CARA PEMBUATAN CCC (COOMB’S CONTROL CEL POSITIVe

CARA PEMBUATAN CCC (COOMB’S CONTROL CEL POSITIVE

mediondiagnostics.us

diamed.co.il

I. TITRASI ANTI RHESUS (ANTI-D)

Anti D yang digunakan adalah anti-D IgG (monoclonal) yang hanya bersifat antibody inkomplit dan
memiliki titer IgG yang cukup tinggi untuk mengetahui tite inkomplit anti-D dan mendapatkan CCC yang
ideal. Terhadap anti-D ini harus dilakukan titrasi dengan cara Double diluent ( pengenceran
berganda/serial) untuk selanjutnya dapat dipastikan nilai pengenceran anti-D 9reaksi 2+) yang akan

digunakan dalam pembuatan CCC.

A. Peralatan

1. Incubator ( waterbath) suhu 37 0 C

2. Centrifuge

3. Mikroskop

4. Timer

5. Rak tabung

6. Tabung reaksi ukuran 12 x 75 mm

7. Pipet tetes

8. Botol semprot

9. Slide tes

10. Beaker glass

11. Wadah limbah

B. Reagensia

1. Sel golongan darah O rhesus positif normal 2-5 %

2. Anti-D IgG
3. Saline

4. Coomb’s serum (AHG)

C. Teknik pengenceran berganda

1. Pengenceran dilakukan di dalam 1o tabung secara berurutan

2. Kedalam masing-masing tabung di tambahkan 2 tetes salin

3. Pada tabung pertama tambahkan 2 tetes Anti-D IgG dengan menggunakan pipet yang sama .Kocok
kuat-kuat, hindari terbentuknya gelombung udara

4. Diambil 2 tetes dari tabung pertama lalu pidahkan pada tabung kedua, kocok-kocok.dilakukan hal yang
sama pada tabung selanjutnya dimana pada tabung terahir dibuang 2 tetes hasil pengencerannya

5. Kepada masing-masing tabung tambahkan sel O rhesus positif 5%, dan dikocok dengan baik

6. Inkubasi seluruh tabung pada suhu 37 0 C selama 30 menit ( pada tahap ini anti-D Coated dengan
antigen D).

7. Cuci seluruh tabung sebanyak 3x dengan saline. Pada pencucian trakhir supernatant dibuang sampai
bersih

8. Kepada endapan (sedimen eritrosit), masing-masing tambahkan 2 tetes Coomb’s serum kemudian
dikocok dengan kuat-kuat.

9. Putar semua tabung pada kecepatan 2000 rpm selama 20 detik

10. Baca hasil reaksinya secara makroskopik dan catat gradasi aglutinasinya.

D. Contoh hasil titrasi

Double diluen Anti-D IgG

16

32

64

128
256

512

1024

Titer Antibody Inkomplit

4+

4+

4+

4+

3+s

3+

2+s

2+

1+

E. Hasil titrasi

Double diluen Anti-D IgG

16

32

64

128
256

512

1024

Titer Antibody Inkomplit

3+

3+

3+

2+

2+

1+

1+

1+

F. Kesimpulan

1. Titer inkomplit Anti-D IGG adalah 512 ( CONTOH TITRASI)

2. Pengenceran anti-D IgG yang akan digunakan untuk pembuatan reagensia CCC adalah 1/128 ( PADA
CONTOH TITRASI) berdasarkan percobaan titrasi anti-D IgG di atas, maka untuk mendapatkan hasil
pembuatan CCC yang baik (reaksi oftimal 2+), anti-D tersebut harus diencerkan terlebih dahulu hingga
128 kali

II. TEKNIK PEMBUATAN CCC ( proses pelapisan sel O ( sensitisasi ) = coated)

1. Ke dalam sebuah tabung, masukkan 1 tetes anti-D igG, selanjutnya tambahkan 127 tetes
salin( pengenceran 1/128)

2. Kemudian tambahkan sel olongan O rhesus Positif 5 % sebanyak 64 tetes kocok dengan baik-baik

3. Inkubasi pada suhu 370 C selama 30 menit

4. Cuci dengan saline s3-4 kali

5. Sedimen sel disuspensikan kembali menjadi 5 % dalam saline = CCC

6. Sebelum CCC digunakan , baiknya diuji terlebih dahulu dengan Coomb’s serum dengan cara 1 tetes
CCC + 2 tetes Coomb’s serum maka akan terbentuk reaksi aglutinasi minimal 2+