Bioteknologi Insulin
Bioteknologi Insulin
PENDAHULUAN
Sebelum ditemukan teknik sintesis insulin, hormon ini hanya bisa diperoleh dari
ekstraksi pankreas babi atau sapi, dan sangat sedikit insulin bisa diperoleh. Setelah ditemukan
teknik sintesis insulin di bidang bioteknologi inilah, harga insulin bisa ditekan dengan sangat
drastis sehingga bisa membantu para penderita diabetes melitus.
Sintesis insulin dapat diperoleh dengan bantuan bakteri yang biasa terdapat di usus
besar, yaitu Escherichia coli. Teknologi dasar proses ini disebut dengan teknologi plasmid.
Kekurangan insulin disebabkan karena cacat genetik pada pankreas, menyebabkan seseorang
menderita diabetes melitus (kencing manis) yang berdampak sangat luas terhadap kesehatan,
mulai kebutaan hingga impotensi. Insulin sendiri merupakan hormon yang mengubah glukosa
menjadi glikogen, dan berfungsi mengatur kadar gula darah bersama hormone glukagon.
1.3 Tujuan
Adapun tujuan dari pembuatan makalah ini antara lain adalah :
1. Untuk mengetahui sejarah dan pengertian dari insulin tersebut.
2. Untuk mengetahui fungsi dari insulin tersebut.
3. Untuk mengetahui pembuatan insulin manusia oleh bakteri.
1.4 Manfaat
Adapun manfaat dari pembuatan karya tulis ini adalah sebagai suatu media informasi bagi
siswa untuk mengetahui sejarah, pengertian, dan fungsi insulin, serta pembuatan insulin
manusia oleh bakteri.
Sejak insulin ditemukan pada tahun 1921, telah menjadi salah satu yang paling menyeluruh
dipelajari molekul dalam sejarah ilmu pengetahuan.
Diabetes telah diakui sebagai kondisi medis yang berbeda untuk setidaknya 3.500 tahun, tapi
penyebabnya adalah misteri sampai awal abad ini. Pada awal 1920-an, peneliti diduga kuat bahwa
diabetes disebabkan oleh kerusakan dalam sistem pencernaan yang berhubungan dengan kelenjar
pankreas, organ kecil yang duduk di atas hati.
Pada saat itu, satu-satunya cara untuk diabetes "kontrol" adalah melalui diet rendah
karbohidrat dan gula, dan tinggi lemak dan protein. Alih-alih mati tak lama setelah diagnosis, diet ini
memungkinkan penderita diabetes untuk hidup - tapi hanya selama sekitar satu tahun.
Persis apa yang salah, atau hilang, dalam metabolisme jalur gula penderita diabetes tidak
diketahui sampai sekelompok peneliti Kanada dimurnikan insulin pada tahun 1921 dan membuktikan
bahwa diabetes merupakan penyakit kekurangan insulin.
Seperti kebanyakan penemuan ilmiah utama, dasar bagi penemuan insulin, telah diletakkan
oleh beberapa orang lain sebelum peneliti Kanada terisolasi. Pada tahun 1889, dua peneliti Eropa,
Minkowski dan von Mering, menemukan bahwa ketika kelenjar pankreas telah dihapus dari anjing,
mereka mengembangkan semua gejala diabetes dan meninggal segera setelah itu. Minkowski dan von
Mering mengusulkan bahwa pankreas sangat penting untuk metabolisme gula.
Sementara itu, ilmuwan Amerika EL Scott setengah berhasil mengekstraksi insulin dengan
alkohol. RC Paulesco, Rumania seorang, membuat ekstrak dari pankreas yang menurunkan glukosa
darah anjing. Beberapa Paulesco klaim adalah orang pertama yang menemukan insulin.
Terobosan terbesar datang pada tahun 1921 ketika Frederick Banting dan Charles Best
melakukan serangkaian percobaan satu musim panas di laboratorium JJ R. Macleod di Universitas
Toronto. Seperti Minkowski dan von Mering, mereka menunjukkan bahwa menghapus pankreas dari
anjing membuat mereka diabetes.
