Proposal Penelitian

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAN INFUSA

DAUN PANDAN (Pandanus amaryllifolius Roxb) TERHADAP
PERTUMBUHAN BAKTERI Escherichia coli

Proposal penelitian ini diajukan untuk

Menyusun Laporan Tugas Akhir

Diajukan oleh :

MIRAWATI ANGRAINI OHOIMAS

NIM. PO.71.26.6.16.026

KEMENTRIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES JAYAPURA
JURUSAN FARMASI
TAHUN 2019
 HALAMAN PERSETUJUAN

Proposal Penelitian

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAN INFUSA

DAUN PANDAN (Pandanus amaryllifolius Roxb) TERHADAP
PERTUMBUHAN BAKTERI Escherichia coli

Diajukan Oleh :
MIRAWATI ANGRAINI OHOIMAS
NIM. PO.71.26.6.16.026

Telah disetujui untuk dipertahankan

Di depan Dewan Penguji Proposal Laporan Tugas Akhir
Jurusan Farmasi, Politeknik Kesehatan Kemenkes Jayapura

Jayapura, 24 Januari 2019

Pembimbing I Pembimbing II

Sri Mulyono, SKM.M.Kes Eka Nurfadillah,S.Farm

NIP. 19640726 198803 1001

Mengetahui,
Ketua Jurusan Farmasi

Wiwiek Mulyani, SKM, M.Sc

NIP. 19770326 200003 2001

ii
 HALAMAN PENGESAHAN

Proposal Penelitian

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAN INFUSA

DAUN PANDAN (Pandanus amaryllifolius Roxb) TERHADAP
PERTUMBUHAN BAKTERI Escherichia coli

Diajukan Oleh :
MIRAWATI ANGRAINI OHOIMAS
NIM. PO.71.26.6.16.026

Telah Dipertahankan di depan Dewan Penguji

Proposal Laporan Tugas Akhir pada tanggal, 24 Januari 2019
Dan dinyatakan telah lulus memenuhi syarat.

Susunan Dewan Penguji

1. Ketua : Sri Mulyono, SKM.M.Kes 1.

2. Anggota : Eka Nurfadillah,S.Farm 2.
3. Anggota : Pratiwi Soegiharti,S.Farm.,Apt 3.

Mengetahui,
Ketua Jurusan Farmasi

Wiwiek Mulyani, SKM, M.Sc

NIP. 19770326 200003 2001

iii
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat
dan rahmat-Nya sehingga penulis dapat menyusun dan menyelesaikan proposal
yang berjudul “Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak dan Infusa Daun Pandan
(Pandanus amaryllifolius Roxb) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli”
tepat pada waktunya.
Penyusunan proposal ini tidak dapat terlaksana tanpa bantuan dan bimbingan
dari pihak yang dengan ikhlas bersedia meluangkan waktu membantu penulis
dalam penyusunan proposal. Oleh karena itu dengan penuh rasa hormat dan
dengan setulusnya penulis berterima kasih kepada :
1. Bapak DR. Arwam Hermanus MZ,SE.,M.Kes.,D.Min, Direktur Politeknik
Kesehatan Jayapura yang telah memberikan kesempatan kepada penulis
dalam mengikuti perkuliahan
2. Ibu Wiwiek Mulyani, SKM.,M.Sc, selaku Ketua Jurusan Farmasi yang
telah membimbing penulis selama menempuh pendidikan di Politeknik
Kesehatan Jayapura
3. Bapak Sri Mulyono, SKM.M.Kes, sebagai pembimbing pertama yang
telah membimbing dan memberikan motivasi serta masukan kepada
penulis dalam penyusunan proposal ini.
4. Ibu Eka Nurfadillah, S.Farm, sebagai pembimbing kedua yang juga telah
membimbing dan memberikan motivasi serta masukan dalam penyusunan
proposal ini.
5. Bapak/Ibu Staf Dosen Politeknik Kesehatan Kemenkes Jayapura yang
telah membimbing penulis selama menjadi mahasiswa di Politeknik
Kesehatan Kemenkes Jayapura
6. Kedua orang tuaku dan kekasihku yang telah memberikan doa, dorongan
dan semangat selama penulis menyusun proposal ini.
7. Kepada seluruh teman-teman angkatan 2016 Jurusan Farmasi yang telah
membantu penulis dari mulai kuliah sampai dengan selesainya proposal
ini. Kebersamaan ini tidak akan pernah dilupakan.

iv
 Penulis menyadari bahwa dalam penyusunan proposal ini masih jauh dari
sempurna, oleh karena itu penulis menerima masukan, kritikan yang sifatnya
membangun guna kesempurnaan proposal ini.

Jayapura,23 Januari 2019

Penulis

v
 DAFTAR ISI

Halaman Judul.................................................................................................. i
Lembar Persetujuan.......................................................................................... ii
Lembar Pengesahan.......................................................................................... iii
Kata Pengantar.................................................................................................. iv
Daftar Isi........................................................................................................... vi
Daftar Tabel...................................................................................................... viii
Daftar Gambar.................................................................................................. ix
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang............................................................................................ 1
B. Rumusan Masalah....................................................................................... 4
C. Tujuan Penelitian........................................................................................ 5
1. Tujuan Umum....................................................................................... 5
2. Tujuan Khusus...................................................................................... 5
D. Manfaat Penelitian...................................................................................... 5
E. Keaslian Penelitian..................................................................................... 6
BAB II TINJAUAN UMUM
A. Tumbuhan Pandan...................................................................................... 8
1. Klasifikasi............................................................................................. 9
2. Morfologi.............................................................................................. 9
3. Kandungan Kimia dan Manfaat Daun Pandan..................................... 11
B. Bakteri Escherchia coli............................................................................... 14
1. Klasifikasi............................................................................................. 14
2. Morfologi.............................................................................................. 15
3. Patogenesis........................................................................................... 15
C. Ekstraksi..................................................................................................... 17
1. Ekstraksi Cara Dingin........................................................................... 17
2. Ekstraksi Cara Panas............................................................................. 20
D. Pelarut......................................................................................................... 23
1. Syarat-syarat Pelarut............................................................................. 24
2. Macam-macam Pelarut dan Contohnya................................................ 24
E. Metode Pengujian Antibakteri.................................................................... 25
1. Metode Difusi Agar.............................................................................. 25
F. Kerangka Teori........................................................................................... 26
G. Kerangka Konsep........................................................................................ 27
H. Definisi Operasional................................................................................... 28
BAB III METODE PENELITIAN
A. Jenis Penelitian........................................................................................... 29
B. Waktu dan Tempat Penelitian..................................................................... 30
C. Objek Penelitian.......................................................................................... 30
D. Instrumen Penelitian................................................................................... 29
1. Alat....................................................................................................... 29
2. Bahan.................................................................................................... 30
E. Prosedur Kerja............................................................................................ 31
1. Pengambilan dan Pembuatan Simplisia................................................ 31

vi
 2. Pembuatan Ekstrak............................................................................... 31
3. Pembuatan Infusa.................................................................................. 32
4. Uji Skrining Fitokimia.......................................................................... 32
5. Pembuatan Media................................................................................. 34
6. Pengujian Aktivitas Antibakteri........................................................... 34
F. Kategori Daya Hambat............................................................................... 35
G. Sumber Data............................................................................................... 36
1. Data Primer........................................................................................... 36
2. Data Sekunder....................................................................................... 36
H. Analisis Data............................................................................................... 36
I. Alur Penelitian............................................................................................ 37
J. Jadwal Penelitian........................................................................................ 38
Daftar Pustaka................................................................................................... 39

vii
 DAFTAR TABEL

Halaman
Tabel 1 Keaslian Penelitian……………………………………………… 6
Tabel 2 Definisi Operasional ………………………………………….. 28
Tabel 3 Jadwal Penelitian………………………………………………… 38
Tabel 4 Klasifikasi Respon Zona Hambat Bakteri ……………………… 35

viii
 DAFTAR GAMBAR

Halaman
Gambar 1 Daun Pandan…………………………………………………… 8
Gambar 2 Bakteri Escherichia coli……………………………………….. 15
Gambar 3 Kerangka Teori………………………………………................ 26
Gambar 4 Kerangka Konsep………………………………………………. 27
Gambar 5 Alur Penelitian…………………………………………………. 37

ix
 BAB I
PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Antibakteri adalah senyawa yang digunakan untuk mengendalikan

pertumbuhan bakteri yang bersifat merugikan dengan tujuan untuk mencegah

penyebaran penyakit dan infeksi, membasmi mikroorganisme pada inang

yang terinfeksi dan mencegah pembusukan serta perusakan bahan oleh

mikroorganisme (Diana, 2015).

