PEMBAHASAN
A. IN VITRO MATURASI
Secara umum oosit hewan mamalia harus mengalami dua hal yaitu
pematangan inti dan pematangan sitoplasma untuk dapat mengalami proses
fertilisasi dan perkembangan embrio. Pematangan inti meliputi berbagai
perubahan kronologis tahapan meiosis sedangkan pematangan sitoplasma
merupakan penambahan kompetensi biologis oosit yang meliputi berbagai
perubahan struktur dan biokimia di dalam sel yang memungkinkan oosit untuk
mengekspresikan potensi perkembangannya setelah fertilisasi dan mampu
mendukung pembentukan dan perkembangan embrio preimplantasi (Gordon,
2003), ditandai dengan sejumlah kriteria termaksud organisasi sitoskeletal dari
oosit seperti migrasi kortika granula ke oolemma, peningkatan mitokondria dan
lipid droplet, akan menyebabkan perubahan susunana paratus golgi
dan 8
Aspirasi (menghisap)
sayatan dan injeksi medium.
Maturasi Oosit
Fertilisasi
Kultur in Vitro
Pembekuan Embrio
Program Transfer Embrio
37,5 C.
Permukaan ovarium dibersihkan sekali lagi dari kemungkinan adanya
kotoran
Disposable syringe diisi dengan NaCl Fisiologis 0,9% (1-1,5 ml).
Gunakan jarum suntik ukuran 21 g yang dipasang pada disposable
ovarium dicatat.
Oosit yang didapatkan kemudian dibilas sebanyak tiga kali dengan
NaCl Fisiologis 0,9 % kemudian dipindahkan sementara ke dalam
medium yang sama untuk menunggu proses selanjutnya.
Teknik sayatan
* Maturasi oosit dapat dilakukan pada oosit yang mempunyai kualitas A dan B
B. IN VITRO FERTILISASI
Fertilisasi terdiri dari penyatuan atau fusi dua sel gamet jantan
(spermatozoa) dengan sel gamet betina (ovum) untuk membentuk satu sel
atau zygote. Proses ini terjadi dibawah ampula tuba fallopii (Hafez, 1980).
Fertilisasi In Vitro
Fertilisasi In Vitro dirintis oleh P.C Steptoe dan R.G Edwards (1997).
Merupakan suatu upaya peningkatan produksi didalam menyelamatkan bibit
unggul yang tidak dapat dilakukan dengan fertilisasiin vivo yaitu dengan suatu
teknik pembuahan dimana sel ovum dibuahi diluar tubuh.
Teknologi fertilisasi secara in vitro (FIV) pada ternak, khususnya sapi
merupakan salah satu usaha memanfaatkan limbah ovari dari induk sapi betina
yang dipotong di Rumah Potong Hewan. FIV ini diharapkan dapat memproduksi
embrio sapi dalam jumlah massal untuk dititipkan pada induk resipien, sehingga
dapat diperoleh ternak dalam jumlah banyak untuk meningkatkan populasi ternak
di Indonesia (Kaiin et al., 2008).
In Vitro Fertilization (IVF) Merupakan metode pengamatan terhadap
terjadinya proses fertilisasi dengan cara membuat percobaan pembuahan di luar
tubuh. Menurut Supri Ondho (1998) secara garis besar percobaan IVF meliputi
serangkaian kegiatan berupa mengumpulkan ovarium, koleksi oosit, kapasitasi
spermatozoa, pembuahan dan perkembangan embrio. Berikut ini adalah tahapantahapan fertilisasi In Vitro : Pengumpulan ovarium dari Rumah Pemotongan
Hewan (RPH), Pengumpulan ovarium dilaksanakan dengan cara mengambil
terdiri atas media BO dan BSA 10 mg/ml). Oosit yang telah dicuci kemudian
ditempatkan ke dalam spot SDS + sperma (10 oosit/ spot) dan dikultur selama 6-7
jam dalam inkubator CO2 (Kaiin et al., 2004).
Oosit yang difertilisasi kemudian dicuci dengan media kultur CR1aa + 5%
FCS sambil dihilangkan sel-sel kumulusnya dengan menggunakan pipet. Zigot
kemudian dimasukkan ke dalam spot media kultur yang kemudian dimasukkan ke
dalam inkubator CO2 5%, temperature 38C. Pengamatan perkembangan embrio
dari tahap 2 sel sampai morula/blastosis dilakukan setiap 24 jam selama 6-7 hari
(Margawati et al., 2000; Kaiin et al., 2004).
