LAPORAN DEMO ALAT LABORATORIUM

KIMIA ANALISIS

Disusun Oleh :
Nama : Rini Artika NIM : 15521186
Nama : Ida Mujadidah S.R NIM : 15521194
Nama : Rafika Erniza Putri NIM : 15521212
Nama : Silvi Nur Sukma I NIM : 16521104

KONSENTRASI TEKNIK KIMIA

PROGRAM STUDI TEKNIK KIMIA
FAKULTAS TEKNOLOGI INDUSTRI
UNIVERSITAS ISLAM INDONESIA
YOGYAKARTA
2019
 KATA PENGANTAR

Segala puji dan puji syukur kami panjatkan kepada ALLAH SWT. Tuhan Yang Maha Esa
pengayom segenap alam yang telah memberikan rahmat serta hidayah Nya sehingga dalam
penulisan laporan ini kami tidak mengalami kendala yang berarti hingga terselesaikannya laporan
penulis yang berjudul “Laporan Demo Alat Laboratorium Kimia Analisis”

Dalam penulisan laporan ini kami mendapatkan banyak bantuan dari berbagai pihak, oleh
karenanya dari hati yang terdalam penulis juga ingin mengungkapkan rasa terima kasih kepada :
1. Terima kasih kami ucapkan kepada kedua orang tua yang selalu mendukung dan
mendoakan sehingga laporan ini dapat diselesaikan tepat waktu.
2. Terima kasih kepada dosen pembimbing kami Dr. Suharno Rusdi yang membimbing dan
mengajarkan penulis dalam penyusunan makalah ini.
3. Terimakasih kepada asisten laboratorium instrumen fakultas matematika dan ilmu
pengetahuan

Kami sangat menyadari tidak ada manusia yang sempurna begitu juga dalam penulisa n laporan
ini, apabila nantinya terdapat kekurangan, kesalahan dalam laporan ini, kami sangat berharap
kepada seluruh pihak agar dapat memberikan kritik dan juga saran agar laporan ini dapat diperbaiki
kedepannya.
Akhir kata, semoga laporan ini dapat memberikan manfaat dan bahan pembelajaran kepada kita
semua.

Yogyakarta, 10 Juli 2019

Penulis
 DAFTAR ISI

BAB I PENDAHULUAN
1.1. LATAR BELAKA NG ........................................................................................................................................... 1
1.2. TUJUAN .................................................................................................................................................................. 1
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Kimia Analisis Instrument .................................................................................................................................... 2
2.1.1. Instrument Kimia UV-VIS.................................................................................................................................... 2
2.1.2. Instrument Kimia Spekt rofotometri Inframerah (IR) .....................................................................................10
2.1.3. Instrument Kimia Atomic Absorption Spectoscopy (AAS)..........................................................................20
2.1.4. Instrument Kimia Gas Chro matography (GC) ................................................................................................25
2.1.5. Instrument Kimia High Performance Liquid ...................................................................................................29
2.1.6. Instrument Kimia GC-MS...................................................................................................................................34
BAB III METODE PENGUJIA N
3.1. UV – VIS Spektro ................................................................................................................................................37
3.1.1. Tata Cara Uji Sampel...........................................................................................................................................37
3.2. Spektrokopi Serapan Atom (AAS) ....................................................................................................................37
3.2.1. Tata Cara Uji Sampel...........................................................................................................................................37
3.3. Spektrofotometri Infra merah (IR)......................................................................................................................38
3.3.1. Tata Cara Uji Sampel...........................................................................................................................................38
3.4. Gas Chro matography (GC) .................................................................................................................................39
3.4.1. Tata Cara Uji Sampel...........................................................................................................................................39
3.5. High Performance Liquid Chro matography (HPLC) .....................................................................................40
3.5.1. Tata Cara Uji Sampel...........................................................................................................................................40
BAB IV PEMBAHASAN
4.1. Interpretasi Spektra AAS ....................................................................................................................................41
4.2. Interpretasi Spektra HPLC ..................................................................................................................................42
4.3. Interpretasi Spektra UV-Vis ...............................................................................................................................43
4.4. Interpretasi Spektra IR .........................................................................................................................................44
4.5. Interpretasi Spektra GC-Ms ................................................................................................................................45
BAB V PENUTUP
5.1 Kesimpulan ............................................................................................................................................................46
5.2 Saran .......................................................................................................................................................................46
DAFTAR PUSTA KA ................................................................................................................................................................... 47

ii
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1. LATAR BELAKANG

Kimia Analisis adalah cabang yang berhubungan dengan pengembangan dan
penggunaan teknik untuk pengukuran kimia. Kimiawan menggunakan teknik-teknik untuk
menentukan komposisi suatu zat. Kimia analisis bisa bersifat kualitatif atau kuantitatif.
Analisis kualitatif mengidentifikasi unsur-unsur atau senyawa yang membentuk zat. Analis is
kuantitatif mengukur jumlah beberapa atau semua elemen atau senyawa.
Kimia analisis memberikan informasi penting untuk ilmu pengetahuan dan industr i.
Misalnya, kimia analisis digunakan untuk menguji sampel udara, tanah, dan air untuk
mengidentifikasi adanya polutan. Hal tersebut didukung dengan alat-alat yang canggih yang
mampu mengidentifikasi zat –zat yang terdapat pada sampel yang akan di uji. Pada kimia
analisis pengujian dilakukan menggunakan alat-alat yang sesuai dengan zat yang akan di uji
secara kualitatif maupun kuantitatif.

1.2. TUJUAN
a. Mahasiswa mengetahui pengujian kimia analisis secara kualitatif dan kuantitatif
b. Mahasiswa mengetahui nama dan fungsi alat-alat laboratorium kimia
c. Mahasiswa mengetahui cara penggunaan beberapa alat – alat laboratorium

1
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Kimia Analisis Instrument

Kimia Analisis adalah cabang ilmu kimia yang berfokus pada analisis cuplikan
material untuk menegtahui kompisis, struktur, dan fungsi kimiawinya. Secara tradisiona l
kimia analisis dibagi menjadi dua jenis, kualitatif dan kuantitatif. Analisis kualitatif
bertujuan untuk menegtahui keberadaan suatu unsur atau senyawa kimia baik organis
maupun inorganic, sedangkan analisis kuantitatif bertujuan untuk mengetahui jumlah suatu
unsur atau senyawa dalam suatu cuplikan. Kimia analisis modern dikategarikan melalui dua
pendekatan, target dan metode. Berdasarkan targetnya, kimia analisis dapat dibagi menjadi
kimia bioanalitik, analisis material, analisis kimia, analisis lingkungan, dan forensik.
Berdasarjan metodenya, kimia analisis dapat dibagi menjadi spektroskopi,
spektrometri massa, kromatografi dan elektroforesis, kristalografi, mikroskopi dan
elektrokimia.
Beberapa alasan perkembangan kimia analisis instrument adalah :
a. Banyak zat kimia yang tidak dapat ditentukan dengan cara kimia biasa (visual)
b. Matriks sampel yang dianalisa sangat sulit
c. Sampel yang dianalisa kuantitasnya sangat kecil
d. Hasil analisa yang cepat.

2.1.1. Instrument Kimia UV-VIS

Dasar Teori
Spektrofotometri UV-Vis merupakan salah satu teknik analisis spektroskopi yang
memakai sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat (190-380) dan sinar tampak
(380-780) dengan menggunakan instrumen spektrofotometer (Mulja dan Suharman,
1995:26). Spektrofotometri UV-Vis melibatkan energi elektronik yang cukup besar pada
molekul yang dianalisis, sehingga spektrofotometri UV-Vis lebih banyak dipakai untuk
analisis kuantitatif ketimbang kualitatif (Mulja dan Suharman, 1995: 26). Spektrofotometer
terdiri atas spektrometer dan fotometer. Spektrofotometer menghasilkan sinar dari spektrum
dengan panjang gelombang tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya
2
yang ditranmisikan atau yang diabsorpsi. Spektrofotometer tersusun atas sumber spektrum
yang kontinyu, monokromator, sel pengabsorpsi untuk larutan sampel atau blangko dan
suatu alat untuk mengukur perbedaan absorpsi antara sampel dan blangko ataupun
pembanding (Khopkar, 1990: 216).
Serapan cahaya oleh molekul dalam daerah spektrum ultraviolet dan visibe l
tergantung pada struktur elektronik dari molekul. Serapan ultraviolet dan visibel dari
senyawa- senyawa organik yang berkaitan erat transisi-transisi diantara tingkatan-
tingkatan tenaga elektronik. Hal ini disebabkan karena, serapan radiasi ultraviolet atau
terlihat sering dikenal sebagai spektroskopi elektronik. Transis i-transisi tersebut biasanya
antara orbital ikatan antara orbital ikatan atau orbital pasangan bebas dan orbital non
ikatan tak jenuh atau orbital anti ikatan. Panjang gelombang serapan merupakan ukuran dari
pemisahan tingkatan- tingkatan tenaga dari orbital yang bersangkutan. Spektrum
ultraviolet adalah gambar antara panjang gelombang atau frekuensi serapan lawan
intensitas serapan (transmitasi atau absorbansi). Sering juga data ditunjukkan sebagai
gambar grafik atau tabel yang menyatakan panjang gelombang lawan serapan molar atau log
dari serapan molar, Emax atau log Emax (Sastrohamidjojo, 2001: 11).
Sumber tenaga radiasi terdiri dari benda yang tereksitasi menuju ke tingkat yang lebih
tinggi oleh sumber listrik bertegangan tinggi atau oleh pemanasan listrik. Monokromator
adalah suatu piranti optis untuk memencilkan radiasi dari sumber berkesinambunga n.
Digunakan untuk memperoleh sumber sinar monokromatis. Alat dapat berupa prisma atau
grating (Khopkar, 1990). Pengukuran pada daerah UV harus menggunakan sel kuarsa karena
gelas tidak tembus cahaya pada daerah ini. Sel yang biasa digunakan berbentuk persegi
maupun berbentuk silinder dengan ketebalan 10 mm. Sel tersebut adalah sel pengabsorpsi,
merupakan sel untuk meletakkan cairan ke dalam berkas cahaya spektrofotometer. Sel
haruslah meneruskan energi cahaya dalam daerah spektral yang diminati. Sebelum sel
dipakai dibersihkan dengan air atau dapat dicuci dengan larutan detergen atau asam nitrat
panas apabila dikehendaki (Sastrohamidjojo, 2001: 39-41).
Sumber radiasi terdiri dari bahan yang dapat tereksitasi ke tingkat energi yang tinggi melalui:
a. proses pemanasan dengan bantuan arus listrik

b proses pelepasan elektron pada beda tegangan yang tinggi

3
 Ketika kembali ke tingkat energi yang lebih rendah, bahan akan melepaskan foton.
Panjang gelombang yang dihasilkan beragam pada daerah pita energi yang luas. Intensitas
radiasi yang dihasilkan harus sama dan tetap, sehingga tidak ada beda Po pada saat
standarisasi dengan Po pada saat pengukuran. Hal ini sangat penting untuk model single -
beam. Pada double-beam, setiap saat Po dan P selalu diukur dan dibandingkan secara
simultan sehingga kestabilan sumber radiasi tidak selalu diperhitungkan.

