PENGARUH KONSENTRASI GULA CAIR DAN WAKTU INKUBASI

TERHADAP PRODUKSI BIOSURFAKTAN Bacillus subtilis 3KP

Fathimatuz Zahroh, Dr. Nimatuzahroh dan Tri Nurhariyati, S.Si.,M.Kes.

Prodi S-1 Biologi,Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi,
Universitas Airlangga, Surabaya.

Abstrak

Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh konsentrasi gula cair,

waktu inkubasi, serta kombinasi antara keduanya terhadap produksi biosurfaktan
Bacillus subtilis 3KP. Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap
dengan pola 4x6 faktorial dan tiga kali ulangan. Media pertumbuhan yang
digunakan terdiri atas air mineral sintetis dengan penambahan gula cair pada
konsentrasi yang berbeda (0, 1, 2, dan 4%). Pada media tersebut, 4% starter
bakteri Bacillus subtilis 3KP (OD = 0,5 pada A = 610 nm) diinokulasikan lalu
diinkubasi pada shaker dengan kecepatan agitasi 120 rpm dan pada suhu ruang.
Produksi biosurfaktan diamati pada waktu inkubasi yang berbeda (0, 1, 2, 3, 4,
dan 5 hari). Data pengamatan berupa nilai tegangan permukaan dianalisis dengan
uji Brown Forsythe dan dilanjutkan dengan uji Games Howell. Sedangkan data
pengamatan berupa nilai aktivitas emulsifikasi dan perolehan massa produk kasar
biosurfaktan dianalisis menggunakan uji Kruskal Wallis yang dilanjutkan dengan
uji Mann Whitney. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa konsentrasi gula cair,
waktu inkubasi, dan kombinasi antar keduanya berpengaruh terhadap produksi
biosurfaktan Bacillus subtilis 3KP. Kombinasi terbaik untuk produksi
biosurfaktan oleh bakteri Bacillus subtilis 3KP adalah konsentrasi gula cair 4%
dengan lama waktu inkubasi 4 hari.