Kemudian mereka pergi langkah lebih lanjut dan susah payah mengambil cairan dari Islets
anjing sehat 'Langerhans, disuntikkan ke anjing diabetes dan dikembalikan ke normal - selama mereka
memiliki extract.With bantuan rekan ahli biokimia bernama JB Collip, mereka kemudian mampu
mengekstrak formula cukup murni insulin dari pankreas sapi dari rumah pemotongan hewan.
The University of Toronto segera memberi perusahaan farmasi lisensi untuk memproduksi
insulin bebas royalti. Pada awal 1923, sekitar satu tahun setelah injeksi tes pertama, insulin menjadi
tersedia secara luas, dan menyelamatkan hidup orang banyak.
Insulin adalah salah satu protein pertama yang mengkristal dalam bentuk murni, pada tahun
1926. Bentuk kristal memungkinkan peneliti untuk mempelajari struktur dengan teknik yang disebut
x-ray kristalografi dan perkiraan bentuk tiga dimensi. Mengetahui bentuk molekul membantu
memahami cara kerjanya dalam tubuh dan sejak itu para ilmuwan telah mencoba untuk memilah-
milah bagaimana insulin bertindak dan apa molekul lain mungkin berinteraksi dengan.
Pada tahun 1955, insulin menjadi protein pertama yang sepenuhnya diurutkan. Pekerjaan
yang menghasilkan Hadiah Nobel 1959 untuk Frederick Sanger. Melalui kerja Sanger kita sekarang
tahu bahwa semua protein manusia memiliki urutan yang unik dari salah satu atau semua dari 20 jenis
asam amino. Asam-asam amino dirangkai menjadi rantai yang disebut peptida, agak seperti huruf
menggabungkan ke dalam kata-kata panjang.
Banyak protein memiliki lebih dari satu rantai, bergabung bersama dengan cara tertentu.
Insulin manusia memiliki dua peptida. The Sebuah rantai (untuk asam) memiliki 21 asam amino dan
rantai B (untuk dasar) memiliki 30 asam amino. Dua rantai yang dihubungkan oleh dua jembatan
disulfida, obligasi terbentuk antara atom belerang dalam asam amino yang sistin. Rantai A juga
memiliki sebuah jembatan disulfida internal yang ketiga. Jembatan disulfida memegang molekul
bersama-sama. Tanpa mereka, protein mungkin tidak akan aktif dalam tubuh.
Setelah urutan protein yang dikenal, adalah mungkin, dalam teori, untuk menciptakan itu
sintetis. Bahkan, insulin adalah protein pertama yang secara kimia disintesis di laboratorium, pada
tahun 1963. Namun para peneliti tidak dapat menghasilkan banyak. Selama 60 tahun setelah
kelompok insulin terisolasi Banting, penderita diabetes mengandalkan hormon dimurnikan dari
hewan, terutama sapi dan babi. Hewan insulin bekerja dengan baik secara keseluruhan, namun tidak
sama persis dengan hormon manusia dan kadang-kadang menyebabkan reaksi yang merugikan,
misalnya, ruam kulit. Pada tahun 1978 insulin menjadi protein manusia pertama yang diproduksi
melalui bioteknologi. Sebuah tim peneliti dari City of Hope National Medical Center dan perusahaan
bioteknologi Genentech masih muda berhasil mensintesis insulin manusia di laboratorium
menggunakan proses yang bisa menghasilkan jumlah besar.
Tim dimasukkan gen untuk insulin manusia ke dalam DNA bakteri, dan menggunakan bakteri
sebagai miniatur pabrik untuk membuat rantai A dan B protein secara terpisah. Pada tahap kedua,
proses kimia menggabungkannya. Hasilnya adalah insulin manusia, tanpa masalah insulin hewan
kadang-kadang menyebabkan. Humulin, sebagai produk komersial disebut, merevolusi pengobatan
diabetes ketika menjadi tersedia secara luas pada awal tahun 1980. Hari ini, hampir semua orang
diabetes menggunakan insulin rekombinan manusia bukan hewan insulin.
