Ragi Dalam Produksi Bioetanol Berkelanjutan: Review A

Abstrak

Bioetanol telah diidentifikasi sebagai biofuel banyak digunakan di seluruh dunia karena memberikan
kontribusi signifikan terhadap pengurangan konsumsi minyak mentah dan pencemaran lingkungan.
Hal ini dapat diproduksi dari berbagai jenis bahan baku seperti sukrosa, pati, lignoselulosa dan
biomassa alga melalui proses fermentasi oleh mikroorganisme. Dibandingkan dengan jenis lain dari
mikroba, ragi terutama Saccharomyces cerevisiae adalah mikroba umum digunakan dalam produksi
etanol karena produktivitas etanol yang tinggi, toleransi etanol tinggi dan kemampuan fermentasi
berbagai gula. Namun, ada beberapa tantangan dalam fermentasi ragi yang menghambat produksi
etanol seperti suhu tinggi, konsentrasi etanol yang tinggi dan kemampuan untuk memfermentasi
gula pentosa. Berbagai jenis strain ragi telah digunakan dalam fermentasi untuk produksi etanol
termasuk hibrida, rekombinan dan tipe liar ragi. Ragi dapat langsung memfermentasi gula sederhana
menjadi etanol sementara lainnya jenis bahan baku harus dikonversi ke gula difermentasi sebelum
dapat difermentasi menjadi etanol. Umum proses melibatkan dalam produksi etanol adalah
pretreatment, hidrolisis dan fermentasi. Produksi bioetanol selama fermentasi tergantung pada
beberapa faktor seperti suhu, konsentrasi gula, pH, waktu fermentasi, tingkat agitasi, dan ukuran
inokulum. Efisiensi dan produktivitas etanol dapat ditingkatkan oleh melumpuhkan sel-sel ragi.
Ulasan ini menyoroti berbagai jenis strain ragi, proses fermentasi, faktor yang mempengaruhi
produksi bioetanol dan imobilisasi ragi untuk produksi bioetanol yang lebih baik.

1. pengantar

Peningkatan standar hidup mendesak perburuan energi berkelanjutan untuk memenuhi

konsumsi energi di seluruh dunia [1]. Di sisi lain, penggunaan bahan bakar fosil sebagai sumber
utama energi yang disebabkan munculnya masalah di seluruh dunia seperti pencemaran
lingkungan dan pemanasan global [2,3]. Ini menyebabkan temuan energi ramah lingkungan,
terbarukan dan berkelanjutan oleh sektor pemerintah, industri dan energi [4,5]. Di antara energi
terbarukan, prioritas diberikan kepada biofuel cair karena mewakili sekitar 40% dari total
konsumsi energi di dunia [6]. Penggunaan biofuel cair berkontribusi pada pengurangan emisi gas
rumah kaca, penciptaan lapangan kerja, pembangunan daerah dan keamanan pasokan [5,7].

Bioetanol dikenal sebagai biofuel yang paling banyak digunakan di sektor transportasi dan
memiliki sejarah panjang sebagai bahan bakar alternatif. Pada tahun 1984, Jerman dan Perancis
mulai menggunakan bioetanol sebagai bahan bakar dalam mesin pembakaran internal (ICES) [8].
Pemanfaatan bioetanol oleh Brasil dimulai sejak 1925. Di Eropa dan Amerika Serikat, bioetanol
secara luas digunakan sampai awal 1900-an. Setelah Perang Dunia II, penggunaan bioetanol
diabaikan karena biaya produksi yang mahal dibandingkan dengan bahan bakar minyak bumi
sampai krisis minyak di tahun 1970-an [5]. Kepentingan dalam menggunakan bioetanol telah
meningkat sejak tahun 1980-an dan telah dianggap sebagai bahan bakar alternatif di banyak
negara. produksi etanol global meningkat dari 13,12 miliaran galon di 2007-25,68 miliaran galon
pada tahun 2015 dengan sedikit penurunan pada tahun 2012 dan 2013 [9]. Amerika Serikat
merupakan produsen etanol terbesar dengan produksi hampir 15 miliar galon pada 2015.
Produksi etanol oleh Amerika Serikat dan Brasil berkontribusi untuk produksi etanol 85% dunia.

Bioetanol juga dikenal sebagai etil alkohol atau kimia C2H5OH atau EtOH. Hal ini dapat
digunakan secara langsung sebagai etanol murni atau dicampur dengan bensin untuk
menghasilkan “gasohol” [10]. Hal ini dapat digunakan sebagai peningkat bensin atau oktan
 enhancer dan campuran bioetanol-diesel untuk mengurangi emisi gas buang [11]. Bioetanol
menawarkan beberapa keunggulan dibandingkan bensin seperti jumlah tinggi oktan (108),
ambang ledakan yang lebih luas, kecepatan api yang lebih tinggi dan meningkatkan memanas
penguapan [12]. Berbeda dengan bahan bakar minyak bumi, bioetanol kurang beracun, mudah
terurai secara hayati dan menghasilkan polusi udara-ditanggung lebih kecil [13]. Berbagai bahan
baku dari generasi pertama, kedua dan ketiga telah digunakan dalam produksi bioetanol. Generasi
pertama bioetanol melibatkan bahan baku kaya sukrosa (gula tebu, gula bit, sorgum manis dan
buah-buahan) dan pati (jagung, gandum, beras, kentang, singkong, ubi jalar dan barley). Bioetanol
generasi kedua berasal dari biomassa lignoselulosa seperti kayu, jerami dan rumput. Ketiga
bioetanol generasi telah diturunkan dari biomassa alga termasuk mikroalga dan makroalga [14]

Mikroorganisme seperti ragi memainkan peran penting dalam produksi bioetanol dengan
fermentasi berbagai gula menjadi etanol. Mereka digunakan dalam pabrik-pabrik industri karena
sifat berharga dalam yield etanol (> 90,0% hasil teoritis), toleransi etanol (> 40,0 g / L),
produktivitas etanol (> 1,0 g / L / h), pertumbuhan sederhana, media murah dan murni kaldu
fermentasi dengan resistensi terhadap inhibitor dan kontaminan menghambat dari kondisi
pertumbuhan [15]. Sebagai komponen utama dalam fermentasi, ragi mempengaruhi jumlah hasil
etanol. Dalam ulasan ini, peran ragi dalam fermentasi bioetanol dan teknik imobilisasi yang akan
dibahas dalam rangka meningkatkan produksi etanol untuk kepentingan umat manusia.