Kata kunci : biosurfaktan, Bacillus subtilis 3KP, gula cair, aktivitas

emulsifikasi, tegangan permukaan

Pendahuluan
Surfaktan atau surface active hingga industri makanan. Sebagian
agent adalah senyawa amfifatik yang besar dari surfaktan yang digunakan
terdiri atas komponen hidrofilik dan merupakan surfaktan sintetik yang
hidrofobik serta memiliki berasal dari derivat minyak bumi
kemampuan menurunkan tegangan (Desai and Banat, 1997). Pada
permukaan dua fase dengan beberapa tahun terakhir ini,
kepolaran berbeda. Kemampuan pemanfaatan surfaktan sintetik secara
tersebut menjadikan surfaktan luas dalam berbagai bidang industri
digunakan hampir diseluruh bidang dianggap tidak menguntungkan lagi.
industri mulai dari industri Hal ini dikarenakan surfaktan
petroleum, farmasi, kosmetika sintetik mengandung komponen
kimia derivat minyak bumi yang
dinilai tidak ramah terhadap
lingkungan. Komponen ini
menjadikan surfaktan sintetik tidak
dapat didegradasi secara alamiah
serta memiliki kandungan toksik
yang tinggi. Untuk mencegah
terjadinya kerusakan lingkungan
yang lebih buruk, maka perlu
digunakan surfaktan alternatif yang
ramah terhadap lingkungan dimana
salah satunya adalah biosurfaktan
(Banat et al., 2000).
Biosurfaktan merupakan
makromolekul ekstraseluler yang
dapat diproduksi oleh bakteri, yeast
maupun kapang pada berbagai
kondisi substrat. Sama halnya
dengan surfaktan sintetik,
biosurfaktan juga memiliki
kemampuan menurunkan tegangan
permukaan suatu fase zat (Raza et
al., 2005). Dibandingkan dengan
surfaktan sintetis, biosurfaktan
memiliki beberapa keunggulan di
antaranya mampu didegradasi secara
alamiah, mempunyai toksisitas yang
rendah, mampu bekerja efektif
sekalipun dalam kondisi temperatur
maupun pH yang ekstrim dan
menunjukkan kesesuaian lingkungan
yang lebih baik (Desai and Banat,
1997).
Peneliti Puslit Kimia Lembaga
Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI)
dalam harian Kompas (2010)
menyatakan bahwa sebagian besar
dari surfaktan yang dipakai di
Indonesia masih merupakan
surfaktan sintesis. Kurangnya
optimalisasi proses produksi serta
kurangnya ketertarikan investasi
industri dalam negeri terhadap
biosurfaktan turut menjadi pemicu
pemakaian surfaktan sintetis. Oleh
karena itu diperlukan suatu upaya
pengoptimalan produksi biosurfaktan
dalam negeri (Maneerat, 2005).
Salah satu upaya yang dapat
dilakukan dalam mengoptimalkan
proses produksi biosurfaktan adalah
dengan menekan biaya produksi
dalam hal penggunaan substrat. Hal
ini dikarenakan baku yang murah
akan mempengaruhi sebanyak 50%
dari total biaya produksi (Nitschke et
al., 2004). Gula cair merupakan
salah satu produk pertanian yang
murah dan mudah ditemukan serta
memiliki kandungan gula yang
relatif stabil sebagai sumber karbon
bagi mikroba menjadikannya sebagai
alternatif substrat dalam proses
produksi biosurfaktan (Mulligan and
Gibbs, 1993).
Pada penelitian terdahulu,
Richana (2002) telah berhasil
mengisolasi biosurfaktan dari isolat
lokal Bacillus sp. BMN-14 yang
ditumbuhkan pada substrat gula hasil
hidrolisis pati dengan konsentrasi
1,94 g/L. Biosurfaktan yang
dihasilkan Bacillus sp. BMN-14
mampu menurunkan tegangan
permukaan supernatan kultur
mencapai 33,5 dyne/cm (Richana et
al., 2002). Dari penelitian ini, dapat
diketahui bahwa bakteri dari genus
Bacillus memiliki potensi yang
besar dalam memproduksi
biosurfaktan dengan memanfaatkan
gula cair. Namun, sampai saat ini
belum ada penelitian lebih lanjut
tentang kemampuan produksi
biosurfaktan oleh bakteri Bacillus
subtilis 3KP pada substrat gula hasil
hidrolisis yang diorientasikan pada
pengembangan proses produksi.
Berdasarkan latar belakang
tersebut, penelitian ini ditujukan
untuk mengetahui konsentrasi
minimum gula cair yang dibutuhkan
untuk pertumbuhan optimal bakteri
Bacillus subtilis 3KP dan waktu
inkubasi tercepat dengan tingkat
produksi biosurfaktan tertinggi serta
kombinasi yang tepat antara
konsentrasi gula cair dan waktu
inkubasi yang cepat sehingga
didapatkan produksi biosurfaktan
secara optimal dari bakteri Bacillus
subtilis 3KP.
Metode Penelitian
Penelitian ini dilakukan di
Laboratorium Mikrobiologi