Beberapa bakteri dapat dihambat pertumbuhannya dengan bahan anti

bakteri. Bakteri Escherichia coli yang merupakan salah satu jenis spesies

utama bakteri gram negatif yang bersifat patogen. Pada umumnya, bakteri ini

dapat ditemukan dalam usus besar manusia dan dapat menyebabkan diare.

Escherichia coli juga memproduksi enterotoksin yang dapat mencemari

makanan, terutama makanan yang mengandung protein, sehingga

mangakibatkan keracunan (Pratiwi, 2008). Bakteri ini dapat menimbulkan

masalah saluran cerna, salah satunya adalah diare sehingga perlu membunuh

bakteri yang mengkontaminasi tangan dengan anti bakteri (Putri, 2016).

Senyawa anti bakteri banyak beredar di pasaran dengan berbagai macam,

baik yang dibuat dari bahan alami maupun bahan sintetis. Berbagai bahan

alami dari tumbuh-tumbuhan banyak digunakan sebagai bahan anti bakteri.

Salah satu tanaman yang memiliki potensi sebagai obat tradisional adalah

daun pandan.

1
 2

Penggunaan tumbuhan sebagai obat tradisional juga semakin banyak

diminati oleh masyarakat karena telah terbukti bahwa obat yang berasal dari

tumbuhan lebih menyehatkan dan tanpa menimbulkan adanya efek samping

jika dibandingkan dengan obat-obatan yang berasal dari bahan kimia (Lestari,

2016). Penelitian mengenai tanaman –tanaman herbal yang memiliki aktivitas

antibakteri telah dilakukan untuk mengurangi efek samping penggunaan

bahan kimia dalam produk hasil pertanian dan peternakan (Stevani et.all,

2016).

Salah satu tanaman yang digunakan di Indonesia untuk pengobatan

adalah pandan wangi. Pandan wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb) biasanya

digunakan sebagai pewarna makanan dan pemberi aroma. Aroma khas dari

pandan diduga karena adanya senyawa turunan asam amino fenil alanin yaitu

2-acetyl-1-pyrroline (Faras et all.,2014).

Sejak dahulu tumbuhan ini digunakan sebagai obat tradisional, yaitu

untuk obat ketombe, obat lemah syaraf (neurasthenia), tidak nafsu makan,

rematik, pegal linu, sakit disertai gelisah, kerontokan rambut, serta sebagai

penghitam rambut (Mulyaningsih, 2014). Di papua daun pandan selain

sebagai pewarna dan pengaroma makanan, daun pandan biasa dikeringkan

sebagai bahan baku anyaman tikar maupun topi pandan. Tumbuhan ini

banyak ditanam di halaman atau dikebun-kebun, terkadang tumbuh liar ditepi

sungai, tepi rawa, atau di tempat-tempat yang agak lembap, sehingga mudah

didapatkan oleh masyarakat. Pandan wangi memiliki kandungan kimia

meliputi flavonoid, alkaloid, saponin, tannin, polifenol, dan zat warna, diduga
 3

memiliki kontribusi terhadap aktivitas antibakteri (Arisandi dan

Andriani,2008).

Penelitian yang pernah dilakukan terhadap daun pandan adalah uji daya

hambat ekstrak daun pandan wangi (Pandanus amaryllifoliusRoxb) terhadap

bakteri Escherichia coli dan Salmonella sp (Wahyuni, Erina, Fakhrurrazi,

2018). Dari hasil penelitian yang dilakukan oleh wahyuni et.all, bahwa ekstrak

daun pandan wangi pada konsentrasi 25%, 50%, dan 75% memiliki daya

hambat yang lemah terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan

Salmonella sp karena zona hambat yang terbentuk tidak melebihi 10 mm.

Hasil rata-rata zona hambat ekstrak daun pandan wangi terhadap bakteri

Escherichia coli pada konsentrasi 25% yaitu 6,6 mm, pada konsentrasi 50%

yaitu 6,7 mm, dan pada konsentrasi 75% yaitu 6,9 mm. Zona hambat ekstrak

daun pandan wangi terhadap Salmonella sp pada konsentrasi 25% yaitu 6,3

mm, pada konsentrasi 50% yaitu 6,5 mm dan pada konsentrasi 75% yaitu 7,3

mm. Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun pandan (Pandanus amaryllifolius)

terhadap bakteri Bacillus cereus dan Escherichia coli (Diana, 2014). Dari hasil

penelitian yang dilakukan oleh diana, bahwa ekstrak daun pandan pada

konsentrasi 10%, 20%, 30%, 40% dan 50% memiliki daya hambat yang kuat

terhadap pertumbuhan bakteri Bacillus cereus dengan konsentrasi 10%

terdapat zona hambat yaitu 19 mm dan pada konsentrasi 50% terdapat zona

hambat yaitu 35 mm. Pada pertumbuhan bakteri Escherichia coli pada

konsentrasi 10% memiliki daya hambat yang sedang yaitu 10 mm, sedangkan

pada konsentrasi 20%, 30%, 40%, dan 50% memiliki daya hambat yang kuat.
 4

Salah satu alasan pembuatan ekstrak dan infus pada penelitian ini yaitu

untuk membandingkan antara ekstrak dan infus mana yang lebih kuat dalam

menghambat bakteri Escherichia coli. Pemilihan bakteri Escherichia coli

pada penelitian ini karena bakteri Escherichia coli sebagai indikator adanya

bakteri patogen dalam media makanan melalui tangan. Bakteri Escherichia

coli pertumbuhannya sangat cepat dan mudah dalam penanganannya.

Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan, maka perlu dilakukan

penelitian untuk melihat kemampuan ekstrak dan infus daun pandan

(Pandanus amaryllifolius Roxb) sebagai bahan antibakteri untuk menghambat

pertumbuhan Escherichia coli.

B. Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas, maka dirumuskan masalah sebagai

berikut : “Apakah ekstrak daun pandan (Pandanus amaryllifoliusRoxb) dan

infudasi daun pandan (Pandanus amaryllifoliusRoxb) mempunyai aktivitas

antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli ?”

 5

C. Tujuan Penelitian

1. Tujuan Umum

Mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak dan infudasi daun pandan

(Pandanus amaryllifoliusRoxb) terhadap bakteri Escherichia coli.

2. Tujuan Khusus

Tujuan khusus yang hendak peneliti ketahui dalam penelitian ini, yaitu :

1. Menganalisis adanya kandungan metabolit sekunder pada daun pandan

(Pandanus amaryllifoliusRoxb)

2. Menggambarkan adanya aktivitas antibakteri ekstrak daun pandan

(Pandanus amaryllifoliusRoxb) terhadap Escherichia coli pada

konsentrasi 30%, 60%, dan 80%.

3. Menggambarkan adanya aktivitas antibakteri infudasi daun pandan

(Pandanus amaryllifoliusRoxb) terhadap Escherichia coli pada

konsentrasi 30%, 60%, 80%.

4. Membandingkan aktivitas bakteri antar ekstrak daun pandan dan

infudasi daun pandan pada konsentrasi 30%, 60%, dan 80%.

 6

D. Manfaat Penelitian

Adapun manfaat penulisan Karya Tulis Ilmiah ini adalah:

1. Bagi IPTEK

Hasil penelitian ini dapat menambah pengetahuan tentang anktivitas

antibakteri ekstrak daun pandan terhadap bakteri Escherichia coli.

2. Bagi Institusi

Hasil penelitian ini dapat digunakan sebagai bahan informasi yang

berguna dalam menambah wawasan dan pengetahuan program pendidikan

kefarmasian tentang aktivitas antibakteri esktrak daun pandan terhadap

bakteri Escherichia coli.

3. Bagi Masyarakat

Hasil penelitian ini diharapkan dapat menjadi sumber informasi bagi

masyarakat tentang manfaat ekstrak daun pandan serta meningkatkan mutu

pelayanan kesehatan bagi masyarakat, khususnya manfaat daun pandan

yang berguna sebagai antibakteri.