2. Ragi

Ragi didefinisikan sebagai ascomycetous atau jamur basidiomycetous yang mampu

mereproduksi oleh tunas atau fisi dan bentuk spora yang tidak tertutup dalam tubuh buah [16].
Mereka pertama diklasifikasikan berdasarkan seksualitas nya (Ascomycotina atau
Basidiomycotina) atau kurangnya fase seksual dalam siklus hidup (Deuteromycotina). Subdivisi
taksonomi yang lebih rendah (keluarga, sub-famili, genus, spesies dan strain) ditentukan oleh
karakteristik morfologi, fisiologi dan genetik termasuk reproduksi seksual [17].

2.1. ragi keragaman

Jumlah ragi ditemukan telah meningkat dari tahun ke tahun. Lebih dari 2500 spesies ragi yang
diterbitkan pada tahun 2005. Hal ini diasumsikan bahwa hanya 1% dari spesies ragi saat ini
dikenal yang mewakili sekitar 1500 spesies. Total jumlah spesies ragi di bumi diperkirakan
mencapai 150.000 [18]. Keragaman spesies ragi dalam relung tertentu ditentukan oleh
kemampuan memanfaatkan sumber karbon yang berbeda dan selektivitas gizi karena
menunjukkan spesialisasi besar untuk habitat [19]. Ragi dapat diisolasi dari lingkungan darat, air
dan udara. Tanaman merupakan habitat disukai masyarakat ragi. Beberapa spesies yang
ditemukan memiliki commensalism atau hubungan parasit dengan hewan. lingkungan yang
ekstrim seperti potensi rendah air (gula tinggi atau konsentrasi garam) dan suhu rendah dapat
dihuni oleh ragi [20,21]. Habitat alami ragi diringkas dalam Tabel 1

Ada keragaman yang luas dari sel ragi termasuk ukuran, bentuk dan warna. ukuran sel ragi
dipengaruhi oleh spesies dan kondisi pertumbuhan. Panjang beberapa sel ragi hanya 2-3 m
sedangkan spesies lainnya dapat mencapai panjang 20-50 m [19]. Kebanyakan ragi memiliki lebar
di kisaran 1-10 pM. Umumnya, ukuran strain pembuatan bir dari S. cerevisiae lebih besar dari
strain laboratorium [22]. Banyak spesies ragi termasuk Saccharomyces spp. adalah elips atau bulat
telur dalam bentuk dan memiliki koloni warna krem [20,21].
2.2. genetika molekuler dari ragi

Produksi bioetanol didirikan pada kemampuan ragi untuk catabolize molekul enam karbon
seperti glukosa menjadi dua komponen karbon, seperti etanol, tanpa melanjutkan ke produk
oksidasi akhir yang CO2. Crabtree ragi positif seperti S. cerevisiae menumpuk etanol dengan
adanya oksigen, namun Candia albicans yang merupakan crabtree-negatif ragi catabolizes gula
menjadi CO2 di hadapan oksigen [23]. Kehadiran enam karbohidrat karbon merepresi respirasi
jalur oksidatif di Crabtree ragi positif dan energi untuk pertumbuhan yang dihasilkan melalui
glikolisis. Setelah menipisnya enam molekul karbon, katabolisme bergeser ke oksidasi dua
molekul karbon menjadi CO2 [24]. Fenomena ini disebut di ‘pergeseran diauxic’. Proses produksi
bioetanol melalui metabolisme fermentasi dan pergeseran diauxic tergantung pada enzim
Alkohol dehidrogenase (EC 1.1.1.1) yang dikodekan pada ADH1locus. ADH1 mengkatalisis
reduksi asetaldehida menjadi etanol selama fermentasi glukosa, juga dapat mengkatalisis reaksi
sebaliknya yang merupakan konversi etanol menjadi asetaldehida, meskipun dengan efisiensi
catalystic lebih rendah [25].

Ragi S. cerevisiae mengandung dua gen yang mengkode ADH, ADH1 dinyatakan konstitutif,
sedangkan ekspresi ADH2 diinduksi oleh penurunan konsentrasi intraseluler glukosa. Substrat
untuk enzim ADH2 adalah etanol [26]. Ekspresi gen ADH2 diatur oleh faktor transkripsi dan
sekuensing genom dan analisis transcriptome telah mengungkapkan struktur dan DNA mengikat
unsur protein-protein regulator [27]. Kemajuan terbaru dalam biologi sintetis telah difokuskan
pada rekayasa ulang gen ADH untuk spesifisitas substrat yang lebih besar dan peningkatan
aktivitas katalitik serta rekayasa genom ragi dengan protein coding gen [28] yang meningkatkan
toleransi terhadap etanol dan katalis dari berbagai karbon sumber [29]. Para ahli biologi
molekuler secara aktif mencari gen baru encoding ADHs menggunakan pendekatan
metagenomic, dan ini telah menghasilkan sejumlah varian unik [30].