Departemen Biologi Fakultas Sains
dan Teknologi Universitas Airlangga
Surabaya pada bulan Agustus-
September 2011.
Isolat bakteri Bacillus subtilis
3KP yang digunakan dalam
penelitian ini merupakan koleksi
Laboratorium Mikrobiologi
Departemen Biologi Fakultas Sains
dan Teknologi, Universitas
Airlangga, Surabaya yang diisolasi
dari Perairan kali Donan Cilacap,
Jawa Tengah. Adapun media
pertumbuhan yang digunakan adalah
media NA, NB dan media air mineral
sintetik (AMS) yang merupakan
komposisi dari Pruthi dan Cameotra
(1997). Substrat gula cair sebagai
sumber karbon yang digunakan
merupakan gula cair yang didapatkan
dari Toko Kue 88 di Surabaya.
Kerosin digunakan sebagai
hidrokarbon uji dalam uji aktivitas
emulsifikasi supernatan kultur
Bacillus subtilis 3KP.
Penelitian ini diawali dengan
penyediaan stok bakteri Bacillus
subtilis 3KP pada media Nutrient
Agar (NA) miring. Kemudian
dilanjutkan dengan pembuatan media
air mineral sintetik (AMS), yang
dibuat dengan melarutkan garam-
garam mineral ke dalam 1 liter
aquades berdasarkan komposisi dari
Pruthi dan Cameotra (1997). Tahap
selanjutnya yakni perbanyakan
bakteri dalam media diperkaya yakni
media Nutrient Broth (NB) dan
diinkubasikan selama 24 jam.
Setelah itu, dilanjutkan dengan
pembuatan kultur bakteri.
Media pertumbuhan yang
digunakan terdiri atas air mineral
sintetis dengan penambahan gula cair
pada konsentrasi yang berbeda (0, 1,
2, dan 4%). Pada media tersebut, 4%
starter bakteri Bacillus subtilis 3KP
(OD = 0,5 pada A = 610 nm)
diinokulasikan lalu kultur tersebut
diinkubasi pada shaker dengan
kecepatan agitasi 120 rpm dan pada
suhu ruang. Produksi biosurfaktan
diamati pada waktu inkubasi yang
berbeda (0, 1, 2, 3, 4, dan 5 hari)
dengan mengukur nilai tegangan
permukaan supernatant kultur, nilai
aktivitas emulsifikasi supernatant
kultur terhadap kerosin dan
Hasil dan Pembahasan
Gambar 1. Grafik nilai tegangan permukaan
(mN/m) supernatan kultur Bacillus subtilis
3KP pada berbagai konsentrasi gula cair.
Gambar 3. Grafik perolehan massa produk
kasar biosurfaktan (g/L) Bacillus subtilis
3KP pada berbagai konsentrasi gula cair.
Grafik 1, 2, dan 3 memiliki perbedaan yang signifikan
menunjukkan bahwa penggunaan
konsentrasi gula cair yang berbeda
memberikan hasil nilai TP, AE dan
perolehan produk kasar biosurfaktan
yang berbeda pula. Dari hasil uji
statistik yang dilakukan, diketahui
bahwa konsentrasi gula cair 0%
perolehan massa produk kasar
biosurfaktan pada masing-masing
perlakuan.
Gambar 2.Grafik nilai aktivitas emulsifikasi
(%) supernatan kultur Bacillus subtilis 3KP
pada berbagai konsentrasi gula cair.
terhadap konsentrasi yang lainnya.
Hal ini menegaskan bahwa
konsentrasi gula cair sebagai sumber
karbon memegang peranan penting
dalam proses produksi biosurfaktan
dimana semakin sedikit konsentrasi
gula cair yang digunakan maka
semakin rendah pula nilai TP, AE
dan produk kasar biosurfaktan yang
dihasilkan begitu juga sebaliknya.
Nilai penurunan tegangan permukaan
dan nilai aktivitas emulsifikasi
tertinggi diperoleh pada konsentrasi
2% dengan nilai sebesar 9,69 mN/m
Gambar 4. Grafik nilai tegangan permukaan
(mN/m) supernatan kultur Bacillus subtilis
3KP dengan lama waktu inkubasi yang
berbeda.
Gambar 6. Grafik perolehan massa produk
kasar biosurfaktan (g/L) Bacillus subtilis
3KP dengan lama waktu inkubasi yang
berbeda.
Grafik 4, 5, dan 6 diperoleh pada lama inkubasi hari
menunjukkan bahwa penggunaan
konsentrasi gula cair yang berbeda
memberikan hasil nilai TP, AE dan
perolehan produk kasar biosurfaktan
yang berbeda pula. Nilai penurunan
tegangan permukaan tertinggi
dan 27,39%. Sedangkan perolehan
massa produk kasar biosurfaktan
Bacillus subtilis 3KP terbanyak
diperoleh pada konsentrasi 4% yakni
sebesar 4,31 g/L.
Gambar 5. Grafik nilai aktivitas
emulsifikasi (%) supernatan kultur Bacillus
subtilis 3KP dengan lama waktu inkubasi
yang berbeda.
ke-1 dengan nilai 2,48 mN/m, nilai
aktivitas emulsifikasi tertinggi
diperoleh pada lama inkubasi hari
ke-5 dengan nilai 30,37 % sedangkan
perolehan massa produk kasar
biosurfaktan terbanyak diperoleh
pada lama inkubasi hari ke-4 yakni sebesar 5,66 g/L.

