Nanopartikel lipid padat untuk pengiriman pulmonal yang berkelanjutan

Dari Minyak esensial Yuxingcao: Persiapan, karakterisasi dan in vivo

evaluasi

Astrak :

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mempersiapkan nanopartikel lipid padat (SLNs) untuk
pengiriman pulmonal Yuxingcao essential oil (YEo) yang berkelanjutan.

Tiga YEO memuat SLN (SLN-200, SLN-400 dan SLN-800) dengan

Ukuran partikel yang berbeda disiapkan dan dipisahkan mengikuti teknik homogenisasi geser
tinggi
menggunakan Compritol 888 ATO sebagai lipid dan polivinil alkohol sebagai pengemulsi.
Ukuran partikel, potensial zeta,
Efisiensi enkapsulasi obat dan pemuatan obat SLN ditentukan antara 171 dan
812 nm, 17,1 dan 19,3 mV, antara 76,6 dan 90,2% dan antara 2,34 dan 3,12%, sedangkan
data pelepasan in vitro menunjukkan bahwa SLN menyebabkan pelepasan obat yang terus
berlanjut sampai 48 jam.
Selain itu, SLN suspensi setelah nebulisasi menghasilkan fraksi partikel halus (<5,4mm) dari
67,4-75,8%. Setelah pemberian intra tracheal pada tikus, YEO memasukkan SLN tidak hanya
mempertahankan pulmonary berkepanjangan hingga 24 jam, tetapi juga meningkatkan nilai
AUC (15,4, 18,2 dan 26,3mg / gh untuk SLN-200, SLN-400 dan SLN-800, masing) dengan
4,5-7,7 lipatan dibandingkan dengan larutan YEO intratrakeal tertutup dan dengan 257-438
lipatan ke larutan YEO dengan dosis intravena. Hasil saat ini adalah yang pertama
menunjukkan bahwa YEO SLN yang dimuat dapat mempertahankan pengiriman inhalasi YEO
dan meningkatkan bioavailabilitas lokal, yang mewakili pembawa inhalable menjanjikan untuk
mencapai aplikasi sekali sehari.