Keunggulan Fertilisasi In Vitro
Berikut ini adalah beberapa keunggulan dari fertilisasi in vitro :
a. Mempercepat peningkatan populasi dan produksi ternak serat
perbaikan mutu genetis.
b. Memanfaatkan Ovarium dari RPH
c. Perkembangan zigot dapat diamati
d. Pembuahan dapat dilakukan diluar tubuh ternak
C. PEMBEKUAN EMBRIO
Embrio yang mencapai tahap morula atau blastosis dalam kultur in vitro
kemudian dicuci dalam media DPBS mengandung 20% FCS, kemudian
dipindahkan berturut-turut ke dalam media yang mengandung gliserol 3,3%; 6,7%
sampai 10% masing-masing selama 10 menit. Embrio dan gliserol dalam volume
sesedikit mungkin kemudian dimasukkan ke dalam straw bersama dengan kolomkolom media berisi sukrosa yang berfungsi sebagai media pencuci gliserol pada
saat thawing. Setelah itu, straw yang berisi embrio tersebut dibekukan dengan
diatas
pemanfaatan
teknik
non-bedah
membuat
prosedur
lebih
kepanasan 36-48 jam kemudian . Penerima diberikan PGF12-18 jam sebelum sapi
donor sehingga estrus akan sesuai antara donordan penerima .ketika ovulasi telah
berlangsung selama 24 jam, pada saat itu inseminasi biasanya dilakukan .
Biasanya sapi donor diinseminasi pada 12 , 24 dan 36 jam setelah estrus .
PMSG sebagai injeksi tunggal 2000 -3000 IU, atau dua kali suntikan
harian total dosis 28-50 mg FSH - P telah paling umum digunakan untuk
superovulasi sapi. Sebagian besar telah menemukan hasil superovulatory untuk
menjadi lebih ungguldengan FSH - P dibandingkan dengan PMSG ( 40 ) .
Tampaknya ini mungkin terkait denganpendek biologis paruh FSH - P .Awalnya ,
embrio dikumpulkan dengan pembedahan sapi sekitar 4 hari setelah berahi.
Namun, tiga laporan muncul dalam jurnal yang sama pada sukseskoleksi tanpa
pembedahan embrio sapi pada tahun 1976. Pada dasarnya , teknikdijelaskan
melibatkan bagian dari karet kateter diborgol melalui leher rahim danmenjadi
salah satu tanduk rahim pada hari-hari 6 sampai 8 setelah berahi. Embrio
kemudiandikumpulkan oleh sistem tertutup terus menerus atau terputus aliran
( 32) , atau dengan terputusteknik jarum suntik.
Embrio berada dengan mikroskop stereoskopik setelah menetap dan
siphoningatau aspiras, atau setelah penyaringan melalui filter plankton ( 45 ) .
meskipunembrio
biasanya
ditransplantasikan
sesegera
mungkin
setelah
embrio sapi dan untuk menjaga mereka dalam lemari es selama 2-3 hari. Sebagai
alternatif terakhir , embrio dapat dibekukan untuk digunakan di kemudian hari .
Embrio biasanya dibiakkan di sama atau media mirip dengan yang di mana
mereka dikumpulkan . Media harus buffer untuk mempertahankan pH 7,2-7,6 dan
memiliki sebuah osmolaritas sekitar 300 mO. Secara tradisional , embrio
dikumpulkan dalam Jaringan Culture Medium 199 ( TCM 199 ) diperkaya dengan
albumin serum sapi atau panas tidak aktif serum janin anak sapi ( FCS ) dan
antibiotik . Namun, seperti TCM 199 membutuhkan C 0 2 untuk sistem buffer ,
sebagian besar telah diberikan cara untuk fosfat buffered saline Dulbecco itu
( PBS ) diperkaya dengan FCS dan antibiotik . Glukosa dan piruvat sering
ditambahkan untuk jangka panjang budaya . Biasanya , diperkaya dengan PBS 1-2
% FCS digunakan untuk pembilasan embrio dari uterus , sedangkan , embrio yang
dibudidayakan di media yang sama dengan 15 % FCS . Ada bukti bahwa media
yang lebih kompleks seperti Ham ' F - 10 , yang memiliki buffer karbonat ,
menghasilkan hasil yang lebih unggul untuk budidaya jangka panjang embrio
sapi.
Embrio diklasifikasikan dan dievaluasi dengan pemeriksaan morfologi
pada 50-100x pembesaran. Diameter keseluruhan embrio sapi adalah 150-190 pM
termasuk zona pelusida ketebalan 12-15 pM . Diameter keseluruhan dari embrio
tetap hampir tidak berubah dari tahap satu sel sampai ekspansi blastokista.
Umumnya , embrio digambarkan sebagai ke tingkat perkembangan dan kualitas.