2.3. Ragi dalam produksi bioetanol

Sejak ribuan tahun yang lalu, ragi seperti S. cerevisiae telah digunakan dalam produksi
alkohol terutama di industri pembuatan bir dan anggur. Itu membuat murah distilasi karena
memberikan yield etanol yang tinggi, produktivitas tinggi dan dapat menahan konsentrasi etanol
yang tinggi [31]. Saat ini, ragi digunakan untuk menghasilkan bahan bakar etanol dari sumber
energi terbarukan [32]. strain ragi tertentu seperti Pichia stipitis (NRRL-Y-7124), S. cerevisiae (RL-
11) dan Kluyveromyces fagilis (Kf1) dilaporkan sebagai produsen etanol yang baik dari jenis
fferent gula [33]

S. cerevisiae adalah ragi yang paling umum digunakan dalam produksi etanol industri karena
mentolerir berbagai pH [34] sehingga membuat proses lebih rentan terhadap infeksi. ragi roti
secara tradisional digunakan sebagai kultur starter dalam produksi etanol karena biaya rendah
dan ketersediaan mudah. Namun, ragi roti dan jenis lainnya S. cerevisiae tidak dapat bersaing
dengan tipe liar ragi yang menyebabkan kontaminasi selama proses industri. kondisi stres
seperti peningkatan konsentrasi etanol, suhu, stres osmotik dan kontaminasi bakteri adalah
alasan mengapa ragi tidak dapat bertahan hidup selama fermentasi [35]. ragi flocculent juga
digunakan selama fermentasi biologis untuk produksi etanol karena memfasilitasi pengolahan
hilir, memungkinkan operasi pada densitas sel yang tinggi dan memberikan produktivitas secara
keseluruhan lebih tinggi [36,37]. Ini mengurangi biaya pemulihan sel karena terpisah dengan
mudah dari medium fermentasi tanpa sentrifugasi [38]

.
 Ada tantangan umum untuk ragi selama fermentasi gula yang kenaikan suhu (35-45 ° C) dan
konsentrasi etanol (lebih dari 20%) [39]. tingkat ragi pertumbuhan dan peningkatan
metabolisme dengan naiknya suhu hingga mencapai nilai optimum. Peningkatan konsentrasi
etanol selama fermentasi dapat menyebabkan penghambatan pertumbuhan mikroorganisme
dan kelangsungan hidup [40,41]. Ketidakmampuan S. cerevisiae tumbuh pada media yang
mengandung tingkat tinggi alkohol menyebabkan penghambatan produksi etanol [42]. Masalah-
masalah lain dalam fermentasi bioetanol oleh ragi adalah kemampuan untuk memfermentasi
gula pentosa. S. cerevisiae adalah yang paling umum digunakan dalam produksi bioetanol.
Namun, hanya dapat memfermentasi heksosa tapi tidak pentosa [43]. Hanya beberapa ragi dari
genus Pichia, Candida, Schizosaccharomyces dan Pachysolen mampu memfermentasi pentosa
menjadi etanol [33]

Efisiensi produksi etanol pada skala industri akan meningkat dengan menggunakan ragi yang
toleran terhadap inhibitor [39]. Tantangan umum ragi dapat diatasi dengan menggunakan
ethanoltolerant dan ragi tahan panas. Etanol-toleran dan strain tahan panas yang dapat
menahan tekanan dapat diisolasi dari sumber daya alam seperti tanah, air, tanaman dan hewan.
Hal ini karena sel-sel beradaptasi dengan lingkungan mereka dari waktu ke waktu oleh seleksi
alam. fermentasi etanol pada suhu tinggi adalah proses ficial bene karena memilih
mikroorganisme thermo-toleran dan tidak memerlukan biaya pendinginan dan selulase [44].
Misalnya, K. marxianus adalah tahan panas ragi yang mampu co-fermentasi baik heksosa dan
pentosa gula dan dapat bertahan hidup suhu 42-45 ° C [45].

Masalah fermentasi pentosa dapat diselesaikan dengan menggunakan hybrid, rekayasa

genetika atau co-budaya dua strain ragi. strain ragi hibrida digunakan secara bersamaan untuk
memfermentasi pentosa dan heksosa gula menjadi etanol. Strain hibrida telah dikembangkan
dengan menggabungkan protoplas S. cerevisiae dan xylose-fermentasi ragi seperti P.tannophilus,
C. shehatae dan P. stipitis [46]. Rekayasa genetika S. cerevisiae dan co-budaya dua strain telah
dikembangkan untuk memproduksi bioetanol dari xylose dengan hasil tinggi. penggunaan teknik
teknologi DNA rekombinan genetik untuk up-mengatur gen toleransi stres dalam rangka untuk
mengatasi situasi penghambatan [47]. Xilosa reduktase dan xylitol dehidrogenase gen dari S.
stipitis diperkenalkan ke S. cerevisiae untuk mengembangkan ketegangan dengan kemampuan
fermentasi xilosa. strain ragi yang direkayasa dapat mengkonversi selulosa menjadi etanol lebih
cepat dibandingkan dengan strain ragi fied unmodi. Proses co-budaya secara bersamaan budaya
dan tumbuh dua ragi yang berbeda dalam reaktor yang sama [48]. Co-budaya menunjukkan
produksi etanol lebih baik dibandingkan dengan kultur murni nya [49]. Dalam co-budaya,
pentosa memanfaatkan ragi seperti fermentans Pichia dan Pichia stipitis digabungkan bersama-
sama dengan S. cerevisiae sehingga heksosa dan gula pentosa dapat e fficiently dimanfaatkan
[50,51].

strain ragi yang telah digunakan dalam produksi bioetanol dirangkum dalam Tabel 2. S.
cerevisiae adalah ragi yang paling banyak dipelajari. Berbagai jenis bahan baku yang digunakan
untuk produksi bioetanol. Kim et al. [52] melaporkan konsentrasi etanol tertinggi dari 96.9g / L
dengan produktivitas 3.46g / L / jam. Hal disumbangkan oleh tipe liar ragi regangan digunakan,
S. cerevisiae KL17 yang mampu memanfaatkan glukosa dan galaktosa secara bersamaan. Hal ini
menunjukkan bahwa tipe liar ragi memiliki potensi tinggi dalam fermentasi gula menjadi etanol.
Selain itu, Silva- filho et al., [53] melaporkan bahwa tipe liar strain bisa lebih efisien untuk proses
industri dari strain komersial. Fermentasi buluh raksasa menggunakan S. stipitis CBS 6054
diperoleh konsentrasi etanol terendah 8.2g / L dengan produktivitas 0.17g / L / h [54]. Pada
 kondisi optimum untuk rilis gula, kadar produk degradasi beracun melebihi tingkat kritis dan
membuat kondisi tidak cocok untuk fermentasi ragi.