Melihat enzim secara lebih rinci, urutan babi (babi) insulin dan insulin manusia hampir identik,
tetapi tidak benar - itu berbeda dengan satu asam amino. Bovine (sapi) insulin yang berbeda dengan
tiga asam amino dari manusia. Inilah sebabnya mengapa orang mampu menggunakan insulin dari sapi
di tahun 1920, meskipun mereka tidak tahu pada saat itu.
Pada tahun 1996 Food and Drug Administration telah menyetujui insulin manusia diubah
disebut Humalog, yang khusus dikembangkan untuk menjadi aktif sangat cepat setelah injeksi.
Apa yang berikutnya untuk insulin? Para ilmuwan tidak yakin, tapi satu hal yang pasti: Beyond
nilai terkenal untuk penderita diabetes, insulin juga telah berada di garis depan ilmu pengetahuan
selama lebih dari 60 tahun.
Insulin adalah hormon utama yang mengendalikan glukosa dari darah ke dalam sebagian
besar sel (terutama sel otot dan lemak, tetapi tidak pada sel sistem saraf pusat). Oleh karena itu,
kekurangan insulin atau kekurangpekaan reseptor-reseptor memainkan peran sentral dalam segala
bentuk diabetes mellitus.
Sebagian besar karbohidrat dalam makanan akan diubah dalam waktu beberapa jam ke dalam
bentuk gula monosakarida yang merupakan karbohidrat utama yang ditemukan dalam darah dan
digunakan oleh tubuh sebagai bahan bakar. Insulin dilepaskan ke dalam darah oleh sel beta (β-sel)
yang berada di pankreas, sebagai respons atas kenaikan tingkat gula darah, biasanya setelah makan.
Insulin digunakan oleh sekitar dua pertiga dari sel-sel tubuh yang menyerap glukosa dari darah untuk
digunakan sel-sel sebagai bahan bakar, untuk konversi ke molekul lain yang diperlukan, atau untuk
penyimpanan.
Insulin juga merupakan sinyal kontrol utama untuk konversi dari glukosa ke glycogen untuk
penyimpanan internal dalam hati dan sel otot.
Tingkatan insulin yang lebih tinggi menaikkan anabolic (rangkaian jalur metabolisme untuk
membangun molekul dari unit yang lebih kecil), seperti proses pertumbuhan sel dan duplikasi, sintesa
protein, lemak dan penyimpanan. Insulin adalah sinyal utama dalam mengkonversi banyak
bidirectional proses metabolisme dari catabolic (rangkaian jalur metabolisme untuk membongkar
molekul-molekul ke dalam bentuk unit yang lebih kecil dan melepaskan energi) ke anabolic, dan
sebaliknya. Secara khusus, tingkatan insulin yang lebih rendah berguna sebagai pemicu masuk
keluarnya ketosis (fase metabolik pembakaran lemak).
Jika jumlah insulin yang tersedia tidak cukup, jika sel buruk untuk merespon efek dari insulin
(kekurangpekaan atau perlawanan terhadap insulin), atau jika insulin cacat/defective, maka gula tidak
akan diserap dengan baik oleh orang-orang sel-sel tubuh yang memerlukannya dan tidak akan
disimpan dengan baik di hati dan otot. Efek selanjutnya adalah tingkat gula darah yang tetap tinggi ,
Insulin berperan dalam penggunaan glukosa oleh sel tubuh untuk pembentukan energi.
Apabila tidak ada insulin maka sel tidak dapat menggunakan glukosa sehingga proses metabolisme
menjadi terganggu.
Proses yang terjadi yaitu karbohidrat dimetabolisme oleh tubuh untuk menghasilkan glukosa,
glukosa tersebut selanjutnya diabsorbsi di saluran pencernaan menuju ke aliran darah untuk
dioksidasi di otot skelet sehingga menghasilkan energi.
Glukosa juga disimpan dalam hati dalam bentuk glikogen kemudian diubah dalam jaringan
adiposa menjadi lemak dan trigliserida. Insulin memfasilitasi proses tersebut. Insulin akan
meningkatkan pengikatan glukosa oleh jaringan, meningkatkan level glikogen dalam hati, mengurangi
pemecahan glikogen (glikogenolisis) di hati, meningkatkan sintesis asam lemak, menurunkan
pemecahan asam lemak menjadi badan keton, dan membantu penggabungan asam amino menjadi
protein.