Sumber radiasi UV, Lampu hidrogen, Lampu deutorium,adiasi yang dihasilka n

mempunyai panjang gelombang 180-350 nm.

Hukum Lambert-beer
Hukum Lambert-Beer menyatakan hubungan linieritas antara absorban dengan
konsentrasi larutan analit dan berbanding terbalik dengan transmitan. Dalam hukum
Lambert-Beer tersebut ada beberapa pembatasan, yaitu :

1. Sinar yang digunakan dianggap monokromatis

2. Penyerapan terjadi dalam suatu volume yang mempunyai penampang yang sama
3. Senyawa yang menyerap dalam larutan tersebut tidak tergantung terhadap yang lain
dalam larutan tersebut
4. Tidak terjadi fluorensensi atau fosforisensi
5. Indeks bias tidak tergantung pada konsentrasi larutan

Berdasarkan hukum Lambert-Beer, rumus yang digunakan untuk menghitung banyaknya

cahaya yang hamburkan:

4
dimana I0 merupakan intensitas cahaya datang dan It atau I1 adalah intensitas cahaya setelah
melewati sampel.
Rumus yang diturunkan dari Hukum Beer dapat ditulis sebagai:

A = a . b . c atau A = ε . b . c

dimana:

A = absorbansi

b = tebal larutan (tebal kuvet diperhitungkan juga umumnya 1 cm)

c = konsentrasi larutan yang diukur

ε = tetapan absorptivitas molar (jika konsentrasi larutan yang diukur dalam molar)
a = tetapan absorptivitas (jika konsentrasi larutan yang diukur dalam ppm).

Secara eksperimen hukum Lambert-beer akan terpenuhi apabila peralatan yang digunaka n
memenuhi:
1. Sinar yang masuk atau sinar yang mengenai sel sampel berupa sinar dengan panjang
gelombang tunggal (monokromatis).
2. Penyerapan sinar oleh suatu molekul yang ada di dalam larutan tidak dipengaruhi oleh
molekul yang lain yang ada bersama dalam satu larutan.
3. Penyerapan terjadi di dalam volume larutan yang luas penampang (tebal kuvet) yang
sama.
4. Penyerapan tidak menghasilkan pemancaran sinar pendafluor. Artinya larutan yang
diukur harus benar-benar jernih agar tidak terjadi hamburan cahaya oleh partikel-
partikel koloid atau suspensi yang ada di dalam larutan.
5. Konsentrasi analit rendah. Karena apabila konsentrasi tinggi akan mengga ngu
kelinearan grafik absorbansi versus konsntrasi.

5
 Tabel 1. Warna pada area visible
(Sumber : Analytical Chemistry, Christian, Gary D.)
Panjang gelombang (nm) Warna yang Warna yang teruskan
diserap
< 380
380 - 450 ungu Kuning – Hijau
450 - 495 Biru Kuning
495 - 570 Hijau Ungu
570 - 590 Kuning Biru
590 - 620 Orange Hijau – Biru
620 - 750 Merah Biru – Hijau

Monokromator
Fungsi dari monokromator untuk memecah radiasi polikromatis dengan pita energi
yang lebar yang dihasilkan sumber radiasi menjadi radiasi dengan pita energi yang lebih
sempit atau menjadi radiasi monokromatis. Monokromator mampu menghasilkan radiasi
dengan lebar pita efektif sebesar 35 - 0,1 nm. Lebar pita efektif yaitu kisaran panjang
gelombang dimana nilai transmitansi minimal ½ dari nilai maksimalnya. Komponen –
komponen monokromator. Celah untuk masuknya radiasi polikromatis dari lensa/cer min
untuk menyerap cahaya. Pendispersi cahaya yang berupa prisma atau grating yang dapat
memecah radiasi menjadi komponen-komponen panjang gelombang. Lensa/cermin
pemfokus cahaya celah keluar

Gambar 1.1 Monokromator

6
Operasi single-beam dan double-beam

Single-beam radiasi dari monokromator yang masuk didispersikan oleh prisma/

grating. Ketika alat pendispersi dirotasikan, berbagai pita radiasi yang telah terpecah
difokuskan pada celah keluar. Radiasi dilewatkan sampel dan diterima detektor.

Gambar 1.2 Operasi single

Sinar dari monokromator diarahkan ke sel blangko dan sel sampel dengan bantuan
beam splitter (chopper). Kedua sinar dibandingkan terus menerus/bergantian secara
berulangulang.Fluktuasi pada intensitas sumber cahaya respon detektor dan hasil penguat
sinyal dikompensasi dengan mengamati perbandingan sinyal antara blangko dengan
sampel,

Gambar 1.3 Operasi double beam

Menentukan koefisien absorbansi

Penentuan sifat optik penting dalam pembuatan lapisan tipis untuk menentuka n
struktur dari semi konduktor. Selain itu, konstanta dalam optik dapat memberikan informas i
mengenai strukur dari lapisan tipis. Spektrum transmisi dan absorbansi dengan panjang
gelombang antara 300-1100 nm dari data tersebut dapat digunakan untuk menghitung nila i
koefisien absorbansi band gap energi dan konstanta optik yang lainya. hubungan antara
intensitas dari sinar datang (I0 ) dengan sinar yang ditransmisikan (IT ) sebagai berikut :
IT  I0 exp t 

7
Dimana  merupakan koefisien absorbansi dan t ebal dari sampel dari persmaan 1 maka dapat

dikeahui nilai koefisien absorbansi sebagai berikut :   ln (1/ T ) / t ...(2)

Fungsi dan Kegunaan
Spektrofotometer UV –Vis umumnya digunakan untuk analisa kuantitatif. Tetapi bisa juga
untuk analisa kualitatif.
Cara menggunakan Spektro UV – VIS sebagai analisa kualitatif :
1. Membandingkan panjang gelombang maksimum
2. Membandingkan serapan (A), daya serap (a) serta
3. Membandingkan harga serapan relatif
4. Membandingkan spektrum serapannya

Jenis Bahan Kimia/Senyawa yang dapat Diuji/Diagnosis pada Instrumen

1. Sampel dalam larutan menyerap sinar tampak (350-770nm)

2. Larutan sampel harus bening dan berwarna.
3. Pelarut tidak menyerap sinar tampak.
4. Sampel dalam larutan menyerap sinar UV (180-350nm)

Spektrofotometer UV-Vis dapat melakukan penentuan terhadap sampel yang berupa

larutan, gas, atau uap. Untuk sampel yang berupa larutan perlu diperhatikan pelarut yang
dipakai antara lain:
1. Pelarut yang dipakai tidak mengandung sistem ikatan rangkap terkonjugasi pada
struktur molekulnya dan tidak berwarna.
2. Tidak terjadi interaksi dengan molekul senyawa yang dianalisis.
3. Kemurniannya harus tinggi atau derajat untuk analisis.(Mulja dan Suharman, 1995: 28).

Keunggulan dan Kelemahan Instrumen

 Keunggulan :
1. Panjang gelombang dari sinar putih dapat lebih terseleksi.
2. Pengoprasiannya sederhana.
3. Dapat menganalisa larutan dengan konsentrasi yang sangat kecil.

8
 Kelemahan :
1. Absorbsi dipengaruhi oleh pH larutan, suhu dan adanya zat penggangu dan
kebersihan dari kurvet.
2. Hanya dapat dipakai daerah ultraviolet yang panjang gelombang >185nm
3. Pemakaian hanya pada gugus fungsional yang mengandung elektron valensi dengan
energi eksitasi rendah.
4. Sinar yang dipakai harus monokromatis.

9
2.1.2. Instrument Kimia Spektrofotometri Inframerah (IR)
Dasar Teori
Spektrofotometri inframerah (IR) merupakan salah satu alat yang dapat digunaka n
untuk menganalisa senyawa kimia. Spektra inframerah suatu senyawa dapat memberika n
gambaran dan struktur molekul senyawa tersebut. Spektra IR dapat dihasilkan dengan
mengukur absorbsi radiasi, refleksi atau emisi di daerah IR.

Daerah inframerah pada spektrum gelombang elektromagnetik mencakup bilanga n

gelombang 14.000 cm-1 hingga 10 cm-1. Daerah inframerah sedang ( 4000-400 cm-1)
berkaitan dengan transisi energi vibrasi dari molekul yang memberikan informasi mengena i

gugus-gugus fungsi dalam molekul tersebut. Daerah inframerah jauh (400-10cm-1)

bermanfaat untuk menganalisis molekul yang mengandung atom-atom berat seperti senyawa
anorganik, namun membutuhkan teknik khusus yang lebih baik. Daerah inframerah dekat

(12.500-4000cm-1) yang peka terhadap vibrasi overtone (Schechter,1997). Pada alat

spektrofotometri inframerah, satuan bilangan gelombang merupakan satuan yang umum
digunakan. Nilai bilangan gelombang berbanding terbalik terhadap frekuensi atau energinya.
Bilangan gelombang dan panjang gelombang dapat dikonversi satu sama lain menggunaka n
persamaan dibawah :

V(cm-1 ) = 1/ λ(µm) x 104 ... (1)

Informasi absorpsi inframerah pada umumnya diberikan dalam bentuk spektrum

dengan panjang gelombang (µm) atau bilangan gelombang (cm-1) sebagai absis x dan
intensitas absorpsi atau persen transmitan sebagai ordinat y. Intensitas pita dapat dinyatakan
dengan transmitan (T) atau absorban (A). Transmitan adalah perbandingan antara fraksi
sinar yang diteruskan oleh sampel (I) dan jumlah sinar yang diterima oleh sampel tersebut
(Io ). Absorban adalah –log dari transmitan :

A= log(1/T) = -logT = -log I/Io ... (2)

Gambaran berkas radiasi elektromagnetik diperlihatkan pada Gambar 1 berikut :

10
 Saat ini telah dikenal berbagai macam gelombang elektromagnetik dengan rentang
panjang gelombang tertentu. Spektrum elektromagnetik merupakan kumpulan spektrum
dari berbagai panjang gelombang. Berdasarkan pembagian daerah panjang gelombang
pada Tabel 1 dan Gambar 2, sinar infra merah dibagi atas tiga daerah, yaitu:
a. Daerah Infra Merah dekat.
b. Daerah Infra Merah pertengahan.
c. Daerah infra merah jauh

11
 Dari pembagian daerah spektrum elektromagnetik tersebut diatas, daerah panjang
gelombang yang digunakan pada alat spektrofotometer infra merah adalah pada daerah infra
merah pertengahan, yaitu pada panjang gelombang 2,5 – 50 µm atau pada bilanga n
gelombang 4.000 – 200 cm-1 . Satuan yang sering digunakan dalam spektrofotometri infra

merah adalah Bilangan Gelombang ( ) atau disebut juga sebagai Kaiser.