Injeksi Yuxingcao, juga disebut injeksi Houttuynia, adalah larutan encer dari distilat
uap dari Herba Houttuyniae (Yuxingcao dalam bahasa Cina), yang secara tradisional
digunakan untuk
pengobatan pneumonia, infeksi saluran pernapasan dan saluran kemih, hemoptisis refrakter dan
efusi pleura ganas di China. Studi farmakologi telah menunjukkan bahwa Yuxingcao
dipamerkan antiviral, antibakteri, antiinflamasi dan imunomodulator efek (Lau et al., 2008; Liu
et al., 2010; Lu et al., 2005, 2006b).
Injeksi Yuxingcao mengandung minyak atsiri dari Houttuynia cordata sebagai bahan
aktif, 0.5% Tween 80 sebagai solubilizer dan NaCl sebagai regulator tekanan osmotik, pada
awalnya disetujui melalui injeksi intramuskular pada tahun 1978 dan kemudian melalui injeksi
intravena pada tahun 1994 untuk pengobatan pernafasan penyakit menular di China Sejak di
suntikan, suntikannya menjadi salah satu obat tradisional China terlaris (TCM).
suntikan dengan jumlah resep tahunan lebih banyak
dari 600 juta ampul di Cina. Namun, dengan semakin Aplikasi yang luas dalam praktik klinis,
obat yang merugikan terkait reaksi (ADRs) menjadi masalah yang mengkhawatirkan. Secara
sistematis review dari 372 laporan klinis yang melibatkan 34.969 pasien, 179 kasus ADR yang
berat, termasuk 11 kasus kematian didokumentasikan (Yiet al., 2008).
 Karena terjadinya ADRs yang serius dan fatal, Administrasi Makanan dan Obat
China (CFDA) untuk sementara ditangguhkan penggunaan injeksi ini di awal tahun 2006.
Meski hebat Upaya telah dikhususkan untuk mengevaluasi kembali keamanan klinis,
Terjadinya ADR yang terkait dengan suntikan ini sebagian besar tidak dapat diprediksi Oleh
karena itu, sangat diinginkan untuk mengejar alternatif mengantarkan sarana ke jalur injeksi
sehingga dapat mempertahankan keuntungan dari onset cepat dan efikasi yang
menguntungkan, dan belum minimalkan ADR yang terkait dengan suntikan.
Sebelumnya, penggunaan injeksi Yuxingcao off-label untuk nebulisasi telah dipelajari secara
ekstensif dan telah ada lebih dari 100 uji coba terkontrol secara acak dan tidak diacak studi
terkontrol pada Yuxingcao nebulasi untuk penyakit pernafasan. Studi ini menunjukkan bahwa
pengobatan Yuxingcao aerosol menghasilkan peningkatan efikasi terapeutik dan bebas dari
ADR yang parah terkait dengan suntikan. Sebagai contoh, dua meta-analisis (Yuan dan Ma,
2008; Yuan et al., 2011)
telah dilakukan pada menilai manfaat dan risiko Yuxingcao nebulasi pada pneumonia
dan infeksi saluran pernapasan bagian atas dan hasilnya menunjukkan hal itu Terapi nebulisasi
secara signifikan meningkatkan efektifitas total tarif untuk kedua indikasi.
Selain itu, beberapa penelitian klinis menunjukkan bahwa nebulized Yuxingcao dianggap
sebanding kemanjuran ke rekan intravena infused (Lan et al., 1998;Lin et al., 2001).
Namun, nebulisasi injeksi Yuxingcao dibutuhkan beberapa dosis harian, yang
menyebabkan kepatuhan pasien miskin. Alasannya adalah karena bahan aktif, minyak atsiri
Yuxingcao (YEO), terdiri dari bahan hidrofobik seperti 2-undecanone, decanoylacetaldehyde,
bornyl acetate, b-linalool, 1-nonanol, 4-terpineol, a- terpineol dan lain-lain (Lu et al., 2005,
2006a; Zhang dan Wu, 2012), dan senyawa hidrofobik yang dihirup adalah umumnya terkena
pembersihan cepat penyerapan paru (Hu et al., 2016).
Keterbatasan injeksi Yuxingcao semacam itu Membutuhkan pengembangan formulasi
inhalable novel itu Bisa mengantarkan obat langsung ke paru-paru dengan dosis rendah
frekuensi. Di antara pembawa untuk pelepasan berkelanjutan, polimer partikel, liposom dan
nanopartikel lipid padat (SLNs) telah ada digunakan untuk merangkum minyak esensial untuk
mengendalikan pelepasan (Asbahani et al., 2015).
Mengingat fakta bahwa SLN sudah bagus biokompatibilitas paru, stabilitas dan sifat
yang baik memperpanjang pelepasan obat paru (Weber et al., 2014; Wissing et al., 2004), SLN
dapat digunakan sebagai pembawa untuk enkapsulasi dan pengiriman inhalasi YEO yang
berkelanjutan.
Karena itu, di masa sekarang studi, tujuan utamanya adalah untuk merangkum YEO
di SLNs dan ke mengevaluasi kinerja aerosol in vitro suspensi SLN nebulized dan retensi paru
in vivo. Tujuan selanjutnya adalah untuk menguji Hipotesis bahwa SLN yang diloloskan
melalui jalur pulmonary adalah a pembawa efektif untuk menyediakan tingkat YEO yang
berkelanjutan di paru-paru.
2. Bahan dan metode

2.1. Bahan

Polyvinyl Acetate (PVAc-203) dan 2-undecanone masing – masing dibeli dari Beijing Zhengjielida
Economic and Trade Co., Ltd., and China Food and Drug Inspection Institute (Beijing, China). Compritol
888 ATO (dinyatakan sebagai gliserol behenate) dengan titik leleh 69,0-74,0˚C didapat dari Gattefossé
(Lyon, Prancis). Gliserin dan natrium dodesil sulfat (SDS) dibeli dari Xilong Chemical Co., Ltd (Shenzhen,
China) sedangkan Poloxamer 188 dan Tween-80 masing – masing diperoleh dari Shanghai Yuanye
Bioteknologi Co, Ltd, dan Shanghai Shenyu Pharmaceutical Co, Ltd,. Asetonitril dan etil asetat kadar
HPLC didatangkan dari Merck (Darmstadt, Jerman) dan Honeywell Buidick & Jackson (Ulsan, Korea),
dan air dimurnikan dengan pemurnian air Milli-Q sistem (Millipore, Bedford, USA).

2.2. Ekstraksi minyak esensial

YEO diekstraksi dengan hidrodistilasi dalam alat tipe Clevenger yang dimodifikasi, minimal 4 jam, yang
didapat dari bagian ramuan segar yang dibudidayakan di Kebun Tanaman Obat, Institute of Medicinal
Plant Development (IMPLAD), Beijing. dan diidentifikasi oleh Profesor Zhang Zhao di IMPLAD. Hasil
minyak esensial diperoleh 0,5% b / b setelah pengeringan oleh natrium sulfat anhidrat dan dianalisis
dengan spektrometri massa kromatografi gas (GC).