3. Proses produksi bioetanol

Proses produksi etanol tergantung pada jenis bahan baku yang digunakan. Secara umum, ada tiga
langkah utama dalam produksi etanol: (1) memperoleh solusi yang berisi gula difermentasi, (2)
mengubah gula menjadi etanol oleh fermentasi dan (3) pemisahan etanol dan pemurnian [108].
Bahan baku biasanya pra-perawatan untuk mengurangi ukuran dan memfasilitasi proses selanjutnya.
Kemudian, hemiselulosa dan selulosa akan dihidrolisis menjadi gula difermentasi. Ragi diberi
tanggung jawab untuk fermentasi gula tersebut menjadi etanol. teknologi pemisahan yang digunakan
untuk memulihkan etanol sebelum dapat

3.1 pretreatment

Pretreatment memiliki dampak yang signifikan terhadap keseluruhan proses yang membuat
hidrolisis lebih mudah dan menghasilkan jumlah yang lebih tinggi dari gula difermentasi. Ini
mempengaruhi jumlah hasil etanol dan biaya produksi [56]. Metode yang saat ini digunakan
untuk pretreatments adalah fisik, kimia, biologi dan fisika. pretreatment fisik menggunakan
penggilingan mekanik ke tanah substrat. Pretreatment kimia umum termasuk ozonolysis,
hidrolisis asam, basa hidrolisis [57] dan proses organosoly berdasarkan [58]. spesies jamur yang
berbeda yang terlibat dalam pretreatment biologis sementara pretreatment fisikokimia termasuk
serat amonia ledakan [59] dan uap [60]. Dehidrasi heksosa dan pentosa selama rilis pretreatment
senyawa furan seperti 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde (HMF) dan 2-furaldehyde. Derivatif furan
menginduksi penghambatan pertumbuhan sel dan mengurangi produktivitas etanol [61]. Ragi
fermentasi dihambat oleh stres asam lemah diinduksi dari bahan lignoselulosa. Namun,
konsentrasi rendah asam lemah dapat meningkatkan produksi etanol oleh seluler divisi.
Dilaporkan bahwa kehadiran asam lemah dapat meningkatkan pemanfaatan glukosa, produksi
etanol dan toleransi untuk HMF dan furfural di S. cerevisiae [62].

3.2. Hidrolisis

proses hidrolisis terjadi setelah pretreatment untuk memecah bahan baku menjadi gula
difermentasi untuk produksi bioetanol. Dua metode hidrolisis paling sering digunakan adalah
asam dan enzimatik. hidrolisis asam dianggap sebagai metode tertua dan paling umum digunakan
[63]. hidrolisis asam dapat dibagi menjadi dua jenis yaitu encer dan terkonsentrasi. Hidrolisis
asam encer dilakukan pada suhu yang lebih tinggi menggunakan konsentrasi asam rendah,
sementara hidrolisis asam pekat dilakukan pada suhu yang lebih rendah menggunakan
konsentrasi asam yang tinggi. Hidrolisis asam encer adalah proses yang paling umum digunakan.
Namun, itu menghasilkan sejumlah besar inhibitor dibandingkan dengan hidrolisis asam pekat.
Asam hidrolisis biomassa lignoselulosa dilakukan dalam dua tahap proses sebagai gula pentosa
menurunkan lebih cepat dibandingkan dengan heksosa gula. Hemiselulosa dihidrolisis dalam
tahap pertama menggunakan larutan asam sementara selulosa dihidrolisis pada tahap kedua
menggunakan asam pekat. proses asam terkonsentrasi menghasilkan pemulihan gula tinggi (90%)
pada periode waktu yang lebih singkat [64]. Kelemahan dari hidrolisis asam adalah sulitnya
melakukan pemulihan asam dan proses daur ulang yang meningkatkan biaya produksi.

hidrolisis enzimatik membutuhkan enzim untuk menghidrolisis bahan baku yang menjadi gula
difermentasi. Tiga jenis enzim yang umum digunakan untuk selulosa rincian seperti endo-β-1,4-
glucanases, cellobiohydrolases dan β-glucosidases. Aktivitas enzim selulase dipengaruhi oleh
konsentrasi dan sumber enzim. Selulosa akan terdegradasi ke dalam mengurangi gula dalam
 kondisi reaksi ringan (pH: 4,8-5,0, suhu: 45-50 ° C). Selain itu, tidak menyebabkan masalah korosi
dalam reaktor yang dapat menghasilkan hasil gula yang tinggi. Efisiensi hidrolisis enzimatik
dipengaruhi oleh kondisi optimal seperti suhu, waktu, pH, enzim bongkar konsentrasi substrat
[65]. Jumlah gula difermentasi diperoleh meningkat sebagai beban enzim meningkat sementara
beban selulosa menurun. sakarifikasi enzim selulosa dapat ditingkatkan dengan menggunakan
surfaktan yang berfungsi untuk memblokir lignin. Efisiensi hidrolisis selulosa dapat ditingkatkan
dengan menambahkan Polyethylene glycol (PEG) atau Tween 20 untuk meningkatkan sakarifikasi
enzimatik dan mengurangi adsorpsi selulase pada lignin [64]. Keterbatasan menggunakan enzim
dalam hidrolisis adalah karena mereka terlalu mahal untuk produksi ekonomis etanol dari
biomassa.