Spektrum yang dihasilkan biasanya relatif kompleks karena adanya overtone

kombinasi dan perbedaan serapan yang lemah. Overtone dihasilkan akibat adanya eksitasi
dari tingkat energi rendah ke tingkat energi yang lebih tinggi, yang merupakan kelipatan
dari frekuensi fundamental (v). bila dua frekuensi vibrasi (v1 dan v2) dalam molekul
bergabung menghasilkan vibrasi frekuensi baru dalam molekul, dan bila frekuensi tersebut
aktif inframerah, maka hal tersebut disebut serapan kombinasi (Harjono,1992). Apabila
vibrasi fundamental bergabung dengan serapan overtone atau serapan kombinasi lainnya,
maka vibrasi gabungan ini disebut resonansi Fermi yang sering teramati dalam senyawa
karbonil. Terdapat dua macam vibrasi, yaitu vibrasi ulur dan tekuk. Vibrasi ulur merupakan
suatu gerakan berirama di sepanjang sumbu ikatan sehingga jarak antar atom akan
bertambah atau berkurang. Vibrasi tekuk dapat terjadi karena perubahan sudut-sudut ikatan
antara ikatan- ikatan pada sebuah atom.

Teori Absorpsi Inframerah

Pada temperatur diatas temperatur nol absolut, semua atom di dalam molekul
bervibrasi antara satu dengan lainnya. Ketika frekuensi dari vibrasi spesifik sama dengan
frekuensi dari radiasi inframerah yang mengenai langsung pada molekul, molekul tersebut
akan menyerap radiasi. Setiap molekul mempunyai darajat kebebasan sebesar jumla h
derajat kebebasan atom-atomnya. Setiap atom di dalam koordinat cartesius mempunyai tiga
derajat kebebasan yang menyatakan kedudukan relatifnya terhadap atom-atom lainnya di
dalam molekul.

Syarat suatu gugus fungsi dalam suatu senyawa dapat terukur pada spektra IR adalah
adanya perbedaan momen dipol pada gugus tersebut. Vibrasi ikatan akan menimbulka n
fluktuasi momen dipol yang menghasilkan gelombang listrik. Untuk pengukura n

12
menggunakan IR biasanya berada pada daerah bilangan gelombang 400-4500 cm-1 .
Daerah pada bilangan gelombang ini disebut daerah IR sedang, dan merupakan daerah
optimum untuk penyerapan sinar IR bagi ikatan-ikatan dalam senyawa organik ( Harjono,
1992). Suatu ikatan kimia dapat bervibrasi sesuai dengan level energinya sehingga
memberikan frekuensi yang spesifik. Hal inilah yang menjadi dasar pengukura n
spektroskopi inframerah. Jenis-jenis vibrasi molekul biasanya terdiri dari enam macam,
yaitu symmetrical stretching, assymmetrical stretching, scissoring, rocking, wagging, dan
twisting. Daerah inframerah dibagi menjadi tiga sub daerah, yaitu inframerah dekat

(14000-4000 cm-1), inframerah sedang (4000- 400 cm-1), dan inframerah jauh (400-10

cm-1) (Ellis, D.I., 2006).

Gambar 1.1 Tabel Korelasi Spektrum IR (Ellis, D.I., 2006)

Dasar Spektroskopi Infra Merah dikemukakan oleh Hooke dan didasarkan atas
senyawa yang terdiri atas dua atom atau diatom yang digambarkan dengan dua buah bola
yang saling terikat oleh pegas seperti tampak pada gambar disamping ini. Jika pegas
direntangkan atau ditekan pada jarak keseimbangan tersebut maka energi potensial dari
sistim tersebut akan naik.

Setiap senyawa pada keadaan tertentu telah mempunyai tiga macam gerak, yaitu :

1. Gerak Translasi, yaitu perpindahan dari satu titik ke titik lain.

2. Gerak Rotasi, yaitu berputar pada porosnya, dan
3. Gerak Vibrasi, yaitu bergetar pada tempatnya.

Bila ikatan bergetar, maka energi vibrasi secara terus menerus dan secara periodik
berubah dari energi kinetik ke energi potensial dan sebaiknya. Jumlah energi total adala h

13
sebanding dengan frekwensi vibrasi dan tetapan gaya ( k ) dari pegas dan massa ( m1 dan m2
) dari dua atom yang terikat. Energi yang dimiliki oleh sinar infra merah hanya cukup kuat
untuk mengadakan perubahan vibrasi.

Panjang gelombang atau bilangan gelombang dan kecepatan cahaya dihubungka n

dengan frekwensi melalui bersamaan berikut :

Energi yang timbul juga berbanding lurus dengan frekwesi dan digambarkan dengan
persamaan Max Plank :

sehingga :

dimana :

E = Energi, Joule
h = Tetapan Plank ; 6,6262 x 10-34 J.s
c = Kecepatan cahaya ; 3,0 x 1010 cm/detik
n = indeks bias (dalam keadaan vakum harga n = 1)
 = panjang gelombang ; c
 = frekwensi ; Hertz
Dalam spektroskopi infra merah panjang gelombang dan bilangan gelombang adalah
nilai yang digunakan untuk menunjukkan posisi dalam spektrum serapan. Panjang
gelombang biasanya diukur dalam mikron atau mikro meter ( µm ). Sedangkan bilanga n

gelombang ( ) adalah frekwensi dibagi dengan kecepatan cahaya, yaitu kebalikan dari

14
panjang gelombang dalam satuan cm-1 . Persamaan dari hubungan kedua hal tersebut diatas
adalah :

Posisi pita serapan dapat diprediksi berdasarkan teori mekanikal tentang osilator
harmoni, yaitu diturunkan dari hukum Hooke tentang pegas sederhana yang bergetar, yaitu
:

dimana :

Keterangan :

c = kecepatan cahaya : 3,0 x 1010 cm/detik

k = tetapan gaya atau kuat ikat, dyne/cm
µ = massa tereduksi
m = massa atom, gram

Setiap molekul memiliki harga energi yang tertentu. Bila suatu senyawa menyerap
energi dari sinar infra merah, maka tingkatan energi di dalam molekul itu akan tereksitasi ke
tingkatan energi yang lebih tinggi. Sesuai dengan tingkatan energi yang diserap, maka yang
akan terjadi pada molekul itu adalah perubahan energi vibrasi yang diikuti dengan perubahan
energi rotasi.

Monokromator
Fungsinya sama seperti pada spektrofotometer UV-Vis. Hanya saja monokromator
dalam spektrofotometer IR tidak terbuat dari kwarsa (leburan silica ) tetapi terbuat dari
garam NaCl, KBr, CsBr, LiF. Oleh sebab itu, spektrofotometer IR harus diletakkan disuatu
tempat dengan kelembapan yang rendah untuk mencegah rusaknya peralatan optiknya.

15
 Ada 2 macam monokromator dengan fungsi yang berbeda yang keduanya sama
fungsinya dengan monokromator spektrofotometer UV-Vis. Monokromator celah berfungs i
untuk lebih memurnikan radiasi IR yang dari cuplikan sehingga masuk dalam rentang
bilangan gelombang yang dikehendaki. Monokromator prisma yang terbuat dari garam
anorganik berfungsi sebagai pengurai dan pengarah radiasi IR menuju detector.
Monokromator prisma yang terbuat dari hablur NaCl yang paling banyak dipakai sebab
memberikan resolusi radiasi IR yang terbaik disbanding lainnya. Prisma leburan garam2
bromida pada umumnya dipakai sebagai resolusi radiasi IR jauh, sedangkan garam flour ida
untuk radiasi IR dekat. Monokromator yang umum dipakai untuk spektrofotometer IR saat
ini adalah kisi difraksi (grating).

Kisi difraksi terbuat dari kaca atau bahan plastic yang tertoreh dengan halus
permukaannya dan terlapisi oleh kondensasi uap aluminium keunggulannya memberika n
resolusi yang jauh lebih bagus dengan dispersi yang sinambung lurus , disamping itu tetap
menjaga keutuhan radiasi IR menuju detector.

Fungsi dan Kegunaan

Karena setiap tipe ikatan memiliki sifat frekuensi yang berbeda, dan karena tipe
ikatan yang sama dalam dua senyawa berbeda terletak dalam lingkungan yang sedikit
berbeda, maka tidak ada dua molekul yang berbeda bentuknya akan mempunyai serapan
inframerah yang sama. Dengan membandingkan serapan dari dua senyawa yang
diperkirakan identik, baru dapat diperoleh kesimpulan apakah senyawa itu identik atau
tidak. Pelacakan ini biasa disebut/ dikenal dengan bentuk sidik jari dari dua spektrum
inframerah.

Manfaat lain dari spektrum inframerah adalah memberikan keterangan tentang

molekul. Kisaran serapan yang kecil dapat digunakan untuk menentukan tipe ikatan.
Untuk memperoleh interpretasi lebih jelas dibutukan tabel korelasi dari inframerah. Pada
saat menentukan puncak dari gugus spesifik dalam daerah spectrum inframerah biasanya
vibrasi ulur lebih bermanfaat. Daerahnya dapat dibagi menjadi empat daerah, yaitu :

16
 Tabel 1.1 Korelasi Inframerah

Rentang (cm-1) Jenis Ikatan

3700-2500 Ikatan tunggal ke hidrogen

2300-2000 Ikatan rangkap tiga

1900-1500 Ikatan rangkap dua

1400-650 Ikatan tunggal selain ke hidrogen

Jenis Bahan Kimia/Senyawa yang dapat Diuji/Diagnosis pada Instrumen

Tergantung pada jenis cuplikan yaitu apakah berbentuk gas,cairan,atau padatan.
1. Gas
Untuk menangani sampel berbentuk gas,maka sampel harus dimasukkan dalam sel gas
yang dapat mengatur masuk dan keluarnya sampel gas melalui 2 buah katup dalam ruang
gas sampel ini akan dapat diatur terjadinya pengamatan bentuk gas atau cair melalui proses
penguapan dan penyublinan. Dalam bentuk yang dimodifikasi, cermin internal yang
digunakan dapat memantulkan berkas sinar berulang kali melalui sampel untuk menaikka n
sensitifitas sejumlah kecil senyawa-senyawa organik dapat ditentukan dalam bentuk gas,
bahkan dalam sel-sel yang dipanaskan.
2. Cairan
Cara paling mudah dalam penanganan sampel untuk cairan yang tidak mengand ung
air adalah menempatkan sampel tersebut sebagai film yang tipis diantara 2 lapis NaCl yang
transparan terhadap inframerah karena digunakan NaCl maka setelah selesai harus segera
dibersihkan dengan mencuci menggunakan pelarut toluena, kloroform, dsb. NaCl harus
dijaga tetap kering dan dipegang pada ujung2nya.Keburaman tablet ini dapat digosok denagn
alcohol absolute dan dijaga kelembapannya pada 40-50 % untuk spectra dibawah 250 cm-1
maka digunakan CsI untuk sampel yang mengandung air hendaklah disiapkan denagn tablet
sel AgCl yang dijaga tak boleh terkena radiasi matahari atau dapat juga digunakan CaF 2 .