2.3. Persiapan SLNs

YEO yang diisi SLNs disiapkan dengan metode homogenisasi high-shear. Singkatnya, fase lipid, terdiri
dari glyceryl behenate (500 mg) dan YEO (25 mg), dipanaskan sampai 5˚ C di atas titik lebur glyceryl
behenate, sedangkan tiga fase cair yang mengandung PVA-203 1% b/b, PVA-203 1% b/b dengan HCl
0,1% dan PVA-203 1% b/b dengan gliserin 0,5%, masing-masing disiapkan pada suhu yang sama.
Kemudian, Fase lipid ditambahkan secara perlahan kedalam 50 ml fase air di bawah pengadukan
mekanik pada 11.000 rpm dan campurannya kemudian diaduk pada 24.000 rpm selama 10 menit
dengan Utek X 10/25 homogenizer (Utek International Corporation Ltd., Taipei, China). Emulsi
dimasukkan ke dalam lemari pendingin pada suhu 4˚ C selama 2 jam. SLNs diperoleh dengan ultra-
filtrasi setelah disentrifugasi dengan senapan ringan Thermal Thermo Sorvall 16R (Thermo Scientific,
USA) sebanyak 4000g pada suhu 4˚ C selama 2 jam.
2.4. Analisis YEO dan 2-undecanone dengan kromatografi gas (GC)

YEO dan 2-undecanone dianalisis pada sistem Agilent 6890 GC (Agilent Technologies, Santa Clara, CA)
ditambah dengan sinar detektor ionisasi atau Flame Ionization Detector (FID) dan injektor split-
splitless. Digunakan Agilent 19091-413 kolom kapiler HP-5 (30 m x 0,32 mm x 0,25 mm). Gas
pembawanya adalah nitrogen dengan laju alir berada pada 1,0 ml / menit dalam mode aliran konstan
dengan satu mikroliter disuntikkan secara perlahan. Suhu di atur naik dari 60˚ C menjadi 120˚ C, sekitar
5˚ C / menit. dan dipertahankan pada 120˚ C selama 2 menit, kemudian di naikkan kembali dari 120˚
C sampai 240˚ C dengan kecepatan 20˚ C / menit dan dipertahankan selama 5 menit. Metode
kuantifikasi 2-undecanone pada jaringan paru-paru digunakan undecene sebagai standar internal dan
divalidasi.

2.5. Karakterisasi SLNs

Ukuran partikel SLN diukur dengan Dynamic Light Scattering (DLS) menggunakan Zetasizer
Nano ZS (Malvern Instruments Ltd, Worcestershire, Inggris), sedangkan potensi zeta diukur
menggunakan Zetasizer pada suhu 25˚ C dan sudut 17˚ dengan mengukur mobilitas
elektroforesis mengguanakn laser Doppler velocimetry. Semua pengukuran dilakukan secara
triplo. Setelah nebulisasi ukuran partikel dan potensi zeta YEO yang diisi suspensi SLN juga
diukur untuk menangkap aerosol yang dijelaskan pada Bagian 2.7. Untuk penentuan efisiensi
enkapsulasi (EE%) dan kapasitas pemuatan obat (DL%), 2-undecanone digunakan sebagai
penanda kimia terindeks. YEO yang tidak terpisahkan, dipisahkan oleh metode ultrafiltrasi
(Hu et al., 2013) di bagian bawah tabung dan di analisis oleh GC untuk mengetahui
kandungan 2-
undecanone. Total kandungan obat dalam SLN ditentukan setelah ekstraksi dengan etil asetat. DL%
dinyatakan sebagai persen. EE% bisa dihitung dengan persamaan berikut :