4. Bagi Penulis

Menambah wawasan mengenai tumbuhan yang berkhasiat sebagai

antibakteri serta memperdalam pengetahuan tentang gambaran aktivitas

esktrak daun pandan sebagai antibakteri.

 7

E. Keaslian Penelitian

Tabel 1. Keaslian Penelitian

NO Nama Penelitian Tahun Judul

1. Indri Wahyuni, 2018 Uji daya hambat ekstrak daun
Erina, pandan wangi (Pandanus
Fakhrurrazi amaryllifoliusRoxb) terhadap
bakteri Escherichia coli dan
Salmonella sp.
2. Maria Kristin 2017 Uji aktivitas antibakteri ekstrak
Yunita Ngasar daun pandan (Pandanus
amaryllifoliusRoxb) terhadap
pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus.
3. Widya Savitri 2014 Uji aktivitas antibakteri ekstrak
Diana daun pandan (Pandanus
amaryllifolius) terhadap bakteri
Bacillus cereus dan Escherichia
coli.
Perbedaan penelitian Wahyuni, Erina, Fakhrurrazi (2018) terletak pada

konsentrasi yaitu 25%, 50%, dan 75%, sedangkan pada penelitian ini

menggunakan konsentrasi 30%, 60% dan 80%.

Perbedaan penelitian Ngasar (2017) terletak pada pelarut yaitu etil asetat

dan bakteri yaitu Staphylococcus aureus sedangkan penelitian ini

menggunakan etanol 96% dan menggunakan bakteri Escherichia coli.

Perbedaan penelitian ini dengan Diana (2014) terletak pada konsentrasi

yaitu 10%,20%,30%,40% dan 50% sedangkan pada penelitian ini

menggunakan konsentrasi 30%,60% dan 80%.

 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

A. Tumbuhan Pandan (Pandanus amaryllifoliusRoxb)

Pandan adalah salah satu tanaman yang termasuk kedalam tumbuhan

monokotil dalam satu genus pandanus (Katzer, 2012). Daun pandan

merupakan salah satu tanaman yang mengeluarkan aroma yang wangi. Daun

ini banyak sekali kegunaannya bagi kehidupan manusia khususnya ibu-ibu

rumah tangga, dimana digunakan sebagai pewarna dan pengharum tambahan

alami pada makanan. Namun daun pandan tidak hanya bermanfaat untuk

makanan saja tetapi bisa dijadikan sebagai obat alternatif untuk mengobati

berbagai penyakit (Sajin, 2013).

Gambar 1. Daun Pandan (Pandanus amaryllifoliusRoxb)

(Mira, 2019)

8
 9

1. Klasifikasi Daun Pandan Wangi

Klasifikasi daun pandan wangi (Pandanus amaryllifoliusRoxb) menurut

Prameswari(2014) adalah sebagai berikut :

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Liliopsida

Ordo : Pandanales

Famili : Pandanceae

Genus : Pandanus

Spesies : Pandanus amaryllifolius Roxb.

2. Morfologi Tanaman Pandan

Menurut Rahayu & Handayani (2008), morfologi tanaman daun

pandan wangi berdasarkan cirri-ciri tanaman yaitu :

1. Akar

Akar tanaman yang berserabut, akar tunjang yang menopang pada

tanaman lainnya, perakaran ini memiliki panjang mencapai 30-60 cm

bahkan lebih, berwarna kecoklatan dan juga dapat mencapai

kedalaman tanah 30cm.

2. Batang

Batang tanaman daun pandan ini menjalar, berbentuk bulat, lunak

bercabang dan juga dapat mencapai 2 meter bahkan lebih. Batang daun

pandan ini juga dikenal sebagai batang perdu atau tanaman perdu yang

dapat meneduhkan sekitar tanaman daun pandan tersebut.

 10

3. Daun

Daun pandan ini memiliki daun memanjang, yang berbentuk

hampir menyerupai daun palem atau rumput, yang memiliki bagian

tepi bergerigi, pangkal ujung meruncing, dengan pertulangan yang

menonjol memanjang. Daun pandan ini juga tersusun dalam beberapa

garis spiral yang mencapai 3-4 garis, pada umumnya daun pandan ini

berwarna kehijauan muda hingga tua.

4. Bunga

Bunga daun pandan ini merupakan bunga yang majemuk,

berbentuk dalam tandan atau tongkol yang berwarna putih. Bunga ini

terletak pada ketiak daun pelindung dan juga terletak di sekitar ujung

bagian batang. Bunga ini biasanya dapat menyerbuk dengan alami

maupun dengan bantuan hewan sekitar.

5. Buah

Buah daun pandan berbentuk bulat, dengan permukaan bergerigi

dan memiliki duri halus, pada umumnya buah ini memiliki ukuran

yang sangat bervariasi, mulai dari 4-7 cm bahkan lebih. Buah ini

berwarna kehijauan dengan corak yang kemerahan sedikit yang

memiliki biji dalam setiap buahnya. Biji dalam buah ini dapat berkisar

antara 10-20 bahkan lebih, dengan bulat pipih, dan juga berdaging

halus serta berwarna abu-abu atau kecoklatan.

 11

3. Kandungan Kimia dan Manfaat Daun Pandan

a. Kandungan Kimia

Beberapa senyawa kimia yang terkandung dalam pandan wangi

seperti tannin, falvonoid, saponin, alkaloid, dan polifenol merupakan

senyawa metabolit sekunder pada tumbuhan daun pandan yang bersifat

sebagai antibakteri (Arisandi dan Andriani,2008).

1. Alkoloid

Alkoloid adalah suatu golongan senyawa organic yang

terbanyak ditemukan di alam. Hampir seluruh alkaloid berasal dari

tumbuh-tumbuhan dan tersebar luas dalam berbagai jenis

tumbuhan tingkat tinggi. Sebagian besar alkaloid terdapat pada

tumbuhan dikotil sedangkan untuk tumbuhan monokotil dan

pteridofita mengandung alkaloid dengan kadar yang sedikit (Lopez

DC.,2012).

2. Saponin

Saponin adalah suatu glikosida alamiah yang terikat dengan

steroid atau triterpena. Saponin mempunyai aktifitas farmakologi

yang cukup diantaranya antitumor, antiinflamasi, antivirus,

antijamur, immunomodulator. Saponin mempunyai sifat

bermacam-macam yaitu memiliki rasa manis atau pahit, dapat

membentuk buih, dapat menstabilkan emulsi, dan dapat

menyebabkan hemolisis. Saponin dapat digunakan antara lain

untuk membuat minuman beralkohol, dalam industri pakaian dan

 12

kosmetik, dalam membuat obat-obatan, serta sebagai obat

tradisional. Saponin berfungsi sebagai antibakteri dan antimikroba

(Soekamto NH,2011).

3. Flavonoid

Flavonoid merupakan senyawa golongan fenolik. Senyawa

fenol dapat mengikat protein. Keberadaan flavonoid pada daun

tanaman dipengaruhi oleh proses fotosintesis, sehingga daun muda

belum terlalu banyak mengandung flavoniod. Manfaat flavonoid

antara lain adalah untuk melindungi struktur sel, memiliki

hubungan sinergis dengan vitamin C (meningkatkan efektivitas

vitamin C), antiinflamasi, mencegah keropos tulang, dan sebagai

antibiotik (Purwantiningsih,2014).

4. Tannin

Tannin merupakan senyawa metabolit sekunder yang sering

ditemukan pada tanaman. Tannin merupakan astrigenin, polifenol,

memiliki rasa pahit, dan dapat mengikat dan mengendapkan

protein serta larut dalam air (terutama air panas). Umumnya tannin

digunakan untuk pengobatan penyakit kulit dan sebagai antibakteri,

tetapi tannin juga banyak diaplikasikan untuk pengobatan diare,

hemostatik (menghentikan pendarahan) dan wasir (Setyorini,2011).

 13

5. Polifenol

Polifenol atau senyawa phenolic merupakan senyawa

antioksidan alami pada tumbuhan, dapat berupa golongan

flavonoid, turunan asam sinamat dan asam-asam organic

polifungsional. Antioksidan alami yang berasal dari tumbuhan

memiliki gugus hidroksil pada struktur molekulnya. Aktivitas

antioksidan dari polifenol berperan penting dalam penyerapan dan

penetralan radikal bebas atau penguraian peroksida. Antioksidan

polifenol biasanya digunakan untuk mencegah kerusakan akibat

reaksi oksidasi pada makanan, kosmetik, farmasi dan plastik.