Gambar 7. Grafik nilai tegangan permukaan Gambar 8. Grafik nilai aktivitas

(mN/m) supernatan kultur Bacillus subtilis emulsifikasi (%) supernatan kultur Bacillus
3KP pada kombinasi konsentrasi gula cair subtilis 3KP pada kombinasi konsentrasi
dengan lama waktu inkubasi gula cair dengan lama waktu inkubasi

Gambar 9. Grafik perolehan massa produk

kasar biosurfaktan (g/L) Bacillus subtilis
3KP pada pada kombinasi konsentrasi gula
cair dengan lama waktu inkubasi.

Berdasarkan uji yang telah konsentrasi gula cair 4% dengan

dilakukan diketahui bahwa waktu inkubasi hari ke-3 yakni
kombinasi antara konsentrasi gula sebesar 6,48 mN/m. Francy et al.
cair dengan lama waktu inkubasi (1991) menyatakan bahwa bakteri
berpengaruh terhadap nilai dikatakan berpotensi menghasilkan
penurunan tegangan permukaan, biosurfaktan apabila dapat
aktivitas emulsifikasi dan perolehan menurunkan nilai tegangan
massa produk kasar biosurfaktan permukaan sebesar 10 mN/m. Nilai
Bacillus subtilis 3KP. Dari Gambar 7 penurunan tegangan permukaan yang
dapat diketahui bahwa nilai tidak optimal dalam penelitian ini
penurunan tegangan permukaan diduga disebabkan oleh kondisi pH
terbesar didapatkan pada kombinasi kultur yang terlalu asam. Penurunan
pH pada masa kultivasi memang
tidak memberikan pengaruh yang
signifikan pada pertumbuhan bakteri,
namun tidak begitu halnya dengan
produksi biosurfaktan sebagai
senyawa aktif permukaan. Kondisi
pH berpengaruh terhadap produksi
biosurfaktan di mana pH optimal
dalam produksi biosurfaktan adalah
pH 7. Tingkat produksi akan
menurun pada saat pH berada dalam
kondisi asam (Kokare et al, 2007).
Menurut Desai dan Banat
(1997), biosurfaktan tidak selalu
memiliki kemampuan yang tinggi
dalam mengemulsi dan menurunkan
tegangan permukaan sekaligus.
Beberapa jenis biosurfaktan
diketahui hanya bersifat menurunkan
tegangan permukaan saja tetapi
bukan agen pengemulsi yang baik,
begitu pun sebaliknya. Oleh karena
itu, nilai tegangan permukaan yang
tinggi bukan berarti meniadakan
produksi biosurfaktan.
Gambar 8 menunjukkan
adanya aktivitas emulsifikasi yang
tinggi terhadap minyak uji kerosin.
Pola fluktuasi nilai aktivitas
emulsifikasi antar konsentrasi juga
terlihat hampir serupa dengan
perlakuan optimum yang berbeda
pada masing-masing konsentrasi. Hal
ini mengindikasikan bahwa
biosurfaktan Bacillus subtilis 3KP
tergolong bioemulsifier (agen
pengemulsi yang baik) bila
dibandingkan dengan
kemampuannya dalam menurunkan
tegangan permukaan.
Nilai aktivitas emulsifikasi
paling tinggi pada Gambar 8 dicapai
pada konsentrasi 4% dengan lama
waktu inkubasi hari ke-4 yakni
sebesar 44,37%. Setingkat
dibawahnya, terdapat konsentrasi 1%
dengan waktu inkubasi yang lebih
lama yakni hari ke-5 dengan nilai
aktivitas emulsifikasi sebesar
38,37%. Selanjutnya ada konsentrasi
2% dengan waktu inkubasi yang
lebih cepat yakni hari ke-3 walaupun
hanya dengan nilai aktivitas
emulsifikasi sebesar 37,56%.
Pencapaian perlakuan-perlakuan
optimum ini tergolong cepat bila
dibandingkan dengan penelitian yang
dilaporkan oleh Ulum (2004) di
mana perlakuan optimum produksi
biosurfaktan oleh Bacillus subtilis
3KP pada substrat molase baru
dicapai pada hari ke-10.
Pada Gambar 9 terlihat bahwa
perolehan massa produk kasar
biosurfaktan terbanyak didapatkan
pada kombinasi antara konsentrasi
4% dengan lama waktu inkubasi hari
ke-4 sebanyak 10,2 g/L. Perolehan
massa produk kasar pada kombinasi
konsentrasi 4% dengan lama waktu
inkubasi hari ke-4 ini nampak
memiliki pola yang sesuai jika
dibandingkan dengan nilai aktivitas
emulsifikasi terbesar yang juga
diperoleh pada kombinasi
konsentrasi 4% dengan lama waktu
inkubasi hari ke-4. Hal ini
mengindikasikan bahwa perolehan
massa produk kasar biosurfaktan
pada konsentrasi gula cair dan lama
waktu inkubasi yang berbeda
sebanding dengan nilai aktifitas