3. Padatan
Wujud sampel padat dapat bermacam-macam diantaranya Kristal, amorf, serbuk, gel,
dll. Ada 3 cara umum untuk mencatat spectra untuk padatan. Pelet KBr, mull dan bentuk
lapisan tipis padatan juga dapat ditentukan dalam larutan tetapi spectra larutan mungk in

17
memberikan kenampakan yang berbeda dari spectra bentuk padat karena gaya-gaya
intermolekul akan berubah.
a) Dibuat tablet kempa dengan KBr
KBr untuk keperluan tersebut harus kering dengan memanaskan sampai 110 0C
selama 1 – 2 jam campur zat padat yang akan dianalisis (0,1 – 2 % b/b) dengan KBr
dalam mortar agate,selanjutnya buat tablet tipis dengan penempaan memakai hampa
udara dengan tekanan tinggi.
Pengempaan lebih baik dilakukan dibawah lampu inframerah untuk mencegah
terjadinya kondensasi uap dari atmosfer yang akan memberikan serapan lebar pada 3500
cm-1 .
b) Mull atau pasta
Dibuat dengan mencampur cuplikan dengan setetes minyak,pasta kemudian
dilapiskan antara 2 keping tablet NaCl yang transparan bahkan pasta harus transparan
terhadap IR, tetapi hal ini tidak pernah ada dan struktur yang dihasilkan selalu
menunjukkan serapan yang berasal dari bahan pasta dengan sampel yang sering
digunakan sebagai bahan pasta adalah parafin cair.
c) Larutan
Melarutkan terlebih dahulu dengan pelarut-pelarut organik yang mutlak bebas
air seperti karbon disulfide (CS2 ) untuk penentuan 1330 – 625 cm-1 karbon tetraklorida
(CCl4 ) untuk penentuan 4000 – 1330 cm-1 . Pelarut polar juga dapat dipakai spt
kloroform, dioksan, dan formamida.
Larutan (biasanya 1 – 5 %) ditempatkan dalam sel yang terdiri dari bahan
transparan. Sel yang kedua berisi pelarut murni ditempatkan pada berkas sinar referensi
sehingga serapan dari pelarut dapat dihilangkan dan spectrum yang dicatat merupakan
senyawanya sendiri.
Larutan tadi juga dapat diteteskan pada kepingan NaCl untuk membuat lapisan
tipis padatan. Caranya dengan meneteskan larutan dalam pelarut yang mudah menguap
tersebut pada permukaan kepingan NaCl dan dibiarkan sehingga pelarut menguap.
Untuk mengidentifikasi senyawa yang tidak dikenal , seorang hanya perlu
membandingkan spectrum IR dengan sederet spectrum standar.

18
Keunggulan dan Kelemahan Instrumen
Keunggulan dan Kelemahan spektrokopi inframerah adalah dalam pengiriman data .
 Keunggulan inframerah dalam pengiriman data
1. Pengiriman data dengan infra merah dapat dilakukan kapan saja, karena pengir ima n

dengan inframerah tidak membutuhkan sinyal.

2. Pengiriman data dengan infra merah dapat dikatakan mudah karena termasuk alat yang
sederhana.
3. Pengiriman data dari ponsel tidak memakan biaya (gratis)

 Kelemahan inframerah dalam pengiriman data

1. Pada pengiriman data dengan inframerah, kedua lubang infra merah harus berhadapan

satu sama lain. Hal ini agak menyulitkan kita dalam mentransfer data karena caranya
yang merepotkan.
2. Inframerah sangat berbahaya bagi mata, sehingga jangan sekalipun sorotan infra merah
mengenai mata
3. Pengiriman data dengan inframerah dapat dikatakan lebih lambat dibandingkan dengan
rekannya Bluetooth.

19
2.1.3. Instrument Kimia Atomic Absorption Spectoscopy (AAS)
Dasar Teori
Spektrometri atomik adalah metode pengukuran spektrum yang berkaitan dengan
serapan dan emisi atom. Bila suatu molekul mempunyai bentuk spektra pita, maka suatu
atom mempunyai spektra garis. Atom-atom yang terlibat dalam metode pengukuran
spektrometri atomik haruslah atom-atom bebas yang garis spektranya dapat diamati.
Pengamatan garis spektra yang spesifik ini dapat digunakan untuk analisis unsur baik
secara kualitatif maupun kuantitatif.
Absorbsi (serapan) atom adalah suatu proses penyerapan bagian sinar oleh atom-
atom bebas pada panjang gelombang tertentu dari atom itu sendiri sehingga konsentrasi
suatu logam dapat ditentukan. Karena absorbansi sebanding dengan konsentrasi suatu
analit, maka metode ini dapat digunakan untuk sistem pengukuran atau analisis kuantitatif.
Spektrometri Serapan Atom (SSA) dalam kimia analitik dapat diartikan sebagai suatu
teknik untuk menentukan konsentrasi unsue logam tertentu dalam suatu cuplikan. Teknik
pengukuran ini dapat digunakan untuk menganalisis konsentrasi lebih dari 62 jenis unsur
logam.
Teknik Spektrometri Serapan Atom (SSA) dikembangkan oleh suatu tim peneliti
kimia Australia pada tahun 1950-an, yang dipimpin oleh Alan Walsh, di CSIRO
(Commonwealth Science and Industry Research Organization) bagian kimia fisik di
Melbourne, Australia. Unsur-unsur dalam cuplikan diidentifikasi dengan sensitivitas dan
limit deteksi pada teknik pengukuran ini dapat mencapai 1 mg/L (1 ppm) bila
menggunakan lampu nyala biasa dan dapat dicapai sampai 0,1 ppm dengan
menggunakan prosedur SSA yang lebih canggih.

Dalam spektroskopi atomik, faktor-faktor yang dapat menyebabkan pelebaran garis

spektra merupakan suatu problem dalam sistem analisis metode ini. Dua hal yang paling
sering menimbulkan problem ini adalah pelebaran efek Doppler (Doppler Boardening)
dan pelebaran tekanan (Pressure Boardening).

Pelebaran Efek Doppler (Doppler Boardening)

Selama proses atomisasi atau ionisasi, suatu spesies yang sedang diukur dapat
bergerak menjauhi atau melalui detektor. Hal ini dapat menimbulkan loncatan Doppler

20
pada spektra garis yang dihasilkan, sehingga garis spektra yang seharusnya berkisar antara
1-15 nm menjadi kira-kira 100 kali lebih lebar. Tidak banyak hal yang dapat dilakukan
untuk menghindari efek Doppler ini kecuali hanya mengenali mengapa hal tersebut
terjadi.
Pelebaran Tekanan (Pressure Boardening)

Efek ini dapat timbul bila suatu analit bertabrakan dengan spesies lain karena
perubahan energi. Efek ini semakin besar pengaruhnya sejalan dengan kenaikan suhu.
Efek pelebaran tekanan.
Prinsip Dasar SSA :
1. Cuplikan atau larutan cuplikan dibakar dalam suatu nyala atau dipanaskan dalam
suatu tabung khusus (misal tungku api).
2. Dalam setiap atom tersebut ada sejumlah tingkat energi diskrit yang ditempati oleh
elektron.
3. Tingkat energy biasanay dimulai dengan E0 bila berada pada keadaan dasar (grouns
state level) sampai E1, E2 sampai E .
Atom yang tidak tereksitasi, berada dalam keadaan dasar (ground state). Untuk
mengeksitasi atom, satu atau lebih elektron harus berpindah ke tingkat energi yang lebih
tinggi dengan cara penyerapan energi oleh atom itu. Energi dapat disuplai oleh foton
atau dari peristiwa tabrakan yang disebabkan oleh panas. Dengan peristiwa itu, elektron
terluar akan menjauhi inti paling tidak adalah ke tingkat energi pertama E1. Energi yang
dibutuhkan adalah setara dengan selisih dari energi tingkat satu dengan energi dasar.

E = E1 – E0 ... (1)

Energi yang dibutuhkan untuk transisi elektron itu dapat dipenuhi oleh foton atau cahaya
yang setara dengan :
E = hv ... (2)

Dengan h = tetapan Planck dan v = frekuensi

Dimana c = kecepatan cahaya pada keadaan vakum

Untuk beberapa peristiwa eksitasi misalnya pada UV atau sinar-X spektrometri selisih
energi (E1 -E0) sangat lebar, berkisar 100-900 nm.

21
 Dalam SSA, selisih energi (E1 -E0) kecil, hal ini disebabkan karena hanya bagian
elektron terluar yang teresksitasi, disebabkan oleh pengendalian suhu yang cermat. Bila
suhu terlampau tinggi sebagian atom akan terionisasi.

Atom-atom dalam kabut tersebut bergerak dengan kecepatan tinggi dan saling

E1 -E0 sempit ini, walaupun pada proses pembakaran terjadi kabut dari berbagai atom,
tapi hanya atom tertentu yang dapat menyerap sumber enrergi atau foton. Hal ini
merupakan sifat selektif yang spesifik dari SSA.
Kespesifikan itu juga merupakan suatu kekurangan karena lebar pita penyerapan
yang sempit dengan lebar berkisar 0,001 nm menjadi kendala dalam analisis. Tidak ada
monokromator yang mampu menghasilkan pita radiasi yang sekecil puncak absorpsi atom
(0,001 nm). Bila digunakan sumber radiasi kontinu, monokromator akan melakukan suatu
pita yang lebarnya 3-
o
/oo. Dalam keadaan demikian hukum Beer tidak berlaku karena perubahan relatif
intensitas pita radiasi yang dilakukan sangat kecil dibandingkan dengan perubahan radiasi
yang bersesuaian dengan puncak absorpsi.

yang sama dengan radiasi elemen yang akan dianalisis yang dihasilkan oleh Hollow
Cathode Lamp (HCL) atau Electrodeless Discharge Lamp (EDL).
Di dalam Hollow Cathode Lamp (HCL) atau Electrodeless Discharge Lamp (EDL),
atom elemen yang dimaksud dalam keadaan gas dieksitasikan dengan pengawamua ta n
(discharge) listrik. Atom-atom yang tereksitasi mengemisikan radiasi khas bila kembali
ke tingkat energi yang lebih rendah. Sebagian dari radiasi yang diemisi akan mempun ya i

dengan cermat, garis- garis emisi dapat mempunyai pita yang lebarnya lebih kecil dari
pita absorpsi.
Walaupun masalah pita radiasi sudah dapat dipecahkan, SSA ini maish mempunya i
keterbatasan, yaitu untuk setiap analisis diperlukan adanya HCL yang sesuai dengan
elemen yang dianalisis. Persyaratan lain untuk memperoleh sinyal penyerapan yang tinggi
adalah sebagian besar atom dalam keadaaan energi dasar (ground state) dan sejumla h

22
besar elektron harus dapat dieksitasi ke tingkat energi pertama (E1) ketika foton dengan
frekuensi yang tepat diserap.
Fungsi dan Kegunaan
Spektrofotometer Serapan Atom berfungsi untuk menentukan kadar konsentrasi
dari unsur metalik untuk kepentingan medis dalam pemeliharaan kesehatan, seperti
kalsium, magnesium, tembaga, seng, dan besi. Selain itu Spektrofotometer Serapan Atom
juga dapat digunakan untuk menentukan apakah obat-obatan terapeutik tingkat seperti
lithium telah dicapai dalam darah dan juga dapat mendeteksi quantitatif kadar racun pada
logam.