𝑊𝑡−𝑊𝑢
Enkapsulasi efisiensi (EE%) = 𝑊𝑡
𝑥 100%

Dimana Wu adalah obat yang tidak terpakai di SLN dan Wt adalah keseluruhannya obat dalam
suspensi SLN.
2.6. Pelepasan SLN secara in vitro
Metode dialisis yang dimodifikasi digunakan untuk mengevaluasi pelepasan YEO secara in vitro
dengan atau tanpa pemuatan pada SLN. Secara singkat, satu mililiter SLN atau YEO bebas dengan
konsentrasi YEO 0,2 mg / ml ditempatkan dalam kantong dialisis selulosa (Spektrum / Por1 berat
molekul dipotong (MWCO) 8000-14,000 Da, Laboratorium Spectrum, Rancho Dominguez, CA, AS )
terhadap 200 ml larutan air SDS 0,5%, pada suhu 37˚C dengan pengadukan magnetic stirer pada 300
rpm. Pada interval waktu yang telah ditentukan (0,5, 1, 2, 4, 8, 16, 32 dan 48 jam), 1 ml larutan dalam
fase penerimaan diambil untuk analisis dengan menggunakan GC dari 2-undecanone yang dilepaskan.
Setelah setiap 1 ml sampel diambil, 1 ml larutan SDS 0,5% yang baru ditambahkan ke dalam bejana
untuk mempertahankan volume total pada 200 ml. YEO bebas dilarutkan dalam 0,5% Tween 80
solution. Semua percobaan dilakukan tiga kali (triplet).

2.7. Endapan aerosol in vitro dan distribusi ukuran partikel / tetesan

Setelah nebulisasi suspensi SLN melalui nebulizer PARI LC Plus, distribusi ukuran partikel/globul
diukur dengan menggunakan Malvern Spraytec1 (Song et al., 2016) sedangkan karakteristik
aerodinamis ditentukan dengan menggunakan pemicu next-generation pharmaceutical impactor (NGI,
Aparatur E; European Pharmacopoeia, 2013) (MSP, AS) dengan kelembaban relatif 30% pada suhu
kamar. Untuk pengukuran NGI, setelah NGI yang dirakit dengan kertas saring dan port induksi yang
baru diganti didinginkan terlebih dahulu di lemari es (pada suhu 5˚C) selama tidak kurang dari 90 menit,
nebulizer dengan 4 ml suspensi SLN dilekatkan pada NGI via corong karet, di mana stopkontak
pemukul dihubungkan ke pompa vakum yang mampu menarik udara melalui saluran masuk sistem pada
15 L/ menit. Setelah menyalakan kompresor (PARI Turbo BOY N) untuk nebulizer, tetesan kemudian
ditarik ke impactor selama 60 detik. Semua sampel suspensi SLN dijalankan dalam rangkap tiga.
Setelah setiap ukuran, partikel obat dalam nebulizer, tenggorokan dan setiap tahap NGI dicuci dengan
air deionisasi dengan labu volumetrik 5 ml, kemudian diekstraksi menggunakan etil asetat. Setiap fasa
organik dikumpulkan dan dikeringkan, dan residu dilarutkan dalam 500 ml etil asetat. Setelah
sentrifugasi dengan Thermo Sorvall Legend Micro 17R centrifuge (Thermo Scientific, USA) pada
15.000 g selama 5 menit, supernatan tersebut disuntikkan di GC untuk analisis. Seperti untuk
menangkap nebulasi aerosol, ukuran partikel, dan pengukuran potensial zeta, satu aliquot suspensi SLN
5 ml dan partikel obat dilakukan nebulisasi selama 10 menit pada nebulizer, pada tenggorokan dan
semua tahap pada proses NGI dicuci dengan air deionisasi pada labu volumetrik 50 ml untuk
pengukuran.

Diameter efektif cutoff untuk tahap 1-7 dari NGI pada 15 l / menit masing-masing adalah 14,1, 8,61,
5,39, 3,3, 2,08, 1,36, 0,98 mm. Data yang didapat dianalisis untuk memberikan dosis total obat (TD)
(obat yang dikumpulkan di perangkat, corong dan tenggorokan, stadium 1-7 dan kolektor orifos mikro,
MOC), FPD (obat yang dikumpulkan pada tahap 4-MOC) dan FPF < 5,39 mm (rasio obat yang
dikumpulkan pada stadium 4-MOC sampai dengan TD). Diameter aerodinamis medianya (MMAD)
adalah diameter pada persentase kumulatif 50%, sementara standar deviasi geometrik (GSD)
didefinisikan sebagai rasio diameter pada persentase kumulatif 84,1% terhadap 50%.

2.8. Retensi pulmonal SLNs

Tikus jantan Wistar (180-220 g, 8 minggu) dipasok dari Institute of Laboratory Animal Science,
Akademi Ilmu Pengetahuan Medis China (Beijing, China). Sebelum percobaan, semua tikus
ditempatkan di kamar hewan bebas patogen spesifik pada suhu yang dikontrol (23˚C) dan di bawah 12
jam siklus terang / gelap setidaknya selama 7 hari, dan tikus memiliki akses bebas terhadap diet dan air.
Percobaan hewan tersebut disetujui oleh Komite Etika Hewan di Institute of Medicinal Plant
Development, Chinese Academy of Medical Sciences. Nomor persetujuan etika hewan SLXD-
2013101627.

