotin 30 g 14 atau kurang 15-17 18 atau lebih Kloramfenikol 30 g 12 atau kurang 13-17 18 atau lebih Kolistin 10 g 8 atau kurang 9-10 11 atau lebih Eritromisin 15 g 13 atau kurang 14-17 18 atau lebih Kanamisin 30 g 13 atau kurang 14-17 18 atau lebih Linkomisin* 2 g 17 atau lebih Metisilin 5 g 9 atau kurang 10-13 14 atau lebih Asam Nalidiksat 30 g 13 atau kurang 14-18 19 atau lebih Neomisin 30 g 12 atau kurang 13-16 17 atau lebih Novobiosin 30 g 17 atau kurang 18-21 22 atau lebih Oleandomisin 15 g 11 atau kurang 12-16 17 atau lebih Penisilin-G 10 g 20 atau kurang 21-28 29 atau lebih Polimisin-B 300 units 8 atau kurang 9-11 12 atau lebih Streptomisin 10 g 11 atau kurang 12-14 15 atau lebih Sulfonamida 300 g 12 atau kurang 13-16 17 atau lebih Tetrasiklin 30 g 14 atau kurang 15-18 19 atau lebih Vankomisin 30 g 9 atau kurang 10-11 12 atau lebih * Standar tentatif Standar berlaku untuk infeksi saluran urine saja Ukuran daerah tidak berlaku apabila daerah ditambahkan pada medium Lempengan sulfonamida 300 atau 250 g mana saja yang diperoleh di pasaran mungkin digunakan dengan standar penafsiran zona yang sama

Sumber: Volk and Wheeler (1993).

Lampiran 6. 6.1 Hasil Pengamatan Uji Golongan Senyawa Aktif Daun Teh Tua No Perlakuan Hasil Pengamatan 1. Uji alkaloid Ekstrak akudes ditambahkan 0,5 mL HCl 2 Endapan orenge % dan 2-3 tetes reagen Dragendorff ditambahkan 0,5 mL HCl 2 % dan 2-3 tetes reagen Endapan putih Mayer Ekstrak etanol ditambahkan 0,5 mL HCl 2 % dan 2-3 tetes reagen Endapan orange Dragendorff ditambahkan 0,5 mL HCl 2 Endapan putih % dan 2-3 tetes reagen Mayer 2. Uji flavonoid Katekin a Ekstrak akuades dididihkan dengan 1-2 mL HCl 2 M Coklat kuning Ekstrak etanol dididihkan dengan 1-2 mL HCl 2 M Coklat Tanin b Uji FeCl3 Filtrat akuades ditambahkan dengan 2-3 Hijau kehitaman atau biru tua pekat tetes FeCl3 1 % Filtrat etanol ditambahkan dengan 2-3 Hijau kehitaman atau biru tua agak tetes FeCl3 1 % pekat Uji gelatin Filtrat akuades ditambahkan dengan larutan Endapan putih gelatin Filtrat etanol ditambahkan dengan larutan Tidak terbentuk endapan putih gelatin Uji tanin katekol Filtrat akuades

Terbentuk endapan merah muda

- ditambahkan formaldehid 3 % dan HCl pekat (2:1) dan No Perlakuan dipanaskan dalam air panas dengan suhu 90 0C Filtrat etanol ditambahkan formaldehid 3 % dan HCl pekat (2:1) dan dipanaskan dalam air panas dengan suhu 90 0C Uji tanin galat Filtrat akuades dijenuhkan dengan Na-asetat dan ditambahkan FeCl3 1 % Filtrat etanol dijenuhkan dengan Na-asetat dan ditambahkan FeCl3 1 % 3. Saponin Ekstrak akuades ditambahkan air panas dan dikocok selama 1 menit. Jika timbul busa ditambahkan HCl 1 N Ekstrak etanol ditambahkan air panas dan dikocok selama 1 menit. Jika timbul busa ditambahkan HCl 1 N

Hasil Pengamatan

Terbentuk endapan kuning

Terbentuk warna kuning kehijauan

Terbentuk warna kuning kehijauan

Tidak timbul busa

Tidak timbul busa

6.2 Uji Statistik Data pemberian ekstrak dengan konsentrasi yang berbeda terhadap aktivitas bakteri. H0 diterima jika Fhitung Ftabel maka variasi konsentrasi ekstrak tidak terdapat pengaruh pada aktivitas antibakteri terhadap bakteri M. luteus dan P. fluorescens. H1 diterima jika Fhitung Ftabel maka variasi konsentrasi ekstrak terdapat pengaruh pada aktivitas antibakteri terhadap bakteri M. luteus dan P. fluorescens. 1. Bakteri M. luteus Tabel Hasil Uji Antibakteri pada M. luteus Konsentrasi (mg/mL) 30 40 50 60 70 80 Total FK Diameter zona hambat (mm) Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 6 8 5 8 4 10 5 12 14 10 8 10 5 15 5 12 6 5 46 = Y2 / rp = (148)2 / 3 x 6 = 1216,9 JK Total =
i j

