PEWARNAAN GRAM
Pewarnaan gram adalah
Cara Kerja
1. Buat preparat ulas (sinear) yang telah difiksasi
dari bakteri gram positif misal Bacillus subtilis dan
gram negatif misal Excherichia coli
2. Teteskan kristal violet sebagai pewarna utama
pada kedua preparat, usahakan semua ulasan
terwarnai dan tunggu selama 1 menit
3. Cuci dengan akuades mengalir
4. Teteskan mordant (lugols iodine)
5. Cuci dengan akuades mengalir
6. 6. Beri larutan pemucat (ethanol 96% / aseton)
setetes demi setetes hingga etanol yang jatuh
berwarna jernih. Jangan sampai terlalu banyak
(overdecolorize
7. Cuci dengan akuades mengalir
8. Teteskan counterstain (safranin) dan tunggu
selama 45 detik
9. Cuci dengan akuades mengalir
10. Keringkan preparat dengan kertas tissue yang
ditempelkan di sisi ulasan (jangan sampai merusak
ulasan) lalu biarkan mengering di udara
Dampak / Hasil
Sel bakteri tertempel pada permukaan kaca (object
glass)
Kristal ungu akan mewarnai seluruh permukaan sel
bakteri gram positif dan negatif
Adanya lugols iodine menyebabkan adanya ikatan
CV dengan iodine yang akan meningkatkan afinitas
pengikatanzat warna oleh bakteri. Pada gram positif
dapat terbentuk CV iodinribonukleat pada dinding
sel
Penetesan etanol asolut menyebabkan terbentuknya
pori pori pada gram negatif yang memiliki banyak
lapisan lemak (lipid larut dalam etanol), sehingga
komplek CV-Iodine akan lepas dari permukaan sel
gram negatif, sedangkan pada gram positif CV-
Iodine tetap menempel di dinding sel, sel gram
negatif menjadi bening
Safranin akan mewarnai sel gram negatif menjadi
berwarna merah, sedangkan gram positif tidak
terpengaruh. Counterstain hanya berfungsi sebagai
pengontras saja.