Larutan YEO bebas disiapkan dengan melarutkan YEO dalam larutan Tween 80 aqueous saline (0,9%
NaCl), sementara suspensi SLN diperoleh dengan memasukkan SLN dalam air. Untuk menguji retensi
paru in vivo, tikus dibagi menjadi 5 kelompok, masing-masing kelompok diberi imunisasi SLN-200,
SLN-400, SLN-800 atau YEO dengan dosis 1,0 mg / kg YEO, atau secara intravena (IV) diberikan
larutan YEO dengan dosis 10,0 mg / kg YEO. Untuk administrasi TI, hewan diberi anestesi dengan
suntikan sodium pentobarbital intraperitoneal (40 mg / kg). Selanjutnya, sprayer mikro (Model IA-1B,
Penn-Century Inc., AS) yang terpasang pada jarum suntik dimasukkan ke trakea, suspensi atau larutan
disampaikan pada volume 1,0 ml / kg. Setelah pemberian dosis intratrakeal, hewan tersebut dipegang
tegak selama 1 menit untuk memastikan pengendapan dosis setelah dikeluarkannya alat pengantaran.

Pada waktu yang telah ditentukan (yaitu 0,5, 1, 6, 12, 24 jam) setelah pemberian dosis, tiga tikus pada
setiap waktu tertentu dibunuh dengan dislokasi serviks, dan jaringan paru nya dikumpulkan, dicuci dan
ditimbang. Setelah pengumpulan jaringan, sampel disimpan pada suhu 20˚C sampai analisis lebih
lanjut.

Sebelum analisis GC, sampel jaringan dihomogenisasi atau dicampur dalam larutan garam dengan
perbandingan 1: 3 (b/b). Selanjutnya, 500 ml masing-masing homogenat jaringan dipindahkan ke
tabung dan dengan menambahkan 1 ml etil asetat untuk mengekstrak YEO. Setelah melakukan vortex
dan sentrifugasi Thermo Sorvall Legend Micro 17R centrifuge (Thermo Scientific, USA) pada 15.000
g selama 3 menit, fase organik setiap tabung dipindahkan ke tabung baru dan diuapkan sampai kering
di bawah aliran nitrogen pada suhu kamar. Residu dilarutkan dalam 100 ml etil asetat dan disentrifugasi
pada 15.000 g pada suhu 4˚C selama 10 menit. Supernatan tersebut disuntikkan ke GC untuk analisis.

Tabel 1

2.9. analisis data

Nilai daerah area under the mean lung concentration–time curve (AUC) dihitung dengan menggunakan
aturan trapesium. Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan uji beda dua varian terhadap uji
statistik faktorial (ANOVA) yang tidak berpasangan. Nilai P-kurang dari 0,05 diindikasikan signifikan
secara statistik. Semua data dinyatakan sebagai standar deviasi (SD).

3. hasil dan diskusi

3.1. Persiapan formulasi SLN

Dalam literatur, berbagai metode telah digunakan untuk menghasilkan dispersi nanopartikel lipid yang
terdispersi halus (Müller et al., 2000; Naseri et al., 2015). Dalam penelitian ini, sebuah studi
pendahuluan telah menguji lima metode, termasuk pengeringan semprot nano, homogenisasi
bertekanan tinggi, homogenisasi ultrasonikasi, penguapan pengeringan emulsi pelarut dan
homogenisasi dengan geser tinggi, untuk produksi YEO yang memuat SLN. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa pengeringan semprotan nano sulit untuk memberikan SLN nanosized, sedangkan
homogenisasi ultrasonikasi dan emulsifikasi pelarut - evaporasi dapat menghasilkan SLN 200 nm
namun dengan indeks polidispersitas (PDI) lebih besar dari 0,7 (Data tidak ditunjukkan). Meskipun
homogenisasi tekanan tinggi mampu menghasilkan SLN dengan distribusi ukuran kecil, proses ini
memerlukan waktu persiapan yang lama, yang menyebabkan pemulihan YEO yang buruk (data tidak
ditunjukkan). Sebaliknya, homogenisasi geser tinggi ditemukan menghasilkan SLN dengan ukuran
sempit distribusi dan pemulihan YEO yang tinggi. Akibatnya, homogenisasi dengan geser tinggi
digunakan untuk mempersiapkan SLN dalam penelitian ini.