Jenis Bahan Kimia/Senyawa yang dapat Diuji/Diagnosis pada Instrumen

Beberapa logam yang terkandung dalam sampel dapat ditentukan secara langsung
dengan menggunakan AAS, tetapi ada beberapa gangguan kimia yang menyebabkan
sampel harus diperlakukan khusus terlebih dahulu. Gangguan kimia disebabkan oleh
berkurangnya penyerapan loncatan atom dalam kombinasi molekul dalam frame. Hal ini
terjadi karena flame tidak cukup panas untuk memecah molekul atau pada saat pemecahan
atom, dioksidasi segera menjadi senyawa yang tidak terpecah pada temperature flame.
Beberapa gangguan dapat dikurangi atau dihilanhkan dengan penambahan elemen atau
senyawa khusus pada larutan sampel. Beberapa gangguan kimia anatara lain :
a. Pembentukan Senyawa Stabil
Pembentukan senyawa stabil menyebabkan disosiasi analit tidak bercampur.
Gangguan kimia ini dapat diatasi dengan menaikkan suhu nyala, menggunakan zat
pembebas dan ekstrasi analit.
b. Ionisasi
Ionisasi dapat dicegah dengan menambahkan ion yang lebih mudah terionisasi untuk
menahan ionisasi analit. Unsur-unsur yang dapat ditentukan dengan AAS lebih dari 60
unsur logam dengan konsentrasi antara 1 ppm – 10 ppm. Setiap unsur logam yang
dideteksi menggunakan AAS mempunyai kondisi optimum yang berbeda-beda.
Keunggulan dan Kelemahan Instrumen
 Kelebihan yang dimiliki oleh metode Spektrofotometri Serapan Atom (SSA/AAS),yaitu
:

23
 Metode AAS dibandingkan dengan spektrofotometer biasa yaitu spesifik, batas deteksi
yang rendah dari larutan yang sama bisa mengukur unsur-unsur yang berlaina n,
pengukurannya langsung terhadap contoh, output dapat langsung dibaca, cukup ekonomis,
dapat diaplikasikan pada banyak jenis unsur, batas kadar penentuan luas (dari ppm sampai
%).
 Kelemahan yang dimiliki oleh metode Spektrofotometri Serapan Atom
(SSA/AAS),yaitu:

Pengaruh kimia dimana AAS tidak mampu menguraikan zat menjadi atom misalnya
pengaruh fosfat terhadap Ca, pengaruh ionisasi yaitu bila atom tereksitasi (tidak hanya
disosiasi) sehingga menimbulkan emisi pada panjang gelombang yang sama, serta
pengaruh matriks misalnya pelarut.

24
2.1.4. Instrument Kimia Gas Chromatography (GC)
Dasar Teori
Kromatografi gas-cair (GLC), atau kromatografi gas (GC), merupakan jenis
kromatografi yang digunakan dalam kimia organik untuk pemisahan dan analisis. GC dapat
digunakan untuk menguji kemurnian dari bahan tertentu, atau memisahkan berbagai
komponen dari campuran. Dalam beberapa situasi, GC dapat membantu dalam
mengidentifikasi sebuah kompleks. Dalam kromatografi gas, fase yang bergerak (atau
"mobile phase") adalah sebuah operator gas, yang biasanya gas murni seperti helium atau
yang tidak reactive seperti gas nitrogen. Stationary atau fasa diam merupakan tahap
mikroskopis lapisan cair atau polimer yang mendukung gas murni, di dalam bagian dari
sistem pipa-pipa kaca atau logam yang disebut kolom. Instrumen yang digunakan untuk
melakukan kromatografi gas disebut gas chromatograph (atau "aerograph", "gas pemisah").
Senyawa gas yang sedang dianalisis berinteraksi dengan dinding kolom yang dilapis i
dengan berbagai tahapan stationary. Ini menyebabkan setiap kompleks ke elute di waktu
yang berbeda, yang dikenal sebagai ingatan waktu yang kompleks. Perbandingan dari
ingatan kali yang memberikan kegunaan analisis GC-nya.

Kromatografi gas yang pada prinsipnya sama dengan kromatografi kolom (serta yang
lainnya bentuk kromatografi, seperti HPLC, TLC), tapi memiliki beberapa perbedaan
penting. Pertama, proses memisahkan compounds dalam campuran dilakukan antara
stationary fase cair dan gas fase bergerak, sedangkan pada kromatografi kolom yang
seimbang adalah tahap yang solid dan bergerak adalah fase cair. (Jadi, nama lengkap
prosedur adalah "kromatografi gas-cair", merujuk ke ponsel dan stationary tahapan,
masing- masing.) Kedua, melalui kolom yang lolos tahap gas terletak di sebuah oven
dimana temperatur gas yang dapat dikontrol, sedangkan kromatografi kolom (biasanya)
tidak memiliki kontrol seperti suhu. Ketiga, konsentrasi yang majemuk dalam fase gas
adalah hanya salah satu fungsi dari tekanan uap dari gas.

Kromatografi gas juga mirip dengan pecahan penyulingan, karena kedua proses
memisahkan komponen dari campuran terutama berdasarkan titik didih (atau tekanan uap)
perbedaan. Namun, pecahan penyulingan biasanya digunakan untuk memisa hka n
komponen campuran pada skala besar, sedangkan GC dapat digunakan pada skala yang
lebih kecil (yakni microscale).

25
 Kromatografi gas terkadang juga dikenal sebagai uap-tahap kromatografi (VPC), atau
gas-cair kromatografi partisi (GLPC). Alternatif nama ini, serta masing- masing singkatan,
sering ditemukan dalam literatur ilmiah.

Diagram alir kromatografi gas-cair

Mekanisme kerja GC

 Injeksi sampel

Sejumlah kecil sampel yang akan dianalisis diinjeksikan pada mesin menggunaka n
semprit kecil. Jarum semprit menembus lempengan karet tebal (Lempengan karet ini
disebut septum) yang mana akan mengubah bentuknya kembali secara otomatis ketika
semprit ditarik keluar dari lempengan karet tersebut.

Injektor berada dalam oven yang mana temperaturnya dapat dikontrol. Oven
tersebut cukup panas sehingga sampel dapat mendidih dan diangkut ke kolom oleh gas
pembawa misalnya helium atau gas lainnya.

Komponen dalam kromatografi gas :

1. Gas pembawa dan pemasukan sampel

Fase bergerak dalam kromatografi ini adalah gas, yang paling lazim adalah helium,
hidrogen, atau nitrogen. Kompenen pilihan gas pembawa terutama tergantung pada
karakteristik detektor.

26
 2. Kolom
Aliran gas selanjutnya menemui kolom yang diletakkan dalam oven bertemperatur
konstan. Ini adalah jantung instrumen tesebut, tempat dimana proses kromartgrafi
dasar berlangsung. Ada dua tipe utama kolom dalam kromatografi gas-cair. Tipe
pertama, tube panjang dan tipis berisi material padatan; Tipe kedua, lebih tipis dan
memiliki fase diam yang berikatan dengan pada bagian terdalam permukaannya.
3. Detektor
Setelah muncul dari kolom itu, aliran gas lewat melalui sis lain detektor. Maka elusi
zat terlarut dari kolom itu mengatur ketidak seimbangan antara dua sisi detektor yang
direkam secara elektrik.

Fungsi dan Kegunaan

1. Untuk identifikasi senyawa
Dengan suatu kolom tertentu dan dengan semua fariabelnya seperti temperatur dan laju
alir, dikendalikan secara cermat, waktu retensi atau volume retensi suatu zat terlarut
merupakan suatu besaran dari zat terlarut tersebut, seperti halnya titk didih atau halnya
indek bias adalah besaran. Ini menunjukkan bahwa sifat retensi dapat digunakan untuk
mengetahui suatu senyawa.
2. Analisis kuantitatif
Dengan GC tergantung pada hubungan antara jumlah suatu zat terlarut dan ukuran dari
pita elusi yang dihasilkan. Secara umum dengan detektor diferensial, ukuran jumla h
zat terlarut yang paling baik adalah luas dibawah pita elusi. Jumlah zat terlarut = faktor
kalibrasi x luas dibawah pita elusi.

Jenis Bahan Kimia/Senyawa yang dapat Diuji/Diagnosis pada Instrumen

GC adalah instrumen yang digunakan untuk menganalisis senyawa-senyawa organik
yang mudah menguap atau mudah diuapkan dalam GC dimana titik uapnya antara 200o C-
350o C dan biasanya senyawa-senyawa tesebut memiliki massa molekul relatif kecil. Tentu
saja senyawa tersebut harus memiliki sifat tidak rusak karena panas. Untuk sampel yang
tidak memenuhi syarat tersebut dapat dilakukan derivatisasi terlebih dahulu.

27
 GC terbagi menjadi dua yaitu Kromatografi Gas Cair dan Kromatografi Gas Padat.
Perbedaan keduanya terletak pada penggunaan fasa diam. Pada KGC, fasa diam yang
digunakan berupa cairan yang diikatkan pada suatu pendukung sehingga solut akan terlarut
dalam fasa diam. Sedangkan pada KGP, fasa diam yang digunakan yaitu berupa padatan.