Antioksidan polifenol juga dapat mengurangi risiko penyakit

jantung dan kanker (Margaretta,2011).

b. Khasiat Daun Pandan Wangi

Secara empiris di masyarakat, daun pandan berkhasiat untuk

mengatasi : lemah syaraf / neurasthenia, tidak nafsu makan, pegal linu,

rematik, sakit disertai gelisah, rambut rontok, ketombe, menghitamkan

rambut, mengarasi insomnia, membantu mengatasi strees, mencegah

kanker, mencegah diabetes, sumber antioksidan, dan mencegah

penuaan dini, serta membantu mengatasi sembelit (Sukandar, 2009).

Berdasarkan beberapa literature, tumbuhan pandan wangi mengandung

zat bioaktif yang memiliki khasiat sebagai antidiabetes, analgesik,

antioksidan dan antijamur (Muttolifah et al.,2014).

 14

B. Escherichia coli

Antibakteri adalah senyawa yang digunakan untuk mengendalikan

pertumbuhan bakteri yang bersifat merugikan dengan tujuan untuk mencegah

penyebaran penyakit dan infeksi, membasmi mikroorganisme pada inang yang

terinfeksi dan mencegah pembusukan serta perusakan bahan oleh

mikroorganisme (Diana, 2015).

Escherchia coli merupakan bakteri Gram-negatif berbentuk batang yang

termasuk dalam famili Enterobacteriaceae, sesungguhnya merupakan

penghuni usus, selain berkembang biak di lingkungan sekitar manusia.

Pertama dijumpai pada tahun 1885, bakteri ini berpotensi patogen. Bila E.coli,

oleh berbagai sebab tersangkut di organ lain (misalnya saluran kemih)

penyakit akan timbul (Arisman, 2008).

Escherichia coli adalah bakteri Gram negatif berbentuk batang tidak

membentuk spora yang merupakan flora normal di usus. Meskipun demikian,

beberapa jenis Escherichia coli dapat bersifat patogen, yaitu serotipe-serotipe

yang masuk dalam golongan Escherichia coli Enteropatogenik, Escherichia

coli Enteroinvasif, Escherichia coli Enterotoksigenik dan Escherichia coli

Enterohemoragik (Nuraeni, 2008).

 15

1. Klasifikasi Escherichia coli

Domain : Bacteria

Kingdom : Eubacteria

Phylum : Proteobacteria

Class : Gamma Proteobacteria

Order : Enterobacteriales

Family : Enterobacteriaceae

Genus : Escherichia

Spesies : Escherichia coli

Gambar 2. Bakteri Escherichia coli

(Dennis, 2014)

2. Morfologi Bakteri Escherichia coli

Escherhia coli memiliki ukuran sel dengan panjang 2,0 – 6,0 µm dan

lebar 1,1 – 1,5 µm. Bentuk sel seperti coccal sehingga membentuk

sepanjang ukuran Filamentous. Tidak ditemukan spora Escherhia coli

batang gram negatif. Selnya bisa terdapat, berpasangan dan dalam rental

pendek, biasanya tidak berkapsul, bakteri ini aerobik dan dapat juga

fakultatif (Nuraeni, 2008).

 16

3. Patogenesis

Bakteri Escherichia coli dapat membentuk koloni pada saluran

pencernaan manusia maupun hewan dalam beberapa jam setelah kelahiran.

Faktor predisposisi pembentukan koloni ini adalah mikroflora dalam tubuh

masih sedikit, rendahnya kekebalan tubuh, faktor stres, pakan, dan infeksi

agen patogen lain. Kebanyakan Escherichia coli memiliki kapasitas

patogen yang rendah dan bersifat oportunis. Ditjenak (1982) melaporkan

bahwa Escherichia coli keluar dari tubuh bersama tinja dalam jumlah

besar serta mampu bertahan sampai beberapa minggu. Kelangsungan

hidup dan replikasi Escherichia coli dilingkungan membentuk koliform.

Escherichia coli tidak tahan terhadap keadaan kering atau desinfektan

biasa. Bakteri ini akan mati pada suhu 60 0C selama 30 menit (Marzuki,

2013).

Escherichia coli bersifat patogen karena dapat menyebabkan infeksi

pada manusia dan hewan. Seorang bakteriolog yaitu Theodor Escherich ,

mengidentifikasi Escherichia coli dari babi yang menderita enteritis.

Enteritis merupakan peradangan usus yang bisa menyebabkan sakit perut,

mual, muntah, dan diare baik manusia maupun hewan. Escherichia coli

merupakan bakteri yang bisa hidup pada lingkungan yang berbeda. Bakteri

ini dapat ditemukan di tanah, air, tanaman, hewan, dan manusia (Marzuki,

2013).
 17

Genus Eschericia merupakan bakteri berbentuk batang (1x4 μm),

motil, dan mesofilik. Bakteri ini sering ditemukan di dalam pencernaan

manusia, hewan berdarah panas, dan burung. Spesies terpenting dari genus

Eschericia ialah Escherichia coli. Escherichia coli merupakan famili

Enterobacteriaceae yang termasuk bakteri enterik. Bakteri enterik ialah

bakteri yang bisa bertahan di dalam saluran pencernaan termasuk sruktur

saluran pencernaan rongga mulut, esofagus, lambung, usus, rektum, dan

anus. Escherichia coli bisa hidup sebagai bakteri aerob maupun bakteri

anaerob. Oleh karena itu, Escherichia coli dikategorikan sebagai anaerob

fakultatif (Marzuki, 2013).

C. Ekstraksi

Ekstrasi adalah pemisahan suatu zat atau beberapa dari suatu padatan

atau cairan dengan bantuan pelarut, pemisahan terjadi atas dasar kemampuan

larutan yang berbeda dari komponen-komponen tersebut, ekstraksi biasa di

gunakan untuk memisahkan dua zat berdasarkan perbedaan kelarutan. Ekstrak

sediaan kering, kental, atau cair di buat dengan menyaring simplisia nabati dan

hewani menurut cara yang cocok, di luar pengaruh matahari langsung (Ansel,

2008).
 18

Metode-metode dan cara ekstraksi menurut Sampurno, (2008) dibagi

menjadi 2, yaitu :

1. Ekstraksi Cair Dingin

Ekstraksi dengan cara dingin adalah ekstraksi yang menggunakan

pelarut dimana pelarut dan simplisia tidak melaui pemanasan langsung.

a. Metode Maserasi

1) Pengertian Maserasi

Maserasi adalah proses ekstraksi simplisia dengan menggunakan

pelarut beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur

ruangan. Prosedurnya dilakukan dengan merendam simplisia dalam

pelarut yang sesuai di dalam wadah tertutup. Pengadukan sekali

ataupun konstan dapat meningkatkan kecepatan ekstraksi, proses

ekstraksi di hentikan ketika mencapai keseimbangan antara konsentrasi

metabolit dalam ekstrak dan dalam bahan tanaman.

2) Prinsip kerja maserasi

Prinsip maserasi adalah ekstraksi zat aktif yang dilakukan dengan

cara merendam serbuk dalam pelarut yang sesuai selama beberapa hari

pada temperature kamar terlindung dari cahaya, pelarut akan masuk

kedalam sel tanaman melewati dinding sel. Isi sel akan larut karena

adanya perbedaan konsentrasi antara larutan didalam sel dengan diluar

sel. Larutan yang konsentrasinya tinggi akan terdesak keluar dan

diganti oleh pelarut dengan konsentrasi rendah. Peristiwa tersebut akan

 19

berulang sampai terjadi keseimbangan antara larutan didalam sel dan

larutan diluar sel.

3) Keuntungan Maserasi

Peralatan yang di gunakan dalam metode maserasi sangat

sederhana dan dapat menghasilkan ekstrak dalam jumlah banyak serta

terhindar dari perubahan kimia senyawa-senyawa tertentu karena

pemanasan.

4) Kerugian Maserasi

Waktu yang di perlukan untuk mengekstraksi sampel cukup lama,

cairan penyari yang di gunakan lebih banyak, tidak dapat di gunakan

untuk bahan-bahan yang mempunyai tekstur keras seperti benzoin,

tiraks dan lilin.

b. Metode Perkolasi

1) Pengertian Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru

sampai sempurna (exhaustive extraction) umumnya dilakukan pada

suhu kamar. Perkolasi merupakan penyarian simplisia dengan jalan

melewatkan pelarut yang sesuai secara lambat pada simplisia dalam

suatu percolator. Tujuan perkolasi adalah supaya zat berkhasiat tertarik

seluruhnya dan biasanya di lakukan untuk zat berkhasiat yang tahan

ataupun tidak tahan pemanasan.