3.3. proses fermentasi

Ada tiga proses yang umum digunakan dalam produksi bioetanol yang hidrolisis terpisah dan
fermentasi (SHF), sakarifikasi simultan dan fermentasi (SSF) dan sakarifikasi simultan dan co-
fermentasi (SSCF). Dalam SHF, hidrolisis bahan lignoselulosa dipisahkan dari fermentasi etanol.
Pemisahan hidrolisis enzimatik dan fermentasi memungkinkan enzim untuk dioperasikan pada
suhu tinggi untuk performa yang lebih baik sementara organisme fermentasi dapat dioperasikan
pada suhu moderat untuk mengoptimalkan pemanfaatan gula. SSF dan SSCF memiliki proses
keseluruhan singkat sebagai enzimatik hidrolisis dan proses fermentasi terjadi secara bersamaan
untuk menjaga konsentrasi rendah glukosa. Untuk SSF, fermentasi glukosa dipisahkan dari pentosa
sementara SSCF fermentasi glukosa dan pentosa dalam reaktor yang sama [65]. Kedua SSF dan
SSCF lebih disukai lebih SHF karena operasi dapat dilakukan dalam tangki yang sama. Manfaat
kedua proses adalah biaya yang lebih rendah, yield etanol yang lebih tinggi dan waktu proses yang
lebih singkat [66].

Fermentasi bioetanol dapat dilakukan dalam batch, makan-batch, batch yang berulang atau
kontinu. Dalam proses batch, substrat disediakan pada awal proses tanpa penambahan atau
penghapusan media [67]. Hal ini dikenal sebagai sistem yang paling sederhana dari bioreaktor
dengan multi-kapal, fleksibel dan proses kontrol yang mudah. Proses fermentasi dilakukan dalam
sistem loop tertutup dengan gula yang tinggi dan konsentrasi inhibitor di awal dan berakhir
dengan konsentrasi tinggi produk [68]. Ada beberapa manfaat dari sistem batch termasuk
sterilisasi lengkap, tidak memerlukan keterampilan tenaga kerja, mudah untuk mengelola bahan
baku, bisa dapat kontrol dengan mudah dan fleksibel untuk berbagai spesifikasi produk [69,70].
Namun, produktivitas rendah dan perlu biaya tenaga kerja intensif dan tinggi. Kehadiran
konsentrasi gula yang tinggi dalam medium fermentasi dapat menyebabkan inhibisi substrat dan
hasil dalam penghambatan pertumbuhan sel dan produksi etanol [71].

Sel recycle fermentasi batch (CRBF) adalah metode strategis untuk produksi etanol efektif
karena mengurangi waktu dan biaya untuk persiapan inokulum. Keuntungan lain dari proses
berulang-batch yang kumpulan sel mudah, operasi yang stabil dan produktivitas jangka panjang
[72,73]. bahan gula dan sel-sel ragi amobil digunakan untuk memfasilitasi pemisahan sel untuk
daur ulang sel [74,75]. Kombinasi SSF dan repeatedbatch fermentasi telah berhasil diterapkan
pada fermentasi pati singkong menggunakan flocculating ragi [76]. Namun, penerapannya dalam
proses SSF dari bahan lignoselulosa sangat sulit karena residu lignocelluosic tetap dalam medium
fermentasi bersama-sama dengan sel ragi [77]. Penggunaan sel bebas dalam sistem ini
mengurangi konsentrasi sel ragi dan hasil produksi etanol lebih rendah di batch berikutnya.
fermentasi berulang-batch dapat dilakukan dengan mengganti sel-sel bebas dengan sel amobil
[78]
 fermentasi Fed-batch adalah kombinasi dari batch dan kontinyu yang melibatkan penambahan
substrat dalam fermentor tanpa menghapus medium. Ini telah digunakan untuk mengatasi
masalah penghambatan substrat dalam operasi batch. Volume budaya dalam proses fed-batch
dapat bervariasi tetapi harus diberi makan dengan baik pada tingkat tertentu dengan komposisi
komponen yang tepat. Produktivitas fermentasi umpan curah dapat ditingkatkan dengan menjaga
substrat pada konsentrasi rendah yang memungkinkan konversi jumlah yang cukup gula
difermentasi menjadi etanol [70]. Proses ini memiliki produktivitas yang lebih tinggi, oksigen yang
lebih tinggi terlarut dalam medium, waktu fermentasi yang lebih pendek dan efek toksik yang
lebih rendah dari komponen menengah dibandingkan dengan jenis lain dari fermentasi [71].
Namun, produktivitas etanol dalam makan-batch dibatasi oleh laju umpan dan konsentrasi massa
sel [79]. operasi Fed-batch telah berhasil diterapkan dalam sistem SSF non-seragam dengan terus
menambahkan substrat dengan perlakuan khusus untuk mencapai gula yang relatif tinggi dan
konsentrasi etanol [80].

operasi terus-menerus dilakukan dengan terus-menerus menambahkan substrat, medium

kultur dan nutrisi ke dalam bioreaktor yang berisi mikroorganisme aktif. Volume budaya terus
beroperasi harus konstan dan produk fermentasi diambil terus menerus dari media. Berbagai
jenis produk dapat diperoleh dari bagian atas bioreaktor seperti etanol, sel-sel dan sisa gula [69].
Keuntungan dari sistem kontinyu selama batch dan sistem fed-batch yang produktivitas yang lebih
tinggi, volume bioreaktor yang lebih kecil dan kurang investasi dan biaya operasional [70]. Pada
tingkat pengenceran tinggi, produktivitas etanol meningkat sementara yield etanol menurun
karena konsumsi tidak lengkap substrat oleh ragi [81]. Namun, kemungkinan untuk kontaminasi
terjadi lebih tinggi dari jenis lain dari fermentasi [66]. Selain itu, kemampuan ragi untuk
menghasilkan etanol dalam proses yang berkesinambungan berkurang karena waktu budidaya
yang lama.