Keunggulan dan Kelemahan Instrumen

 Keunggulan :
1. Waktu analisis yang singkat dan ketajaman pemisahan yang tinggal.
2. Dapat menggunakan kolom lebih panjang untuk menghasilkan efisiensi pemisaha n
yang tinggi.
3. Gas mempunyai vikositas yang rendah.
4. Kesetimbangan partisi antara gas dan cairan berlangsung cepat sehingga analisis relatif
cepat dan sensitifitasnya tinggi.
5. Pemakaian fase cair memungkinkan kita memilih dari sejumlah fase diam yang sangat
beragam yang akan memisahkan hampir segala macam campuran.
 Kelemahan :
1. Teknik Kromatografi gas terbatas untuk zat yang mudah menguap
2. Kromatografi gas tidak mudah dipakai untuk memisahkan campuran dalam jumla h
besar. Pemisahan pada tingkat mg mudah dilakukan, pemisahan pada tingkat gram
mungkin dilakukan, tetapi pemisahan dalam tingkat pon atau ton sukar dilakukan
kecuali jika ada metode lain.
3. Fase gas dibandingkan sebagian besar fase cair tidak bersifat reaktif terhadap fase diam
dan zat terlarut

28
2.1.5. Instrument Kimia High Performance Liquid
Dasar Teori
HPLC secara mendasar merupakan perkembangan tingkat tinggi dari kromatografi
kolom. Selain dari pelarut yang menetes melalui kolom dibawah grafitasi, didukung melalui
tekanan tinggi sampai dengan 400 atm. Ini membuatnya lebih cepat. HPLC memperbolehka n
penggunaan partikel yang berukuran sangat kecil untuk material terpadatkan dalam kolom
yang mana akan memberi luas permukaan yang lebih besar berinteraksi antara fase diam dan
molekul- molekul yang melintasinya. Hal ini memungkinkan pemisahan yang lebih baik dari
komponen-komponen dalam campuran. Perkembangan yang lebih luas melalui kromatografi
kolom mempertimbangkan metode pendeteksian yang dapat digunakan. Metode-metode ini
sangat otomatis dan sangat peka. Ada dua fase HPLC:

1. Fase normal HPLC

Kolom diisi dengan partikel silika yang sangat kecil dan pelarut non polar misalnya
heksan. Sebuah kolom sederhana memiliki diameter internal 4.6 mm (dan mungk in
kurang dari nilai ini) dengan panjang 150 sampai 250 mm. Senyawa-senyawa polar dalam
campuran melalui kolom akan melekat lebih lama pada silika yang polar dibanding degan
senyawa-senyawa non polar. Oleh karena itu, senyawa yang non polar kemudian akan
lebih cepat melewati kolom.
2. Fase balik HPLC
Dalam kasus ini, ukuran kolom sama, tetapi silika dimodifikasi menjadi non polar
melalui pelekatan rantai-rantai hidrokarbon panjang pada permukaannya secara
sederhana baik berupa atom karbon 8 atau 18. Contoh, pelarut polar digunakan berupa
campuran air dan alkohol seperti metanol. Dalam kasus ini, akan terdapat atraksi yang
kuat antara pelarut polar dan molekul polar dalam campuran yang melalui kolom. Atraksi
yang terjadi tidak akan sekuat atraksi antara rantai-rantai hidrokarbon yang berlekatan
pada silika (fase diam) dan molekul- molekul polar dalam larutan. Oleh karena itu,
molekul- molekul polar dalam campuran akan menghabiskan waktunya untuk bergerak
bersama dengan pelarut. Fase balik HPLC adalah bentuk yang biasa digunakan dalam
HPLC.Melihat seluruh proses

29
 Diagram alir HPLC

Injeksi sampel
Injeksi sample seluruhnya otomatis dan anda tidak akan mengharapkan bagaima na
mengetahui apa yang terjadi pada tingkat dasar. Karena proses ini meliputi tekanan, tidak
sama halnya dengan kromatografi gas (jika anda telah mempelajarinya).
Waktu retensi
Waktu yang dibutuhkan oleh senyawa untuk bergerak melalui kolom menuju detektor
disebut sebagai waktu retensi. Waktu retensi diukur berdasarkan waktu dimana sampel
diinjeksikan sampai sampel menunjukkan ketinggian puncak yang maksimum dari senyawa
itu.
Senyawa-senyawa yang berbeda memiliki waktu retensi yang berbeda. Untuk
beberapa senyawa, waktu retensi akan sangat bervariasi dan bergantung pada:

 Tekanan yang digunakan (karena itu akan berpengaruh pada laju alir dari pelarut)
 Kondisi dari fase diam (tidak hanya terbuat dari material apa, tetapi juga pada ukuran
partikel)
 Komposisi yang tepat dari pelarut
 Temperatur pada kolom

30
 Detektor
Ada beberapa cara untuk mendeteksi substansi yang telah melewati kolom. Metode
umum yang mudah dipakai untuk menjelaskan yaitu penggunaan serapan ultra-viole t.
Banyak senyawa-senyawa organik menyerap sinar UV dari beberapa panjang gelomba ng.
Jika anda menyinarkan sinar UV pada larutan yang keluar melalui kolom dan sebuah
detektor pada sisi yang berlawanan, anda akan mendapatkan pembacaan langsung berapa
besar sinar yang diserap.

Jumlah cahaya yang diserap akan bergantung pada jumlah senyawa tertentu yang
melewati melalui berkas pada waktu itu. Anda akan heran mengapa pelarut yang digunaka n
tidak mengabsorbsi sinar UV. Pelarut menyerapnya! Tetapi berbeda, senyawa-senyawa akan
menyerap dengan sangat kuat bagian-bagian yang berbeda dari specktrum UV.

Misalnya, metanol, menyerap pada panjang gelombang dibawah 205 nm dan air pada
gelombang dibawah 190 nm. Jika anda menggunakan campuran metanol-air sebagai pelarut,
anda sebaiknya menggunakan panjang gelombang yang lebih besar dari 205 nm untuk
mencegah pembacaan yang salah dari pelarut.

Interpretasi output dari detektor

Output akan direkam sebagai rangkaian puncak-puncak, dimana masing- mas ing
puncak mewakili satu senyawa dalam campuran yang melalui detektor dan menerap sinar
UV. Sepanjang anda mengontrol kondisi kolom, anda dapat menggunakan waktu retensi
untuk membantu mengidentifikasi senyawa yang diperoleh, tentunya sudah mengukur
senyawa-senyawa murninya dari berbagai senyawa pada kondisi yang sama.

31
 Jika menginjeksi suatu larutan yang mengandung senyawa murni X yang telah
diketahui jumlahnya pada instrumen, anda tidak hanya dapat merekam waktu retensi dari
senyawa tersebut, tetapi anda juga dapat menghubungkan jumlah dari senyawa X dengan
puncak dari senyawa yang dihasilkan.

Fungsi dan Kegunaan

1. HPLC dengan prinsip kromatografi banyak digunakan pada industri farmasi dan
pestisida.
2. Zat- zat dengan kepolaran berbeda yaitu antara sedikit polar sampai polar dapat
dipisahkan dengan HPLC berdasarkan partisi cair-cair.
3. Asam-asam nukleat dapat dipisahkan dengan kolom penukar ion yang dikombinasika n
dengan kolom butiran berlapis zat berpori
4. Morfin, heroin dan semacamnya telah dapat dipisahkan dengan rezin Zipax-SAX.
5. Dapat memisahkan vitamin- vitamin yang larut dalam air.
6. Digunakan untuk menentukan berat molekul polimer dan masalah- masalah biokimia.
7. Dapat digunakan untuk memurnikan dan mengidentifikasi suatu senyawa.

Jenis Bahan Kimia/Senyawa yang dapat Diuji/Diagnosis pada Instrumen

 Zat cair yang akan digunakan sebagai fasa gerak HPLC harus memenuhi beberapa
persyaratan berikut:
1. Zat cair harus bertindak sebagai pelarut yang baik untuk cuplikan yang akan di analis is
2. Zat cair harus murni sekali untuk menghindarkan masuknya kotoran yang dapat
menganggu interpretasi kromatogram.
3. Zat cair harus jernih sekali untuk menghindarkan penyumbatan pada kolom.
4. Zat cair harus mudah diperoleh, murah, tidak mudah terbakar, dan tidak beracun.
5. Zat cair tidak kental.
6. Sesuai dengan detektor.

32
 Fase gerak memiliki syarat-syarat :
1. Murni, tanpa cemaran
2. Tidak bereaksi dengan kemasan
3. Sesuai dengan detektor
4. Dapat melarutkan cuplikan
5. Mempunyai viskositas rendah
6. Memungkinkan memperoleh dengan mudah cuplikan jika diperlukan
7. Harganya wajar

Keunggulan dan Kelemahan Instrumen

 Keunggulan :

1. Mampu memisahkan molekul- molekul dari suatu campuran

2. Mudah melaksanakannya
3. Kecepatan analisis dan kepekaan yang tinggi
4. Dapat dihindari terjadinya dekomposisi / kerusakan bahan yang dianalisis ü Resolusi
yang baik
5. Dapat digunakan bermacam- macam detektor
6. Kolom dapat digunakan kembali

 Kelemahan :

1. Larutan harus dicari fase diamnya terlebih dahulu

2. Hanya bisa digunakan untuk asam organic.
3. Harus mengetahui kombinasi yang optimum antara pelarut, analit, dan gradient elusi
4. Harganya mahal sehingga penggunaannya dalam lingkup penelitian yang terbatas

33
2.1.6. Instrument Kimia GC-MS
Dasar Teori
GC-MS singkatan dari “Gas Chromatography-Mass Spectrometry”. Instrumen ini
adalah metode yang mengkombinasikan kromatografi gas dan spektrometri massa untuk
mengidentifikasi senyawa yang berbeda dalam analisis sampel. Hal ini berarti sampel yang
hendak diperiksa dipisahkan dahulu dengan alat GC (Gas Chromatography) untuk
menganalisis jumlah senyawa secara kuantitatif. Kemudian diidentifikasi dengan alat MS
(Massa Spectrometer) untuk menganalisis struktur molekul analit. GC dan MS merupakan
kombinasi kekuatan yang stimulan untuk memisahkan dan mengidentifikas i komponen-
komponen campuran. Dengan menggambungkan kedua teknik tersebut diharapkan mampu
meningkatkan kemamapuan dalam menganalisis sampel dengan mengambil kelebiha n
masing- masing teknik dan meminimalisir kekurangannya.
Kromatografi gas dan spektrometer massa dalam banyak hal memiliki banyak
kesamaan dalam tekniknya. Untuk kedua teknik tersebut, sampel yang dibutuhkan dalam
bentuk fase uap, dan keduanya juga sama-sama membutuhkan jumlah sampel yang sedikit.
Disisi lain, kedua teknik tersebut memiliki perbedaan yang cukup besar yakni pada kondisi
operasinya. Senyawa yang terdapat pada kromatografi gas adalah senyawa yang digunaka n
untuk sebagai gas pembawa dalam alat GC dengan tekanan kurang lebih 760 torr, sedangkan
spketometer massa beroperasi pada kondisi vakum dengan kondisi tekanan 10-6 – 10-5 torr.