 20

2) Prinsip kerja perkolasi

Prinsip kerja perkolasi adalah serbuk simplisia ditempatkan dalam

suatu bejana silinder, yang bagian bawahnya diberi sekat berpori.

Cairan penyari dialirkan dari atas kebawah melalui serbuk tersebut.

Cairan penyari akan melarutkan zat aktif sel-sel yang dilalui sampai

mencapai keadaan jenuh. Gerakan kebah disebabkan oleh kekuatan

gaya beratnya sendiri dan cairan diatasnya, dikurangi dengan daya

kapiler yang cenderung untuk menahan. Kekuatan yang berperan pada

perkolasi antara lain: gaya berat, kekentalan, daya larut, tegangan

permukaan, difusi, osmosa, adesi, daya kapiler dan gaya geseran.

3) Keuntungan perkolasi

Tidak terjadi kejenuhan pengaliran meningkatkan difusi dengan

dialiri cairan penyari sehingga zat seperti terdorong untuk keluar dari

sel.

4) Kerugian perkolasi

Cairan penyari lebih banyak di gunakan, resiko cemaran mikroba

untuk penyari air karena di lakukan secara terbuka.

 21

2. Ekstrasi Cara Panas

Ekstrasi dengan cara panas adalah ekstraksi yang menggunakan pelarut

dan simplisia dimana pelarut melalui pemanasan langsung.

a. Refluks

1) Pengertian Refluks

Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperature titik

didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut yang relative

konstan dengan adanya pendingin balik. Ekstraksi refluks di gunakan

untuk bahan-bahan yang tahan terhadap pemanasan.

2) Prinsip kerja refluks

Penarikan komponen kimia yang di lakukan dengan cara sampel

di masukan kedalam labu alas bulat bersama-sama dengan cairan

penyari lalu di panaskan, uap-uap cairan penyari terkondensasi pada

kondensor bola menjadi moleku-molekul cairan penyari yang akan

turun kembali menuju labu alas bulat, akan menyari kembali sampel

yang berada pada labu alas bulat demikian seterusnya berlangsung

secara berkesinambungan sampai penyarian sempurna, penggantian

pelarut dilakukan sebanyak 3 kali 3-4 jam. Filtrat yang diperoleh di

kumpul dan di pekatkan.

3) Keuntungan Refluks

Digunakan untuk mengekstraksi sampel-sampel yang memiliki

tekstur kasar.
 22

4) Kerugian Refluks

Butuh volume total pelarut yang besar dan sejumlah manipulasi

operator.

b. Soxhletasi

1) Pengertian Soxhletasi

Soxhletasi adalah ekstraksi yang menggunakan pelarut yang

selalu baru yang umumnya di lakukan dengan alat khusus sehingga

terjadi ekstraksi yang kotinyu dengan jumlah pelarut yang relative

konstan dengan adanya pendingin balik.

2) Prinsip Kerja Soxhletasi

Ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya

sehingga terjadi ekstraksi kontinyu dengan jumlah pelarut konstan

dengan adanya pendingin balik.

3) Keuntungan Soxhletasi

Dapat di gunakan untuk sampel dangan tekstur yang lunak dan

tidak tahan terhadap pemanasan secara langsung. Pelarut yang di

gunakan lebih sedikit, pemansannya dapat diatur.

4) Kerugian Soxhletasi

Karena pelarut di daur ulang, ekstrak yang terkumpul pada wadah

di sebelah bawah terus-menerus di panaskan sehingga dapat

menyebabkan reaksi peruraian oleh panas. Jumlah total senyawa-

senyawa yang di ekstraksi akan melampaui kelarutannya dalam pelarut

tertentu sehingga dapat mengendap dalam wadah dan membutuhkan

 23

volume pelarut yang lebih banyak untuk melarutkannya. Bila

dilakukan dalam skala besar mungkin tidak cocok untuk menggunakan

pelarut dengan titik didih yang terlalu tinggi.

c. Digesti

1) Pengertian Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan yang

kontinyu) pada temperature yang lebih tinggi dari temperature ruangan

(kamar), yaitu secara umum dilakukan pada temperature 40-50oC.

2) Prinsip kerja Digesti

Digesti dilakukan dengan pengadukan kontinyu pada temperature

yang lebih tinggi dari temperature ruangan (kamar), yaitu secara umum

dilakukan pada temperature 40-50˚C selama waktu 15 menit.

3) Keuntungan Digesti

Kekentalan pelarut berkurang sehingga dapat mengakibatkan

berkurangnya lapisan-lapisan batas, daya melarutkan cairan penyari

akan meningkat, koefisien difusi berbanding lurus dengan suhu

absolute, dan berbanding terbalik dengan kekentalan.

d. Infudasi

1) Pengertian Infudasi

Infudasi adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperature

penangas air selama waktu tertentu 15-20 menit, bejana infus tercelup

dalam penangas air mendidih temperature terukur 96-98˚C.

 24

2) Prinsip kerja infudasi

Infudasi ekstraksi dengan pelarut air pada temperature penangas

air (bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperature

terukur (96-98˚C) selama waktu tertentu (15-20 menit).

3) Keuntungan infudasi

Alat yang dipakai sederhana dan biaya yang digunakan tidak

begitu mahal.

4) Kekurangan Infudasi

Kandungan zat yang telah tertarik kemungkinan akan mengendap

bila kelarutannya telah mendingin, adanya kandungan zat yang tidak

tahan terhadap panas yang lama, selain itu simplisia yang mengandung

lilin, tiraks, albumin akan menyulitkan penarikan zat-zat berkhasiat.

D. Pelarut (Hargono et al., 2008)

Pelarut adalah zat yang digunakan untuk mengekstraksi simplisia baik

dalam bentuk sediaan yang kering, kental, ataupun cair dan di sesuaikan

dengan metode ekstraksi yang akan digunakan.

1. Syarat-syarat Pelarut :

a. Selektif, dapat melarutkan semua zat dengan cepat, sempurna, dan

sedikit mungkin melarutkan bahan lain (lilin, senyawa albumin).

b. Mempunyai titik didih yang rendah dan seragam.

c. Tidak larut dalam air.

d. Bersifat inert dan tidak mudah terbakar.

e. Harga pelarut murah.

 25

2. Macam-macam Pelarut dan Contohnya

a. Pelarut Non Polar

Pelarut non polar adalah pelarut yang memiliki perbedaan

keelektronegatifan yang relatif kecil seperti turunan hidrokarbon

alifatik dan aromatik. Contohnya : Heksan, Kloroform dan Toluen.

b. Pelarut Polar

Pelarut polar adalah pelarut yang memiliki atom hidrogen yang

terikat dengan atom yang memiliki elektronegatifas besar seperti

oksigen. Pelarut jenis ini berpeluang untuk mengadakan ikatan

hidrogen dengan reaktan yang juga polar, seperti alkohol dan asam

karboksilat. Contohnya : Asam asetat, Etanol, Methanol dan Air.

c. Pelarut Semi Polar

Pelarut semi polar adalah pelarut yang memiliki tingkat kepolaran

yang lebih rendah dibandingkan dengan pelarut polar. Pelarut ini baik

untuk mendapatkan senyawa-senyawa semipolar dari tumbuhan.

Contohnya : aseton dan etil asetat.

Pemilihan cairan penyari harus mempertimbangkan banyak faktor

(Pratama, 2009). Cairan penyari yang baik harus memenuhi kriteria

berikut :

1. Murah dan mudah diperoleh

2. Stabil secara fisika dan kimia

3. Bereaksi netral

4. Selektif yaitu hanya menarik zat berkhasiat yang dikehendaki

 26

5. Tidak mempengaruhi zat berkhasiat

6. Diperolehkan oleh peraturan

E. Metode Pengujian Antibakteri

1. Metode Difusi Agar

Metode difusi digunakan untuk menentukan aktivitas agen

antimikroba. Piringan yang berisi agen antimikroba diletakkan pada media

agar yang telah ditanami mikroorganisme yang akan berdifusi pada media

agar tersebut. Area jernih pada permukaan media agar mengindikasikan

adanya hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh agen antimikroba.