Insulin termasuk hormon polipeptida yang awalnya diekstraksi dari pankreas babi maupun
sapi, tetapi kini telah dapat disintesis dengan teknologi rekombinan DNA menggunakan E.coli.
Susunan asam amino insulin manusia berbeda dengan susunan insulin hewani. Insulin rekombinan
dibuat sesuai dengan susunan insulin manusia sehingga disebut sebagai human insulin.
Insulin diproduksi oleh sel beta di dalam pankreas dan digunakan untuk mengontrol kadar
glukosa dalam darah. Sekresi insulin terdiri dari 2 komponen. Komponen pertama yaitu: sekresi insulin
basal kira-kira 1 unit/jam dan terjadi diantara waktu makan, waktu malam hari dan keadaan puasa.
Komponen kedua yaitu: sekresi insulin prandial yang menghasilkan kadar insulin 5-10 kali lebih besar
dari kadar insulin basal dan diproduksi secara pulsatif dalam waktu 0,5-1 jam sesudah makan dan
mencapai puncak dalam 30-45 menit, kemudian menurun dengan cepat mengikuti penurunan kadar
glukosa basal. Kemampuan sekresi insulin prandial berkaitan erat dengan kemampuan ambilan
glukosa oleh jaringan perifer.
Fungsi insulin:
Insulin sampai saat ini dikelompokkan menjadi beberapa jenis antara lain:
Contoh: Actrapid, Humulin R,Reguler Insulin (Crystal Zinc Insulin) Bentuknya larutan jernih,
efek puncak 2-4 jam setelah penyuntikan, durasi kerja sampai 6 jam. Merupakan satu-satunya insulin
yang dapat dipergunakan secara intra vena. Bisa dicampur dengan insulin kerja menengah atau insulin
kerja panjang.
Contoh: Insulatard, Monotard, Humulin N, NPH, Insulin Lente Dengan menambah protamin
(NPH / Neutral Protamin Hagedom) atau zinc (pada insulin lente), maka bentuknya menjadi suspensi
yang akan memperlambat absorpsi sehingga efek menjadi lebih panjang. Bentuk NPH tidak
imunogenik karena protamin bukanlah protein.
Contoh: Insulin Glargine, Insulin Ultralente, PZI Insulin bentuk ini diperlukan untuk tujuan
mempertahankan insulin basal yang konstan. Semua jenis insulin yang beredar saat ini sudah sangat
murni, sebab apabila tidak murni akan memicu imunogenitas, resistensi, lipoatrofi atau lipohipertrofi.
Cara pemberian insulin ada beberapa macam: a) intra vena: bekerja sangat cepat yakni dalam
2-5 menit akan terjadi penurunan glukosa darah, b) intramuskuler: penyerapannya lebih cepat 2 kali
lipat daripada subkutan, c) subkutan: penyerapanya tergantung lokasi penyuntikan, pemijatan,
kedalaman, konsentrasi. Lokasi abdomen lebih cepat dari paha maupun lengan. Jenis insulin human
lebih cepat dari insulin animal, insulin analog lebih cepat dari insulin human.
Insulin diberikan subkutan dengan tujuan mempertahankan kadar gula darah dalam batas normal
sepanjang hari yakni 80-120 mg% saat puasa dan 80-160 mg% setelah makan. Untuk pasien usia diatas
60 tahun batas ini lebih tinggi yaitu puasa kurang dari 150 mg% dan kurang dari 200 mg% setelah
makan. Karena kadar gula darah memang naik turun sepanjang hari, maka sesekali kadar ini mungkin
lebih dari 180 mg% (10 mmol/liter), tetapi kadar lembah (through) dalam sehari harus diusahakan
tidak lebih rendah dari 70 mg% (4 mmol/liter). Insulin sebaiknya disuntikkan di tempat yang berbeda,
tetapi paling baik dibawah kulit perut.
