Eksperimen Retensi Intratumoral

Retensi Intratumoral Sistem Cy7 yang Berbeda Diukur oleh pencitraan

inframerah jarak dekat
Kedua formulasi near-infrared (NIR), Cy7-lip-gel dan Cy7-lip, dicitrakan
secara langsung dengan menggunakan sistem pencitraan NIR in vitro. Pencitraan
seluruh tubuh dan teknik pencitraan fluoresensi digunakan untuk memantau
kapasitas penyimpanan terlokalisasi PTX / Cy7-lip-gel melalui spektroskopi
fluoresensi (Cy7, lex 710 nm, lem 790 nm) menggunakan spektroskop fluoresensi
(Cary Eclipse; Varian Corporation). Pencitraan fluoresensi dan pencitraan X-ray
digabung melalui Carestream Molekuler. Pada titik waktu yang telah ditentukan,
1, 6,12, 24, 48, dan 96 jam, tikus Cy7-lip-gel yang disuntik intratumoral dan Cy7-
lip dimasukkan ke dalam spektroskopi fluoresensi setelah anestesi hidrat kloral.

Residu PTX dalam Massa Tumor Ditentukan oleh HPLC

Untuk mengukur sisa PTX dalam massa tumor, HPLC dilakukan pada tumor
S180 yang dieksisi dari tikus homograft. Ketika volume tumor mencapai sekitar
500 mm3, 100 mL PTX-lip-gel diberikan secara intratumoral. Pada titik waktu
yang ditentukan (1,6, 12, 24, dan 48 h) setelah pemberian, tumor dipotong,
ditimbang, dicincang, dan dihomogenisasi dalam PBS (0,1 g / 0,5 mL). hal
tersebut merupakan metode persiapan sampel sama seperti di Distribusi
jaringan dan kondisi analisisnya sama seperti pada Determinasi Kandungan Obat
dalam Docetaxel Liposome Gel.

Gambar 2. Ukuran Partikel dan Zeta Potensial dari PTX-lip dan PTX-lip-gel
 Gambar 3. Transisi gel kosong dan formulasi lip-gel PTX.

Tabel 1. Indeks Evaluasi Farmakodinamik

Percobaan farmakodinamik secara in vivo

Aktivitas Antitumor
Efektivitas antitumor secara in vivo dievaluasi menggunakan tikus yang
diinokulasi sel saringan asites S180. Semua protokol eksperimental dipatuhi
dengan prinsip-prinsip perawatan hewan laboratorium dan disetujui oleh Komite
Penggunaan dan Perawatan Hewan Eksperimental, Universitas Farmasi
Shenyang. Tikus (18-20 g) disuntikkan secara subkutan di ketiak anterior kiri
dengan 0,2 mL suspensi sel yang mengandung sel tumor dalam saline. Perawatan
dimulai ketika tumor pada tikus mencapai volume tumor 30 mm3. Tikus
ditimbang dan dibagi secara acak menjadi empat kelompok (enam tikus /
kelompok), dan 0,2 mL gel kosong, Taxol, PTX-lip, dan PTX-lip-gel (15 mg / kg)
disuntikkan intratumoral menggunakan 1,0 mL semprit. Evaluasi efikasi dan
keamanan pengobatan dinilai dengan volume tumor relatif (RTV), tingkat
proliferasi tumor relatif (T / C%), dan berat badan, masing-masing. Volume tumor
dihitung dengan persamaan:

L X 𝑊2
𝑉= (2)
2

di mana L dan W adalah dimensi tumor pada titik terpanjang dan titik terlebar,
masing-masing. RTV dihitung dengan persamaan:

Vt
𝑅𝑇𝑉(%) = Vo 𝑥100 % (3)

di mana Vt adalah volume tumor pada titik waktu yang ditentukan, dan V0
adalah volume tumor saat kelompok. Tingkat proliferasi tumor relatif (T/C%)
dihitung dengan persamaan:

𝑇 𝑇
(%) = 𝑥 100 % (4)
𝐶 𝐶

di mana TRTV adalah RTV dari kelompok perlakuan, dan CRTV adalah RTV dari
perlakuan kontrol negatif. Volume tumor dan kurva berat badan diplot
menggunakan ukuran tumor rata-rata dan berat badan rata-rata dalam setiap
kelompok eksperimen pada titik waktu yang telah ditentukan. Berat badan tikus
juga dicatat.

Efek membunuh pada jaringan Tumor

Tumor dari tikus dari semua kelompok di atas dipilih untuk pengamatan
histologi pada akhir pengobatan. Tumornya dibedah, dicuci dalam PBS, dan
difiksasi dalam larutan paraformaldehid 4% semalam dan kemudian bagian
tumor diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (H & E) untuk analisis histologis.

Studi Keamanan In Vivo

Berat badan
Berat badan setiap tikus dimonitor setiap hari setelah administrasi dan
dicatat sebagai metode untuk mengevaluasi keamanan formulasi PTX.

Biokompatibilitas
Larutan gel kosong (0,5 mL / tikus) dan garam dengan volume yang sama
disuntikkan ke lapisan subkutan tikus. Pada hari ke-3 setelah injeksi, jaringan di
sekitar tempat suntikan pembedahan diangkat dan histologis diproses oleh
pewarnaan H & E untuk memeriksa respon inflamasi.

Distribusi jaringan
 Kami juga mengumpulkan jantung, hati, limpa, paru-paru, dan ginjal
setelah satu kali pemberian intratumoral PTX-lip-gel atau PTX-lip untuk
mendeteksi distribusi obat di jaringan ini. Semua sampel ditentukan oleh HPLC.
Jaringan dihomogenkan dengan salin fisiologis dalam rasio 1:1 (g / mL) untuk
hati, ginjal, paru-paru, dan 1:2 (g / mL) untuk jantung dan limpa untuk
mendapatkan sampel jaringan homogenat. Seratus mikroliter plasma atau
sampel homogenat jaringan dipindahkan ke 1,5 mL EP bersama dengan 10 mL
larutan IS (docetaxel larutan, 20 mg / mL dalam metanol). Setelah vortex
bercampur selama 30 detik, sampel diekstraksi dengan 500 mL etil asetat
menggunakan getaran vortex selama 3 menit, dan disentrifugasi pada 15435g
selama 10 menit. Lapisan organik atas dipindahkan ke tabung lain dan diuapkan
pada alat pengering di bawah aliran N2 pada 60oC. Residu dibentuk kembali
dalam 50 mL fase gerak, vortex dicampur selama 30 detik, dan disentrifugasi
pada 15435g selama 10 menit. Supernatan (20 mL) disuntikkan ke dalam sistem
HPLC. Kondisi analisisnya sama seperti pada Penentuan Kandungan Obat dalam
Docetaxel Liposome Gel.

gambar 4. Performabilitas gel kosong secara in vitro dan in vivo

 gambar 5. Degradasi dari gel kosong dan PTX-lip-gel secara in vitro

Analisis statistik
Semua nilai dinyatakan sebagai sarana ± SD. analisis varians satu arah
(ANOVA) digunakan untuk mengevaluasi data, setelah itu pengujian post hoc
dengan koreksi Bonferroni diterapkan untuk membandingkan antara masing-
masing kelompok. Nilai p kurang dari 0,05 dianggap signifikan secara statistik.