Metode difusi agar dibedakan menjadi dua yaitu cara Kirby Bauer dan cara

Sumuran.

a. Cara Kirby Bauer

Metode difusi disk (Kirby Bauer) dilakukan untuk menentukan

aktivitas agen antimikroba. Piringan yang berisi agen antimikroba

diletakkan pada media agar yang telah ditanami mikroorganisme yang

akan berdifusi pada media agar tersebut. Area jernih mengindikasikan

adanya hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh agen antimikroba

pada permukaan media agar.

b. Cara Sumuran

Metode ini serupa dengan metode difusi disk, dimana dibuat

sumur pada media agar yang telah ditanami dengan mikroorganisme

dan pada sumur tersebut diberi agen antimikroba yang akan diuji

(Pratiwi,2008).
 27

F. Kerangka Teori

Klasifikasi
Tumbuhan Pandan (Pandanus Morfologi
amaryllifoliusRoxb)
Kandungan Kimia dan
Manfaat Daun Pandan

Klasifikasi

Bakteri Escherichia Morfologi

coli
Patogenesis

Ekstraksi Cara Dingin

Ekstrak
Ekstraksi Cara Panas

Syarat-syarat Pelarut
Pelarut
Macam-macam Pelarut

Metode Pengujian Antibakteri Metode Difusi Agar

Gambar 3. Kerangka Teori

 28

G. Kerangka Konsep

Variabel Bebas Variabel Terikat

Variasi Konsentrasi Ekstrak

Daun Pandan (30%, 60%,
dan 80%) Aktivitas Antibakteri Bakteri
Escherichia coli
Variasi Konsentrasi Infudasi
Daun Pandan (30%, 60%,
dan 80%)

Gambar 4. Kerangka Konsep

 29

H. Definisi Operasional
Tabel 2. Definisi Operasional

Instrumen
Penelitian Skala
Variabel Definisi Hasil Ukur
dan Cara Data
Ukur
Infudasi daun Daun pandan Ins : Konsentrasi : Rasio
pandan (Pandanus Timbangan,p a. 30%
(Pandanus amaryllifoliusR anci infus, b. 60%
amaryllifolius oxb) yang telah penangan air, c. 80%
Roxb) direbus selama kain flannel,
15 menit suhu batang
dijaga 96-98°C pengaduk,cor
ong
kaca,gelas
ukur, tabung
reaksi dan
toples.
Cara :
Pengukuran
Volume
Cairan Infus
Ekstrak daun Daun pandan Ins : Batang Konsentrasi : Rasio
pandan yang dibuat pengaduk, a. 30%
(Pandanus dalam berbagai botol kaca, b. 60%
amaryllifolius variasi corong kaca, c. 80%
Roxb) dengan konsentrasi yang gelas ukur,
berbagai menggunakan labu
konsentrasi metode maserasi Erlenmeyer,
untuk labu ukur,
mendapatkan rotary
ekstrak. evaporator,
tabung
reaksi,
timbangan
dan toples
maserasi.
Cara :
Pengenceran
Daya hambat Adanya zona Inst : Jangka Kategori Rasio
bakteri bening disekitar sorong daya hambat:
Escherichia kertas cakram Cara : Difusi a. Memen
coli yang Agar uhi
menandakan syarat :
 30

terjadi adanya
penghambatan zona
larutan uji bening
terhadap bakteri disekitar
uji. kertas
cakram
b. Tidak
memenu
hi syarat
: tidak
adanya
zona
bening
disekitar
cakram.
 BAB III
METODE PENELITIAN

A. Jenis Penelitian

Jenis penelitian yang digunakan adalah eksperimental laboratorium untuk

mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak daun pandan terhadap bakteri

Escherichia coli. Adapun rancangan dalam penelitian ini menggunakan

rancangan Static Grup Comparison. Dalam desain rancangan penelitian ini

terdapat dua kelompok yang dipilih sebagai obyek penelitian. Kelompok

pertama adalah perlakuan tehadap uji hambat dengan menggunakan ekstrak

daun pandan, sedangkan kelompok kedua dengan menggunakan infusa daun

pandan. Kelompok kedua ini berfungsi sebagai kelompok pembanding /

pengontrol. Desain rancangan penelitian ini sebagai berikut :

Ekstrak Daun Pandan X O1

Infudasi DaunPandan X O2

Keterangan : X1 = Uji coba daya hambat ekstrak daun pandang

X2 = Uji coba daya hambat air rebusan daun pandan
O1 = daya hambat ekstrak terhadap E.coli
O2 = daya hambat air rebusan terhadap E.coli

B. Waktu dan Tempat Penelitian

31
 32

Lokasi atau tempat penelitian yaitu di Laboratorium Farmakognosi

Jurusan Farmasi dan Laboratorium Mikrobiologi Politeknik Kesehatan

Jayapura. Waktu penelitian yaitu akan dilaksanakan pada bulan April - Mei

tahun 2019.

C. Objek Penelitian

Objek dalam penelitian ini adalah daun pandan wangi (Pandanus

amaryllifoliusRoxb) dengan konsentrasi 30%, 60%, dan 80% yang diperoleh

dari Perumahan Kodam, kabupaten Jayapura.

D. Instrumen Penelitian

1. Alat

Autoklaf, batang pengaduk, botol kaca, bunsen, cawan petri, corong

kaca, gelas ukur, incubator, jangka sorong, jarum ose, kain flannel, kertas

cakram, labu erlenmeyer, labu ukur, panci infus, penangas air, rotary

evaporator, tabung reaksi, timbangan, toples maserasi.

2. Bahan

Alumunium foil, aquades, bakteri Escherichia coli, daun pandan

(Pandanus amaryllifolius Roxb), etanol 96%, kapas, Nutrient Agar , kertas

cakram, Tetrasiklin.

E. Prosedur Kerja
 33

1. Pengambilan dan Pembuatan Simplisia

Pengambilan sampel yaitu pada waktu pagi hari, daun yang dipilih

adalah daun yang tidak terlalu muda dan tidak terlalu tua. Penyortiran

dengan cara memisahkan daun dari kotoran-kotoran atau bahan-bahan

asing. Pencucian dilakukan menggunakan air bersih (air mengalir).

Perajangan dilakukan pada bahan (daun pandan) dengan cara dipotong ±1

cm. Pengeringan dengan cara dikering-keringkan selama ± 4-5 hari di suhu

ruangan.

2. Pembuatan Ekstrak

Pembuatan ekstrak daun pandan (Pandanus amaryllifoliusRoxb)

dilakukan di Laboratorium Farmakognosi Jurusan Farmasi Politeknik

Kesehatan Kemenkes Jayapura dengan cara sebagai berikut : Daun pandan

segar yang telah dibuat menjadi simplisia diekstraksi secara maserasi

dengan menggunakan etanol 96%. Sebanyak 750 gram simplisia

dimaserasi dalam 2,25 Liter pelarut etanol 96% (Perbandingan 1:3 b/v).

Jadi selama sehari pelarut yang digunakan yaitu 2,25 Liter dengan

pengadukan 1 x 24 jam. Dalam 3 hari pelarut yang digunakan yaitu 6,75

Liter. Untuk pengambilan filtrat dilakukan 3 kali setiap 24 jam dilakukan

perendaman. Filtrat yang dihasilkan kemudian diuapkan menggunakan

rotary evaporator pada suhu 49°C.

3. Pembuatan Infusa
 34

Daun pandan segar yang telah ditimbang sebanyak 20 gram, dicuci

kemudian dimasukkan dalam panci infuse ditambah aquadest sebanyak

100 ml. Campuran dipanaskan diatas penangas air selama 15 menit

dihitung dari suhu 90°C sambil sesekali diaduk. Campuran diserkai selagi

panas, disaring melalui kain flannel. Apabila infusa < 100 ml ditambahkan

aquadest secukupnya pada ampas infusa tersebut hingga diperoleh volume

100 ml.

4. Pembuatan Konsentrasi

a. Ekstrak

Konsentrasi yang digunakan yaitu 30%,60% dan 80% dalam 10 ml

Larutan induk yang digunakan yaitu : 100%

1.V1 x M1 = V2 x M2

V1 x 100% = 10 ml x 30%

300
V1 = = 3 ml
100

2.V1 x M1 = V2 x M2

V1 x 100% = 10 ml x 60%

600
V1 = = 6 ml
100

3.V1 x M1 = V2 x M2

V1 x 100% = 10 ml x 80%

800
V1 = = 8 ml
100
 35

Pengambilan :

1.Untuk konsentrasi 30%

Diambil dari larutan induk 100% sebanyak 3 ml (masukkan di labu

ukur 10 ml). Kemudian ditambahkan aquadest sampai batas

kalibrasi.