Selanjutnya, efek eksipien lipid dan parameter persiapan seperti laju geser dan waktu pemrosesan pada
distribusi ukuran partikel dan efisiensi enkapsulasi dievaluasi. SLN yang dapat dihirup dalam penelitian
ini dikenai penghilangan pengemulsi. Untuk memudahkan pemisahan SLN dan pengemulsi
pengemulsi, PVA larut air daripada surfaktan digunakan untuk mengemulsi fase lipid. Ketika larutan
PVA digunakan sebagai fasa air, distribusi ukuran partikel terutama ditentukan oleh parameter preparasi
sedangkan eksipien lipida padat memainkan peran penting dalam efisiensi enkapsulasi. Di antara lima
eksipien, yaitu gliserin monostearat, glyceryl distearate, gliseril tristearat, asam stearat dan gliseril
behenate, glyceryl behenate dapat merangkum YEO secara efisien (data tidak ditunjukkan). Glyceryl
distearate adalah bahan lipid yang umum digunakan untuk pembuatan SLN yang terhirup dan pembawa
lipida berstrukturnano (NLC) dan potensi biokompatibilitas potensial juga telah didokumentasikan
(Cipolla et al., 2014). Sebagai contoh, beberapa penelitian telah meneliti sitotoksisitas in vitro dari
pembawa lipida berbasis gliseril behenate pada sel epitel paru, termasuk sel A549 dan H441, dan
hasilnya menunjukkan tolerabilitas yang baik (Hu et al., 2010; Liu et al., 2008; Patlolla et al., 2010).
Selain itu, studi praklinis cenderung mendukung pembawa berbasis lipid (termasuk liposom, SLN dan
NLC) pada umumnya bersifat fisiologis inert dan biokompatibel setelah terhirup, walaupun tidak ada
data keamanan klinis yang tersedia (Cipolla et al., 2014). Oleh karena itu, SLE yang dilepas YEO dapat
digunakan dengan aman untuk pengiriman inhalasi, terutama untuk tujuan terapi jangka pendek.

Serupa dengan temuan sebelumnya (Ahlin et al., 1998; Yang et al., 1999; Zhang et al., 2003) ukuran
partikel dipengaruhi oleh keasaman atau penambahan gliserin ke larutan PVA. Oleh karena itu, setelah
memanipulasi fasa air seperti yang tercantum pada Tabel 1, tiga SLN dengan ukuran partikel berbeda
disiapkan mengikuti teknik homogenisasi geser tinggi dengan menggunakan glyceryl behenate sebagai
lipid.

Fig. 2. Cumulative release profile of Yuxingcao essential oil loaded SLNs with different particle size in vitro (Mean SD, n = 3).
TABEL 2

3.2. Karakteristik fisik SLNs

Ukuran partikel dari tiga formulasi SLN ditentukan masing-masing menjadi 171,2 12,9, 412,2 19,0 dan
811,9 18,6 nm, dengan distribusi ukuran yang relatif sempit yang ditunjukkan oleh nilai PDI 0,260-
0,287 (Tabel 1). Potensi zeta dari SLE yang dimuat YEO antara 17,1 dan 19,3 mV, menunjukkan bahwa
tolakan elektro-statis dapat mencegah agregasi partikel dan meningkatkan stabilitas dispersi.

EE% adalah salah satu karakteristik penting untuk mengevaluasi kualitas formulasi SLN. Setelah
memisahkan minyak atsiri yang tidak terpetakan dengan menggunakan metode ultra-filtrasi yang telah
dijelaskan sebelumnya (Hou et al., 2003; Shi et al., 2012), EE% dari SLN-200, 400 dan 800 bertekad
menjadi 90,20, 0,46, 88,32 3,36 dan 76,61 4,13%, seperti yang ditunjukkan oleh kandungan 2-
undecanone, penanda terindeks YEO (Tabel 1). EE tinggi menunjukkan bahwa glyceryl behenate based
SLNs dapat secara efisien menjebak YEO. Kemampuan encapsulating glyceryl behenate untuk minyak
esensial secara luas sesuai dengan penelitian sebelumnya, yang melaporkan bahwa lipid secara efisien
menyebarkan Dalbergia odorifera, Artemisia arborescens, minyak esensial kemenyan dan srrh,
memberikan EE% 81% -92% dan menyebabkan berkurangnya evapora. -jenis bahan volatil (Han et al.,
2004; Lai et al., 2006; Shi et al., 2012). Namun, perlu dicatat bahwa penggunaan 2-undecanone sebagai
marker yang diindeks tidak berarti secara komprehensif menilai% EE dan DL% SLN karena fakta
bahwa YEO terdiri dari ratusan komponen dengan struktur molekul yang berbeda. Akibatnya, sidik jari
kimia YEO yang diekstraksi dari SLN dibandingkan dengan YEO bebas (Gambar 1). Gambar 1
menunjukkan bahwa profil sidik jari umum antara YEO dan SLN yang dienkapsulasi YEO hampir
identik, yang menunjukkan kesesuaian 2-undecanone sebagai index penanda