Dosis dan frekuensi penyuntikan ditentukan berdasarkan kebutuhan setiap pasien akan insulin.
Untuk tujuan pengobatan, dosis insulin dinyatakan dalam unit (U). Setiap unit merupakan jumlah yang
diperlukan untuk menurunkan kadar gula darah kelinci sebanyak 45 mg% dalam bioassay. Sediaan
homogen human insulin mengandung 25-30 IU/mg.(netdoctor.co.uk/bun)
Pembuatan insulin secara komersial sangat bermanfaat dalam pengobatan penyakit diabetes
melitus yang disebabkan oleh gangguan produksi insulin. Proses pembuatan insulin ini memanfaatkan
teknik DNA rekombinan. Berikut tahapan dalam proses pembuatan tersebut:
Kode genetik insulin terdapat dalam DNA di bagian atas lengan pendek dari kromosom ke-11
yang berisi 153 basa nitrogen (63 dalam rantai A dan 90 dalam rantai B). DNA pengkode insulin dapat
diisolasi dari gen manusia yang ditumbuhkan dalam kultur di laboratorium. Selain itu, dapat pula
disintesis rantai DNA yang membawa sekuens nukleotida spesifik yang sesuai karakteristik rantai
polipeptida A dan B dari insulin. Urutan DNA yang diperlukan dapat ditentukan karena komposisi asam
amino dari kedua rantai telah dipetakan. Enam puluh tiga nukleotida yang diperlukan untuk
mensintesis rantai A dan sembilan puluh untuk rantai B, ditambah kodon pada akhir setiap rantai yang
menandakan pengakhiran sintesis protein.
Masing-masing DNA insulin dan plasmid E.Coli dipotong dengan enzim restriksi yang sama.
Kemudian DNA insulin A dan B secara terpisah diselipkan ke dalam plasmid berbeda dengan
menggunakan enzim ligase.
Plasmid yang telah diselipkan DNA insulin (plasmid rekombinan) dicampurkan dalam kultur
bakteri E.Coli. Bakteri-bakteri tersebut akan mengambil plasmid rekombinan melalui proses
transformasi. Akan tetapi, tidak semua bakteri mengambil plasmid tersebut.
Sel yang mengandung plasmid rekombinan dapat diseleksi dari sel yang tidak mengandung
plasmid rekombinan. Medium nutrien bakteri yang digunakan mengandung amphisilin dan X-gal.
Sebagaimana telah disebutkan sebelumnya, plasmid yang digunakan sebagai vektor ini mengandung
amp-R dan lac-Z sehingga sel bakteri yang mengandung plasmid rekombinan akan tumbuh dalam
medium tersebut karena resisten terhadap amphisilin serta akan berwarna putih karena plasmid yang
mengandung gen asing (gen insulin manusia) dalam gen lac-Z tidak dapat memproduksi β-
galactosidase sehingga tidak dapat menghidrolisis laktosa.
Proses ini dilakukan melalui hibridisasi asam nukleat. Pada proses ini, disintesis probe asam
nukleat yang mengandung komplementer dari gen insulin, probe dilengkapi dengan isotop radioaktif
atau fluorosen.
Klon sel yang telah diidentifikasi diproduksi dalam skala besar dengan cara ditumbuhkan
dalam tangki yang mengandung medium cair. Gen insulin diekspresikan bersama dengan sel bakteri
yang mengalami mitosis. Rantai insulin A dan rantai B yang dihasilkan kemudian dicampurkan dan
dihubungkan dalam reaksi yang membentuk jembatan silang disulfida.
Pada saat ini, peneliti mulai menggunakan vektor plasmid dari sel eukariotik yaitu ragi bersel
tunggal karena ragi merupakan sel eukariotik yang memiliki plasmid, dapat tumbuh dengan cepat,
serta hasil akhir proses pembuatan insulin dengan ragi akan menghasilkan molekul insulin yang lebih
lengkap dengan struktur tiga dimensi yang sempurna sehingga lebih identik dengan insulin manusia.