Proses yang terlibat dalam produksi bioetanol dirangkum dalam Tabel 3. Hidrolisis enzimatik
merupakan metode sakarifikasi disukai karena hasil yang lebih tinggi, selektivitas tinggi, biaya
energi yang lebih rendah dan kondisi operasi yang lebih ringan daripada proses kimia [82].
Metode pretreatment yang paling umum digunakan adalah ledakan uap. Ini disumbangkan oleh
fitur menarik uap ledakan yang memiliki dampak lingkungan kurang, investasi modal yang rendah,
efisiensi energi yang tinggi, proses kimia dan kondisi yang kurang berbahaya dan pemulihan gula
lengkap [83]. Fermentasi miskantus oleh S. cerevisiae CHY1011 melaporkan konsentrasi etanol
tertinggi dari 69.2g / L dengan produktivitas 1.24g / L / h [84]. Metode pretreatment menerapkan
gaya geser yang tinggi untuk meningkatkan permukaan biomassa dan hasil peningkatan cerna
enzimatik. Selain itu, sistem SSF makan terus menerus meningkatkan konsentrasi biomassa
sehingga memberikan waktu yang cukup untuk pencairan substrat oleh enzim. Scordia et al. [85]
melaporkan konsentrasi etanol terendah 12.1g / L dengan produktivitas 0,13 / L / jam dengan
fermentasi Miskantus x giganteus menggunakan S. stipitis CBS 6054. Hal ini karena pemulihan
gula dari fraksi larut air (WSF) yang memiliki telah digunakan sebagai bahan baku untuk
fermentasi rendah.

3.4. Faktor-faktor yang mempengaruhi produksi bioetanol

Ada beberapa faktor yang mempengaruhi produksi bioetanoltermasuk suhu, konsentrasi gula,
pH, waktu fermentasi, tingkat agitasi, dan ukuran inokulum [86]. Tingkat pertumbuhan
mikroorganisme secara langsung dipengaruhi oleh suhu [87]. Suhu tinggi yang tidak
menguntungkan bagi pertumbuhan sel-sel menjadi faktor stres bagi mikroorganisme [88]. Ideal
Kisaran suhu untuk fermentasi adalah antara 20 dan 35 ° C. Sel-sel bebas dari S. cerevisiae
memiliki suhu optimum dekat 30 ° C sedangkan sel amobil memiliki suhu sedikit lebih tinggi
optimal karena kemampuannya untuk mentransfer panas dari permukaan partikel ke dalam sel
[89]. Selain itu, enzim yang mengatur aktivitas dan fermentasi mikroba proses sensitif terhadap
suhu tinggi yang dapat mengubah sifat struktur tersier dan menginaktivasi enzim [90]. Dengan
demikian, suhu dengan hati-hati diatur selama proses fermentasi.

Peningkatan konsentrasi gula sampai tingkat tertentu menyebabkan laju fermentasi

meningkat. Namun, penggunaan konsentrasi gula yang berlebihan akan menyebabkan laju
fermentasi stabil. Hal ini karena konsentrasi penggunaan gula di luar kapasitas penyerapan sel
mikroba. Umumnya, tingkat maksimum produksi etanol dicapai bila menggunakan gula pada
konsentrasi 150 g / L. Konsentrasi gula awal juga telah dianggap sebagai faktor penting dalam
produksi etanol. produktivitas etanol yang tinggi dan hasil dalam fermentasi batch dapat
diperoleh dengan menggunakan konsentrasi gula awal yang lebih tinggi. Namun, perlu waktu
fermentasi lebih lama dan biaya pemulihan lebih tinggi [86].

produksi etanol dipengaruhi oleh pH kaldu karena mempengaruhi kontaminasi bakteri,

pertumbuhan ragi, tingkat fermentasi dan pembentukan produk sampingan. Permeabilitas
beberapa nutrisi penting ke dalam sel dipengaruhi oleh konsentrasi H + dalam kaldu fermentasi
[86]. Selain itu, kelangsungan hidup dan pertumbuhan ragi dipengaruhi oleh pH dalam kisaran
2,75-4,25 [91]. Dalam fermentasi untuk produksi etanol, kisaran pH optimum dari S. cerevisiae
adalah 4,0-5,0 [34]. Ketika pH di bawah dari 4,0, masa inkubasi lebih lama diperlukan tetapi
konsentrasi etanol tidak berkurang secara signifikan. Namun, ketika kemudian pH di atas 5.0,
konsentrasi etanol dikurangi secara substansial [10].

waktu fermentasi mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme. waktu fermentasi yang lebih

pendek menyebabkan fermentasi tidak efisien karena pertumbuhan tidak memadai
mikroorganisme. Di sisi lain, waktu fermentasi lagi memberikan efek toksik terhadap
pertumbuhan mikroba terutama dalam modus batch karena konsentrasi etanol yang tinggi dalam
kaldu fermentasi. fermentasi lengkap dapat dicapai pada suhu yang lebih rendah dengan
menggunakan waktu fermentasi lebih lama yang menghasilkan yield etanol termurah [86].
kecepatan pengadukan mengontrol permeabilitas nutrisi dari kaldu fermentasi untuk di dalam sel
dan penghapusan etanol dari sel ke kaldu fermentasi. Semakin besar tingkat agitasi, semakin
tinggi jumlah etanol yang dihasilkan. Selain itu, meningkatkan jumlah konsumsi gula dan
mengurangi penghambatan etanol pada sel. Tingkat agitasi umum untuk fermentasi oleh sel-sel
ragi adalah 150-200 rpm. Tingkat agitasi Kelebihan tidak cocok untuk produksi etanol halus karena
menyebabkan keterbatasan aktivitas metabolisme dari sel-sel [86].