Prediktor terbaik dari viabilitas embrio adalah tingkat perkembangan relatif untuk
apa yang seharusnya pada hari tertentu setelah ovulasi . Embrio yang baik
dankualitas yang sangat baik dan pada tahap perkembangan akhir-akhir morula ke
blastosis hasil tingkat kehamilan terbaik . Dianjurkan untuk memilih tahap embrio
untuk sinkroni penerima .
Transfer embrio pada sapi bisa dibuat dengan sukses baik hanya jika
sebelumnya berahi dalam donor dan penerima terjadi dalam waktu 2 hari satu
sama lain . Bergantian , penerima harus sinkron dengan tahap perkembangan
embrio yang telah dibekukan sebelumnya . Penerima dapat disediakan oleh
menjaga kawanan besar untuk memperoleh memanaskan alam atau penerima
dapat disinkronisasi dengan PGF yang jauh lebih ekonomis . Sebagian besar
penerima akan disinkronisasi kimia terlepas dari apakah transfer embrio harus
dilakukan pada transfer embrio pusat atau "on farm " .
Sampai sekarang, sebagian besar transfer embrio pada sapi dilakukan
pembedahan, sedangkan pada saat ini sebagian besar dilakukan dengan
menggunakan metode pembedahan. Bedah transfer dilakukan awalnya dengan
cara insisi mid -line yang mengharuskan umum anestesi dan agak rumit fasilitas .
Selama pertengahan hingga akhir 1970-an , bedah Transfer ini dilakukan dengan
cara sayatan sayap yang cepat dan tidak memerlukan kecanggihan yang sama
dalam fasilitas . Hal ini membuat " on farm " embrio mentransfer mungkin dan
menambahkan perspektif baru pada penggunaan transfer embrio dalam skema
produksi ternak . Baru-baru ini , penggunaan transfer embrio nonsurgical telah
meningkatkan pemanfaatan teknologi ini dalam skema peternakan karena bahkan
kurang rumit persyaratan. Untuk transfer bedah , rahim tanduk berdekatan dengan
ovarium bantalan korpus luteum ( CL ) adalah exteriorized dan embrio disimpan
melalui dinding rahim ke dalam lumen uterus dengan pipet Pasteur atau kateter
intravena.
Teknik transfer embrio non bedah digunakan saat ini melibatkan
penggunaan cassou AI pipet atau alat serupa. Embrio ditempatkan dalam rahim
tanduk berdekatan dengan ovarium menyandang CL dengan melewati pipet
melalui servik , sangat mirip dengan AI . Praktek dan ketangkasan tampaknya
meningkatkan kemampuan seseorang untuk mencapai angka kehamilan yang
tinggi menunjukkan trauma yang ke endometrium mungkin membatasi faktor
dalam metode transfer embrio . Stimulasi serviks dan sengaja pengenalan
kontaminan bakteri tampaknya tidak menjadi penentu utama di bawah keadaan
normal. Dengan latihan dan perhatian terhadap detail , kehamilan tarif dengan
transfer non-bedah bisa mendekati bahwa transfer bedah.
Dengan teknologi yang ada , rata-rata untuk masing-masing donor sapi
superovulasi akan akan delapan sampai sepuluh telur dikumpulkan , enam sampai
tujuh embrio transplantasi dan 3-4 kehamilan hasil . Harus ditekankan bahwa
sangat sedikit sapi donor rata-rata . Tingkat kehamilan umumnya sekitar 60 %
dengan embrio segar dan berkisar dari 30 - 40 % dengan embrio beku . Satu dapat
mengantisipasi kerugian kematian janin sebesar 10% dari diagnosis kehamilan
sampai betis berusia enam bulan.
DAFTAR PUSTAKA
Hafez, E.S.E. 1980. Reproduction in Farm Animal. 4 th ed. Lea and Febiger.
Philadelphia.
Kaiin, E.M., S.Said & B.Tappa. 2008. Kelahiran Anak Sapi Hasil Fertilisasi secara in
Vitro dengan Sperma Hasil Pemisahan. Bidang Biologi Sel dan Jaringan, Pusat
Penelitian Bioteknologi LIPI.
Kaiin, E.M., M. Gunawan, S.Said & B.Tappa. 2004. Fertilisasi dan perkembangan oosit
sapi hasil IVF dengan sperma hasil pemisahan. Prosiding Seminar Nasional
Teknologi Peternakan dan Veteriner. Puslitbang Peternakan, Bogor. Hlm. 21-25.
Margawati, E.T., E.M. Kaiin, K.Eriani, N.D. Yanthi & Indriawati. 2000. Pengaruh
media IVM dan IVC pada perkembangan embrio sapi secara in vitro. Jurnal Ilmu
Ternak dan Veteriner 5 : 229-233.