3.3. Pelepasan secara in vitro dari YEO yang dilepas SLNs

Profil pelepasan in vitro dari YEO denga menggunakan SLN dengan ukuran partikel yang berbeda
ditunjukkan pada Gambar 2. Dapat dilihat bahwa larutan YEO bebas menyebabkan pelepasan yang
relatif cepat dengan lebih dari 70% obat dilepaskan dari kantong dialisis dalam 5 jam. . Ketika
dienkapsulasi ke dalam SLN, 2-undecanone dilepaskan dengan kecepatan lebih dari 48 jam dengan
kurang dari 40% ledakan awal dalam 5 jam pertama untuk ketiga SLN tersebut. Pelepasan yang secara
signifikan berkelanjutan seperti ini kemungkinan disebabkan oleh difusi minyak esensial yang lebih
lambat dari SLN daripada penetrasi molekul obat di membran dialisis, dan data pelepasan in vitro juga
menyarankan agar formulasi SLN saat ini berpotensi berguna untuk mengendalikan pelepasan esensial.
minyak. Ledakan awal SLN dalam 5 detik pertama nampak berbanding terbalik dengan ukuran partikel.
Semakin besar ukuran partikel, semakin tinggi burst awal. Meskipun demikian, tampaknya tidak ada
perbedaan yang signifikan dalam hal kondisi steady state antara 5 dan 48 jam.
Fig. 3. The droplet size distribution of YEO loaded SLN suspensions after nebulization as evaluated in laser diffraction testing: SLN-200 (A), SLN-400 (B), SLN-800 (C) and the
in vitro deposition profiles in a Next Generation Impactor at 15 l/min (D) (Mean SD, n = 3).

Tabel 3

3.4. Endapan aerosol in vitro dan distribusi ukuran tetesan SLN

suspensi

Injeksi Yuxingcao sering digunakan diluar label untuk terapi nebulisasi. Data pada Tabel 2
menunjukkan bahwa nebulisasi SLN tidak mengarah pada
variasi yang signifikan dalam ukuran partikel dan potensial zeta,
suspensi SLN yang mengandung YEO menunjukkan toleransi yang baik
dengan proses nebulisasi.

Untuk karakterisasi mutu aerosol yang dihasilkan nebulizer,

persyaratan wajibnya adalah evaluasi aerodinamis dan distribusi ukuran partikel/ ukuran
tetesan. Akibatnya, suspensi SLN yang mengandung YEO dievaluasi kinerja aerosol setelah
nebulisasi. Distribusi ukuran tetesan dari suspensi SLN-YEO setelah nebulisasi seperti yang
dievaluasi dalam pengujian difraksi laser dan profil pengendapan in vitro dalam NGI pada 15
l/menit ditunjukkan pada Gambar 3 dan Tabel 3. Hasil difraksi laser pada Gambar 3A-C
menunjukkan bahwa distribusi ukuran tetesan nebulisasi suspensi SLN serupa dengan diameter
medial volumetrik (VMD) yaitu antara 3,26 dan 3,53 µm dan tetesan memperlihatkan derajat
monodispersitas yang sedang (moderat) seperti yang ditunjukkan oleh nilai Span, suspensi
cocok untuk inhalasi karena lebih dari 70% dari tetesan berukuran lebih kecil dari 5 µm. Data
deposisi pada NGI (Gambar 3D) menunjukkan kecenderungan yang sama dengan hasil difraksi
laser suspensi SLN-800 yang memperlihatkan FPF sedikit lebih rendah dan MMAD lebih besar
daripada SLN-200 atau SLN-400. Secara keseluruhan, ketiga suspensi SLN setelah nebulisasi
menunjukkan kemampuan pernafasan yang sangat baik dengan FPF <5,4 µm
lebih dari 67,4%.