Prinsip Kerja dari GC-Ms

Cara kerja dari kromatografi gas adalah gas pembawa lewat melalui satu sisi detektor
kemudian memasuki kolom. Di dekat kolom ada suatu alat di mana sampel–sampel bisa
dimasukkan ke dalam gas pembawa (tempat injeksi). Sampel–sampel tersebut dapat berupa
gas atau cairan yang volatil (mudah menguap). Lubang injeksi dipanaskan agar sampel
teruapkan dengan cepat.
Aliran gas selanjutnya menemui kolom, kolom berisi suatu padatan halus dengan luas
permukaan yang besar dan relatif inert. Sebelum diisi ke dalam kolom, padatan tersebut
diimpregnasi dengan cairan yang diinginkan yang berperan sebagai fasa diam atau stasioner
sesungguhnya, cairan ini harus stabil dan nonvolatil pada temperatur kolom dan harus sesuai
dengan pemisahan tertentu. Setelah muncul dari kolom itu, aliran gas lewat melalui sisi lain

34
detektor. Maka elusi zat terlarut dari kolom mengatur ketidakseimbangan antara dua sisi
detektor yang direkam secara elektrik.
Waktu Retensi adalah waktu yang digunakan oleh senyawa tertentu untuk bergerak
melalui kolom menuju ke detektor disebut sebagi waktu retensi (RT). Waktu ini diukur
berdasarkan waktu dari saat sampel diinjeksikan pada titik dimana tampilan menunjukka n
tinggi puncak maksimum untuk senyawa itu. Molekul-molekul memerlukan jumlah waktu
yang berbeda (disebut waktu retensi) untuk keluar dari kromatografi gas, dan ini
memungkinkan spektrometer massa untuk menangkap, ionisasi, mempercepat,
membelokkan, dan mendeteksi molekul terionisasi secara terpisah. Spektrometer massa
melakukan hal ini dengan memecah masing- masing molekul menjadi terionisasi mendeteksi
fragmen menggunakan massa untuk mengisi rasio.

Bagian-bagian GC-Ms dan Fungsinya

a. Carrier Gas Supply
Gas pembawa (Cerrier gas) pada kromatografi gas sangatlah penting. Gas yang
dapat digunakan pada dasarnya haruslah inert, kering dan bebas oksigen. Kondisi ini
dibutuhkan karena gas pembawa ini dapat saja bereaksi dan dapat mempengaruhi gas
yang akan dipelajari atau diidentifikasi
b. Injection Port
Jarum yang digunakan untuk menginjeksikan sampel kedalam lempengan karet
tebal atau yang biasa disebut septrum. Dalam pemisahan senyawa harus dalam bentuk
gas. Biasanya jumlah cuplikan yang diinjeksikan pada waktu mengadakan analisa 0,5-
50 ml gas dan 0,2-20 untuk cairan.
c. Oven
Digunakan untuk memanaskan column pada temperature tertentu sehingga
mempermudah proses pemisahan komponen sampel. Biasanya oven memilik i
jangkauan suhu 30 – 320 C.
d. Column
Kolom merupakan tabung yang akan dilewati oleh fase gerak yang membawa
sampel, bentuk kolom berbeda-beda ada yang lurus, bengkok, dan kumparan spiral.

35
e. Detector
Detector terdiri atas High Energy Dynodes (HED) dan Electron Multiplier (EM)
detector. Selama proses, sejumlah ion-ion dan electron-elektron dihasilkan salam nyala.
Kehadiran ion dan electron dapat dideteksi. Seluruh detector ditutup dalam oven yang
lebih panas dibanding dengan temperature kolom. Hasil detector akan direkan sebagai
urutan puncak-puncak. Setiap puncak mewakili satu senyawa dalam campuran yang
melalui detector.

Kekurangan dari GC-Ms

1. Teknik Kromatografi gas terbatas untuk zat yang mudah menguap .
2. GC/MS kurang cocok untuk analisa senyawa labil pada suhu tinggi karena akan
terdekomposisi pada awal pemisahan.
3. Kromatografi gas tidak mudah dipakai untuk memisahkan campuran dalam jumla h
besar.
4. Pemisahan pada tingkat mg mudah dilakukan, pemisahan pada tingkat gram mungk in
dilakukan, tetapi pemisahan dalam tingkat pon atau ton sukar dilakukan kecuali jika
ada metode lain.
5. Fase gas dibandingkan sebagian besar fase cair tidak bersifat reaktif terhadap fase
diam dan zat terlarut.

Kelebihan dari GC-Ms

1. Efisien, resolusi tinggi sehingga dapat digunakan untuk menganalisa partikel
berukuran sangat kecil seperti polutan dalam udara
2. Aliran fasa bergerak (gas) sangat terkontrol dan kecepatannya tetap.
3. Pemisahan fisik terjadi didalam kolom yang jenisnya banyak sekali, panjang dan
temperaturnya dapat diatur.
4. Banyak sekali macam detektor yang dapat dipakai pada kromatografi gas (saat ini
dikenal 13 macam detektor) dan respons detektor adalah proporsional dengan jumlah
tiap komponen yang keluar dari kolom.
5. Sangat mudah terjadi pencampuran uap sampel kedalam fasa bergerak.

36
 BAB III
METODE PENGUJIAN

3.1. UV – VIS Spektro

3.1.1. Tata Cara Uji Sampel

 Persiapan Sampel Uji

1. Timbang 1 gram serbuk metil Blu. Masukkan ke dalam alkohol (etanol)

95% sebanyak 90 mL. Aduk sampai rata.

2. Kemudian encerkan dengan air sampai 100 mL.

 Operasional Instrumen
1. Nyalakan PC dan boot sistem operasi PC. Jika printer telah terhubung ke
sistem, maka nyalakan printer.
2. Nyalakan spektrofotometer dan tunggu sampai cahaya indikator
spektrofotometer berwarna hijau. Proses ini meliputi pengujia n
spektrofotometer dan mengambil waktu sekitar 1 menit.
3. Letakkan sampel yang telah dimasukkan kedalam kuvet pada sample
compartment. Sebelum sample di ukur, preparasi sample terlebih dahulu.
4. Kita siap untuk menggunakan sistem.
5. Lampu hijau akan berkedip, hal ini bahwa menunjukkan pengukuran sedang
berlangsung.
6. Jika spektrofotometer berhenti, hal ini menunjukkan bahwa pengukuran telah
siap berlangsung.
7. Data absorbansi dan spektrum akan terbaca di komputer, yang berbentuk
grafik hubungan antara panjang gelombang dengan absorbansi.

3.2. Spektrokopi Serapan Atom (AAS)

3.2.1. Tata Cara Uji Sampel
a. Persiapan Sampel Uji
1. Preparasi Larutan Standar
a. Dibuat larutan standar Fe 1000 ppm sebanyak 100 ml dengan cara

37
 menimbang (NH4 )2 Fe( SO4 )2 . 6H2 O sebanyak 0,7006 gram, kemudian
dimasukkan ke dalam labu takar 100 ml dilarutkan dengan aquades serta
ditandabataskan.
b. Larutan standar Fe 1000 ppm diencerkan menjadi 100 ppm sebanyak 100
ml.
c. Larutan standar Fe 100 ppm yang telah dibuat sebelumnya kemudian
diencerkan kembali sehingga diperoleh 5 variasi konsentrasi larutan, yaitu
2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, dan 10 ppm. Masing-masing larutan dibuat
sebanyak 50 ml. Larutan ini digunakan untuk membuat kurva kalibrasi.
2. Preparasi Cuplikan
a. Sampel yang berupa serbuk bayam ditimbang sebanyak 0,2594 gram.
b. Serbuk bayam dimasukkan ke dalam beker Teflon, kemudian ditambahkan 1-
2 ml H2 SO4 pekat dan HNO3 pekat. Beker teflon ditutup dengan gelas arloji,
kemudian dipanaskan dengan hati-hati di atas kompor listrik.
c. Setelah semua sampel bayam larut dan larutan berubah warna menjadi bening,
beker Teflon kemudian diangkat dari kompor listrik dan didinginkan.
d. Larutan sampel kemudian diencerkan ke dalam labu tukar 50 ml.

3.3. Spektrofotometri Inframerah (IR)

3.3.1. Tata Cara Uji Sampel
Pada pengujian di Laboratorium menggunakan sampel padat.
 Persiapan Sampel Uji
a. Timbang serbuk KBr halus 0,1 g.
b. Timbang sampel padat kering (bebas air) 1% dari berat KBR.
c. Campurkan serbuk KBr dan sampel dalam mortal agate, kemudian gerus
sampai halus dan tercampur rata.
d. Siapkan cetakan pelet, cuci bagian sample base dan tablet frame dengan
klorofom.
e. Masukkan campuran dalam set cetakan pelet.
f. Untuk meminimalkan kadar air hubungkan dengan pompa vacum. On-kan
pompa vacum 5 menit.

38
 g. Cetakan diletakkan pada pompa hidrolik, kemudian diberi tekanan sampai
tanda 80.
h. Matikan pompa vacum, kemudian turunkan tekanan dalam cetakan dengan
cara membuka kran udara.
i. Lepaskan pelet KBr yang sudah terbentuk.
j. Tempatkan Pelet KBr pada tablet holder, lakukan pengukuran dengan alat
FTIR (lihat prosedur pengukuran).

 Operasional Instrumen
a. Hidupkan spektro IR

b. Kemudian masukkan pelet tadi dengan cetakannya ke dalam spektro IR

c. Lalu tutup spektro IR dan tutup wadah spektro IR (agar tidak ada udara yang
masuk)

d. Kemudian setting dalam komputer untuk menganalisa senyawa yang berada

di spektro IR tersebut.

e. Setelah telah keluar hasil analisa pada komputer, keluarkan senyawa tadi yang
berada di dalam spektro IR.

3.4. Gas Chromatography (GC)

3.4.1. Tata Cara Uji Sampel
 perasional Instrumen
a. Aktifkan Un-interrupable Power Supply (UPS) jika ada.
b. Buka katup gas (alirkan gas ke GC)
- Gas Helium (He) sebagai gas pembawa (carier)
- Gas Nitrogen (N 2 ) sebagai pembawa (carier) dan sebagai make up gas (FID)
- Gas Hydrogen (H2 ) sebagai gas pembakar (FID)
- Gas Compress Air sebagai pembakar (FID)
f. Aktifkan computer.
g. Aktifkan Gas Chromatography (GC) dengan tombol On/Off berada di sisi kiri
bawah, tunggu hingga GC selesai initialisasi & self test (kira-kira 2 menit).

39
 h. Aktifkan software chemstation dengan doble Program click kiri icon
instrument 1 online atau klik start Instrument 1 online. ChemStation Pastikan
menu berada pada Load Method (Conditioning Methode) Method “Method and
Run Control” pilih metode yang diinginkan. Sebelum digunakan, pastikan
column sudah diconditioning dengan suhu 20 o C dibawah suhu maximum
column atau diatas suhu operational tetapi tidak diperbolehkan melewati suhu
max column seperti yang tertera di tag column.Conditioning GC selama 30
menit. Pilih Methode yang akan digunakan untuk analisa (Method and Run
Control)
3.5. High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
3.5.1. Tata Cara Uji Sampel
 Persiapan Sampel Uji
#Sebagai contoh membuat lerutan paracetamol.
Larutan kerja parasetamol 100 µg/mL dipipet masing- masing 0,5 mL; 1 mL; 1,5
mL; 2 mL; 2,5 mL untuk dimasukan kedalam labu ukur 10 mL. Setelah itu metanol
dan air (70:30 v/v) ditambahkan pada setiap labu ukur tersebut sampai tanda batas,
kemudian digojog homogen. Larutan seri parasetamol yang yang dihasilka n
masing- masing sebesar 5 µg/mL; 10 µg/mL; 15 µg/mL; 20 µg/mL; 25 µg/mL.
 Operasional Instrumen
Prinsip kerja alat HPLC adalah pertama fasa gerak dialirkan melalui kolom
kedetektor dengan bantuan pompa. Kemudian cuplikan dimasukan ke dalam aliran
fasa gerak dengan cara penyuntikan. Didalam kolom terjadi pemisahan
komponen-komponen campuran karena perbedan kekuatan interaksi antara solut-
solut terhadap fasa diam. Solut-solut yang kurang kuat interaksinya dengan fasa
diam akan keluar dari kolom terlebih dahulu. Sebaliknya solut-solut yang
interaksinya kuat dengan fasa diam akan keluar dari kolom lebih lama. Setiap
komponen yang campuran yang keluar kolom dideteksi oleh detektor kemudian
direkam dalam bentuk kromatogram.