Total 19 22 31 28 25 23 148

Rata-rata 6,33 7,33 10,33 9,33 8,33 7,6

53

49

Y 2 - FK
1216,9

= 62 + 82 + ..... + 52 = 197,1 JK Perlakuan =

i

Yij )2 / r - FK

= 192 + 222 + .... + 232 / 3 1216,9 = 31,1 JK Ulangan =

j

Yij ) 2 / p - FK
1216,9

= 462 + 532 + 492 / 6 = 4,1

JK Galat

= JK Total - JK Perlakuan - JK Ulangan = 197,1 31,1 4,1 = 161,9

Tabel Analisis Ragam Satu Arah SK Perlakuan Ulangan Galat percobaan Total db 5 2 10 17 JK 31,1 4,1 161,9 197,1 KT 6,22 2,05 16,19 F Hitung 0,38 0,13 Tabel 1 % 5,64 7,56

Berdasarkan analisis ragam di atas F hitung F tabel (5,10) maka dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak dengan konsentrasi yang berbeda terhadap tidak berpengaruh nyata (p < 0,01) pada aktivitas antibakteri terhadapa bakteri M. luteus, sehingga tidak perlu dilakukan pengujian lebih lanjut dengan uji BNT untuk mengetahui perlakuan mana yang berpengaruh. Jadi, H0 diterima. 2. Bakteri P. fluorescens Tabel Hasil Uji Antibakteri pada P. fluorescens Diameter zona hambat (mm) Konsentrasi (mg/mL) Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 30 5 6 6 40 4 7 10 50 5 10 10 60 5 5 7 70 5 6 4 80 4 9 1 Total FK 28 = Y2 / rp = (109)2 / 3 x 6 = 660,05 JK Total =
i j

Total Rata-rata 17 21 25 17 15 14 109 5,67 7,00 8,33 5,67 5,00 4,67

43

38

Y 2 - FK
660,05

= 62 + 62 + ...+ 12 = 100,95

JK Perlakuan

Yij )2 / r - FK

= 172 + 212 + ..... + 142 / 3 660,05 = 28,28 JK Ulangan =

j

Yij ) 2 / p - FK
660,05

= 282 + 432 + 382 / 6 = 19,45 JK Galat

= JK Total - JK Perlakuan - JK Ulangan = 100,95 28,28 = 53,22 19,45

Tabel Analisis Ragam Satu Arah SK Perlakuan Ulangan Galat percobaan Total db 5 2 10 17 JK 28,28 19,45 53,22 100,95 KT 5,65 9,75 5,32 F Hitung 1,06 1,83 Tabel 1 % 5,64 7,56

Berdasarkan analisis ragam di atas F hitung F tabel (5,10) maka dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak dengan konsentrasi yang berbeda terhadap tidak berpengaruh nyata (p < 0,01) pada aktivitas antibakteri terhadap bakteri P. fluorescens, sehingga tidak perlu dilakukan pengujian lebih lanjut dengan uji BNT untuk mengetahui perlakuan mana yang berpengaruh. Jadi, H0 diterima.

Lampiran 7. Dokumentasi Penelitian A. Preparasi Sampel

Daun Teh Tua

Daun Teh Tua Dipotong-potong

Serbuk Daun Teh Tua

B. Ekstraksi Maserasi Daun Teh Tua

Maserasi Akuades

Maserasi Etanol

Sampel Setelah Dishaker

Penyaringan Daun Teh tua

Ekstrak Dirotary Evaporator

Ekstrak Pekat Akuades dan Etanol

C. Identifikasi Golongan Senyawa Aktif Daun Teh Tua

Uji Alkaloid Etanol dan Akuades Mayer

Uji Alkaloid Etanol dan Akuades Dragendorff

Uji Katekin Akuades

Uji Katekin Etanol

Uji Tanin FeCl3 Akuades

Uji Tanin FeCl3 Etanol

Uji Tanin + Gelatin Akuades dan Etanol

Penentuan Katekol Akuades

Penentuan Katekol Etanol

Tanin Galat Akuades dan Etanol

Uji Saponin Akuades dan Etanol

Uji Penyamakan Kulit Akuades

D. Uji Antibakteri Pembuatan Media Nutirent Agar (NA) dan Nutrient Borth (NB)

Media NA Peremajaan Biakan Murni

Media NB

Hasil peremajaan bakteri Micrococcus luteus

Hasil peremajaan bakteri Pseudomonas fluorescens

Biakan murni bakteri Pembuatan Larutan Biakan

Larutan biakan M. luteus dan P. fluorescens

E. Uji Efektivitas Antibakteri Pelarut Akuades dan Etanol M. luteus P. fluorescens

Ekstrak Akuades

Ekstrak Akuades

Ekstrak Etanol

Ekstrak Etanol

Variasi Konsentrasi M. luteus

Ekstrak Akuades 30 mg/mL

Ekstrak Akuades 40 mg/mL

Ekstrak Akuades 50 mg/mL

Ekstrak Akuades 60 mg/mL

Ekstrak Akuades 70 mg/mL

Ekstrak Akuades 80 mg/mL

P. fluorescens

Ekstrak Akuades 30 mg/mL

Ekstrak Akuades 40 mg/mL

Ekstrak Akuades 50 mg/mL

Ekstrak Akuades 60 mg/mL

Ekstrak Akuades 70 mg/mL

Ekstrak Akuades 80 mg/mL

Kontrol (-) Akuades

Kontrol (-) Etanol

Kontrol (+) Streptomisin F. Alat-alat Penelitian

Kontrol (+) Penisilin

Shaker

Spektronik 20

Autoklaf

Inkubator

Pipet Mikro

This document was created with Win2PDF available at http://www.daneprairie.com. The unregistered version of Win2PDF is for evaluation or non-commercial use only.