Perbedaan susunan asam amino pada insulin manusia, babi (pork), dan sapi (beef)
Insulin manusia dan insulin babi hanya beda 1 asam amino yaitu pada B30, sedangkan
insulin manusia dan insulin sapi beda 3 asam amino yaitu pada A8, A10, dan B30 sehingga
pemakaian insulin babi kurang imunogenik dibandingkan insulin sapi. Tapi masalahnya, 1 babi
yang diekstraksi insulinnya hanya cukup untuk 1 orang selama 3 hari padahal saat ini ada ± 60
juta orang di dunia yang menderita diabetes tergantung insulin dan diduga meningkat 5-6 %
per tahunnya. Maka dari itu sekarang banyak dikembangkan teknologi rekombinan untuk
mendapatkan insulin.
Salah satu sumber insulin yang sudah tidak asing lagi digunakan dalam dunia
kedokteran adalah insulin babi. Untuk menghasilkan 1 pound insulin didapatkan dari 60 ribu
ekor babi serta diperkirakan mampu mengobati pasien diabetes sebanyak 750-1.000 orang
selama setahun . Jika produksi babi pertahun sebanyak 85 juta maka insulin yang mampu
dihasilkan selama setahun adalah 1.400 pound. Jumlah tersebut dapat mengobati pasien
sebanyak 1, 050 juta sampai 1,4 juta pertahunnya. Jumlah yang cukup spektakuler. Saat ini ada
alternatif lain pengganti insulin seperti Humulin. Humulin merupakan produk insulin manusia
pertama yang dipasarkan perusahaan farmasi Amerika serikat, Eli Lily pada tahun 1982.
Walaupun lebih sedikit mahal, ternyata cukup diminati oleh pasien untuk mengganti hormon
insulin babi. Namun, teknologi rekayasa genetika juga telah banyak berperan dalam produksi
insulin, dimana bakteri di rekayasa sedemikian rupa sehingga mamapu memproduksi insulin.
Dengan demikian insulin yang beredar pada dunia pengobatan merupakan gabungan dari
insulin babi dan insulin dari bakteri.
3.1 Kesimpulan
Dari pembahasan pada pembahasan diatas dapat disimpulkan hal-hal sebagai berikut.
1. Insulin ditemukan pada tahun 1921, dan telah menjadi salah satu yang paling menyeluruh
dipelajari molekul dalam sejarah ilmu pengetahuan.
2. Insulin adalah hormon utama yang mengendalikan glukosa dari darah ke dalam sebagian
besar sel (terutama sel otot dan lemak, tetapi tidak pada sel sistem saraf pusat).
3. Fungsi insulin:
Membantu pembakaran dan penyerapan glukosa oleh sel badan
Mengimbangkan paras glukosa didalam darah dan mencegah kencing manis.
Membantu sel menyimpan tenaga dalam bentuk glukosa didalam hati
Membantu proses penyimpanan glukosa berlebihan dalam bentuk lemak didlm hati.
3.2 Saran
Meskipun telah ditemukannya sintesis insulin, namun tetap saja kita harus berpola hidup yang
sehat baik pola makannya maupun yang lainnya karena pada zaman sekarang makanan banyak
mengandung gula yang tinggi untuk itu jangan sembarangan makan makanan yang belum pasti
keamanannya untuk dikonsumsi. Penulis juga menyarankan agar berolah raga yang telatur guna
membakar gula yang berada dalam tubuh kita. Dengan berpola hidup yang sehat, berarti kita telah
mencegah penyakit diabetes militus.
http://id.wikipedia.org/wiki/Insulin
http://www.artikelkesehatan.info/sejarah-diabetes/
https://prezi.com/vxqzsw0yeup0/insulin-rekombinan/
http://www.jevuska.com/2014/03/07/insulin/
http://www.sridianti.com/apa-pengertian-hormon-insulin.html
http://biologimediacentre.com/bioteknologi-5-membuat-insulin-dengan-bantuan-e-coli/
https://sites.google.com/site/emodulbiologi/materi/bab-iii---bioteknologi-dalam-bidang-
kedokteran-dan-farmasi/3-4-rekayasa-genetika-untuk-produksi-hormon-insulin
http://www.slideshare.net/olivianisa/pembuatan-insulin