RESUME BIOLOGI MEDIK

Ekstraksi DNA

Di Susun Oleh: Kelompok 1

Kelas A

1. A. Arviani Desianti Nur 16 3145 353 001

2. Anjelina Ruatemeti 16 3145 353 002
3. Apriyansen Ruru 16 3145 353 003
4. Arini Birana 16 3145 353 004
5. Ayu Saleh Hanubun 16 3145 353 005
6. A.Ayu Safitra 16 3145 353 041
7. Abd. Mannan Rachman 16 3145 353 042
8. Windy Rahayu Putri 16 3145 353 039
9. Windar Rumbiak 16 3145 353 038
10. Zumairah Abbas 16 3145 353 040

PRODI DIV ANALIS KESEHATAN

SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN
MEGA REZKY MAKASSA
2016/2017
 RESUME EKSTRAKSI DNA

A. Pengertian Ekstraksi DNA

Ekstraksi DNA adalah langkah pertama yang sangat penting dalam langkah-
langkah kerja analisis DNA sequencing. Kualitas secara keseluruhan, akurasi dan panjang
pembacaan urutan basa DNA dapat dipengaruhi secara signifikan oleh karakter sample itu
sendiri, dan metode yang dipakai untuk ekstraksi DNA.

B. cara kerja ekstraksi dna

Cara ekstraksi DNA dengan sampel darah menggunakan prosedure kit promega
yaitu sebagai berikut :

1.a) persiapan sampel darah

ambil sebanyak 200 m ke 1,5 ml mikro sentrifuse tube. Tambahkan volume

sampai 200 m dengan PBS. Tambahkan 20 m proteinase K lalu dicampur dengan pipet.
Diinkubasi dengan suhu 60 C selama 5 menit.

1.b) persiapan sampel kultur cell

sel triphysinze Adheren persiapan untuk menananm. Masukkan sel ke 1,5 ml mikro
sentrifuse tube. Kemudian sentrifuse selama 5 menit pada 300 x g. Dibuang supernatan
kemudian kirim sel di 200 m PBS dengan pipet. Tambahka 20 m proteinase K.
Kemudian campur dengan pipet lalu diinkubasi pada suhu 60 C selama 5 minet.

1.c) persiapan cairan Amniotik

Masukkan sebanyak 15 ml cairan Amniotk ke mikro sentrifuse tube 15 ml.

Sentrifuse selama 3 menit pada 14-16000 x g. Kemudian dibuang supernatan lalu
ditambahkan 200 m GST buffer untuk mengirim ulang Pelet dan masukkan campuran ke
1,5 ml mikro sentrifuse tube. Lalu tambahkan 10 ml Proteinase K dan kocok kuat-kuat lalu
inkubasi pada suhu 60C selama 30 menit. Selama inkubasi, balik tabung selama 5 menit
2. Lisis sel

tambahkan 200 m GSB buffer. Kemudian campur lalu kocok kuat-kuat untuk
darah dan sel sampel. Inkubasi pada suhu 60C selama 5 menit, balik tabung setiap 2
menit. Untuk sampel cairan Amiotik inkubasi pada suhu 60 20 menit. Kemudian balik
tabung setiap 5 menit. Selama proses inkubasi masukkan Illution Buffer sebanyak
volume yang dibutuhkan ( 200 m per sampel) ke 1,5 ml sentrifuse tube dan panaskan
pada suhu 60 ( untuk tahap 5 DNA Ellution.

langkah penghilangan Optional DNA untuk DNA Free gDNA ikuti penambahan
GSB Buffer dan inkubasi pada suhu 60C. Tambahkan 5 m RNAse A ( Mg/Ml) dan
campurkan lalu kocok kuat-kuat. Inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit untuk
memastikan degradasi DNA yang effisien.

3. DNA Binding

tambahkan 200 m Absolut Ethanol untuk sampel Lysate dan segera campur, lalu
kocok kuat-kuat selama 10 detik. Jika endapan muncul hancurkan sebanyak mungkin
dengan pipet. Tempatkan GS Coloum ditempat 2ml Collection Tube. Masukkan semua
campuran ke GS Coloum. Sentrifuse pada 14-16000 x g selama 1 menit. Berikut
sentrifugasi jika campuran tidak mengalir melalui GS Colom Membrane, tingkatkan
waktu sentrifuse sampai melewati batas sepenuhnya. Buang Tabung 2 ml Collection
Tube yang berisi cairannya, lalu masukkan GS Coloum ke 2 ml Collection Tube.

Note!!!

Penting bahwa Lysite dan Ethanol dicampur secara menyeluruh untuk

menghasilkan larutan homogen.

4. Pencucian

tambahkan 40 m W1 Buffer ke GS Column. Sentrifuge pada 14-16.000 x g

selama 30 detik kemudian buang aliran. Tempatkan GS column kembali ke dalam 2 ml
collection tube. Tambahkan 600 m wash buffer. Ke GS column. Sentrifuge pada 14-
16000 x g selama 30 detik kemudian buang cairan. Tempatkan GS column kembali ke 2
ml collection tube. Sentrifuge lagi selama 3 menit pada 14-16.000 x g untuk
mengeringkan column matrix.

5. DNA Elution

masukkan GS column kering ke 1,5 ml mikrosentrifuge tube yang bersih.

Tambahkan 100 m Elution Buffer sebelum dipanaskan TE Buffer atau air menjadi pusat
matrix column. Diamkan 3 menit untuk memungkinkan Elution Buffer, TE Buffer atau
air benar-benar diserap. Sentrifuge pada 14-16000 x g selama 30 detik untuk
mengeliminasi DNA yang diperlukan.