40
 BAB IV
PEMBAHASAN

4.1. Interpretasi Spektra AAS

 Data Larutan Standar Pb
Nama Sampel Konsentrasi (mg/L) Absorbansi
Blanko 0,00 0,0000
Standar 1 0,5 0,0036
Standar 2 1,0 0,0045
Standar 3 2,0 0,0134
Standar 4 3,0 0,0189
Standar 5 5,0 0,0307
Standar 6 10,0 0,0583

 Analisa Data
1. Kurva Kalibrasi

2. Kadar Logam Timbal (Pb)

Nama Sampel Konsentrasi (mg/L) Absorbansi Kadar (mg/L)
Blanko 0,00 0,0000 -0,085
Standar 1 0,5 0,0036 0,525
Standar 2 1,0 0,0045 0,678
Standar 3 2,0 0,0134 2,186
Standar 4 3,0 0,0189 3,119
Standar 5 5,0 0,0307 5,119
Standar 6 10,0 0,0583 9,797

41
 Persamaan untuk mendapatkan kadar timbal (Pb)
y=ax+b dimana nilai a dan b telah didapat dari regresi linear dari grafik di
atas dan y adalah absorbansi
𝑦− 𝑏
𝑋=
𝑎
0,0036 − 0,0005
𝑋=
0,0059
𝑋 = 0,525 𝑚𝑔/𝐿

4.2. Interpretasi Spektra HPLC

Pada pengujian HPLC sampel yang akan di uji adalah 3B dan senyawa atau sampel
yang akan di amati adalah amoxilin. Maka terlebih dahulu dilakukan pengujian standar
amoxilin dengan konsentrasi 1000 ppm untuk mengetahui waktu retensi dan luas area
amoxilin.
Berikut grafik standar amoxilin dengan konsentrasi 1000 ppm :
Dari kromatogram di samping
dapat dilihat bahwa amoxilin
memiliki reletion time (RT,
waktu retensi) 5,352 menit,
dengan luas area 17135148.
RT merupakan jarak antara
puncak maksimat dari titik
injeksi yang dinyatakan dalam
unit waktu. RT berfungsi sebagai
pengidentifikasi analit pada
system particular. Karena di
kromatogram puncaknya hanya
ada satu, maka analit yang
terbaca yaitu amoxilin (100%),
tanpa zat lain.

42
 Kromatogram sampel 3B
Dari kromatogram di samping
dapat dilihat bahwa sampel 3B
memiliki RT 3.542 menit, dengan
luas area 48267. Terdapat 3 puncak
pada kromatogram, ini menandakan
terdapat 3 zat aktif di dalam sampel
3B. amoxilin terdapat 40,808%
sedangkan analit lainnya ada
disekitar 0,225% dan 58,967%.

4.3. Interpretasi Spektra UV-Vis

 Data Larutan Standar
Nama Sampel Konsentrasi (mg/L) Absorbansi
Standar 1 0,00 0,000
Standar 2 1,0 0,321
Standar 3 2,0 0,650
Standar 4 4,0 1,276

 Analisa Data
1. Kurva Kalibrasi

43
 2. Penentuan Konsentrasi
Untuk penentuan sampel yang tidak diketahui konsentrasinya, terlebih dahulu
dilakukan penentuan panjang gelombang sesuai dengan sampel standarnya, berikut
hasil absorbansi sampel pada panjang gelombang 663,0 nm.
Nama Sampel Panjang Gelombang Absorbansi Konsentrasi
(nm) (mg/L)
Sampel 1 663,0 0,446 1,387

Persamaan untuk mendapatkan konsentrasi sampel yaitu : y = a x + b

Dimana nilai a dan b telah didapat dari regresi linear dari grafik di atas dan y adalah
absorbansi
𝑦− 𝑏
𝑋=
𝑎
0,446 − 0,0032
𝑋=
0,3192
𝑋 = 1,387 𝑚𝑔/𝐿

4.4. Interpretasi Spektra IR

Dari hasil analisa grafik dengan sampel standar cafein, diperoleh bahwa cafein memiliki
beberapa gugus fungsi sebagai berikut :
Gugus Fungsi Daerah Serapan (cm-1)
C-N (amina) 1188,63
C-H (aromatic) 3112,05
C=O 1709,08
O-H 3418,39

44
4.5. Interpretasi Spektra GC-Ms

Dari data kromatografi minyak kayu putih diperoleh beberapa puncak, namum
untuk analisa ini kami hanya mengamati satu puncak saja aitu yang paling tinggi
adalah punyak 9, berikut spectrogram fraksinasi massa senyawa untuk puncak 9.

Pada kromatografi diatas muncul puncak dasar m/z 43 yang merupakan puncak
khas dari ester aromatis oleh ion CH2 =C=O +, dengan berat molekul atau massa
molekul sebesar 154. Dari hasil analisa senyawa yang terbaca dari grafik di atas
adalah :1,8-Cineole ; 2-Oxabicyclo[2.2.2]octane, 1,2,3-trimethyl-(CAS) Terpan ;
Zineol ; Eucapur ; p-Cineole ; Cajeputol ; Eucalyptol

45
 BAB V
PENUTUP

5.1 Kesimpulan
a. Kimia Analisis adalah cabang ilmu kimia yang berfokus pada analisis cuplika n
material untuk menegtahui kompisis, struktur, dan fungsi kimiawinya. Secara
tradisional kimia analisis dibagi menjadi dua jenis, kualitatif dan kuantitatif.
b. Berdasarjan metodenya, kimia analisis dapat dibagi menjadi spektroskopi,
spektrometri massa, kromatografi dan elektroforesis, kristalografi, mikroskopi dan
elektrokimia.
c. Kimia Analisis Instrument mencangkup beberapa alat yaitu : UV-Vis
Spektrofotometri, Spektrofotometer Serapan Atom (AAS), Spektrofotometer Infra
Red (IR), Kromatografi Gas-Spektrometri Massa (GC-MS), Kromatografi Gas (GC),
High Performance Liquid Chromatography (HPLC).

5.2 Saran
Laporan ini dibuat untuk mengetahui fungsi dan kegunaan alat-alat spektrofotomete r
sekaligus cara pengoprasian dan analisa data dari masing- masing alat spektro.

46
 DAFTAR PUSTAKA

Anonim. (2013). Spektrofotometer Uv-Vis.

(http://labdasar.unand.ac.id/files/Modul%20Fisika/O5_spektrofotomerUv-Vis.pdf).
Diakses pada 27 Juni 2019.
Anonim. (2012). Spektrometri Serapan Atom.
(https://deerakusuma.files.wordpress.com/2012/11/laporan-aas.pdf). Diakses pada
27 Juni 2019.
Anonim. (2011). Spektrometri Serapan Atom (SSA).
(https://dykuza.files.wordpress.com/2011/01/aas-ssa___dykuza.pdf). Diakses pada
27 Juni 2019.

Anonim. (2017). Spektrofotometri Inframerah. (http://www.pendekarilusi.com/wp-

content/uploads/2017/02/Spektrofotometri-Inframerah-1.pdf). Diakses pada 29 Juni
2019.

Anonim. (2013). Spektrofotometri Inframerah.

(http://digilib.itb.ac.id/files/disk1/622/jbptitbpp-gdl-febrinaldo-31070-3-2008ta-
2.pdf). Diakses pada 29 Juni 2019.

Anonim. 2010. Petunjuk singkat penggunaan GC-MS.

http://ui.ac.id/GCMS_Instructions_20051205.pdf. Diakses Tanggal 12 juli 2019.

Anonim. 2011. Gc-MS (Kromatografi Gas-Spektrometer Massa).

http://Shvoong.Com/Read/2011/06/13/213/467938/Gc-MS-(Kromatografi-Gas
Spektrometer-Massa). Diakses Tanggal 12 juli 2019.

Anonim. (2011). Gas Chromatography.

(http://indonesiakimia.blogspot.co.id/2011/05/gas-chromatography-gc.html).
Diakses pada 12 juli 2019.
Andrian, E. (2013). Chromatography HPLC.
(http://ekaandrians.blogspot.co.id/2013/04/hplc.html). Diakses pada 12 juli 2019

Hasan, D. (2013). Fungsi dan Kegunaan HPLC.

(https://www.scribd.com/document/330621001/Fungsi-Dan-Kegunaan-HPLC).
Diakses pada 12 juli 2019.
Idris, R. (2013). Fase Gerak HPLC. (http://ruqayyahmiyuky-
idris.blogspot.co.id/2013/06/normal-0-false-false- false- in-x-none- x.html). Diakses
pada 12 juli 2019.

47
Khopkar, S.H. 1985. Konsep Dasar Kimia Analitik. Penerbit Universitas Indonesia (UI-
Press): Indonesia.

Kristianingrum, S. (2014). Spektrofotometer Serapan Atom dan Penggunaannya.

(http://staff.uny.ac.id/sites/default/files/pengabdian/susila-kristianingrum-dra-
msi/4.pdf). Diakses pada 27 Juni 2019.

Kristianingrum, S. (2014). Spektroskopi Inframerah.

(http://staff.uny.ac.id/sites/default/files/pendidikan/Susila%20Kristianingrum,%20Dr
a.,%20M.Si./Handout-INSTRUMEN-IR-Susi.pdf). Diakses pada 29 Juni 2019.

Kristianingrum, S. (2014). Spektroskopi Uv-Vis.

(http://staffnew.uny.ac.id/upload/132318568/pendidikan/Spektroskopi+UV-
Vis.pdf). Diakses pada 27 Juni 2019
Purnama, D. (2012). Makalah Chromatography Gas.
(http://dedepurnama.blogspot.com/2012/06/makalah-chromatography- gas-gc.html).
Diakses pada 13 juli 2019.
Skoog, Douglas A., West, Donald M., dan Holler, F.James. 1996. Analytical Chemistry.
Saunders College Publishing: Amerika.

Tissos, N. (2013). Spektrofotometer Uv-Vis.

(http://nurryputri.blogspot.co.id/2013/07/spektrofotometer-uv- is.html). Diakses
pada 27 Juni 2019.
Wahyuni, E. (2013). Gas Chromatography.
(http://wahyuniieka.blogspot.co.id/2013/11/gas-chromatography-gc.html). Diakses
pada 13 juli 2019

48