konsentrasi inokulum tidak memberikan pengaruh yang signifikan terhadap konsentrasi etanol
akhir tetapi mempengaruhi tingkat konsumsi gula dan produktivitas etanol [92]. Produksi etanol
terlihat ditingkatkan dengan peningkatan jumlah sel dari 1 × 104 untuk 1 × 107 sel per ml tapi
tidak ada produksi etanol yang signifikan ditemukan antara 107 dan 108 sel per ml. Hal ini karena
peningkatan konsentrasi sel dalam kisaran tertentu mengurangi waktu fermentasi sebagai sel-sel
tumbuh dengan cepat dan langsung mengkonsumsi gula menjadi etanol [86].

Faktor-faktor yang mempengaruhi produksi bioetanol ditunjukkan pada Tabel 4. Sebagian

besar proses fermentasi menggunakan S. cerevisiae dilakukan pada 30 ° C sedangkan fermentasi
menggunakan K. marxianus dilakukan pada 42 ° C. Suhu ideal untuk produksi bioetanol
tergantung pada suhu ideal dari ragi. Sebagian besar media fermentasi yang digunakan untuk
produksi bioetanol memiliki pH di kisaran 4,5-5,5 dengan konsentrasi berbagai gula. Proses
fermentasi umumnya dilakukan pada 24 dan 72 jam dengan rotasi pada 120 dan 150 rpm. Ukuran
 inokulum umum digunakan dalam produksi bioetanol adalah 5% dan 10%. Zhang et al. [93]
melaporkan konsentrasi tertinggi etanol (128.5g / L) dan produktivitas etanol (4.76g / L / h)
mungkin karena kondisi yang menguntungkan untuk ragi untuk menghasilkan bioetanol.
Konsentrasi terendah etanol (9.5g / L) dan produktivitas etanol (0.31g / L / h) dihasilkan dari
eceng gondok karena konsentrasi gula rendah yang membatasi substrat untuk produksi bioetanol
[94].

Sejumlah besar etanol harus diproduksi untuk memenuhi meningkatnya permintaan di seluruh
dunia. Namun, produksi etanol menggunakan sel ragi gratis masih tidak efisien karena biaya yang
lebih tinggi dari siklus sel, risiko kontaminasi yang lebih besar, keterbatasan tingkat pengenceran
dan kerentanan terhadap variasi lingkungan [95]. Selain itu, sel-sel bebas penyebab substrat atau
produk inhibisi dari kontak langsung antara sel-sel dan menengah. Sebagian besar permasalahan
yang terjadi dalam sistem-sel bebas dikurangi dengan metode imobilisasi.

4. Imobilisasi
teknologi sel amobil umumnya diterapkan dalam proses fermentasi. Manfaat sel amobil lebih
sel gratis termasuk kepadatan lebih tinggi sel per volume reaktor, pemisahan lebih mudah dari
media reaksi, konversi substrat yang lebih tinggi, kurang penghambatan oleh produk, waktu reaksi
yang lebih pendek dan pengendalian replikasi sel [96]. Imobilisasi sel ragi dan produktivitas
dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti karakteristik permukaan pembawa, ukuran pori, kadar
air, hidrofilisitas dan magnet [97]. Imobilisasi harus dilakukan di bawah kondisi yang ringan untuk
menjaga aktivitas sel-sel [98].

4.1. Imobilisasi sel ragi

Sel dapat bergerak dengan berbagai jenis metode seperti adsorpsi, silang, enkapsulasi dan
jebakan. Jebakan dilakukan oleh polimerisasi larutan monomer akrilamida di mana
mikroorganisme ditangguhkan. Hal ini umumnya digunakan untuk mengatasi masalah degradasi
dan keterbatasan perpindahan massa. Ini menghindari pelepasan sel sementara memungkinkan
difusi substrat dan produk [99]. Metode ini memungkinkan biomassa pemuatan tinggi yang
menghasilkan produktivitas etanol yang tinggi. Metode jebakan banyak digunakan karena
kesederhanaan, tidak beracun, lebih murah, reversibel dan baik sifat mekanik. Jebakan dapat
dioperasikan pada tingkat pengenceran yang sangat tinggi tanpa menyebabkan washout sel.
Sebagian besar penelitian yang melibatkan imobilisasi sel mikroba difokuskan pada jebakan gel.
gel yang paling umum digunakan adalah dalam bentuk manik-manik bulat dengan diameter
dalam kisaran 0,3-5 mm. Namun, gel telah membatasi stabilitas mekanik yang dapat dengan
mudah rusak oleh pertumbuhan sel-sel mikroba dan karbon dioksida produksi. Selain itu,
kehadiran fosfat menyebabkan melemahnya kalsium gel alginat [79].

Adsorpsi adalah cara yang sangat populer imobilisasi sel karena sederhana, metode murah dan
cepat. Sel yang melekat pada permukaan bahan oleh gaya elektrostatik seperti pasukan Van der
Waals, ikatan ion, jembatan hidrogen atau interaksi kovalen. tarik ionik digunakan untuk
melumpuhkan sel ragi. materi pendukung yang digunakan harus memiliki afinitas tinggi agar
strain ragi untuk menahan kondisi lingkungan hadir dalam bioreaktor. Dalam kebanyakan kasus
produksi etanol terus menerus, adsorpsi dilakukan oleh beredar suspensi terkonsentrasi sel ragi
melalui bioreaktor selama beberapa jam. Teknik adsorpsi tidak memerlukan penggunaan bahan
kimia beracun dan sel-sel ragi dapat dipertahankan dalam keadaan layak. Sistem ini diserap sel
dibatasi oleh pemuatan biomassa yang lebih rendah dan tingkat aliran umpan yang lebih rendah
 dibandingkan dengan sistem terjebak-sel. Hal ini karena jumlah sel ragi yang dapat diserap pada
operator dibatasi oleh luas permukaan pembawa [79].

