Tujuan.

Mengembangkan metode HPLC-DAD yang telah divalidasi untuk penentuan secara simultan
posasonazol (PSZ) dan vincristine (VCR) pada plasma tikus.

Metode. PSZ, VCR, dan itrakonazol (ITZ) diekstraksi dari 200 L plasma dengan menggunakan dietil
eter dengan adanya larutan natrium hidroksida 0,1 M. Lapisan organik diuapkan dalam vakum dan
residu kering dilarutkan dan disuntikkan melalui kolom HC-C18 (4,6 x 250 mm, 5 m). Pada fase
gerak, asetonitril dan 0,015 M kalium dihidrogen ortofosfat (30: 70 sampai 80: 20, gradien linier
selama 7 menit) dipompa pada 1,5 mL / menit. VCR dan PSZ masing-masing diukur pada 220 dan 262
nm. Dua tikus Sprague Dawley diberi PSZ oral diikuti dengan dosis iv VCR dan pengambilan sampel
darah serial dilakukan.

Hasil. VCR, PSZ, dan ITZ berhasil dipisahkan dalam waktu 11 menit. Kurva kalibrasi linier berkisar
antara 50-5000 ng / mL untuk kedua obat tersebut. Kesalahan CV% dan% mean adalah 18% dan
batas kuantitasi adalah 50 ng / mL untuk kedua obat. Konsentrasi plasma tikus PSZ dan VCR secara
simultan diukur hingga 72 jam dan parameter farmakokinetik yang dihitung sebanding dengan
literatur.

Kesimpulan. Pengujian divalidasi sesuai dengan pedoman ICH dan sesuai untuk penelitian interaksi
obat-obatan dengan farmakokinetik.

2.3. Stock dan Solusi Standar. Larutan stok PSZ dan VCR sulfat (100mg / L) dibuat secara terpisah
dalam metanol. Larutan standar 10 mg / L dari standar internal (ITZ) disiapkan dalam metanol. Untuk
mempersiapkan sampel untuk kurva kalibrasi dan penilaian validasi, tiga solusi standar kerja (10, 1,
dan 0.1mg / L) PSZ dan VCR disiapkan baru-baru ini dengan pengenceran 1/10 berturut-turut larutan
stok dengan metanol.

2.4. Prosedur Ekstraksi. ITZ (0,03 mL) ditambahkan ke masing-masing sampel plasma tikus 0.2mL
dalam tabung reaksi kaca. Untuk sampel plasma tikus, 0,03mL NaOH 0,1M dan 6mL dietil eter
ditambahkan. Karena metanol ada dalam sampel kurva standar, jumlah yang setara juga
ditambahkan ke sampel uji (0,2 mL). Tabung ditutupi, dicampur vortex selama 2 menit dengan
kecepatan tinggi, dan kemudian disentrifugasi selama 10 menit pada ~2500 g. Lapisan organik
dipindahkan ke tabung kaca baru dan diuapkan sampai kering dalam vakum (konsentrator vakum
rotasi Kristus, Jerman). Tabung ditempatkan di freezer -20C sampai waktu analisis. Residu
dilarutkan dalam 100 Lmethanol dimana volume 80 L disuntikkan ke dalam HPLC.

Sistem KCKT

1. Kolom (fase diam)

= kolom HC-C18 (4,6 x 250 mm, 5 m)
2. Detektor = multiple wavelength detector (DAD)
3. Kecepatan alir = 1,5 mL / menit
4. Fase gerak = asetonitril dan 0,015 M kalium dihidrogen ortofosfat (30: 70 sampai
80: 20, gradien linier selama 7 menit)
5. Retensi waktu = 5.9 menit
6. Persamaan regresi = Y = 0.0006x 0.0581 (R2 = 0.9966)