3.5. Studi distribusi / retensi paru

Kurva konsentrasi-waktu paru rata-rata dari 2-undecanone setelah

pemberian formulasi bebas YEO dan SLN ditunjukkan pada Gambar 4. dan parameter
farmakokinetik diringkas dalam Tabel 4. Dalam penelitian sebelumnya (Xiao et al., 2007),
mengikuti injeksi IV larutan YEO, 2-undecanone cepat didistribusikan di paru-paru dan
konsentrasi menurun sampai di bawah LLOD (0,3 µg/g) dalam 6 jam setelah injeksi. AUC di
paru-paru dengan dosis larutan IV adalah 0.6 µg/g h dengan dosis YEO 10 mg/kg. Saat larutan
YEO 1,0 mg/kg di minum intratrakea oleh tikus, konsentrasi 2-undecanone di paru-paru juga
hanya terdeteksi dalam 6 jam. Dengan eliminasi yang cepat dari 2-undecanone maka molekul
kecil hidrofobik absorpsi klirens pulmonernya pun cepat. (Hu et al, 2016; Patton et al., 2004).
Larutan yang diberikan IT ditemukan untuk meningkatkan AUC 2-undecanone sebesar 56,7
kali lipat dibandingkan dengan larutan obat yang diberikan IV. Maksimalisasi ketersediaan
obat ke saluran pernafasan merupakan tujuan yang utama untuk rute pemberian paru-paru.

Setelah dihirup hewan pada penelitian sebelumnya menunjukan bahwa SLN mampu untuk
memperpanjang retensi paru dan untuk mempertahankan pelepasan obat (Hu et al., 2010;
Pandey dan Khuller, 2005). Dalam penelitian ini, IT menghantarkan SLN-YEO secara
berkelanjutan/ kadar 2-undecanone bertingkat di paru-paru setidaknya 24 jam, menyebabkan
peningkatan 257- 438 kali lipat pada AUC di paru-paru dibandingkan dengan IV larutan.
Meskipun ada perbedaan signifikan dalam besarnya AUC di antara ketiga SLNs, perbedaan
utamanya dihasilkan dari pembersihan awal SLN dalam 1 jam dan alasannya tidak jelas. Secara
keseluruhan, data ini telah mengungkapkan bahwa dosis IT SLN, terlepas dari ukuran partikel
antara 171 dan 812 nm, dapat memberikan bioavailabilitas lokal yang lebih baik dari YEO ke
larutan IV, mewakili pembawa inhalable yang menjanjikan yang bisa
membawa YEO ke paru-paru dengan frekuensi dosis rendah.
4. Kesimpulan

Dalam studi ini, YEO dalam SLN dengan ukuran partikel yang berbeda
berhasil dipreparasi menggunakan teknik homogenisasi geser tinggi. Karakterisasi fisikokimia
menunjukkan basis SLNs yaitu glyceryl behenate secara efektif mengkapsulasi
lipofilikminyak esensial dan secara in vitro mempertahankan pelepasan obat. Dengan
nebulisasi, suspensi SLN dapat menunjukkan pernapasan yang sangat baik secara in vitro.
Dalam studi farmakokinetik komparatif, IT SLNs muncul untuk memperpanjang retensi obat
dan meningkatkan tersediaan lokalnya. Hasil saat ini, pertama untuk menunjukkan bahwa YEO
dengan teknologi SLN dapat mempertahankan penghantaran inhalasi YEO, memperpanjang
eliminasi paruh (waktu paruh) di paru-paru dan meningkatkan bioavailabilitas lokal, berpotensi
memperluas aplikasi klinis dengan dosis sekali sehari.

Table 1
Preparation compositions and physiochemical properties of Yuxingcao essential oil (YEO) loaded solid lipid nanoparticles (Mean SD, n = 3).

Formulation Preparation composition Particle size (nm) PDI Zeta potential (mV) EE (%) DL (%)

SLN-200 Lipid phase: 500 mg glyceryl behenate, 25 mg YEO 171.2 12.9 0.263 0.019 19.3 1.27 90.20 0.46 2.96 0.02

Water phase: 1% PVA aqueous 50 ml with 0.1% HCl

SLN-400 Lipid phase: 500 mg glyceryl behenate, 25 mg YEO 412.2 19.0 0.260 0.030 18.4 0.62 88.32 3.36 3.12 0.12

Water phase: 1% PVA aqueous 50 ml

SLN-800 Lipid phase: 500 mg glyceryl behenate, 25 mg YEO 811.9 18.6 0.287 0.056 17.1 1.01 76.61 4.13 2.34 0.13

Water phase: 1% PVA aqueous 50 ml with 0.5% glycerin

PDI, polydispersity index; EE, encapsulation efficiency; DL, Drug loading.