emulsifikasi masing-masing
supernatan.
Dalam upaya pengembangan
skala produksi yang lebih besar
(scale up), hasil perolehan produk
kasar biosurfaktan oleh bakteri
Bacillus subtilis 3KP dalam
penelitian ini menunjukkan potensi
yang besar untuk dikembangkan.
Dibandingkan dengan perolehan
Kesimpulan dan Saran
1. Konsentrasi gula cair
berpengaruh terhadap nilai
penurunan tegangan permukaan,
aktivitas emulsifikasi dan
perolehan massa produk kasar
biosurfaktan Bacillus subtilis
3KP.
2. Lama waktu inkubasi
berpengaruh terhadap aktivitas
emulsifikasi dan perolehan
massa produk kasar biosurfaktan
Bacillus subtilis 3KP tetapi tidak
berpengaruh terhadap nilai
penurunan tegangan permukaan.
Daftar Pustaka
Anonimus. 2010. Harian Kompas
Online ; Permintaan Migas
Terus Meningkat.
http://kompas.realviewusa.c
om/default.aspx?iid=41877
&startpage=page0000002.
Diakses tanggal 09
Desember 2010
Banat, M., R. S. Makkar., S. S.
Cameotra., 2000. Potential
Commercial Applications
produk kasar biosurfaktan oleh
bakteri Bacillus subtilis 3KP pada
media molase yang hanya mencapai
8,18 g/L pada konsentrasi 4% dan
lama waktu inkubasi mencapai 6
hari, maka perolehan produk kasar
biosurfaktan oleh bakteri Bacillus
subtilis 3KP dengan media gula cair
pada penelitian ini lebih tinggi yakni
mencapai 10,2 g/L pada konsentrasi
4% dan lama waktu inkubasi yang
lebih cepat yakni 4 hari.
3. Kombinasi antara konsentrasi
gula cair dengan lama waktu
inkubasi berpengaruh terhadap
nilai penurunan tegangan
permukaan, aktivitas
emulsifikasi dan perolehan
massa produk kasar biosurfaktan
Bacillus subtilis 3KP.
Dari penelitian ini dapat
disarankan bahwa kombinasi
konsentrasi gula cair 4% dengan
waktu inkubasi 4 hari dapat dijadikan
acuan dalam upaya scale up produksi
biosurfaktan Bacillus subtilis 3KP.
Of Microbial Surfactants.
Appl. Microbiol.
Biotechnol., 53: 495508.
Desai, J.D. and Banat, M., 1997.
Microbial Production of
Surfactant and
Commercial Potential.
Microbiology and
Molecular Biology Reviews.
Vol.61, No.1 : 47-64.
Francy, D.S., Thomas, J.M.,
Raymond, R.L., and Word,
C.H., 1991. Emulsification
 of Hydrocarbon by Applied Biochemistry and
Subsurface Bacteria. J. Biotechnology, Vol : 112 :
Ind. Microbiol. 8(4) 237- 163-172.
246. Raza, Z.A., M.S. Khan, Z.M. Khalid
Kokare C R., S S Kadam, K R and A. Rehman., 2005.
Mahadik and B A Chopade. Production of
Studies on Bioemulsifier Biosurfactant Using
Production from Marine Different Hydrocarbons
Streptomyces sp. S1. Indian by Pseudomonas
Journal of Biotechnology aeruginosa EBN-8
Vol 6, January 2007, pp 78- Mutant. Naturforsch, 61c,
84 87-94.
Makkar, R.S. and Cameotra S.S., Richana, Nur., Ani Suryani., Helena
1997. Utilization of Yusuf Makagiansar dan Tun
Molasses for Biosurfactant Tedja Irawadi., 2000.
Production by Two Berbagai Cara Hidrolisis
Bacillus Strains at Pati untuk Media
Thermophilic Conditions. Pertumbuhan Bacillus sp.
JAOCS, 74 : 887-889. BMN14 Penghasil
Maneerat, S., 2005. Production of Biosurfaktan Lipopeptida.
Biosurfactants Using Jurnal Mikrobiologi
Substrates from Indonesia, September 2000,
Renewable Resources. him. 29-31.
Songklanakarin Journal Ulum, Bahriyatul, 2004. Pengaruh
Science Technology, Vol.27 Konsentrasi Molase dan
No.3 : 675-683. Natrium Nitrat terhadap
Mulligan, Catherine N. and Bernard Produksi Biosurfaktan
F. Gibbs, 1993. The Bacillus subtilis 3KP.
Economics of Skripsi. FMIPA Universitas
Biosurfactant. N. Kosaric Airlangga, Surabaya.
(ed) In : Biosurfactant :
Production, Properties,
Application, Marcel Dekker
Inc, New York, p.329-368.
Nitschke, M., Ferraz, C., Pastore,
G.M., 2004. Selection of
Microorganisms for
Biosurfactant Production
Using Agroindustrial
Wastes. Brazilian Journal
of Microbiology, 35 : 81-85
Nitschke, M., and Pastore, G.M.,
2004. Biosurfactant
Production by Bacillus
subtilis Using Cassava-
Processing Effluent.