Metode lain yang umum digunakan untuk sel imobilisasi adalah enkapsulasi yang
membungkus sel dalam membran semi-permeabel tipis. Sel-sel yang bebas bergerak di inti cair
batin di dalam kapsul. Namun, ruang dibatasi oleh membran luar [100]. Dalam fermentasi,
dimensi molekul mikrokapsul membatasi pertumbuhan sel dan ukuran kedua nutrisi dan produk.
Laju perpindahan substrat ke dalam kapsul akan menentukan laju reaksi. Metode enkapsulasi
memberikan beberapa keuntungan seperti stabilitas mekanik dan kimia dari sistem membran,
kemungkinan loading yang tinggi dan regulasi reaksi fermentasi oleh difusi selektif substrat dan
produk [101].

Ada banyak jenis bahan pendukung yang telah digunakan dalam sel ragi imobilisasi seperti
kalsium alginat, bagas tebu, didelignifikasi bahan selulosa, kulit jeruk, biji-bijian menghabiskan,
tongkol jagung, k-karagenan, balok kayu, selulosa berpori, zeolit, spons loofa dan sorgum ampas
tebu [102]. Dukungan digunakan dalam imobilisasi harus kondusif untuk kelangsungan hidup sel
dan memiliki permeabilitas yang tepat untuk difusi oksigen, nutrisi penting, sisa metabolisme dan
produk sekretori di seluruh jaringan polimer. Ada dua jenis polimer yang digunakan sebagai
pembawa dalam ragi imobilisasi yang merupakan polimer alami dan sintetis. Manfaat
menggunakan polimer alam adalah harga rendah dan tidak ada kotoran yang dihasilkan dari
reaksi kimia. polimer sintetis menunjukkan kimia yang tinggi dan stabilitas biologis, ketahanan
mekanik terhadap abrasi, permeabel terhadap reagen, dan memiliki permukaan yang besar,
kapasitas dan porositas [103].

4.2. ragi amobil dalam produksi bioetanol

Imobilisasi strain ragi untuk produksi bioetanol disajikan pada Tabel 5. Metode yang umum
digunakan untuk ragi imobilisasi adalah adsorpsi karena sel-sel tidak terpengaruh dan ragi dapat
ditambahkan atau dicuci keluar dari medium fermentasi [104]. Kalsium alginat adalah operator
yang paling disukai karena biokompatibilitas yang baik, biaya rendah, kemudahan ketersediaan
[96]. Ariyajaroenwong et al., [105] melaporkan konsentrasi etanol tertinggi dari 98.48g / L dengan
fermentasi jus sorgum manis menggunakan S. cerevisiae NP 01. Sorghum tangkai yang digunakan
sebagai pembawa menunjukkan fungsi penting sebagai sumber inokulum untuk produksi etanol
sementara jus sorgum manis yang digunakan sebagai bahan baku yang terkandung nutrisi penting
untuk pertumbuhan ragi. Singh et al., [106] digunakan S. cerevisiae MTCC 174 untuk fermentasi
ampas tebu dan diproduksi hanya 15.4g / L konsentrasi etanol. Jumlah yang rendah gula yang
diperoleh dari ampas tebu bisa menjadi alasan untuk jumlah rendah konsentrasi etanol. Zheng et
al. [107] digunakan S. cerevisiae untuk fermentasi gula dan tetes yang diperoleh produktivitas
etanol tertinggi 6.55g / L / jam. Adsorpsi dan kovalen mengikat MCM-41 zeolit dengan embedding
alginat menyebabkan sel dalam pembawa komposit zeolit mesopori MCM-41 untuk tumbuh lebih
baik daripada di pembawa murni. Behera et al., [108] digunakan S. cerevisiae CTCRI untuk
fermentasi bunga mahula dan produktivitas etanol dicapai hanya 0.27g / L / jam. Produktivitas
etanol terendah diperoleh mungkin karena mahula bunga yang berisi jumlah rendah gula
difermentasi dibandingkan dengan jenis lain dari bahan baku.

5. Kesimpulan
Ragi yang merupakan mikroorganisme yang paling umum dalam produksi bioetanol
memainkan fungsi penting dalam fermentasi gula menjadi etanol. Pengaruh strain ragi, proses
fermentasi dan imobilisasi ragi pada produksi etanol telah ditunjukkan dalam pekerjaan ini.
Banyak jenis strain ragi telah diidentifikasi di seluruh dunia dengan kemampuan memproduksi
etanol dari berbagai jenis bahan baku. Makalah ulasan ini membahas tentang efisiensi strain ragi
yang berbeda dalam memproduksi etanol dengan tipe liar regangan sebagai produsen etanol
tertinggi. Proses fermentasi menunjukkan efek signifikan pada produksi etanol. Metode SSF terus
menerus telah menunjukkan kemampuannya dalam memproduksi etanol tinggi dengan
produktivitas yang tinggi. Penerapan imobilisasi sel dalam produksi etanol dievaluasi. Metode
adsorpsi adalah metode yang disukai melumpuhkan sel ragi sedangkan kalsium alginat adalah
pilihan utama bagi operator ragi. sel amobil memberikan beberapa keuntungan dalam produksi
etanol seperti kepadatan tinggi sel, pemisahan mudah dari media, konversi substrat tinggi, kurang
penghambatan, waktu reaksi singkat dan daur ulang sel. Dengan demikian, ragi bergerak
membuka jalan yang lebih baik untuk komersialisasi produksi bioetanol dari perspektif ekonomis.