2.Untuk Konsentrasi 60%

Diambil dari larutan induk 100% sebanyak 6 ml ( masukkan di labu

ukur 10 ml). Ditambahkan aquadest sampai batas kalibrasi.

3.Untuk konsentrasi 80%

Diambil dari larutan induk 100% sebanyak 8 ml ( masukkan di labu

ukur 10 ml). Ditambahkan aquadest sampai batas kalibrasi.

b. Infusa

Dibuat 20 gram dalam 100 ml. Larutan induk 50%

1.Konsentrasi 30%

V1 x M1 = V2 x M2

V1 x 50% = 5 ml x 30%

150
V1 = = 3 ml
50

2.Konsentrasi 60%

V1 x M1 = V2 x M2

V1 x 50% = 5 ml x 60%

300
V1 = = 6 ml
50
 36

3.Konsentrasi 80%

V1 x M1 = V2 x M2

V1 x 50% = 5 ml x 80%

400
V1 = = 8 ml
50

Pembuatan :

1.Untuk konsentrasi 30%

Diambil dari larutan induk 100% sebanyak 3 ml ( masukkan di labu

ukur 5 ml). Ditambahkan aquadest sampai batas kalibrasi.

2.Untuk konsentrasi 60%

Diambil dari larutan induk 100% sebanyak 6 ml ( masukkan di labu

ukur 5 ml). Ditambahkan aquadest sampai batas kalibrasi.

3.Untuk konstrasi 80%

Diambil dari larutan induk 100% sebanyak 8 ml ( masukkan di labu

ukur 5 ml). Ditambahkan aquadest sampai batas kalibrasi.

5. Uji Skrining Fitokimia (Ida Adhayanti,et.all.2018)

Untuk mengetahui kandungan bahan metabolit sekunder dilakukan

dengan :

a. Uji Alkoloid

Ekstrak ditimbang sebanyak 0,5 gram, dimasukkan kedalam

tabung reaksi, dilarutkan dengan 1 ml HCL 2N dan 9 ml air, kemudian

dibagi menjadi 3 bagian, hasilnya positif mengandung alkaloid jika

ditambahkan pereaksi mayer akan membentuk endapan putih (putih

kekuningan) dan jika ditambahkan pereaksi wagener akan

 37

menghasilkan endapan coklat dan jika ditambahkan pereaksi

dragendrof menghasilkan endapan merah jingga.

b. Uji Saponin

Ekstrak ditimbang sebanyak 0,5 gram, dimasukkan dalam tabung

reaksi, ditambahkan 10 ml air panas dan dikocok selama 10 menit,

hingga terbentuk busa atau lebih lalu ditetesi dengan HCL 2N, jika

buih tidak hilang dengan penambahan HCL 2N maka ekstraksi

tersebut positif mengandung saponin.

c. Uji Flavonoid

Esktrak ditimbang sebanyak 0,5 gram, ditambahkan dengan

etanol. Kemudian ditambahkan 5-6 tetes HCL pekat, membentuk

warna merah yang menunjukkan adanya flavonoid dan pembentukan

warna orange menandakan adanya senyawa flavon.

d. Uji Tanin

Ekstrak ditimbang sebanyak 0,5 gram, ditambahkan dengan 10 ml

air panas dan dikocok, lalu ditambahkan 20 ml NaCl 10% dan

disaring. Filtrat yang dihasilkan ditambahkan FeCl3 dan apabila terjadi

perubahan warna biru tua atau hitam maka positif mengandung tanin.

e. Uji Polifenol

Larutan ekstrak uji sebanyak 1 ml direaksikan dengan larutan

FeCl3 10%. Jika terjadi warna biru tua, biru kehitaman atau hitam

kehijauan menunjukan adanya senyawa polifenol.

 38

6. Pembuatan Media NA (Nutrient Agar)

Pembuatan media NA dilakukan dengan cara menimbang sebanyak

7,6 gram NA. Kemudian dimasukkan ke dalam labu erlenmeyer lalu

ditambahkan dengan 200 ml aquades. NA dan aquades dalam labu

erlenmeyer dipanaskan dengan menggunakan hotplate selama ±10 menit

hingga NA larut. Media yang telah homogen disterilisasi di dalam

autoklaf selama 15 menit pada suhu 121°C. Setelah itu media ditunggu

hingga agak dingin sekitar suhu 40-45°C. Media NA yang telah dingin

kemudian nantinya akan dituangkan ke cawan petri sebanyak 20 mL.

Media NA yang telah dituang ke dalam cawan petri dibiarkan hingga

memadat.

7. Pengujian Aktivitas Antibakteri

a. Inokulasi Bakteri

Bakteri yang digunakan dalam penelitian ini adalah bakteri

Escherichia coli yang diperoleh dari Laboratorium Analis Kesehatan

Politeknik Kesehatan Kemenkes Jayapura. Inokulasi bakteri dilakukan

dengan menggunakan metode tuang (poured plate). Sebelum dipakai

dalam uji antibakteri, bakteri yang akan dipakai setiap kali harus

diregenerasi terlebih dahulu dari medium yang lama ke medium yang

baru. Biakan bakteri yang akan diuji ditanam satu ose pada 20 mL

media Nutrient Agar (NA), kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu

37° C.
 39

b. Uji aktivitas Antibakteri

Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi dengan

menggunakan kertas cakram. Biakan bakteri diambil sebanyak 100 µL

kemudian dimasukkan kedalam cawan petri yang telah steril lalu dituang

20 mL media padat (NA). Selanjutnya celupkan kertas cakram dalam

kontrol negatif yaitu aquades, tetrasiklin 500 mg sebagai kontrol positif

dan tiga seri konsentrasi ekstrak dan infudasi daun pandan yaitu 30%, 60%

dan 80%. Lalu kertas cakram dikering anginkan hingga tidak ada lagi

cairan. Inkubasi selama 12-18 jam pada suhu 37°C hingga menghasilkan

zona bening yang merupakan zona hambat. Ukur zona hambat

menggunakan jangka sorong. Cara diatas dilakukan replikasi sebanyak tiga

kali.

F. Kategori Daya Hambat

Penentuan aktivitas daya hambat antimikroba mengacu pada tabel

kategori kekuatan aktivitas antibakteri.

Tabel 4. Klasifikasi Respon Zona Hambat Bakteri

Diameter zona terang Respon hambatan pertumbuhan

> 20 mm Kuat

16 – 20 mm Sedang

10 – 15 mm Lemah

0 mm Tidak Ada
(Greenwood et al, 2003)

G. Sumber Data
 40

Sumber data yang di lakukan yaitu dengan cara pengumpulan data primer

dan data sekunder.

1. Data Primer

Data primer adalah data yang diambil langsung dari uji daya hambat

dari daun pandan (Pandanus amaryllifoliusRoxb) terhadap bakteri

Escherichia coli, dengan menggunakan ekstrak dan infudasi daun pandan.

2. Data Sekunder

Data sekunder yaitu data yang dapat memberikan informasi kepada

penulis secara tidak langsung. Dalam penelitian ini penulis memperoleh

data sekunder melalui sumber yang sudah ada, data di peroleh dari

penelitian terdahulu melalui jurnal penelitian yang berkaitan dengan daun

pandan (Pandanus amaryllifoliusRoxb) dan Bakteri (Escherichia coli).

H. Analisis Data

Data penelitian berupa luas zona hambat antibakteri infudasi dan ekstrak

daun pandan (Pandanus amaryllifoliusRoxb) terhadap bakteri Escherichia

coli. Untuk membandingkan perbedaan uji hambat antara ekstrak dan infudasi

daun pandan digunakan uji statistik t-test independent.

I. Alur Penelitian
 41

Daun Pandan Wangi (Pandanus

amaryllifoliusRoxb)

Daun di Sortir Basah

Simplisia daun pandan

(Pandanus amaryllifoliusRoxb)

Infudasi Maserasi 3x24 jam

menggunakan etanol 96%

Air Rebusan Daun Pandan Ekstrak Kental

Variasi Pengenceran Konsentrasi

Ekstrak 30%, 60%, dan 80%

Uji Aktivitas terhadap bakteri

Escherichia coli

Metode Difusi

Ada aktivitas Tidak adanya

antibakteri aktivitas antibakteri

Hasil

Data diolah menggunakan tabel

Kesimpulan

Gambar 5. Aluran Penelitian

J. Jadwal Penelitian
 42

Tabel 3. Jadwal Penelitian

Bulan
No Uraian Kegiatan
12 1 4 5 6
1. Pembuatan Proposal  
2. Penyajian Proposal 
3. Penelitian Laboratorium 
4. Pengolahan Data dan Analisis 
5. Penulisan laporan tugas akhir 
6. Penyajian dan ujian laporan tugas 
akhir
 DAFTAR PUSTAKA

Afifah, Riski. (2012). Metode Maserasi. (Online).

http://ekstraksitanamanobat.blogspot.com.Diakses tanggal 18 April 2014
Pukul 16.32 WITA

Ansel H.C. (2008). Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Jakarta : Universitas

Indonesia Press.

Ariana, Diah. (2017). Uji antibakteri perasan daun pandan wangi (Pandanus
amaryllifoliusRoxb) terhadap Shigella dysentriae. Universitas
Muhammadiyah Surabaya. ISSN : 2597-3681.

Arisandi dan Andriani. (2008). Khasiat Berbagai Tanaman Untuk Pengobatan.

Eksa Media. Jakarta.

Arisman. (2008). Keracunan Makanan Buku Ajar Ilmu Gizi. Jakarta: Kedokteran
EGC.

Denis R.(2014). Identifikasi Bakteri Escherichia coli ( E . coli ) Pada Air Galon
Reverse Osmosis (RO ) dan Non Reverse Osmosis( Non RO ). J
Gradien.10(1):967–71.

Diana, Widya Savitri. (2014). Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun pandan
(Pandanus amaryllifolius) terhadap bakteri Bacillus cereus dan Escherichia
coli. Fakultas Tarbiyah dan Keguruan. Pekan Baru.

Faras, A.F., Wadkar, S.S., and Ghosh, J.S.,(2014), Effect of Leaf Extract of
Pandanus amaryllifolius Roxb on Growth of Escherichia coli and
Micrococcus (Staphylococcus) aureus, Internasional Food Research
Journal 21(1):421-423.

Greenwood, D., Finch, R., Davey, P., Wilcox, M.(2003).Antibiotics sensitivity

test, inantimicrobial and chemotherapy.5th revisi edition Oxford University
Press. Page 99-108

Hamdani. (2014). Maserasi . (Online). http://catatankimia.com. Diakses tanggal

18 April 2014 Pukul 16.09 WITA

Hargono Semangun. (2008). Penyakit-Penyakit Tanaman Perkebunan Di

Indonesia. cetakan kelima. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.

43
 44

Ida Adhayanti,et.all.(2018). Uji Kandungan Total Polifenol dan Flavonoid

Ekstrak Etil Asetat Kulit Pisan Raja (Musa paradisiaca var. sapientum).
Poltekes Kemenkes Makassar. Media Farmasi Vol.XIV.No.1.April 2018

Indri Wahyuni, Erina, Fakhrurrazi.(2018). Uji daya hambat ekstrak daun pandan
wangi (Pandanus amaryllifoliusRoxb) terhadap bakteri Escherichia coli dan
Salmonella sp. Fakultas kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala.
JIMVET E-ISSN : 2540-9492.

Karsinah. (2008). Prinsip kerja Refluks dan Proses Laboratorium. Edisi Kelima.
Jakarta. Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Halaman
178.P

Katzer (2012). Tumbuhan Daun Pandan Wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb).

Kandungan Zat Kimia Aktif Daun Pandan. Jakarta: EGC.

Laluces. (2015). Parameter Standar Umum Pelarut Polar dan Nonpolar. Bogor:
Penerbit Penebar Swadaya

Lestari.P. (2016).Studi tanaman khas sumatera utara yang berkhasiat Obat.Jurnal

Farmanesia.9(11):11-12.

Lopez, D. C., and Nanoto, M.G., (2012). Alkoloids from Pandanus amaryllifolius
Coleected from Marikina, phillippines, Phillipine Journal of Science
134(1):39-44.

Mardiyaningsih, A., dan R. Aini. (2014). Pengembangan Potensi Ekstrak Daun

Pandan (Pandanus amaryllifolius Roxb) sebagai Agen Antibakteri.
Pharamaciana.4(2):186-189.

Margaretta S. (2011). Ekstrasi senyawa phenolic Pandanus amaryllifolius Roxb

sebagai antioksidan alami. J Widya Teknik; 10(1):21-4

Marzuki, A. (2013). Studi Karakteristik Bakteri Escherichia coli di Laboratorium

Kesehatan. 3-5.

Mulyaningsih, S. (2014). Analis pemanfaatan daun pandan (Pandanus

amaryllifolius Roxb) sebagai antiketombe.Jurnal Dikbio.

Muttolifah R.(2007). Efek berbagai konsentrasi infus dan jenis organ tumbuhan
pandan wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb) terhadap diameter zona
 45

hambat Pityrosporum ovale secara in vitro[internet]. Available from:

URL:eprints.umm.ac.id. Accessed: 7/12/2014

Ngasar, K. Y. Maria. (2017). Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun pandan

(Pandanus amaryllifolius Roxb) terhadap pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus.

Novita, Widya. (2009). Buku Pintar Merawat Kecantikan Dirumah- Kumpulan

Tips Praktis dan Murah Merawat Kecantikan dari Ujung Rambut Hingga
Ujung Kaki. PT. Gramedia Pustaka: Jakarta

Nuraeni AD. (2008). Ekstraksi Komponen Antibakteri dan Antioksidan dari Biji
Teratai (Nymphea pubescens Willd). Skripsi. Departemen Ilmu dan
Teknologi Pangan. Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Prameswari, O. M. dan S. B. Widjanarko. (2014). Uji Efek Ekstrak Air Daun

Pandan Wangi terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah dan Histopatologi
Tikus Diabetes Mellitus.J.Pangan dan Agroindustri.2(2):16-27.

Pratiwi. (2008). Metode Dilusi Padat. Mikrobiologi Farmasi Jakarta: Penerbit

Erlangga.

Purwatiningsih, T.I. (2014). Aktivitas Senyawa Fenol dan Flavonoid dalam Daun
Pandan (Pandanus amaryllifolius Roxb) sebagai Antibiotik Alami. Buletin
Peternakan 38(1):59-64.

Putri, R. W. A. (2016). Identifikasi Bakteri Escherichia Coli Dan Salmonella Sp.

pada jajanan batagor disekolah dasar negeri dikelurahan pisangan, cirendu,
dan cempaka putih kecamatan cipitural timur. Skripsi. Programstudi
kedokteran dan profesi dokter fakultas kedokteran dan ilmu kesehatan UIN
syarif hidayatullah, Jakarta.

Rahayu, Se. Handayani. (2008). Morfologi daun pandan wangi. IPB. Bogor.

Sajin. Manfaat-daun-pandan. http://sajidinapotik.blogspot.com/2012/07/manfaat-

daun-pandan.html.diakses(10:40,8 Januari 2019)
Sampurno. (2008). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.
Departemen Kesehatan. Jakarta.

Setyorini. (2011). Penyarian dengan Pelarut . Jakarta EGC.

 46

Soekamto NH. (2011). Aktivitas antibakteri dan antijamur ekstrak dan senyawa
saponin daun pandan (Pandanus amaryllifolius Roxb). Makalah Simnas
KBA XIX.

Stevani. H., Irmawati., dan A. Kadir. (2016). Uji daya hambat perasan daun
pandan wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb) terhadap bakteri
Staphylococcus Aureus.Media farmasi. 12(2):145.

Sukandar, D. (2009). Uji Toksisitas dan Khasiat Ekstrak Daun Pandan Wangi
(Pandanus amaryllifolius Roxb) dengan Metode Brine Shrimp Lethality
Test(BSLT), [available on
http://journal.uinjkt.ac.id/index.php/valensi/article/viewFile/217/135] hal
63-70.

Winarto. (2008). Aktivitas Antibakteri Pada Pembuatan Ekstrak Daun Pandan

Wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb) Secara Maserasi. Momentum, Vol.6
(2) : 36-41.